《儀器分析及實驗》課程教學大綱

1、PAGE 8PAGE 269儀器分析及實驗課程教學大綱課程基本信息 中文名稱：儀器分析及實驗 英文名稱：Instrumental Analysis and Experiments 課程編碼：0801035B 課程類別：專業(yè)主干課 總學時數(shù)：39 總 學 分：2 適用專業(yè)：化學 先修課程：物理學、無機化學、有機化學、分析化學、物理化學 開課系部：應用化學系二、課程性質(zhì)與任務儀器分析是分析化學最為重要的組成部分，是化學和相關(guān)專業(yè)的必修課程，也是分析化學的發(fā)展方向，是一門實踐性強的課程。本課程是以分析方法為系統(tǒng)，借助于專用儀器，綜合應用已學過的有關(guān)學科知識，理論密切聯(lián)系實際，重視分析儀器在生產(chǎn)和科研

2、中的實際應用。通過本課程的學習，要求學生掌握相關(guān)基本理論、基礎(chǔ)知識和基本操作技能，掌握基本的儀器分析方法及分析數(shù)據(jù)的處理手段，經(jīng)過系統(tǒng)地必要理論和操作技能的訓練，培養(yǎng)學生嚴謹、細致、實事求是的科學作風，養(yǎng)成分析工作整潔、有序、珍惜儀器設(shè)備的良好實驗習慣，培養(yǎng)學生具有分析問題、解決問題的初步能力。三、課程教學基本要求本課程以方法為系統(tǒng)。教學的基本要求是使學生主要掌握下面兩點：1、理解方法原理（含概念、術(shù)語、定性和定量的依據(jù)和譜圖解析方法等）。2、注重應用特點（含儀器的流程和主要部件、儀器的操作要領(lǐng)和注意事項以及方法的應用范圍等）。四、大綱內(nèi)容及基本要求第一章 緒論教學目的：1、了解儀器分析的內(nèi)容

3、和應用；2、了解儀器分析方法的特點和應用；3、了解儀器分析在化學研究中的作用；4、了解儀器分析的發(fā)展趨勢；5、了解儀器分析的學習方法。光學分析法導論教學目的：1、學習電磁輻射的基本特征；2、了解電磁波譜區(qū)域、光學光譜概論；3、掌握光學分析的儀器組成和分類。教學重點： 光學分析的儀器組成和分類。教學難點： 電磁波譜區(qū)域、光學光譜概論。教學內(nèi)容：1、電磁輻射的波動性；2、電磁輻射的量子性；3、光學分析儀器。4、習題：1、3、4、5、6、10、11、12、13、14、15 第三章 光學原子光譜法基礎(chǔ)教學目的：1、掌握原子化的方法及試樣的引入；2、學會光譜化學性質(zhì)的規(guī)律性；3、了解光學原子光譜。教學重

4、點： 原子化的方法及試樣的引入。教學難點： 光學原子光譜。教學內(nèi)容：1、光學原子光譜；2、元素光譜化學性質(zhì)的規(guī)律性；3、原子化的方法及試樣的引入。4、習題：1、3、5、7、9、11、12 第四章 原子吸收和原子熒光光譜法教學目的：1、了解原子吸收光譜法概述；2、學會原子吸收光譜法的基本原理：原子吸收光譜的產(chǎn)生；譜線的輪廓與變寬，吸收定律；積 分吸收；峰值吸收及其測量。光源；火焰原子化器：石墨爐原子化器：單色儀及檢測系統(tǒng)；3、熟悉原子吸收分光光度計；4、掌握定量分析方法：標準曲線法；標準加入法；內(nèi)標法；5、了解原子吸收中的干擾及消除：光譜干擾；物理干擾、化學干擾；電離干擾；6、了解原子吸收測量條

5、件的選擇；7、了解原子吸收光譜法的靈敏度和檢測極限；8、原子熒光光譜法簡介。教學重點： 原子吸收光譜法的基本原理；原子吸收分光光度計；定量分析方法。教學難點： 譜線的輪廓與變寬；原子吸收中的干擾及消除。教學內(nèi)容： 1、試樣原子化技術(shù)；2、原子吸收光譜儀；3、原子吸收分析中的干擾效應及抑制方法，原子吸收分析的實驗技術(shù)；4、原子熒光光譜法。5、習題：1、5、7、9、11、12、16第五章 原子發(fā)射光譜法教學目的：1、了解原子發(fā)射光譜法概述：發(fā)射光譜分析的概念和基本過程；原子發(fā)射光譜法的特點和應用；2、掌握原子發(fā)射光譜法的基本原理：原子能級和原子光譜；譜線的強度；3、掌握原子發(fā)射光譜儀：光源；光譜儀

6、；觀測設(shè)備；4、學會發(fā)射光譜定性分析：元素的最后線與分析線；譜線的自吸與自蝕；定性分析方法；定性分析過程；5、學會發(fā)射光譜定量分析：定量分析的基本關(guān)系式；內(nèi)標法原理；諧線強度的測量；定量分析方法：背景的影響和扣除；靈敏度和檢出限；6、熟悉發(fā)射光譜半定量分析；7、了解火焰光度分析。 教學重點： 原子發(fā)射光譜法的基本原理；原子發(fā)射光譜儀。教學難點： 譜線的自吸與自蝕。教學內(nèi)容：1、等離子體、電弧和火花光源；2、攝譜儀；3、光電光譜儀。4、習題：2、5、6、8、12、14第六章 質(zhì)譜法教學目的：1、掌握質(zhì)譜法的基本原理；2、熟悉質(zhì)譜圖；3、掌握離子的主要類型：分子離子峰；同位素離子峰；碎片離子峰；重

7、排離子峰；多電荷離子峰；亞穩(wěn)離子峰；4、掌握質(zhì)譜定性分析：分子量的測定；分子式的確定；未知物的鑒定；5、了解質(zhì)譜解析程序。 教學重點： 質(zhì)譜法的基本原理；質(zhì)譜圖；分子離子峰；質(zhì)譜定性分析。教學難點： 質(zhì)譜解析程序。教學內(nèi)容： 1、質(zhì)譜法的基本原理；2、質(zhì)譜儀；3、電感耦合等離子體質(zhì)譜法。4、習題：1、4、5、7 第七章 紫外-可見分子吸收光譜法教學目的：1、了解光的基本知識；2、掌握紫外可見吸收光譜基本原理：分子的能級與分子光譜；紫外可見吸收光譜的產(chǎn)主；電子躍遷的類型；影響紫外光譜的因素；3、熟悉紫外可見分光光度計；4、掌握典型有機化合物的紫外光譜：烷烴；不飽和烴類化合物；碳基化合物；芳香族化

8、合物；雜環(huán)化合物；5、了解無機化合物的電子光譜；6、理解紫外可見光譜定量分析：解聯(lián)立方程法；雙波長分光光度法；導數(shù)光譜法；7、了解紫外可見吸收光譜法的應用：純度的檢驗；有機物結(jié)構(gòu)測定；異構(gòu)體的確定；氫鍵強度的測定。教學重點： 紫外可見吸收光譜基本原理；紫外可見分光光度計；紫外可見光譜定量分析。教學難點： 典型有機化合物的紫外光譜；電子躍遷的類型。教學內(nèi)容： 1、光的吸收定律；2、紫外及可見分光光度計和光譜法的應用；3、化合物電子光譜的產(chǎn)生。4、習題：1、4、5、6、11、13、14 第八章 紅外吸收光譜法教學目的： 1、紅外吸收光譜法概述；2、掌握紅外吸收光譜法基本原理：紅外光譜的產(chǎn)生；雙原子

9、分子的振動；多原子分子的振動；紅外吸收譜帶的強度及影響因素；影響吸收峰位移的因素；3、熟悉紅外光譜的基本區(qū)域：官能團區(qū)；指紋區(qū)域；4、了解幾類主要有機化合物的紅外光譜：烷烴；烯烴；炔烴；芳香烴；醚；醇和酚；羧基化合物；胺；硝基化合物；鹵素化合物；5、熟悉紅外分光光度計和實驗技術(shù)；6、了解紅外吸收光譜的解析和應用；7、學會紅外光譜法定量分析。教學重點： 紅外吸收光譜法基本原理；紅外光譜的基本區(qū)域；紅外光譜法定量分析。教學難點： 多原子分子的振動；紅外吸收光譜的解析和應用。教學內(nèi)容： 1、基本原理；2、特征吸收峰；3、紅外光譜儀；4、紅外光譜的應用。5、習題：1、5、7、8、9、14、16第九章

10、核滋共振波譜法教學目的：1、核磁共振波譜法概述；2、掌握核磁共振波譜法基本原理：原子核的自旋運動和核磁共振現(xiàn)象；化學位移；影響化學位移的因素；偶合與裂分；核磁共振一級譜；3、熟悉核磁共振波譜儀；4、簡介核磁共振的實驗技術(shù)：樣品的處理方法；位移試劑；去偶技術(shù)；5、 簡介核磁共振法的應用:定量分析；結(jié)構(gòu)鑒定；其它核磁共振簡介（13C-NMR，19F-NMR，31P-NMR，15N-NMR）。 教學重點： 化學位移；影響化學位移的因素；核磁共振波譜儀。教學難點： 偶合與裂分。教學內(nèi)容：1、基本原理；2、核磁共振儀；3、化學位移與核磁共振譜；4、核磁共振譜的應用。5、習題：1、3、4、8、11、12、

11、13、20、21、22第十章 電分析化學導論教學目的：1、熟悉基本術(shù)語和概念；2、掌握電分析化學方法分類及特點。教學重點、難點： 電化學基本術(shù)語和概念。教學內(nèi)容：1、基本術(shù)語及概念；2、方法分類及特點。3、習題：2、3、5、6、8、9第十一章 氣相色譜法教學目的：1、 掌握氣相色譜儀的流程及主要部件；2、氣相色譜柱、氣相色譜固定相的類型；3、固定液的極性表達和固定相選擇的原則；4、 熟悉氣相色譜檢測器的性能指標，幾種檢測器的結(jié)構(gòu)、檢測原理、特點以及主要操作條件聯(lián)用技術(shù)；5、吸附色譜和分配色譜的應用特點；6、了解氣相色譜分析條件的選擇原則，程序升溫氣相色譜法和毛細管氣相色譜法的特點。 教學重點：

12、 氣相色譜儀的流程及主要部件；氣相色譜檢測器的性能指標。教學難點： 程序升溫氣相色譜法和毛細管氣相色譜法的特點。教學內(nèi)容：1、氣相色譜儀；2、氣相色譜方法及應用。3、習題：1、2、8、14、17 第十二章 高效液相色譜法教學目的：1、掌握高效液相色譜法的特點，高效液相色譜儀的主要部件及分析流程；2、了解吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法和體積排除色譜法的固定相、流動相和應用特點，選擇分離類型的原則，薄層色譜法的特點；3、了解分離分析中的新技術(shù)。教學重點： 高效液相色譜儀的主要部件及分析流程。教學難點： 吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法和體積排除色譜法的固定相、流動相和應用特點。教學內(nèi)

13、容：1、高效液相色譜儀。2、習題：2、3、4 實驗大綱實驗一 苯甲酸紅外光譜吸收光譜的測定KBr壓片法制樣一、實驗目的1、學習用紅外吸收光譜進行化合物的定性分析；2、掌握溴化鉀壓片法制備固體樣品的方法；3、學習并掌握TENSOR27型傅立葉變換紅外光譜儀的使用方法。二、實驗原理物質(zhì)分子中的各種不同基團，在有選擇地吸收不同頻率的紅外輻射后，發(fā)生振動能級之間的躍遷，形成各自獨特的紅外吸收光譜。據(jù)此可對物質(zhì)進行定性、定量分析?；鶊F的振動頻率和吸收強度與組成基團的原子質(zhì)量、化學鍵類型及分子的幾何構(gòu)型等有關(guān)。因此根據(jù)紅外吸收光譜的峰位置、峰強度、峰形狀和峰的數(shù)目，可以判斷物質(zhì)中可能存在的某些官能團，進而

14、推斷未知物的結(jié)構(gòu)。最后可通過與未知樣品相同測定條件下得到的標準樣品的譜圖或已發(fā)表的標準譜圖（如Sadtler紅外光譜圖等）進行比較分析，做出進一步的證實。三、試劑和儀器儀器 TENSOR 27型傅立葉變換紅外光譜儀（德國Bruker公司）；壓片機和模具；瑪瑙研缽；試樣勺。試劑 苯甲酸為優(yōu)級純，溴化鉀為光譜純。 四、實驗步驟溴化鉀壓片法：取1-2mg苯甲酸，加入100-200mg溴化鉀粉末，在瑪瑙研缽中充分磨細（顆粒約2m），使之混合均勻，取出適量混合物均勻鋪灑在干凈的壓模內(nèi)，于壓片機上在1215kg/cm2壓力下，維持3min，制成透明薄片。將此片裝于固體樣品架上，樣品架插入紅外光譜儀的固體支

15、架上，掃描測繪譜圖。在整個制樣過程中注意避免吸潮。五、數(shù)據(jù)處理將測得的苯甲酸的吸收光譜與標準譜圖對照，根據(jù)特征吸收頻率數(shù)據(jù)，對特征吸收峰進行檢驗，在4000-2000cm-1范圍內(nèi)，波數(shù)誤差不大于10cm-1。在2000-650cm-1范圍內(nèi)，波數(shù)誤差不大于3cm-1。苯甲酸分子中各原子基團的基頻峰如下：原子基團的基本振動形式 基頻峰的頻率 /cm-1C-H(Ar 上) 3077,3012C=C(Ar 上) 1600,1582,1495,1450C-H(Ar 上鄰接五氫) 715,690 O-H 935 C=O 1400 C-O-H(面內(nèi)彎曲振動) 1250 實驗二 火焰原子吸收法測定水中的銅

16、1、實驗目的和要求了解原子吸收分光光度計的基本結(jié)構(gòu)和使用方法；掌握應用標準曲線測定水中的金屬含量2、原理將水樣或消解處理好的試樣直接吸入火焰，火焰中形成原子蒸汽對光源發(fā)射的特征電磁輻射產(chǎn)生吸收。將測得的樣品吸光度和標準溶液的吸光度進行比較，確定樣品中被測元素的含量。3、儀器和試劑（1）儀器原子吸收分光光度計、背景校正裝置、所測元素的元素燈及其必要的附件（2）試劑硝酸，優(yōu)級純、高氯酸，優(yōu)級純、去離子水、燃氣乙炔，純度不低于99.6%、助燃空氣、銅標準貯備液：準確稱取經(jīng)稀酸清洗干燥后的0.5000g光譜純金銅，用50mL（1+1）硝酸溶解，必要時加熱至完全溶解，用水稀釋至500 mL，此溶液每毫升

17、含1.00mg銅。銅標準溶液：用0.2%硝酸稀釋金屬主鋇溶液配置而成，使配成的標準溶每毫升含銅50.0ug。4、步驟（1）樣品預處理：取100 mL水樣放入200 mL燒杯中，加入硝酸5 mL，在電熱板上加熱消解。蒸至10 mL左右，加入5毫升硝酸和2 mL高氯酸，繼續(xù)消解，直至1 mL左右。（2）樣品測定：按參數(shù)選擇分析線和調(diào)節(jié)火焰。儀器用0.2%硝酸調(diào)零，吸入空白樣和試樣，測量其吸光度?？鄢瞻讟游展舛群?，從校準曲線上查處試樣中的金屬濃度。也可以從儀器上讀出。（3）校準曲線：吸收標準溶液0 mL、0.5 mL、1.00 mL、3.00 mL、5.00 mL、10.00 mL，分別放入6個

18、100 mL容量瓶中，用0.2%硝酸稀釋定容。接著按樣品測定的步驟測量吸光度，用經(jīng)空白校正的各標準的吸光度對相應的濃度作圖，繪制校準曲線。5、計算銅（mg/L）=m/v式中，m為從校準曲線上查出或儀器直接讀出的被測金屬量，ug；V為分析用的水樣體積，mL。6、思考題（1）簡述原子吸收分光光度分析的基本原理。（2）能否用氫燈或鎢燈代替空心陰極燈？實驗三 熒光分光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的含量一、實驗目的1、學習熒光分光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的分析原理；2、掌握熒光分光光度計的操作技術(shù)和測定多維葡萄糖粉中維生素B2的方法。二、實驗原理維生素B2（核黃素，VB2）橘黃色無臭的針

19、狀結(jié)晶，維生素B2溶液在430440 nm藍光的照射下，發(fā)出綠色熒光，熒光峰在535 nm。維生素B2在pH=67的溶液中熒光強度最大，在pH=11的堿性溶液中熒光消失，所以可以用熒光光度法測維生素B2的含量。維生素B2在堿性溶液中經(jīng)光線照射會發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素，光黃素的熒光比核黃素的熒光強的多，故測維生素B2的熒光時溶液要控制在酸性范圍內(nèi)，且在避光條件下進行。三、試劑與儀器熒光光度計，5 ml吸量管，2 ml吸量管， 50 ml容量瓶10.0g/ml維生素B2標準溶液，冰乙酸（AR）四、實驗步驟1、按先開機預熱30min2、設(shè)置相關(guān)參數(shù)：激發(fā)波長：440nm，發(fā)射波長：540 nm，靈敏

20、度2，入射縫寬和出射縫寬均為10nm。3、標準溶液測定 在6個干凈的50 ml容量瓶中，分別吸取0.50、1.00、1.50，2.00，2.50和3.00ml維生素B2標準溶液，各加入2.00 ml冰乙酸，稀釋至刻度，搖勻。分別得到0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6g/ml的維生素B2溶液，從稀到濃測量系列標準溶液的熒光強度。4、未知試樣的測定 稱取0.1094 g葡萄糖粉試樣，用少量水溶解后轉(zhuǎn)入50 ml容量瓶中，加2.00 ml冰乙酸，稀釋至刻度，搖勻。在測定標準系列時的相同條件下，平行測量其熒光強度3次。5、退出主程序，關(guān)閉計算機，先關(guān)主機，最后關(guān)氙燈。五、數(shù)據(jù)處理： 1.

21、用標準系列溶液的熒光強度繪制標準工作曲線。VB2 (ml)0.501.001.502.002.503.00C(ug/ml)0.100.200.300.400.500.60熒光強度 2、未知樣品的測定根據(jù)待測液的熒光強度，從標準工作曲線上求得其濃度，計算出試樣中含量。編號123平均值熒光強度C(ug/ml)從標準曲線計算出待測試液維生素B2的濃度為：六、思考題：1. 維生素B2在pH67時熒光最強，本實驗為何在酸性溶液中測定？實驗四 X射線粉末衍射法物相分析一、目的要求掌握X射線粉末衍射法的實驗原理和技術(shù)學會根據(jù)X射線粉末衍射圖，分析粉晶試樣的物相組成二、X射線粉末法原理X射線粉末衍射法自從德拜

22、和謝樂首創(chuàng)以來，已經(jīng)有了很大的發(fā)展，其應用范圍非常廣泛，可用來鑒別礦物的物相，測定點陣常數(shù)和晶胞大小，對固溶體進行相的定性與定量分析，還可研究晶粒的大小以及晶體中的殘余應力和點陣畸變等，因此X射線粉末衍射法已成為催化、材料科學及礦物研究中常用的實驗手段。由結(jié)晶學知道，晶體具有周期性結(jié)構(gòu)。一個立體的晶體結(jié)構(gòu)，可看成是一些完全相同的原子平面網(wǎng)按一定距離d平行排列而成，同時也可以看成是另一些原子平面網(wǎng)按另一距離d平行排列而成。所以一個晶體必然存在著一組特定的d值（d, d, d, d）。結(jié)構(gòu)不同的晶體其d值組絕不相同，所以可用它來表示晶體特征。下面介紹如何用X射線粉末法來測定d值。假定晶體中某一方向

23、上原子網(wǎng)面之間的距離為d，X射線以夾角入射晶體，如1所示，從原子網(wǎng)面1和2上產(chǎn)生的兩條衍射線a和b，其光程差為BD+DC，而BD=DC=dSin，故BD+DC=2dSin。我們知道，只有當光程差等于入射光波長的整數(shù)倍n時，亦即d與之間應符合布拉格（Bragg）方程時，才能產(chǎn)生被加強了的衍射線。 （參見謝有暢、邵美成編結(jié)構(gòu)化學下冊，P49）2dSin= n （8-1）圖1 原子網(wǎng)面對X射線的衍射多晶X射線衍射儀器的類型多種多樣，但按其設(shè)計所采用的衍射幾何特點的不同，可分為平行光束型和聚焦型兩大類；按X射線的檢測記錄手段來分也可分為兩大類：感光膠片法（照相法）和衍射儀法。本實驗所采用的儀器為聚焦型

24、衍射儀。應用聚焦原理來設(shè)計粉末衍射裝置，實驗時可以使用大發(fā)散的點發(fā)散X射線束，樣品受照射的表面可以很大，大大增加參與衍射的晶粒數(shù)目；而由于聚焦作用，樣品表層中取向湊巧的晶粒產(chǎn)生的同一衍射卻能同時聚焦集中在同一位置上，得到強度高得多的衍射線，有利于測量。而且，由于X射線源的焦點可以達到很小的尺寸，所以聚焦型的衍射儀器有極好的角度分辨能力。衍射角2的測量則通過一臺精密的機械測角儀來實現(xiàn)。2可以根據(jù)檢測器轉(zhuǎn)過的角度直接讀出。通過檢測器上的閃爍計數(shù)器還可同時給出各衍射線的衍射強度。進而由計算機數(shù)據(jù)采集與分析系統(tǒng)以譜圖或數(shù)據(jù)形式給出衍射結(jié)果。每一種結(jié)晶物質(zhì)均有其特定的結(jié)構(gòu)參數(shù)，這些參數(shù)在X射線衍射圖上均

25、有所反映。單相物質(zhì)的多晶衍射線條的位置和強度是該物相的特有標志。盡管物質(zhì)的種類很多，但很少能找到衍射圖完全相同的兩種物相。由多相物質(zhì)組成的試樣，所得衍射圖是所含單相物質(zhì)衍射圖的簡單疊加。根據(jù)這一原理，可以從一多相物質(zhì)粉末衍射圖中將各物相鑒別出來，由未知物相的衍射圖測算出各衍射線條的晶面間距d值和相應的相對強度值，把這些實測數(shù)據(jù)與已知物相的相應數(shù)據(jù)進行比較，如果兩者均相同，則待鑒定的物相就是該已知物相。幾十年來，國際粉末衍射標準聯(lián)合會（簡稱JCPDS）收集世界各國發(fā)表的單相結(jié)晶物質(zhì)的X光粉末衍射圖譜，經(jīng)過審定、整理、匯編成JCPDS粉末衍射卡出版發(fā)行。實際工作中只要測得被測物質(zhì)得粉末衍射圖，再去

26、查對JCPDS卡片，現(xiàn)在JCPDS卡片已改成為PDF卡片，通過查對標準卡片即可得知被測物質(zhì)的化學式、習慣用名、以及有關(guān)的各種結(jié)晶學數(shù)據(jù)。因此，這套卡片已成為X射線粉末法物相分析必不可少的工具，目前已有人將其編制成數(shù)據(jù)庫，可在計算機上方便地進行查尋。三、儀器和試劑 X射線粉末衍射儀(Cu靶)瑪瑙研缽樣品: 氧化物的純物質(zhì)或混合物樣品架四、實驗步驟研磨樣品 用瑪瑙研缽將試樣研細至手感無顆粒感覺即可。制樣品板 將樣品架置于一干凈的平板玻璃上，把研細的樣品填入樣品架的內(nèi)框中，然后用一平面用力壓實，樣品的背面要均勻平整，作為衍射面。將裝好樣品的樣品架小心放置到樣品架座上。開啟X射線粉末衍射儀 設(shè)定工作儀

27、器參數(shù)和掃描條件。進行衍射實驗和數(shù)據(jù)采集，采集完后將數(shù)據(jù)存盤處理數(shù)據(jù)，并進行計算機檢索。五、數(shù)據(jù)處理及物相鑒定X射線粉末衍射儀帶有一套比較完整的衍射數(shù)據(jù)處理分析系統(tǒng)，可進行數(shù)據(jù)處理和樣品物相的查卡鑒定。六、思考題試討論制樣過程中樣品顆粒過大對實驗結(jié)果會有什么影響？瀝青和玻璃絲會產(chǎn)生衍射譜圖嗎？為什么？實驗五 高效液相色譜儀的定量分析一、 實驗目的1、了解高效液相色譜儀定量分析的基本原理。2、基本掌握液相色譜儀定量分析的操作過程。二、 儀器及試劑1、 高壓泵（雙泵） 2、 六通進樣閥3、檢測器 4、 色譜工作站5、乙腈（色譜純）；水（亞沸蒸餾水）6、苯甲酸（A.R.） 7、容量瓶、燒杯、移液管等

28、三、 基本原理1、 定量分析的基本原理：當一個樣品在色譜柱內(nèi)被分離成幾個組分以后，每個組分依次流經(jīng)檢測器，經(jīng)檢測得到相應的色譜圖。色譜圖中各個組分的響應值，也就是色譜峰的一些性質(zhì)如峰高、峰面積是定量分析的基本依據(jù)。以常用的紫外-可見光檢測器為例：由于紫外-可見光檢測器(UV-Vis檢測器)與分光光度計的基本原理一致，在一定的濃度范圍內(nèi)都服從比耳定律（Beerslaw）:a=bc 其中，a為吸光度；為該物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)；b為光程；c為該物質(zhì)的濃度。根據(jù)一系列的數(shù)學推導，得出以下的公式：在一定的濃度范圍內(nèi)，有C=kA+b C為樣品中該物質(zhì)的濃度，A為該物質(zhì)對應的峰面積，k、b為常數(shù)。 也就是說，

29、被分析樣品內(nèi)某一物質(zhì)的濃度和該物質(zhì)所對應的峰面積成正比，這就是高效液相色譜定量分析的基本原理。在本實驗中，首先我們通過觀察保留時間，對未知樣品中的苯甲酸進行定性分析。然后，通過一系列苯甲酸的標準溶液、未知溶液的峰面積測定，計算出未知溶液中苯甲酸的濃度。四、 實驗步驟1、 流動相的配制：乙腈和水分別以0.45 微米的微孔濾膜過濾后，超聲脫氣20 分鐘，放到色譜儲液槽中。2、 標準溶液的配制：正確稱取一定量的苯甲酸，以乙腈溶解，以流動相稀釋至1mg/mL，用移液管分別移取0.2mL此溶液至50mL容量瓶內(nèi)，以流動相稀釋至刻度。每個標準溶液都以0.45微米的微孔濾膜過濾，備用。3、 檢查高效液相色譜儀電路連接和液路連接，正確以后，