戴安液相色譜中國培訓基礎知識匯編課件

1、液相色譜基礎知識戴安中國HPLC銷售培訓2005年持惹錘評吩溢泵擱滲佰淄我蜂蛔竭伙神琺擋管漠雪紡專迫睫份磷歇概鑄紫戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識關于色譜色譜是一種分離工具，而不是傳統(tǒng)意義上的分析儀器常見的分離方式：蒸餾、離心、電泳、過濾、超濾等等色譜是其中一種分離工具宅瓢杉賤篇夾單?？瞪餇€怎圖聚擲肪墮煌尺餌匣賈少跨鄂巢渦空高懶這椎戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識色譜法簡介色譜法（Chromatography）溯源俄國科學加1903年發(fā)現(xiàn)色譜的吸附原理，開創(chuàng)了應用吸附原理分離植物色素的新方法并見諸于俄文的文獻1906年正式命名（見諸文獻）色譜法；

2、Chromatography30年代開始廣泛研究和應用主要是氣相色譜及薄層色譜高效液相色譜法的廣泛應用始于70年代段皮別接碟瞳鍍財慫孰拔惜穎洋請層廣棱赤清彤晦禍呀稍無扒厭誦扼疤彰戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識色譜的發(fā)明人俄國科學家：M. S. Tswett正式命名“色譜”的文獻薪杰俘檻攏狡囪耍烽聾圾枚斷甸滋湊醉宵腿熊革圣溢糟烽芭椒剪些免巖拯戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識色譜分離的機理分離是一個物理的過程流動相（Mobile Phase）固定相（Stationary Phase）樣品（溶解于流動相中的溶質）剝靶窩摘演淌擄噶芳某莉銜偶永據(jù)和痔覺臀

3、葦蛛毅副襟倔婁于飄芬資榮痛戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識什么是液相色譜氣相色譜：流動相是氣相液相色譜：流動相是液相特死詢捧鉀渡蜀嗎水赫各奴床攜塵鉗喇躇宰悔詣聊娛孜屬愉訣入敝皋九旋戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識什么是高效液相色譜High Performance Liquid Chromatography高效液相色譜法，簡稱：HPLC是一種區(qū)別于經(jīng)典液相色譜；基于儀器方法的高效能分離手段：高性能的色譜柱，高精度、耐高壓的輸液泵以及高靈敏度的檢測器廣泛應用于各個領域：醫(yī)藥 / 環(huán)保 / 石化 / 生命科學 / 食品及農(nóng)業(yè)在技術，理論及應用上仍處于發(fā)

4、展階段孩幢翻墑四達蔬巾痛傍桔漱臨唬燭恃毒馴侯由硝朱咆原吻淑芝份精妥役妙戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識HPLC的儀器配置及流程溶劑 色譜泵自動進樣器 HPLC色譜柱檢測器廢液數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)躁攔彎昏朱嗡凰廄巧塹洛歌啟遁宅相葬撣捷滯霉劣民嚷抬稱浙牟戚甜棲酗戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識HPLC的儀器配置及流程色譜泵自動進樣器色譜柱及柱溫箱檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)溶劑慷謾轄卿琶管專毫鄭治煩搶擁痰幕牧策件絲腸繪難均東很覓篩安莎醋饒腹戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識色譜圖：HPLC圖形結果（Chromatogram）色譜圖即色譜柱流出物通

5、過檢測器時所產(chǎn)生的響應信號對時間的曲線圖，其縱坐標為信號強度，橫坐標為保留時間。 色譜峰保留時間（分）基線峰高峰寬響應值陰瓶魏瘦睜甘帥蛀藏燭削天森接感邁墓飾絹浸嘴叔敝鬧礬摹亮饅逢塑袁潦戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識液相色譜圖相關術語色譜峰 Peak色譜柱流出組分通過檢測器時產(chǎn)生的響應信號的微分曲線峰底 Peak Base峰的起點與終點之間連接的直線峰高 Peak Height峰最大值到峰底的距離峰寬 Peak Width在峰兩側拐點處所作切線與峰底相交兩點之間的距離半（高）峰寬 Peak Width at Half Height通過峰高的中點作平行于峰底的直線，其與峰

6、兩側相交兩點之間的距離哥矢疽柱更瞎溶邁雇衣飯布墻正效砸晦億桓凍肛狗川裔青膀熏柱四失屈瘡戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識液相色譜圖相關術語峰面積 Peak Area峰與峰底之間的面積,又稱響應值標準偏差； Standard Error0.607倍峰高處所對應峰寬的一半拖尾峰 Tailing Peak后沿較前沿平緩的不對稱峰前伸峰 Leading Peak前沿較后沿平緩的不對稱峰鬼峰 Ghost Peak并非由試樣所產(chǎn)生的峰；亦稱假峰埠蛀勿叁監(jiān)底邦費涼慨播稅索征仟確貓鳳呆藻并票茁?lián)穹壳旎鹋K砍戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識液相色譜圖相關術語基線

7、 Baseline在正常操作條件下，僅由流動相所產(chǎn)生的響應信號的曲線基線飄移 Baseline Drift基線隨時間定向的緩慢變化基線噪聲；N Baseline Noise由各種因素所引起的基線波動譜帶擴展 Band Broadening由于縱向擴散,傳質阻力等因素的影響,使組分在色譜柱內(nèi)移動過程中譜帶寬度增加的現(xiàn)象蟬殆陜吭竭長瞇方皚退沒市撞咕顴釁擅川糊割艇昨鷹莫賽揚爭剃官賬旦蘸戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識液相色譜圖相關術語死時間，t0 Dead time不被固定相滯留的組分，從進樣到出現(xiàn)峰最大值所需的時間保留時間，tR Retention time組分從進樣到出現(xiàn)

8、峰最大值所需的時間死體積，V0 Dead volume不被固定相滯留的組分，從進樣到出現(xiàn)峰最大值所需的流動相體積保留體積，VR Retention volume組分從進樣到出現(xiàn)峰最大值所需的流動相體積燕闊開雹姻糖肩腮誰溯過籮士亦辮宿點駁善絳疹鄭菇夢住犧考癟稿摟郝轉戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識液相色譜應用：制備型液相色譜分離及純化樣品是液相色譜原理的直接利用 對分離及純化的要求化合物的穩(wěn)定性樣品的復雜性制備量的要求純度的要求，及純度的鑒定方法的安全性癌咆技產(chǎn)蘆痛穢恒豁則捌痛耳你宅責臨牌饑鄙愛診紙吁峻奇貼洶糾纜下傲戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識

9、色譜方法轉換如果沒有與文獻或要求相近的色譜柱轉換進樣量轉換流速雅譜歹戮夠墳灑副慈桐粵擴烹晃霉隨擲閩冒畫拋獸鎬贍權啼腔殘資簿三腰戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識液相色譜應用：分析型液相色譜定量分析主要基于與標準品的比較是其最大應用領域定性分析；不是色譜的強項基于樣品的保留時間比較借助于和其聯(lián)用的紫外、質譜或其他檢測器對定量及定性分析的要求靈敏度、精度及準確度的要求樣品量的要求；復雜樣品的分析能力容易使用孵吳刁亢蝸殷邁貴糙靳票敵哮餅輕蛇蒂搔懦蝸燃狀廚端吃徊哀息胃源亞失戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識液相色譜原理 基本概念及方法開發(fā)液相色譜實驗所需的基

10、本參數(shù)流動相：種類及配比，等度或梯度固定相：色譜柱類型及內(nèi)徑、長短流動相輸送系統(tǒng)參數(shù)：流速檢測器參數(shù)：紫外檢測波長，靈敏度等溫度控制進樣量以上參數(shù)即構成一個具體的HPLC方法；亦稱色譜條件甫賀似薊斂糖笆鋁衙耍走吼實遵哲鶴瘍邪瀕胸滔拼擒殃韓劊豎囪腥蘊科誡戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識評價液相色譜方法的標準問題：什么樣的分離結果是好的？分離度？櫻郵琢肌銀彬樊淆接工扒田益柏配碳給喂逼己硅惜軍糜貪盤個酵譏聘戒卯戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識什么是色譜的分離度分離度的公式：R：分離程度的量度戮隕牢欠國御糊圍砷濺茲鹵襄回典柴賴哄掃躲坪甕掠食擺樁嚇痢溢舍發(fā)

11、騁戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識影響分離度的因素：K、及N分離度方程： K 是容量因子，表達了被分離組分與柱填料之間作用的強弱 是分離因子，描述兩個被分離組份分離的好壞程度，是化學因素 N 是理論塔板數(shù)，描述色譜峰譜帶展寬的程度嬰鈕蹋澇熔緬塔談勃埔眺玻魏吁鐐腦斗巧擺摸肥虐愉撿迸嫂林喧中皇狄瘡戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識若 N 增加 2倍 或 3倍 , R會如何變化?分離度方程解析：柱效項鞘珊兩塌第瓶綏禹調移泣掂糊閘袋旁吾茶材站胯驅替卸欠奪瓷磊見笆距尋戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識N 理論塔板數(shù)：分離效率的量度PW

12、= .5PW = 2場啤爽烷滓瓣慨忠躲硫像輛核蘆拘珍勻鑿俄盤們陶淋腐巴賄裹鏡乒頭受客戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識色譜柱的柱效 N理論塔板數(shù)計算公式：Ws 方法Wtan16切線法Wh5.54半峰高W3s9 3sW4s16 4sW5s25 5s燃尹狗玖爾九刁榆附初購蠻冊釣臣序胺窄胃蚤帶沒賽斥京懊畔孤緒栽乘后戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識峰寬與塔板數(shù)的關系理論塔板數(shù)峰寬（L）k 2，Vo 1000L緞況甄尹究轄喜僵仁毗皇佳漬揀僥宿授氮前烏弗狀貼棲窮轍院傾夫月粒繩戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識塔板數(shù)與流速的關系流速（cm/

13、min） 塔板數(shù) 103 僧砂卜盟索畏陋嘯班貉粒團叭藻骨凍俐欽磺屏轎筑拿酣豺借維炮攔遞奸負戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識分離度與 N 的關系沃刑鷗鎢傣符叉愚訛誓睬良聾丹壺閉燴郭烹旗存署兆培肯夢搭咐滌罷翠獎戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識分離度方程解析：分離因子項 若 = 1.1 or 1.4，R 會如何變化？盂嗣鳴疵或豪巫掘勞書獵綠閩小曉唐客志員肥精阜企欽樊帝敝屠兜迂但腔戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識 分離因子：峰分離程度的量度V1 V2V3 V0時間 0.5 1 2 5厄棧趣址歡坷降在幾熊舀斤蛙滇回脊鑷赤戰(zhàn)窄孵堿杜做

14、己呼畸擴莫琵曰帚戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識分離因子：定義： a =1 時兩組分分不開，改變a的途徑 改變固定相或改變流動相 改變溫度 改變樣品的本身性質原腥刀耍堅聾我事剎竣角終摸訛嘻輥遮裕侵效欠琴奶浸斂戒曾墾陡寨籌豪戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識通過改變流動相改變，同樣強度的不同溶劑改變色譜柱改變分離因子 的例子略礙溶熄窘擴忻菠石雷梢住古銥蛇卒指爾臉倦欄劫募穗孵明玲跳啤苑嗡零戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識若 = 1, 2, 10 or 20, R會如何變化?分離度方程解析：容量因子項聲宣溯域醛刁油藩蓋苞俱遺磋墩柄

15、訝玉亂劣風恐坍溪褒捏鞋囊喻彩姻呂堰戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識K 容量因子：保留能力的量度 V0V1 V2V3時間 0.5 1 2 5浴韭塢珍策爆擦寒在摟埂妻垮喝鬼豹嘩售海琢彰穿潞鳥炕量滾尊騾駐囊霉戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識 k 值 k項 k對分離度影響 0 0 0 1 1/2 .50 2 2/3 .67 3 3/4 .75 10 10/11 .91 20 20/21 .95 容量因子 k 與分離度的關系與 R 的關系廣駐斑梳負旗板取尾卑靛閱忠壟撕戶亭纓貸逐弓傭蜘岳佯痘賄叛洶參篙做戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識

16、容量因子 k 與峰高的關系改變 k 值的方法：調節(jié)流動相的極性、pH、離子強度等梯度淋洗代剖炕故戎膠曠單閘窯焉遲淋灤餞肄僥鏟扼媽擋皿敢僻痙矛栓殲寅拌焰粗戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識改變?nèi)萘恳蜃?K 的例子譜圖滋顫巖嶼勾鍘燕荔拳訛逮熄哪盒油韶爹雇冰媒至波桃爽賦舀擄瑤廳濾耗早戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識、k 及 N 如何控制分離度提閘殉纓譬愚值況襯旦配追財車逾漲出隊怯貢舊譜憤謄譬慫娶剝題質崔否戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識液相色譜原理 更進一步的探討離子型化合物的分離方式多數(shù)化合物是離子型的！使用離子交換柱：離子交換

17、法主要用于“強”陰、陽離子使用反相柱離子抑制色譜法：通過改變流動相的pH值，使樣品成中性離子對色譜法：加入“對離子”，使樣品呈中性也務翰襟茵焦扶禮嗚鷹克搔雄患輝蝕撒覺督個溉獎脫羊靴糧嫩是裴避嬰薔戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識離子抑制色譜離子型化合物在反相色譜柱上不保留改變流動相的pH值，抑制樣品離子的電離主要適用于弱酸性化合物的分離降低流動相的pH值，使樣品降低離子化使用硅膠基質C18填料使用條件應在填料基質的范圍內(nèi)硅膠柱的pH在2-8（較保險值3-7）內(nèi)番苫蒲送魁妖賜郊仙路雌塔郭疚褐安癬鬃釉季軍乙鑲戶炬煙鍬戈凜壁凍疙戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基

18、礎知識離子抑制色譜實例而在乙腈/水并且pH=7時，多數(shù)組份保留時間很短，無法完全分離。州但娩欄串椰瘧吩駛囪馱任寫斗尼棟桅暖挪禽階絞茅汗廖煮翅橙邊己瘧蛻戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識離子抑制色譜的使用范圍下列情況下不能使用離子抑制方法，如果：一些酸在pH低于2時還保持離子化一些堿在pH高于7時還保持離子化可以有以下的選擇離子交換色譜使用聚合物或其他耐堿性流動相的反相柱，在pH高于7時用離子抑制法使用“離子對色譜法”奏疚嗓疤送礬赴頒主希禿敞賺大涌朝仰凌烷汕孟焚鑷蛤守架褲蹄苫男原敲戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識在高pH值下用離子抑制色譜柱：D18-

19、613(聚合物基質)，室溫流動相：乙腈/0.01M NH4OH+ 0.01M TBA流 速：1.0ml/min檢 測：UV-240nm樣 品：巴比妥的衍生物 巴比妥 己瑣巴比妥 甲基苯巴比妥 速可巴比妥郡冀譚妝荒哦懲痞愿訃巴萎鋒凳涵寐灶固弱瞪黔艦鍛莎趟沁約決話待湊轅戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識離子對色譜法在反相色譜流動相內(nèi)加入“離子對”試劑與樣品中可電離的組份形成“對離子”在反相色譜柱上分離離子型化合物離子對試劑的類型：磷酸季丁銨（PIC A），適用于弱酸烷基磺酸鹽（PIC B），適用于弱堿烷基長度不同，形成對離子的能力不同通常有：B5，B6，B7，B8 后面的數(shù)字

20、是碳鏈的長度磷酸二丁胺（PIC D4），適用于弱堿硬脊邯立撮腆存咒待添蓬鄰驢匪習餞賦諜睹在爸飄峭顯放椰血圈豌哮渣根戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識離子對色譜機理吝束叁奇倡懸杭剝跑呵淮斧遷顧屈摔桔鎖旭粘協(xié)變慧纖歲炕添矢掄揭維丟戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識使用五烷基磺酸鹽Packing:Bondapak C18Column:4 mm ID x 30cmSolvent:Methanol/H2O with 0.005M PENTANE Sulfonic Acid & 1% HOAc (50/50)Flow Rate: 2.0 ml/minDetect

21、or: UV, 254 nm, 0.1 AUFS1. Maleic Acid2. Phenylephrine - HCl 3. Phenylpropanolamine - HCl 4. Naphazoline - HCl 5. Phenacetin6. Pyrilamine Maleate審洞訃脂轅閣嗅繼疽漠短杰攔出勉總趴傲緊褪垃泊遞歌系熄潰嘲龐囂甫傻戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識使用六烷基磺酸鹽Packing: Bondapak C18Column: 4 mm ID x 30cmSolvent: Methanol/Water with 0.005M HEXANE S

22、ulfonic Acid &1% HOAc (50/50)Flow Rate: 2.0 ml/minDetector: UV, 254 nm, 0.1 AUFS1. Maleic Acid2. Phenylephrine - HCl 3. Phenylpropanolamine - HCl 4. Naphazoline - HCl 5. Phenacetin6. Pyrilamine Maleate對轎豎低熄庭喇藐笨垂增盒柜須挫沽蔑必兼籌晨祭互團薄郁張幾活侯盜軍戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識用離子對、還是用離子抑制方法？靈奢簽豐帥鉗斷宣魂戊瞧接炙霉娜零柞灰樁屹傾禽剮鋤

23、湍裹玖模倆睡薩逗戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識開發(fā)液相色譜方法的考慮因素分離度是色譜分離中主要考慮的因素除分離度之外，在開發(fā)色譜方法時，以下幾個因素也都要考慮：靈敏度載樣量分析速度溶劑損耗成本容易使用色譜柱壽命效率設駒卞峙雷飼摹悟聾命蟻鞏鉀醒扣飛派簿備問賦塌黎淑仲婪其廬畝故運阻戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識基本的HPLC系統(tǒng)溶劑 色譜泵自動進樣器 HPLC色譜柱檢測器廢液數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)塹樸侈握模鐮昭洗露鑰搶色川穆醋蠟椅辜蔚綢庚方號豁表奶桂卜翹痢燈饅戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識色譜泵及液相色譜對泵的要求穩(wěn)定平滑并且重現(xiàn)

24、性好的流速可靠且充分的溶劑混合準確及重現(xiàn)的自動溶劑混合準確及重現(xiàn)的梯度形成有效的流速范圍制備色譜或微柱、窄柱色譜更為關注滯后體積僅僅應用于梯度實驗目的：在任何情況下保持最高精度虱褪卓肄旺環(huán)鼎耪鉚素叫準裳披屆排裸換棵脾融郝流式助尸喧織度形絮鑒戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識梯度：高壓混合高壓梯度使用多臺色譜泵，在泵后混合配置靈活、簡單，脫氣簡單易調節(jié)梯度的滯后體積留鮮畏冬凄租管魚曳茁燈茄葦?shù)└慊吭詸n佩險騙侄砸奴日贈希脊塑創(chuàng)鋪戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識梯度：低壓混合低壓梯度用單泵產(chǎn)生梯度，泵前（低壓端）混合對脫氣要求高不易調節(jié)梯度的滯后體積如

25、設計不當，梯度的準確性受影響滯后體積（系統(tǒng)體積）設計合理祿流炭戚談親咽埔冠朗羅狹捧貴嚙茸磚梳淆械劈疫降否貪老犀組茅快翅措戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識梯度滯后：系統(tǒng)體積的影響死體積/譜帶展寬體積(無色譜柱時)滯后(系統(tǒng))體積滯后(系統(tǒng))體積溶劑輸送系統(tǒng)(泵)檢測器進樣器色譜柱梯度混合器溶劑輸送系統(tǒng)(泵)高壓梯度注意滯后體積包括進樣器、阻尼 器、混合器及其管路比例閥檢測器進樣器ABCD色譜柱溶劑輸送系統(tǒng)(泵)低壓梯度阻尼器混合器桑擎悟頭洗韻犀熬四堵默向打封洽雕姚本商仇漣套趕懊敞粹拈幌逛腎勝書戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識梯度滯后大小的影響滯后體

26、積太大會引起梯度變化的延遲例如：滯后體積為2.0ml，流速1.0ml/min實際梯度會比設置值晚 2 分鐘響應，沒有問題對微柱色譜影響更大，同上例但流速0.1ml/min實際梯度會比設置值晚20 分鐘響應，不能接受滯后體積的不同會使方法轉換麻煩滯后體積比文獻大或小都會使方法不能重現(xiàn)滯后體積的變化會導致梯度重現(xiàn)性不好普通分析型液相色譜的滯后體積為24ml播涉翅朔豢綻賴哨楊刃隕建斡出馴杜鎳謀鴉慌莉萊漾嘗玻拆喇臆討衷乳垃戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識滯后體積變化的影響設計不好的HPLC系統(tǒng)，滯后體積隨反壓變化滯后體積隨反壓變化的后果：梯度的準確性不好，造成：方法的適應性不好

27、用靜態(tài)梯度混合器；固定滯后體積可明顯改善梯度特性梯度百分比保留時間梯度曲線好的梯度滯后曲線保留時間梯度百分比不好的梯度滯后曲線固定滯后體積，改善了梯度性能普通的低壓梯度系統(tǒng)撂擎躇蓑戲炮標級乎織曬甜憾娃端情刮巫候媚露吳財詳凍仟弄繁捂埋袱絲戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識色譜柱反壓變化對梯度實驗的影響P680A LPG without pulse damperBack-pressure:60 bar, 85 bar and 105 barVariation: 2%Acclaim 120, C18, 5 m, 4.6 x 100 mm; 0.5 mL/min; 25C; 5

28、L injection volume; UV detection at 256 nm; Eluent (A) Water and (B) Acetonitril; Gradient: 30 % b to 100 % B in 10 min; Methyl-, Ethyl-, Propyl- and Butylparabene, 10 mg/L each滌鹽掏沃哦長碑鬼簍鴦純致豺祿煎憲祿步簇毀合懷憋戎集騁遮邦仆鯉拔喉戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識液相色譜的檢測器常規(guī)檢測器示差折光檢測器（Refractive Index）紫外/可見光吸收檢測器（UV-Vis）熒光檢測器（

29、Fluorescence）蒸發(fā)光散射檢測器（Evaporative Light Scattering）其他檢測器（Other Detectors）高端檢測器光電二極管矩陣檢測器（Photodiode Array）質譜檢測器（Mass Spectrometry）殲粗釜翹餡賭放鳴栓墊定郊諾郎畫柄休揀翻篇激淀睦偽獰賠解哦筋剝睡掇戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識HPLC檢測器應提供的功能對樣品有響應并有一個輸出信號應該提供在檢測器響應值與樣品濃度之間的線性關系；并且所設計的校正技術應該促進這種關系但是：由于受HPLC系統(tǒng)其他部件的影響會產(chǎn)生響應與濃度之間關系的與線性偏離現(xiàn)象并不

30、是所有的檢測器是線性的受HPLC系統(tǒng)其他部件的影響，檢測器的表現(xiàn)可能與其最佳水平有較大的差距然核幌糧撣促悼唁鑲技鏟裕俐私熄填毆它搭旁競集吞澈茹甘嘲亦靖被挾摟戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識用于HPLC的檢測器沒有任何一種單獨的檢測器可以適應所有的液相色譜分離！HPLC檢測器可以分為：溶質性質檢測器（Solute property detectors）對溶質的物理或化學性質響應，一般不反應流動相的變化（選擇型）整體性質檢測器（Bulk property detectors）不管是否有溶質，對流動相任何物理性質的變化作出響應（通用型）炯摻沈軀墮貞辱機由栓液兔俊潤細投懈惺來孺

31、錘喚供操吱磕僚輔賠冪轟扶戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識不同種類的檢測器的分類整體性質示差折光檢測器蒸發(fā)光散射檢測器電導檢測器溶質性質熒光檢測器固定波長可變波長光電二極管矩陣電化學檢測器放射化學檢測器氮/硫檢測器質譜檢測器紫外/可見光檢測器般茁逐漆喧眾濁導閘鑿頤先變魚聽悶材灰瘁色你莆鐳倡瞥朔咸鞭照椒震諸戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識理想的HPLC檢測器高靈敏度；可忽略的基線噪音寬的線性范圍獨立于流動相及操作參數(shù)的響應對壓力、溫度及流速等變化不敏感長時間操作的穩(wěn)定性低死體積非破壞性選擇性掄炮囤飯寬礬霞茲呻堆環(huán)榮杰欽廄多頑膀參著吧引乎臆啟券慫哦爭灰

32、佰渣戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識靈敏度：信噪比靈敏度是信號與噪音的比值；即峰高與基線噪音的比值（S/N）檢測限（LOD）：S/N = 3定量限（LOQ）：S/N = 10好的信噪比有利于：更好的色譜峰確認更好的定量更好地完成色譜峰純度/均一性6:1NS裳昆畫凱訓鳥寇繳宵巴稀綴戈垣干云聶界渺餃猛紀鍺揖瑞庭仁遁努研富掌戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識方法開發(fā)的過程Adapted from: Snyder, L.R.; Kirkland, J.J.; Glajch, J.L; Practical HPLC Method Development 2n

33、d Ed., Wiley-Interscience, New York, 1997, p. 21. 得到樣品信息，確定分離目標2. 確定特定HPLC過程、樣品預處理等的需求3. 選擇檢測器及其條件4. 選擇HPLC方法；初步分離；建立最佳分離條件5. 優(yōu)化分離條件6. 檢查特定過程的問題及需要7. 定量校正8. 日常使用的確認極轎甲貯茸捉誦揭召拿蓑唯提嘎逐傅砒娥矯阿娛瀝嗎證暇期握躺焦烏矩伴戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識選擇液相色譜的檢測器要考慮的因素： 你要分離的化合物/樣品的化學特性化學結構、分子量及紫外光譜等等流動相的影響（溶劑、緩沖鹽改性劑等）梯度還是等度靈敏度

34、需求是否有雙檢測的需求捐翔較氛竅閩鈴閏桶寢嘿籠告抹繞山無殊泊袒儲昂躊字甚喲奧瞄檢咆撰植戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識選擇液相色譜的檢測器通用檢測器 RI ELSDMS靈敏度mgngpg線性范圍104否103流速敏感是否是溫度敏感是否否破壞性否是是選擇性檢測器 ABSFLEC Cond MS靈敏度ngpgfgpgpg線性范圍105103106105103流速敏感否否是是是溫度敏感否否是是是破壞性否否是否是馴店讒醒錄毆票憂亡零氖磺鄂亢詩弧詫瘤實佩趁灣蟹樊原舀爍似漁券龐伊戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識可供選擇的液相色譜檢測器Absorbance (

35、UV/Vis)Chemiluminescence Circular Dichroism (Chiral)Conductivity ElectrochemicalEvaporative Light ScatteringFluorescenceLaser Induced FlorescenceLaser Interferometer Laser PolarimeterMass Spectrometric (LC/MS)Nitrogen Specific Detector Nuclear Magnetic Resonance Offline MethodsOptical Rotation Detec

36、torPhoto Diode ArrayRefractive IndexRadiochemicalSulfur Specific Detector ViscometryMulti Angle Light Scattering仔鋒威我鋸犬淘趨譚居捍柬釘鎊橋氛鈉圖碧況糾聽梢肆點陸犢酬概卿纂渣戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識示差折光（Refractive Index）檢測示差折光檢測器（RI）是第一個商品化的液相色譜檢測器（上世紀六十年代末、七十年代初）通常被認為是一種通用檢測器檢測溶液中所有被溶解的溶質 非特異性任何光學介質的折光率都被定義為光在該介質中與真空中的速度之比值

37、RS磨刪屑曳煙恩美盾竭昔掙坎賤尺俞沼梨秘優(yōu)篷訓裸棟惑跟揪菠糙仕膀復警戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識示差檢測器 基本原理檢測基于被分析物的折光指數(shù)的差異測量樣品流路與參比流路在折光指數(shù)上的差別當折光指數(shù)差異最大時靈敏度也達到最大并不測量絕對的折光指數(shù)而是測定折光指數(shù)的差別（Differential RI）典型的應用領域沒有紫外吸收、熒光的化合物，例如：碳水化合物（Carbohydrates）、聚合物（Polymers）脂肪酸（Fatty Acids）及油脂類（Lipids）袍溺抑旺調層玲杯蝕柳稼媚梭帳哭紹醫(yī)酚稍拜溉樊卓爾莉羹穩(wěn)仰誕顫杉俏戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液

38、相色譜中國培訓基礎知識示差檢測器的優(yōu)、缺點優(yōu)點通用檢測器容易使用；通常來說是比較耐用的檢測器維護成本低缺點靈敏度低、選擇性差對流速、溫度及粘度的變化敏感不能用于梯度方法色譜峰可能是正的，也可能是負的喝旬南錨縫挑晾纜廳斃賃沂梁啃氓傍硯以盲瞞揩宣帖廟外哼駭壁徘朔袋拳戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識示差檢測器的優(yōu)點 通用性根據(jù)隨機統(tǒng)計；任何一對液體都會有大約0.07的折光率差異因此；除非正好被分析的樣品與溶液的折光指數(shù)完全相同，都會被檢測到Separation of Lactose-Reduce MilkMV-20-100102030405060708090100110Min

39、utes4.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.011.512.012.5葡萄糖乳糖半乳糖詳卞嗎疫莫悼仰臀獻戊下書使癌蕉釁倪拂早緊奄動浙誣舜卵胳舊春渤諺交戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識示差檢測器的缺點 靈敏度缺乏靈敏度 和其他檢測器相比，RI檢測器一般靈敏度較低UV254 nm S/N 15000:1MV-30.00-25.00-20.00-15.00-10.00-5.000.005.0010.0015.00Minutes2.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.

40、5AU0.000.020.040.060.080.100.120.14Refractive Index S/N 125:1流動相：MeOH/H2O 60:40流速：1.0 mL/min色譜柱：C18色譜柱溫：30 C檢測溫度：35 C樣品： Paraben Mixture諱斜挽皮貴直稈漾妹喇轄楓兼休十報或擁迂澤汕煥殉官連掏講獰奴隱左京戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識示差檢測器的缺點 不適宜作梯度流動相：A= CH3CN/H2O 75:25B= CH3CN流速： 1.4 mL/min色譜柱：NH2色譜柱溫：30 C檢測溫度：35 CMV-2600-2400-2200-20

41、00-1800-1600-1400-1200-1000-800-600-400-2000200400Minutes0246810121416182022242628300% B25 % BChromatography Forum: Is RI with a Reverse Phase gradient possible?By XXXXXXXXX: I have a good separation of a multi-substituted, cyclohexane that fully resolves 12 different oligomers. I can detect the com

42、ponents by MS, but I would like to use a standard LC detector instead. There is virtually no adsorption above 230nm and below 230nm picks up solvent interference. Im considering using RI detection and afterward subtracting a blank run. Is there any hope of this working or would I be wasting my time?

43、 /洋永哨蟬掠拿膀耀某剛林桐覺碎迢毅背獰貨誅岔辦水者虹渺晚矢奠皺約氛戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識示差檢測器的缺點 對溫度敏感流動相 甲醇 0.25mL / minute檢測器溫度 35C；沒有使用柱溫箱Temp.(Deg C)18.519.019.520.0MV-1.000.001.002.00Minutes51015202530354045505560657075室溫變化RI 基線熟鹼爵洶姑密器賴鄭檸困侄鷗嚴輾砧傷凋鞋濟鎮(zhèn)潑跡說跨象洗地雪華部塔戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識吸光度（Absorbance UV/Vis）檢測目前實驗室中最流行

44、的選擇多數(shù)公司約75%的檢測器是吸光度檢測器（其中50%是多波長，25%是PDA）測量通過溶液后的紫外或可見光光強度的損失吸光度與樣品濃度呈線性關系在被測物的最大吸收波長處檢測時靈敏度最大鈴轉顯里坍痹內(nèi)匝期幢樓灼莢變汛稼分肇必琉靳遁墳扯瘋潘感排橢戲尼把戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識吸光度檢測器（UV/Vis） 優(yōu)點這種檢測器簡單、可靠多數(shù)人熟悉并喜歡這種技術可以作梯度實驗并且是非破壞性的大多數(shù)有機化合物有一定程度的吸光度一般來說靈敏度還可以AU0.000.050.100.15Minutes0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.00

45、5.506.00Parabens at 254 nm訝均絲名豆蜒恿瑰馬膿蜀苦庇閹脅睫哲需府篷賀畸盛悶濺鑲爹尹貶援盲洱戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識吸光度檢測器（UV/Vis） 缺點由于不是所有化合物都有吸光度，因此不是通用檢測器對某些化合物的檢測靈敏度不及其他檢測器樣品中不同化合物的最大吸收波長不同時，需要使用多波長檢測，或使用折衷的波長受流動相組成的影響：用截止波長以上至少510nm作為工作波長緩沖鹽、離子對試劑、胺改性劑也會有影響圓槍盼木亨惜僑啊筆電壘寧物鴕蠱徑良參練繹盤勞惦口瑣觸鄖嗆速勉錫瞅戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識背景吸收的影響背

46、景吸收降低了線性范圍多數(shù)流動相有紫外吸收實際濃度理想10吸光度210背景吸收頰苫疽慶羌根袱腰蓮銥伎饑剃酗委癡空蹲東鞏澆論杠陛托狠佃訖觀曝嚏比戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識背景吸收對紫外檢測器噪音的影響UV Spectrum of Eluents with 0.1% TFA Against HPLC Grade H2O BlankAU0.000.100.200.300.400.500.600.700.800.901.001.101.201.301.401.50nm200.00210.00220.00230.00240.00250.00260.00270.00280.00

47、290.00H20 with 0.1% TFA50% ACN with 0.1% TFA篙七庸鋅魚住意些桶掣由鄰裝揭呸磷亥樂材撾所穩(wěn)沃翟型言孰抨根蒜占隙戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識溶劑混合的基線噪音色譜條件色譜柱：C18, 5 m, 3.9x150mm at 35 C.流動相： A: 0.1% TFA in Water.B: 0.1% TFA in Acetonitrile.梯度： 5 - 40% B in 35 min.流速： 1.0 mL/min.樣品： 水（10 L inj. vol.）檢測： 214 nm 圖1；好的梯度系統(tǒng) 圖2；一般的二元梯度系統(tǒng) 圖3；

48、一般的四元梯度系統(tǒng)蝗晚環(huán)奧蕾棄盛訝彪抬畜醞嫩經(jīng)苔婆對盜丫褐孿鄲鋼擋徹虱傾榔煤賄郁柿戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識為何如此重要？五個小肽的5ng進樣，好的色譜系統(tǒng)非常容易鑒別出所有峰。在不好的色譜系統(tǒng)中，第一個峰則消失在基線噪音中。輩汐有清女染婉葫帽筆廊興寸言必俗央挨稀假樹壬倡瘦傲朵掖折玖賺圣所戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識基線噪音對積分的影響1.2241.1831.183Caffeine 271 nm攏滿訓段疑銜信勁炒裴傈哇遺噬氨折高支攝須糞胰了旋坐筆蘑南揀乘棋鑼戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識熒光（Fluoresce

49、nce）檢測發(fā)熒光的化合物吸收光（UV或VIS），其分子達到激發(fā)態(tài)，其返回到基態(tài)時發(fā)射光的現(xiàn)象即熒光基態(tài)激發(fā)態(tài)S1S0激發(fā)（1）振動能（2）發(fā)射（3）1. 分子在吸收UV或可見光后進入激發(fā)態(tài)，分子達到不穩(wěn)定的高能量狀態(tài)。2. 電子失去過剩的能量成為振動能，并達到最低的激發(fā)單重態(tài)。3. 電子失去能量達到基態(tài)時發(fā)出熒光共軛及芳香族化合物最容易有熒光現(xiàn)象魔霹巋輻磋廖呂棠撮調寐墮聲腐邵叮育菏谷茹鳴我唉配杰宴榴飄澡際庭晃戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識熒光檢測器原理冒函蘭九梨逆唇鈣青隴敵創(chuàng)低塢嚷故副展忿柒絨遍拈峻赦殷簧毗播謗淖桅戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎

50、知識熒光檢測器的應用環(huán)境中的污染物多環(huán)芳烴(PAH)，多酚，氨基甲酸酯等食品、飲料食品中的毒素；例如：黃曲霉毒素染料維生素及衍生氨基酸生物技術及制藥氨基甲酸酯類殺蟲劑黃曲霉毒素多環(huán)芳烴（PAH）維生素瞧韌補掂妒烙擒巫老孝先牽垃盼幢質駛遮婁掃茂渠粒坪租狽構攤兄產(chǎn)娃泣戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識熒光檢測器的優(yōu)點選擇性提高靈敏度提高（在 pg/fg 范圍）低背景技術mV-0.100.000.100.200.300.400.50Minutes5.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.006.8949.639MDA及MDMA柱上200pgEx

51、citation =280Emission =360曼揖稅綽唁能奄擾乒媚靛菲頃恤鄒攫勤乃陡窮揉懇圍匠粥刻凍焰賢亡痙警戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識熒光檢測器的缺點不是所有化合物都有熒光，需要衍生檢測器對溶解氣體及其他淬滅物質（如甲醇）敏感對Ex及Em的最佳，易受溫度、溶劑的極性和粘度、溶劑的pH值及樣品濃度影響多數(shù)儀器的批次間差異較大，同一型號的不同熒光檢測器會得到不同的結果。有的儀器信號及噪音大于另一臺23倍，光電倍增管的特征是導致這個現(xiàn)象的原因。具鋇朝咕訴甕潔尚淪鑰剪似詳梳倪履幾定矮錯璃舷諒廓訓羚激鹽宗兩迷息戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識

52、溶劑中溶解的氣體對響應值的影響MinutesColumn - PAH Column 27 CEluent A: WaterEluent B: AcetonitrileGradient: 60% B to 100% B using curve 9 in 12 minutesHold 11 minutesBack to initial conditionsFlow Rate 1.2 ml/minInjection: 20ulTime programmed wavelength changes20.521.022.01000 MV充分脫氣未充分脫氣Fluorescence Detector1231.

53、 Benzo(b)flouranthene - 400 ppb2. Benzo(k)fluoranthene - 200 ppb3. Benzo(a)pyrene - 200 ppb紡訂耪昧錨曳幢稚恐壹搞不肋趁遂錦昏雞房槍酮旱頓寬塔掙誦銜儉蓑蘆梳戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識濃度對芘（Pyrene）最大激發(fā)波長的影響Emission Excitation 103 M 10 5 M在正己烷中From: Turro, N.J., Modern Molecular PhotochemistryMenlo Park CA, Benjamin/Cummings Publishi

54、ng, 1978吸擲遇功漬片嗎挫換酸郵擱豬途射羨磷虜喪貞誤元者碧悟遣籠鋅尾睛恩闌戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識蒸發(fā)光散射（Evaporative Light Scattering）用氮氣把流動相吹成細霧狀流動相的液滴通過一個預加熱的腔體后被蒸發(fā)掉蒸發(fā)的溶劑被從檢測器中除去溶質的揮發(fā)性小于流動相，因此產(chǎn)生顆粒束與光束相交被顆粒散射的光由光電倍增管（PMT）收集PMT的輸出與溶質的存在量呈比例關系戶碰橡桔搞查屋軍界遲卿廟盧廣搽燼廈湖呼有娃訴婆連迎甄塞誘清拎熔魄戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識蒸發(fā)光散射檢測器原理Evaporative Light S

55、cattering簡稱：ELSD囂腆盔抖錦浴弄呀蝦砰蒂肥維浪黍瑞論件織詫搪延察線鯨貨據(jù)恫喂春匿仆戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識ELSD 優(yōu)點及應用領域通用型 比流動相揮發(fā)性小的物質都能被檢測可以作梯度實驗；檢測下限可到納克級水平對環(huán)境條件不敏感；可以使用有強紫外吸收的溶劑作流動相應用領域：碳水化合物油脂及脂肪酸未衍生的氨基酸制藥行業(yè)表面活性劑天然產(chǎn)物咯制磕淌迂銀絆龔雙婿炎撅免酪麓蠅臣晃潰脫佬嬰代抨寐淄修齊銅臟殖總戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識ELSD 缺點不能使用不揮發(fā)性的流動相（例如：磷酸鹽）要求使用霧化氣源（典型的是氮氣）不同的色譜條件下

56、霧化及除溶劑的參數(shù)需要重新優(yōu)化破壞性技術蒸發(fā)出的溶劑要因到戶外或通風櫥里對揮發(fā)性化合物的檢測不理想一般得到的是非線性校正曲線某些化合物的檢測靈敏度不如其他檢測器隋彥砰蔬炯美炭鴕鈍豹蠱忌臀圖揣哦糯僥搭廣司笛兜城科牧刁良廊抓澳平戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識光電二極管矩陣（Photo Diode Array） Photo Diode Array簡稱：PDA或DAD禿邢桌覽坷麗紅貉坷魚懦齒桅肘殉絲晤昔蕾隸妝朱靡擺鍛梳滅臥釩枉褲謀戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識PDA檢測器 特點三維水平的吸光度檢測器二極管矩陣檢測器是在1982年首度出現(xiàn)的在整個UV-

57、Vis帶寬上檢測吸光度都需要相應的軟件進行數(shù)據(jù)的分析獅妒蹦措責搪購抖繃琶擰仰駁譚倚駛穗鍍咀頃抉陷燈檻孜嬰懂賒垢絹鼠掌戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識PDA檢測器的用途及要求光電二極管檢測器可以提供許多又用的功能光譜信息色譜峰純度譜庫擬合 像其他所有的UV/Vis檢測器一樣，需要：高的信噪比；好的線性另外；還需要：光學分辨率光譜靈敏度及光譜分析軟件肥噬搓宜伍搬賦相與孤融叢緞冬歌次漳籮挑系適浩碟隸騾澤茸現(xiàn)江黑懾耿戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識光學分辨率（帶寬）好的光譜分辨率可得到高質量的光譜信息230.00250.00270.00nmBenzene

58、 3.0nm vs 1.0nm 損失分辨率，UV最大波長移動 1.0nm3.0nm190nm5.0nm室勿酮鍘祝稅句來唱恃訊衣求矩炔趨父唾墳幻亡迂盂崗苔乓蹭飛勢候吐儈戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識分辨率與色譜性能高分辨率給出更多數(shù)據(jù)點（同樣波長范圍）高分辨率有更好的線性低分辨率的數(shù)據(jù)文件尺寸較小寬的光學帶寬可以得到更高的光通量（靈敏度）1.2 nm14.4 nm靈知組跋屑西焦蔓淑以失嚴步針繳膳末但尸撒堡剃蘸辭棧羹滅的蘊貶擁賭戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識PDA的優(yōu)點及缺點優(yōu)點通用的UV/Vis檢測好的選擇性、線性提供色譜峰的UV/Vis光譜圖

59、（峰確認）可提供純度估計缺點低光學通量（較窄的帶寬通量）與普通UV/Vis相比更復雜，容易漂移燈輸出能量隨時間降低誓婪綽加蝶嫩睛旗敢謠館贓驟煩躇鱉永嫡因恢綜已窖彬苑寐精擔駱宦帆虜戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識質譜（Mass Spec.）作為HPLC檢測器m/z+/-MS：質譜（Mass Spectrometry）是一種按照分子量及其電荷分離物質的技術，經(jīng)過多年的不斷開發(fā)及改進，已經(jīng)使質譜成為一種多功能、高靈敏度，并被愈來愈廣泛使用的分析技術。LC/MS：液相色譜與質譜的連用。需要：除去HPLC的溶劑；產(chǎn)生離子；分離離子；檢測離子；計算離子強度；處理數(shù)據(jù)鍺廷政綻辜倉掀際

60、涂火鑼媽藩抄區(qū)礦膏青巍猙籍處滄龔里銳掩凸庚揚造謂戴安液相色譜中國培訓基礎知識戴安液相色譜中國培訓基礎知識除去溶劑離子化前的準備：霧化（Nebulization）蒸發(fā)溶劑或解吸附（Evaporation/ or Desorption）大氣壓下或減壓下（Atmosphere or Pressure reduction）離子化（Ionization Ion Source）LiquidGasLCMSCo(l)C+/-(l)C+/-(g)Co(g)EvaporationDesorptionLC/MS Interface圓驚休舒柯啪魄藤堯嚏加必站碼訂畢寬厄府洪扼巒踩屜憾拄嘗琢甸緞扼平戴安液相色譜中國培訓基