動物實驗基本操作技術(shù)ppt課件(1)

1、2022/7/241第九章 動物實驗基本操作技術(shù)2022/7/242動物實驗準(zhǔn)備引進(jìn)動物動物抓取固定動物編號標(biāo)記給藥途徑和方法動物麻醉體液采集實驗外科技術(shù)操作術(shù)前準(zhǔn)備術(shù)中技術(shù)術(shù)后護(hù)理動物處死動物實驗基本操作技術(shù)一、大、小鼠的抓取固定第一節(jié) 實驗動物的抓取與固定固定盒二、豚鼠的抓取固定法三、家兔的抓取固定法以上抓取方法都是錯誤的以上兩種固定方法均不正確一、大、小鼠的性別鑒定第二節(jié) 性別鑒定外生殖器和肛門距離長，中間有毛的是雄性Female Male 二、兔的性別鑒定一、大、小鼠 1. 根據(jù)形態(tài)鑒定日齡（大、小情況基本一樣）第三節(jié) 年齡的大致判斷日齡/d外觀形態(tài)特征1仔鼠裸體鮮紅3耳殼露出表皮4臍

2、帶瘢痕脫落5能翻身8能爬行日齡/d外觀形態(tài)特征10能聽到聲音911全身被白毛，門齒長出1315眼皮張開，能跳躍，能抓取東西18以后能自行采食，獨立生活 2. 根據(jù)體重鑒定日齡 小鼠日齡與體重的對應(yīng)日齡/d初生 5 10 15 20 25 30體重/g 1.8 4.0 6.0 11.0 15.0 21.0 21.0 大鼠日齡與體重的對應(yīng)日齡/d初生 10 20 30 40 體重/g67 1725 3550 5590 100150日齡/d50 60 70 80體重/g150210 170240 210270 240320 三、家兔 家兔的門齒和爪隨年齡增長而增長，是年齡鑒別的重要標(biāo)志。青年兔：門齒

3、潔白，短小，排列整齊；老年兔：門齒暗黃,厚而長,排列不整齊,有破損1歲家兔趾爪：紅色與白色長度相等；1歲以下：紅多于白；1歲以上：白多于紅。 五、犬 犬的年齡主要以牙齒的生長情況、磨損程度、外形顏色等情況綜合判定。年齡 犬齒更換和磨損情況2個月以下僅有乳齒(白、細(xì)、尖)24個月更換門齒46個月更換犬齒(白，牙尖圓鈍)610個月更換臼齒1歲牙長齊，潔白光亮。門齒有尖突2歲下門齒尖突部分磨平3歲上、下門齒尖突大部分磨平45歲上、下門齒開始磨損呈微斜面，并發(fā)黃68歲門齒磨成齒根，犬齒發(fā)黃、磨損910歲唇部、胡須發(fā)白10歲以上門齒磨損，犬齒不齊全，牙根黃，唇邊胡須全白第四節(jié) 妊娠檢查妊娠診斷(preg

4、nancy diagnosis)：在配種以后能及時掌握雌性動物是否妊娠、妊娠的時間及胎兒和生殖器官的異常情況，采用臨床和實驗室的方法進(jìn)行檢查。通過妊娠檢查，可以及時地對雌性動物加強(qiáng)護(hù)理或再次配種，以保護(hù)母體和胎兒的正常發(fā)育，避免胎兒早期死亡和流產(chǎn)及減少繁育時間的損失。外部檢查法摸胎法陰道檢查法直腸檢查法超聲波檢查法孕酮含量測定法青蛙試驗妊娠檢查方法第五節(jié) 分組與編號動物實驗前對實驗動物進(jìn)行隨機(jī)分組和編號標(biāo)記 一、隨機(jī)分組：隨機(jī)數(shù)字表（隨機(jī)抽樣原理） （一） 為二組 例：設(shè)有雄性Wistar大鼠12只，按體重大小依次編為1，2，3，12號，試用完全隨機(jī)的方法，分為甲、乙兩組。 分組方法：隨機(jī)點落

5、在是隨機(jī)數(shù)字表上第21行第31列的78，則從78開始，由上向下抄12個隨機(jī)數(shù)字，如下：隨機(jī)數(shù)字：78 38 69 57 91 0 37 45 66 82 65 41隨機(jī)數(shù)字的奇數(shù)代表甲組，偶數(shù)代表乙組：動物編號： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12組 別：乙 乙 甲 甲 甲 乙 甲 甲 乙 乙 甲 甲乙組5個，甲組7個，兩組數(shù)字不等繼續(xù)用隨機(jī)方法將甲組多余的一只調(diào)整給乙組，從上面最后一隨機(jī)數(shù)字41，接下去抄一個數(shù)為62，以7除之(因甲組原分配7只)得6，即把原分配在甲組的第6個甲(即11號大鼠)調(diào)入乙組。 如果甲組多兩個，則接下去抄兩個數(shù)。分別以8，7除之，余數(shù)即指要調(diào)入乙組

6、的第幾個甲，余此類推。最后各組的鼠數(shù)就相等了。調(diào)整后各組鼠的編號為： 組別 鼠的編號 甲組 3 4 5 7 8 12 乙組 1 2 6 9 10 11 (二) 為三組：A組、B組、C組 分組方法：落點是隨機(jī)數(shù)字表第40行17列的08，則從08開始，自左到右抄12個隨機(jī)數(shù)字， 以3除各隨機(jī)數(shù)字，若余數(shù)為l，即該鼠歸A組；余數(shù)為2，歸人B組；余數(shù)為3，歸入C組。 動物編號： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 隨機(jī)數(shù)字：08 27 01 50 15 29 39 39 43 79 69 10 除 3 余數(shù)： 2 0 1 2 0 2 0 0 1 1 0 1 組 別： B C A B

7、C B C C A A C A 調(diào)整組別：B （三） 每個動物為一組： 例：設(shè)有A，B，C，D，E，F(xiàn)代表的6只家兔，試用完全隨機(jī)法將其每只分為一組。 分組方法：從隨機(jī)數(shù)字表上用鉛筆任指一點，若為第21行第17列的33，則從33向左抄用6個數(shù)字，然后分別以6，5，4，3，2，l除之。凡除不盡的，即將余數(shù)寫下。 隨機(jī)數(shù)字 33 46 9 52 68 7 除 數(shù) 6 5 4 3 2 1 余 數(shù) 3 1 1 1 2 1 隨機(jī)排列 C A B D F E 二、編號標(biāo)記方法 實驗動物分組后，為了區(qū)分、觀察并記錄每個個體的反應(yīng)情況，必須給每只動物進(jìn)行編號標(biāo)記。 1體表顏料著色法 一般對短期試驗的白色動物可

8、用顏料涂搽被毛的方法標(biāo)記。常用的涂染化學(xué)藥品有： 紅色：0.5中性紅或品紅溶液； 黃色：35苦味酸溶液或8090苦味酸酒精飽和液； 咖啡色：2硝酸銀溶液； 黑色：煤焦油酒精溶液。 左前腿上部為1，左腰部為2，左后腿為3，頭部為4，背部為5，尾基部為6， 右側(cè)從前至后依次為7、8、9。用黃色表示個位數(shù)，紅色表示十位數(shù)。 2個體耳號標(biāo)記法 3. 個體斷趾標(biāo)記法 4. 耳號鉗標(biāo)記法 5. 掛牌法第六節(jié) 常規(guī)采血方法 一、大、小鼠的采血方法 1頸靜脈或頸動脈采血 2股靜脈或股動脈采血 3心臟采血 4尾部采血 5眼眶采血 6斷頭取血2022/7/2439眼窩靜脈叢采血尾部采血2022/7/2440心臟采

9、血二、豚鼠的采血方法 1耳緣剪口采血 2心臟采血方法同大、小鼠。 3股動脈采血方法同大、小鼠。 4后肢背中足靜脈采血三、家兔的采血方法 1.心臟采血 2.耳中央動脈采血 3.耳靜脈采血 4.頸總動脈 四、狗、貓的采血方法 1后肢外側(cè)跗外靜脈、內(nèi)側(cè)隱靜脈、前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈采血 2股動脈采血 3. 心臟采血同大、小鼠心臟采血。 4耳緣靜脈采血同兔耳緣靜脈采血。 采血方法的選擇，決定于實驗?zāi)康乃柩恳约皠游锓N類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白的測定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破組織取毛細(xì)血管的血。當(dāng)需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時，若需反復(fù)多次，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開始，以

10、免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈。而研究毒物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂，需要比較動、靜脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及 K+、Na+、Cl-離子濃度，必須采取動脈血液。1）采血場所有充足的光線；室溫夏季最好保持在2528，冬季，1520為宜；2）采血用具有采用部位一般需要進(jìn)行消毒；3）采血用的注射器和試管必須保持清潔干燥；4）若需抗凝全血，在注射器或試管內(nèi)需預(yù)先加入抗凝劑。采血時要注意 部 位 動物種類 a. 尾靜脈大鼠、小鼠 b. 耳緣靜脈兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊 c. 眼底靜脈叢兔、大鼠、小鼠取少量血 部 位 動物種類后肢外側(cè)皮下小隱靜脈狗、猴、貓前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈狗、猴

11、、貓耳中央動脈兔頸靜脈狗、貓、兔心臟豚鼠、大鼠、小鼠斷頭大鼠、小鼠取中量血 部 位 動物種類股動脈、頸動脈狗、猴、貓、兔心臟狗、猴、貓、兔頸靜脈馬、牛、山羊、綿羊摘眼球大鼠、小鼠取大量血動物種類最大安全采血量 (ml)最小致死采血量 (ml)小鼠0.20.3大鼠12豚鼠510兔1040狼狗100500獵狗50200猴15604. 最大安全采血量與最小致死采血量2022/7/2454第七節(jié) 麻醉方法一、實驗動物的麻醉方法全身麻醉法：吸入法，注射法局部麻醉法：浸潤麻醉，表面麻醉2022/7/2455（一）全身麻醉法1、吸入法麻醉藥：乙醚氯仿三氟乙烷2022/7/24562、注射法靜脈注射、肌肉注射

12、、腹腔注射麻醉藥：巴比妥類藥物、 氯胺酮、 烏拉坦、 水合氯醛（一）全身麻醉法2022/7/2457（二） 局部麻醉法麻醉部位：皮膚、肌下組織、深層組織 1% 鹽酸普魯卡因 局部浸潤麻醉 0.022鹽酸可卡因 表面麻醉2022/7/2458麻醉藥物應(yīng)用原則：依據(jù)動物體重計算麻醉藥物的劑量；依據(jù)動物生命體征變化控制給藥速度；掌握寧少勿多、分階段給藥的方式；麻醉時需注意保溫。針對不同的動物，選擇不同的麻醉藥物、實施不同的麻醉方法。2022/7/2459麻醉具體操作：家兔全身麻醉麻醉劑：3%戊巴比妥鈉，1ml/kg（30mg/Kg ）前1/2快速推入，使動物能順利、快速地渡過興奮期；后1/2速度宜慢

13、，且邊注射邊注意觀察動物的生命體征變化，當(dāng)確定已達(dá)到麻醉效果時，即停止給藥，不必急于將剩余的麻醉藥物全部推入。給藥方法：耳緣靜脈注射2022/7/2460麻醉成功標(biāo)志角膜反射遲鈍或消失肢體肌肉松弛疼痛反射消失呼吸變深變慢 第八節(jié) 給藥途徑與方法注射法分為：皮下注射、皮內(nèi)注射、肌肉注射 腹腔注射、靜脈注射腦膜下注射、腦內(nèi)注射、胸腔內(nèi)注射、腰椎內(nèi)注射、關(guān)節(jié)腔注射和心內(nèi)注射投入法經(jīng)消化道投入：口腔、胃腔或腸管經(jīng)呼吸道投入：鼻腔或氣管 （一）皮下注射 注射時以左手拇指和食指提起皮膚，將連有5（1/2）號針頭的注射器刺入皮下。 注射部位：狗、貓大腿外側(cè) 兔背部/耳根部 豚鼠后大腿內(nèi)側(cè)/小腹部；大白鼠側(cè)下

14、腹部 （二）皮內(nèi)注射局部脫毛消毒繃緊皮膚30度進(jìn)針挑起針頭稍刺入可注射皮膚表面鼓起一小皮丘。 （三）肌肉注射 選肌肉發(fā)達(dá)，無大血管通過的部位，一般多選臀部 （四）腹腔注射 用大、小白鼠做實驗時，以左手抓住動物，使腹部向上，右手將注射針頭于左（或右）下腹部刺入皮下，使針頭向前推0.30.5cm，再以45度角穿過腹肌，固定針頭，緩緩注入藥液，為避免傷及內(nèi)臟，可使動物處于頭低位，使內(nèi)臟移向上腹。若實驗動物為家兔，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開1cm處。 （五）靜脈注射注射時盡量使血管充盈 1兔：兔耳緣靜脈 先拔毛，手指彈動或輕揉兔耳，使靜脈充盈 固定：左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，

15、無名指及小指墊在下面 進(jìn)針：6號針頭從靜脈的遠(yuǎn)端進(jìn)針，移動拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入 結(jié)束：然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻2022/7/24682小白鼠和大白鼠尾靜脈注射固定動物（鼠筒或燒杯），露出尾巴，4550溫水浸潤半分鐘或酒精擦拭，血管充盈，表皮角質(zhì)軟化固定：以左手食指和中指捏住鼠尾，無名指從下面托起，以大拇指和小指夾住尾巴的末梢注射：進(jìn)針，先緩注少量藥液，無阻力3狗前肢內(nèi)側(cè)皮下頭靜脈、后肢小隱靜脈 側(cè)臥固定，剪毛，用膠皮帶扎緊靜脈近端，從遠(yuǎn)端進(jìn)針，有回血后，松開綁帶（或兩手），緩緩注入藥液。 注射途徑小鼠大鼠豚鼠兔狗腹腔0.21.01325510515肌肉0.1

16、0.20.20.50.20.50.5125靜脈0.20.51215310515皮下0.10.50.510.5213310幾種動物不同給藥途徑的常用注射量（毫升） 動物種類體重（g）最大容積（ml）小鼠301.025-300.820-240.5大鼠3008.0250-3006.0200-2494.0-5.0100-1993.0豚鼠3006.0250-3004.0-5.0家兔35002002500-35001502000-2400100貓3000100-1502500-300050-80犬10,000-15,000200-500（六）經(jīng)口給藥多用灌胃法 常用動物一次灌胃能耐受的最大容積 見右表 1

17、小鼠、大鼠（或豚鼠） 灌胃針安注射器上固定動物成垂直體位經(jīng)口腔緩慢插入灌胃針針插入時應(yīng)無阻力注射液體。灌胃針插入位置：小鼠34cm 大鼠或豚鼠46cm 灌胃量：小鼠為0.21ml，大鼠、豚鼠為15ml。 2狗、兔、貓、猴固定動物將擴(kuò)口器放入動物口中，用繩固定于嘴部橡皮導(dǎo)管（如導(dǎo)尿管），經(jīng)擴(kuò)口器上的小圓孔插入將藥液灌入。 （七）其它途徑給藥1. 呼吸道給藥揮發(fā)性類藥物：乙醚、氨氣等2.皮膚給藥藥液涂在皮膚上，經(jīng)皮膚吸收用于鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等3.脊髓腔內(nèi)給藥用于椎管麻醉或抽取腦脊液4.腦內(nèi)給藥用于微生物學(xué)研究大小鼠正中額部刺入腦，豚鼠、兔、狗須先用穿顱鋼針穿透顱骨，再刺入腦部5.直腸內(nèi)給藥用于動物麻醉6.關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥常用于關(guān)節(jié)炎的動物模型復(fù)制2022/7/2477人與各種動物及各種動物之間用藥劑量換算公式：B動物劑量（mg/kg）=WA動物劑量（mg/kg）第九節(jié) 處死方法處死原則：當(dāng)實驗中途停止