抗體的制備和分離

1、抗體的制備和分離藥品名稱 通用名：破傷風(fēng)抗毒素英文名：Tetanus Antitoxin 漢語拼音：Poshangfeng Kangdusu 主要組成成分：經(jīng)胃酶消化后的馬破傷風(fēng)免疫球蛋白。 性狀 本品為無色或淡黃色的澄明液體，含少量防腐劑，久置可析出少量能搖散的沉淀。 藥理作用 本品含特異性抗體，具有中和破傷風(fēng)毒素的作用，可用于破傷風(fēng)桿菌感染的預(yù)防和治療。體液免疫的過程抗原吞噬細胞T細胞B細胞增殖、分化記憶B細胞漿細胞抗體抗原-抗體結(jié)合物吞噬細胞再次感染增殖、分化記憶B細胞漿細胞單克隆抗體制備流程小鼠B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導(dǎo)融合多種細胞選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞抗體檢測，篩選能產(chǎn)生特定抗體的雜

2、交瘤細胞注射特定抗原體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)提取抗體提取抗體鼠-人嵌合抗體的形成過程人源性噬菌體抗體生產(chǎn)過程流程圖某血漿白蛋白進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的結(jié)果試管嬰兒的研究進步“試管嬰兒”是指分別將卵子、精子取出后，在體外使其受精，并發(fā)育成胚胎后，再植回母體子宮內(nèi)。 試管嬰兒進行的步驟：藥物誘發(fā)超排卵監(jiān)測卵泡取卵取精體外受精胚胎體外培養(yǎng)胚胎移植胚胎移植后14天驗晨尿確定是否妊娠妊娠后14天，B超檢查胎兒數(shù)及胚胎著床部位。 1978年7月25日，英國首例試管嬰兒誕生，女性。1988年3月10日，中國首例試管嬰兒在北醫(yī)三院誕生，女性。了解試管嬰兒的研究進步：如今已發(fā)展到第四代 第一代是指常規(guī)體外受精、

3、胚胎移植及衍生技術(shù)，該技術(shù)適應(yīng)于女性不孕問題，如輸卵管性不育、排卵障礙、子宮內(nèi)膜異位癥、宮腔內(nèi)人工授精失敗、抗精子抗體的免疫因素、原因不明的女性不孕癥等；第二代是指單精子卵細胞漿內(nèi)顯微注射受精技術(shù)，這種技術(shù)是幫助少、弱、畸精子的受孕，解決的是男性不育問題； 第三代試管嬰兒是指胚胎植入前遺傳學(xué)診斷技術(shù)，此技術(shù)主要針對單基因遺傳?。喝绲刂泻Ｘ氀Y、血友病以及染色體異常等疾病，其胚胎在分裂為8個細胞時做遺傳缺陷診斷，其基本理論為：從多個受精卵中選擇出基因型最好的移植。如伴Y染色體遺傳病，只要通過PGD技術(shù)選擇生女兒便可以避免遺傳病遺傳給新生兒。該技術(shù)在優(yōu)生方面有所進步，在不育人群中，需要作第三種試管

4、嬰兒的不育患者，相對是比較少的。 第四代試管嬰兒技術(shù)是指卵漿置換，該技術(shù)適用于那些排卵功能正常，但因為身體不好或者年齡偏大，致使卵子的質(zhì)量不高，活力差的女性。具體方法是將妻子的卵細胞的細胞核取出，移植到一位年輕的、身體健康的女性卵子的細胞漿中，形成一個新的、優(yōu)質(zhì)的重組卵細胞。（1）關(guān)注科學(xué)史（如基因工程的誕生）年份重大事件1944Avery等證明DNA是遺傳物質(zhì)。1952Alfred Hershy和Marsha Chase證明T2噬菌體的遺傳物質(zhì)是DNA。1953James D. Watson和Francis H. C. Crick揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)和半保留復(fù)制機制（1962年Nob

5、el生理或醫(yī)學(xué)獎）。1957Crick又提出了遺傳信息傳遞的“中心法則”（1968年Nobel生理或醫(yī)學(xué)獎）。1970H.O. Smith等分離出第一種限制性核酸內(nèi)切酶（1978年Nobel生理或醫(yī)學(xué)獎）1972Paul Berg小組完成了首次體外重組實驗（1980年Nobel化學(xué)獎）。1973斯坦福大學(xué)的S. Cohen小組將含有卡那霉素抗性基因的大腸桿菌R6-5質(zhì)粒與含有四環(huán)素抗性基因的另一種大腸桿菌質(zhì)粒pSC101連接成重組質(zhì)粒，具有雙重抗藥性。1975F. Sanger、A. Maxam和W. Gilbert發(fā)明了DNA快速測序技術(shù)（1986 Nobel生理或醫(yī)學(xué)獎）。1980科學(xué)家首

6、次培育出世界第一個轉(zhuǎn)基因動物轉(zhuǎn)基因小鼠。1983科學(xué)家首次培育出世界第一個轉(zhuǎn)基因植物轉(zhuǎn)基因煙草。1983PCR技術(shù)問世（1988年發(fā)現(xiàn)TaqDNA聚合酶）（1993年Nobel化學(xué)獎）。理論基礎(chǔ)技術(shù)支持（2010年南通一模）2008年諾貝爾化學(xué)獎授予了下村脩、馬丁沙爾菲、錢永健三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻的科學(xué)家，他們代表了綠色熒光蛋白研究上的三個里程碑。請結(jié)合所學(xué)知識分析回答： 材料一 下村脩1962年在普林斯頓大學(xué)做研究的時候從一種水母身上分離出綠色熒光蛋白（GFP）。當時知道在藍光或紫外光的激發(fā)下，它會發(fā)出綠色熒光。 材料二 科學(xué)家1992年克隆出了GFP基因，隨后馬

7、丁沙爾菲成功地讓GFP基因在大腸桿菌和線蟲中表達成功。之后，會發(fā)光的鼠、豬、貓、兔、蝌蚪、魚也相繼問世。下圖是轉(zhuǎn)基因綠色熒光鼠的培育過程： 材料三 錢永健通過改造GFP基因，相繼制造出了藍色（BFP）和黃色（YFP）的熒光蛋白。（1）為了提高實驗成功率，需要通過PCR技術(shù)獲得目的基因的大量拷貝。與體內(nèi)DNA復(fù)制相比，PCR反應(yīng)體系需加入 種引物和 。（2）將綠色熒光蛋白基因的片段與目的基因連接起來組成一個融合基因，再將該融合基因轉(zhuǎn)入真核生物細胞內(nèi)，表達出的蛋白質(zhì)就會帶有綠色熒光。綠色熒光蛋白在該研究中的主要作用是_。（3）材料二中，過程構(gòu)建的基因表達載體的組成必需含有啟動子、終止子、復(fù)制原點、_、 。過程選擇代孕母鼠的條件是_ _。（4）如果將外源基因?qū)胄∈笫芫?，則外源基因可能隨機插入到小鼠受精卵DNA中。這種受精卵有的可發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小鼠，有的卻死亡。請分析因外源基因插入導(dǎo)致受精卵死亡的最可能原因 。（5）材料三中，錢永健制造出藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白，這種現(xiàn)代生物工程