【學(xué)習(xí)課件】第六章-一般毒性作用及其試驗(yàn)與評價(jià)方法

1、上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄第六章 一般毒性作用及其試驗(yàn)與評價(jià)方法第一節(jié) 急性毒性作用及其試驗(yàn)與評價(jià) 第二節(jié)亞慢性毒性作用及其試驗(yàn)與評價(jià)方法第三節(jié) 蓄積毒性作用及其試驗(yàn)與評價(jià) 第四節(jié) 慢性毒性作用及其試驗(yàn)與評價(jià)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄外來化學(xué)物在一定劑量、一定接觸時(shí)間和接觸方式下對試驗(yàn)動物產(chǎn)生的綜合毒效應(yīng)稱為一般毒性作用。 一般毒性作用根據(jù)接觸毒物的時(shí)間長短又可分為急性毒性、亞慢性毒性和慢性毒性。 編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一

2、內(nèi)容回主目錄一、急性毒性的概念 二、急性毒性試驗(yàn)的目的 三、急性毒性試驗(yàn)方法的要點(diǎn) 四、急性毒性分級和評價(jià) 第一節(jié) 急性毒性作用及其試驗(yàn)與評價(jià)方法編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄一、急性毒性的概念 急性毒性是指機(jī)體（實(shí)驗(yàn)動物或人）一次或24h內(nèi)多次接觸外源化學(xué)物后在短期內(nèi)所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)，包括一般行為和外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡效應(yīng)。 第一節(jié) 急性毒性作用及其試驗(yàn)與評價(jià)方法編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄1、急性接觸的次數(shù) （一次或多次） 24h內(nèi)2、中毒效應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間（一般為7-28d） 急性毒性效應(yīng)一般是指機(jī)體接觸

3、化學(xué)物后，在較短時(shí)間內(nèi)觀察到的毒性癥狀。 3、中毒效應(yīng)的強(qiáng)度急性毒性概念中的幾個(gè)問題編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄1、測試和求出毒物的致死劑量以及其他急性毒性參數(shù)，通常以LD50為最主要的參數(shù)； 2、初步評價(jià)毒物對機(jī)體的毒效應(yīng)特征、靶器官、劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系和對人體產(chǎn)生損害的危險(xiǎn)性； 3、研究受試物在動物體內(nèi)的動力學(xué)變化規(guī)律；4、為亞慢性、慢性毒性試驗(yàn)研究以及其他毒理試驗(yàn)提供接觸劑量和觀察指標(biāo)選擇的依據(jù)。 二、急性毒性試驗(yàn)的目的編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄包括實(shí)驗(yàn)動物、染毒途徑、染毒劑量、觀察周期、觀察指標(biāo)的選擇

4、、計(jì)算方法和評價(jià)等。 一般來說，一個(gè)新化學(xué)物在研制初期就要進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。 如果急性毒性試驗(yàn)通不過，則后面的所有試驗(yàn)都不必進(jìn)行了。三、急性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（一）實(shí)驗(yàn)動物的選擇和要求 盡量選擇急性毒性反應(yīng)與人近似的動物； 易于飼養(yǎng)管理、試驗(yàn)操作方便的動物； 繁殖生育力較強(qiáng)，數(shù)量較大能夠保障供應(yīng)； 價(jià)格較低，易于獲得的動物。 實(shí)驗(yàn)動物的選擇包括物種和品系、年齡、體重、數(shù)量等方面，必須按照其規(guī)范要求進(jìn)行。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄1、實(shí)驗(yàn)動物的物種和品系 急性毒性試驗(yàn)一般首先選擇哺乳動物，選擇

5、兩種或兩種以上的動物。包括嚙齒類和非嚙齒類。嚙齒類以大鼠、小鼠為最常用。非嚙齒類以犬或猴最常用。 急性毒性試驗(yàn)所用大鼠的品系以Sprague-Dawley（SD）、Wistar為主，小鼠則以昆明種、NIH、ICR為多。（一）實(shí)驗(yàn)動物的選擇和要求編輯ppt編輯ppt昆明種小鼠（KM小鼠）特 點(diǎn)：體型小，產(chǎn)仔多，生長繁殖快，飼養(yǎng)管理方便，對環(huán)境的適應(yīng)性和對疾病的抵抗力強(qiáng)。廣泛應(yīng)用于藥理毒力病理和細(xì)菌學(xué)研究，以及生物制品和藥品的鑒定。NIH小鼠特 點(diǎn)：體型小，產(chǎn)仔多，生長繁殖快，飼養(yǎng)管理方便，對環(huán)境的適應(yīng)性和對疾病的抵抗力強(qiáng)。廣泛應(yīng)用于藥理毒力病理和細(xì)菌學(xué)研究，以及生物制品和藥品的鑒定。編輯pptW

6、istar大鼠特 點(diǎn)： 抗病力強(qiáng)，自發(fā)性腫瘤發(fā)病率低，多用于腫瘤、免疫、 藥理、內(nèi)分泌。 SD大鼠特點(diǎn) ：白色，產(chǎn)仔多，生長發(fā)育較Wistar大鼠快，對疾病的抵抗力較強(qiáng)，尤以對呼吸道疾病的抵抗力強(qiáng)。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄2、實(shí)驗(yàn)動物的年齡和體重 通常要求剛成年的動物，且為健康未受孕的動物。 通常大鼠180240g、小鼠1825g、家兔22.5kg、豚鼠200250g、Beagle犬46kg、雜種犬815kg。（一）實(shí)驗(yàn)動物的選擇和要求編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄3、實(shí)驗(yàn)動物的性別 通常要求為雌雄各半。 但如有

7、資料或預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)品對雌、雄動物毒效應(yīng)有明顯的性別差異，則應(yīng)單獨(dú)分別試驗(yàn)并求出雌性和雄性動物各自的LD50值。（一）實(shí)驗(yàn)動物的選擇和要求編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄4、實(shí)驗(yàn)動物的預(yù)檢 應(yīng)先進(jìn)行動物的給藥前檢疫觀察。 大鼠、小鼠、豚鼠、兔的檢疫期為1周，犬、猴等適當(dāng)?shù)匮娱L至23周。 設(shè)定檢疫期有兩個(gè)主要目的： 一是讓外購來的實(shí)驗(yàn)動物要適應(yīng)一段時(shí)間，減少環(huán)境和生理?xiàng)l件變化對試驗(yàn)結(jié)果的影響； 二是篩檢健康等不符合試驗(yàn)要求的動物 （一）實(shí)驗(yàn)動物的選擇和要求編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄5、實(shí)驗(yàn)動物的給藥前禁食處理 采用經(jīng)口

8、途徑染毒，實(shí)驗(yàn)動物胃腸道內(nèi)食物存留量對化學(xué)毒物的毒性可產(chǎn)生較明顯的干擾，因此在試驗(yàn)給藥前應(yīng)作禁食處理。 大鼠在前一天傍晚下班時(shí)或晚間將飼料撤掉。 小鼠由于其消化吸收和代謝速度較快，可隔夜禁食也可禁食4h以上。（一）實(shí)驗(yàn)動物的選擇和要求編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（一）實(shí)驗(yàn)動物的選擇和要求 6.試驗(yàn)動物的飼養(yǎng)環(huán)境 恒定的溫度：223濕度：3070%光照度：晝夜各半飼料合格、飲水合格、墊料合格編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄不同的LD50計(jì)算方法對動物組數(shù)的要求有所不同，一般為57組。 大、小鼠等小動物每組數(shù)量通常為不少于

9、10只，家兔每組不少于8只，犬等大動物每組不少于6只。嚴(yán)格按照隨機(jī)分組進(jìn)行。（二）實(shí)驗(yàn)動物分組與數(shù)量 編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄受試物的接受、分樣、保管、稱量、配制以及在此過程中嚴(yán)格的質(zhì)量保證是急性毒性試驗(yàn)成功與否的重要環(huán)節(jié)。 受試物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、純度、雜質(zhì)成分、理化性質(zhì)特別是揮發(fā)性、溶解性等均需了解。 計(jì)算試驗(yàn)所需受試物的總量，一次備齊全部實(shí)驗(yàn)的用量。應(yīng)以同一批號為宜。（三）受試物及處理編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（四）染毒劑量及分組一般推薦，染毒最大量為： 經(jīng)口20ml/kg（對空腹動物）； 經(jīng)皮2ml/kg（

10、根據(jù)體表面積計(jì)算，限于染毒的準(zhǔn)確性）； 靜脈1ml/kg（5min以上）； 肌內(nèi)注射0.5ml/kg（一個(gè)部位）； 每眼0.01ml； 直腸0.5ml/kg； 吸入2mg/L； 鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄染毒途徑（exposure routes）的選擇需考慮：1. 模擬人在生活和生產(chǎn)環(huán)境中實(shí)際接觸受試物的途徑和方式；2. 有利于不同化學(xué)物之間急性毒性大小的比較； 3. 受試物的性質(zhì)和用途；4. 各種受試物毒性評價(jià)程序的要求等。（五）染毒方法編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄 最常用的染毒途徑

11、為經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射途徑。 吸收速率依次排列，一般是靜脈注射吸入肌內(nèi)注射腹腔注射皮下注射經(jīng)口皮內(nèi)注射經(jīng)皮。（五）染毒方法編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄1、經(jīng)口（胃腸道）染毒 灌胃 喂飼 吞咽膠囊 （五）染毒方法編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄2、經(jīng)呼吸道染毒 研究生產(chǎn)條件下以氣體、蒸氣、粉塵、煙、霧等形式存在于車間空氣中的工業(yè)毒物，評價(jià)環(huán)境空氣污染物，以吸入為給藥途徑的藥物，常常采用經(jīng)呼吸道染毒的途徑。（五）染毒方法編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄3、經(jīng)皮膚染毒 經(jīng)皮膚染毒的方

12、式：先使用化學(xué)法脫毛（常用脫毛劑為硫化鋇加滑石粉1：4或硫化鈉加淀粉1：4）或機(jī)械法脫毛（剪剃去毛），將動物脊柱兩側(cè)背毛脫去，去毛面積常為體表面積的10。 局部涂敷受試物并以玻璃紙覆蓋固定一定時(shí)間接觸染毒。（五）染毒方法編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄4、經(jīng)注射途徑染毒 對注射藥品或需作比較毒性觀察的藥品進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)時(shí)，須作經(jīng)注射途徑染毒。 注射途徑可分為靜脈注射或滴注、腹腔注射(ip)、肌內(nèi)注射(im)、皮下注射(sc)、皮內(nèi)注射(id)、椎管內(nèi)注射等。（五）染毒方法編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄查閱文獻(xiàn)了解化學(xué)毒

13、物的結(jié)構(gòu)式、分子量、常溫常壓下的狀態(tài)、熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、密度、閃點(diǎn)、揮發(fā)度、蒸氣壓、水溶性和脂溶性等理化特性，生產(chǎn)批號及純度，雜質(zhì)成分與含量等。確定使用哪一種計(jì)算方法求LD50，然后再設(shè)計(jì)劑量分組。LD50的計(jì)算方法常用改良寇氏法、概率單位法、霍恩氏法等。找出與受試化學(xué)毒物結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)近似的化學(xué)物的毒性資料，并以文獻(xiàn)資料中相同的動物種系和相同接觸途徑所測得的LD50(LC50)值作為受試化學(xué)物的預(yù)期毒性中值。 （六）劑量選擇編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄一般來說，化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)比較近似的毒物，毒性也比較近似。通過以上資料從而對受試物毒力做出估計(jì)，以預(yù)期毒性劑量

14、設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)方案。每個(gè)劑量組間的組距可大些，以便尋找出受試物的致死劑量范圍。（六）劑量選擇編輯ppt目的是找出0及100估計(jì)致死量。更確切地說是找到一個(gè)0死亡的最大劑量和100死亡的最小劑量的估值以決定實(shí)驗(yàn)中采用的最大劑量(Dm)和最小劑量(Dn)，這在測定中非常重要，是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。預(yù)試驗(yàn)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄預(yù)試驗(yàn)設(shè)定以此預(yù)期值作為待測化學(xué)物的中間劑量組，并在該劑量的上下各設(shè)計(jì)l2個(gè)劑量組作為預(yù)試驗(yàn)劑量；根據(jù)確定的劑量組進(jìn)行染毒；根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的死亡資料確定組距。可根據(jù)以下公式計(jì)算出劑量分組： i=(lgLD90-lgLD10)(n-1) 或： i

15、=(lgLD100-lgLD0)(n-1)公式中i為組距(相鄰的兩個(gè)劑量組對數(shù)劑量之差)；n為設(shè)計(jì)的劑量組數(shù)。編輯ppt一般來說、根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)所選用的LD50計(jì)算方法來確定組數(shù)。例如寇氏法、幾率單位法一般設(shè)610個(gè)劑量組；霍恩法固定設(shè)4個(gè)劑量組。求得i值后，以最低劑量組(LD0或LD10)的對數(shù)劑量加上一個(gè)i值，即是第二個(gè)劑量組的對數(shù)劑量，依此類推直至最高劑量組，查各自的反對數(shù)即得出各組劑量的真實(shí)值。123456LgLD0LgLD0+iLgLD0+2iLgLD0+3iLgLD0+4i正式試驗(yàn)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄對未知毒性的化學(xué)物，估計(jì)毒性較低時(shí)，

16、預(yù)試驗(yàn)也可以5g/kg劑量進(jìn)行摸索，來決定是否需正式求LD50。一般來說，化學(xué)物L(fēng)D50如大于5g/kg已表明毒性不大。 我國藥品的毒理研究指導(dǎo)原則規(guī)定要以最大容積最高濃度給予動物后未見死亡，方可不進(jìn)一步試驗(yàn)求出LD50值。 急性毒性試驗(yàn)除設(shè)立幾個(gè)劑量組外，是否設(shè)正常和溶劑對照組，根據(jù)需要確定。（六）劑量選擇編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄急性毒性試驗(yàn)一般是以死亡為主要記錄內(nèi)容。除此之外還要注意： 中毒體征及發(fā)生過程； 死亡情況和時(shí)間分布； 體重 病理形態(tài)學(xué)變化。（七）毒性作用觀察編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄1、中毒體

17、征及發(fā)生過程 應(yīng)詳細(xì)觀察和記錄動物出現(xiàn)的中毒體征、發(fā)生時(shí)間和體征發(fā)展的經(jīng)過。 機(jī)體對毒物作用的反應(yīng)可以表現(xiàn)出各個(gè)系統(tǒng)的特征。（七）毒性作用觀察編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄2、死亡情況和時(shí)間分布 急性毒性試驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動物的死亡數(shù)是計(jì)算LD50值的依據(jù)，動物死亡數(shù)量每增加或減少一只都會對LD50值產(chǎn)生明顯影響，因此應(yīng)認(rèn)真觀察和記錄。 分析中毒死亡時(shí)間的分布規(guī)律，也可以提供重要信息。 編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄3、體重 實(shí)驗(yàn)動物體重變化指標(biāo)，可以反映動物

18、中毒后綜合性整體變化，是一個(gè)比較客觀簡便的量化指標(biāo)。 因此在觀察實(shí)驗(yàn)動物中毒體征的同時(shí)，對存活動物應(yīng)定期多次稱量動物的體重變化，一般為每周1次或2次。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄體重可以反映動物中毒后的整體變化。對存活動物尤其是對低于LD50劑量組的存活動物。應(yīng)在觀察期28天內(nèi)稱量其體重的變化,以便了解受試物引起毒效應(yīng)的持續(xù)時(shí)間。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄4、病理檢查 對死亡動物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行大體解剖，肉眼觀察大體病理變化，如臟器外觀、大小、色澤的變化，有無充血、出血、水腫或其他改變，如有改變須取材作組織病理學(xué)檢查。

19、 對存活動物在觀察期結(jié)束時(shí)亦應(yīng)進(jìn)行解剖檢查，必要時(shí)做組織病理學(xué)檢查。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄高劑量組動物染毒后常在數(shù)分鐘或數(shù)十分鐘內(nèi)出現(xiàn)死亡，染毒以后應(yīng)即刻開始觀察動物的中毒表現(xiàn)和死亡情況。 給藥當(dāng)天應(yīng)連續(xù)或多次觀察，以后可根據(jù)情況，每天2次或多次觀察直到試驗(yàn)周期結(jié)束。 急性毒性試驗(yàn)觀察周期一般為7-28天。（八）觀察時(shí)間和周期編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄改良寇氏法（Karber）霍恩氏法（Horn）威爾氏法（Weil）概率單位法其他計(jì)算方法（九）LD50的計(jì)算方法編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上

20、一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄 四、急性毒性分級和評價(jià)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄 四、急性毒性分級和評價(jià)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄四、急性毒性分級和評價(jià)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄四、急性毒性分級和評價(jià)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄四、急性毒性分級和評價(jià)LD50標(biāo)志著一個(gè)化合物毒性的大小，所以常用作急性毒性分級。毒性大小于LD50值成反比，LD50越小，毒性越大，反之，毒性越小。除了LD50以外，還應(yīng)當(dāng)報(bào)告LD50 95%可信限范圍、急性毒作

21、用帶等指標(biāo)，并盡可能詳盡描述中毒特征、癥狀表現(xiàn)、出現(xiàn)時(shí)間、死亡前兆、毒性作用的發(fā)生、發(fā)展、恢復(fù)經(jīng)過，以及體重、剖檢和病理學(xué)變化等。從而全面的對急性毒性做出評價(jià)。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄五、經(jīng)典急性毒性試驗(yàn)的局限性1.消耗的動物量大2.獲得的信息有限3.測得的LD50僅僅是一個(gè)近似值4.在安全性評價(jià)中僅評價(jià)動物死亡和簡單的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、血液學(xué)及其它化驗(yàn)檢查所提供的深入細(xì)致的毒性信息。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄一、基本概念二、試驗(yàn)?zāi)康?三、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)及其評價(jià)第二節(jié) 亞慢性毒性作用及其

22、試驗(yàn)與評價(jià)方法編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄一、基本概念 亞慢性毒性作用是指試驗(yàn)動物連續(xù)多日接觸較大劑量的外來化學(xué)物所出現(xiàn)的中毒效應(yīng)。 試驗(yàn)染毒期限應(yīng)為36個(gè)月，或一般為實(shí)驗(yàn)動物生命期的1/101/30。 如用小鼠，試驗(yàn)期通常為3個(gè)月，大鼠36個(gè)月，狗412個(gè)月。 編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄二、試驗(yàn)?zāi)康模?）進(jìn)一步探索受試物的毒作用特點(diǎn)和靶器官；（2）了解受試物有無蓄積作用，是否產(chǎn)生耐受性；（3）分析受試物的劑量-效應(yīng)關(guān)系；（4）初步估計(jì)不出現(xiàn)毒性作用的最大耐受劑量（NOEL或NOAEL）和出現(xiàn)毒性的最小有作用劑量

23、（MED）；（5）為慢性毒性試驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)和觀察指標(biāo)提供依據(jù)；（6）為受試物的毒理機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄三、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)在遺傳毒理學(xué)及一些前期的試驗(yàn)難以做出明確評價(jià)時(shí)需要進(jìn)行亞慢性毒性試驗(yàn)。 根據(jù)前期的試驗(yàn)結(jié)果來設(shè)計(jì)亞慢性毒性試驗(yàn)，其試驗(yàn)的周期從幾個(gè)月到一年不等。 在整個(gè)亞慢性試驗(yàn)期間，動物均應(yīng)攝食試驗(yàn)飼料。受試物可摻入飼料中，也可摻入飲水中。不得巳時(shí)可采用灌胃法進(jìn)行。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄1、實(shí)驗(yàn)動物的選擇 （l）物種和品系 一般要求兩種實(shí)驗(yàn)動物，一種是嚙齒類，一種是非嚙齒類，

24、以便全面地了解受試物的毒性。 基本上均使用大鼠和犬，有時(shí)用猴，這取決于受試物的重要性和試驗(yàn)條件。亞慢性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)，可用兔或豚鼠。 大鼠常用Wistar和Sprague-Dawley。 犬的亞慢性毒性試驗(yàn)多使用Beagle犬。三、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)編輯ppt編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（2）性別、年齡和動物數(shù) 性別：一般每組雌雄各半； 年齡：剛斷乳不就得動物大鼠68周齡（體重80100g） 動物數(shù)：大鼠、小鼠每組不少于20只； 犬、猴每組不少于6只。三、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（3）微生物學(xué)寄

25、生蟲學(xué)等級和飼養(yǎng)環(huán)境： 亞慢性毒性試驗(yàn)周期較長，觀察指標(biāo)較多，實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量、喂飼條件和試驗(yàn)環(huán)境明顯影響受試物的毒性反應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)動物分四級：普通級、清潔級、無特定病原體級（SPF級）、無菌級。 犬和猴分為普通級和SPF兩級。 亞慢性毒性試驗(yàn)，應(yīng)使用清潔級及以上等級大小鼠，并飼養(yǎng)在屏障環(huán)境內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)。三、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄2、染毒方式 一是應(yīng)當(dāng)盡量選擇和人類接觸途徑相似的方式； 二是應(yīng)當(dāng)與預(yù)期進(jìn)行的慢性毒作用研究的接觸途徑相一致。 一般以經(jīng)口、經(jīng)呼吸道和經(jīng)皮染毒為多。 染毒頻率通常每日一次，連續(xù)給予，如試驗(yàn)期為3個(gè)月或超過3個(gè)月

26、時(shí)，也可每周6次。三、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄3、染毒途徑 （l）經(jīng)口染毒：灌胃法、喂飼法、膠囊法。 （2）經(jīng)呼吸道染毒： （3）注射： （4）特殊途徑： （5）在進(jìn)行亞慢性毒性試驗(yàn)時(shí)，最好結(jié)合進(jìn)行毒代動力學(xué)血藥濃度的監(jiān)測。三、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄4、劑量選擇和分組 一般至少應(yīng)設(shè)3個(gè)劑量組和1個(gè)陰性（溶劑）對照組。陰性對照組低劑量組中劑量組高劑量組組距：310倍，最低不小于2倍三、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)編輯ppt高劑量組應(yīng)能引起明顯的毒性或少量動物的死亡（少于10%）。低

27、劑量組應(yīng)無中毒反應(yīng)，相當(dāng)于未觀察到有害作用劑量（NOAEL）。高低劑量組間設(shè)置1個(gè)中劑量組，比較理想的中劑量組約相當(dāng)于觀察到有害作用的最低劑量（LOAEL）。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄原則是，盡量控制在受試動物在整個(gè)試驗(yàn)期既不發(fā)生死亡，又有明顯毒性反應(yīng)。 各組劑量設(shè)計(jì)的依據(jù)： 高劑量組：以急性毒性的閾劑量作為亞慢性毒性試驗(yàn)的最高劑量。 或以該受試物L(fēng)D50的1/201/5作為最高劑量 一般在LD50的1/101/50之間按等比級數(shù)設(shè)計(jì)其它各組。三、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)編輯ppt4. 觀察指標(biāo)1234三、亞慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)編輯ppt編輯ppt（1）一般性指

28、標(biāo)包括每日采食量、體重變化（定期稱量）、外觀特征（被毛光澤、精神狀態(tài)、呼吸動作、分泌物、排泄物、飲食、活動、行為等）、異常表現(xiàn)和中毒癥狀等。編輯ppt（2）實(shí)驗(yàn)室檢查：上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄l）血液學(xué)檢查 2）血液生化檢查 通常為血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、總蛋白（TP）、清蛋白（ALB）、血糖（GLU）、總膽紅素（T-BIL）、肌酐（Crea）、總膽固醇（T-CHO）等。 尿液檢查包括外觀、pH值、蛋白、糖、潛血和沉淀物鏡檢等，可提供與毒物有關(guān)的靶器官毒性和中間代謝產(chǎn)物的信息。編輯

29、ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（3）系統(tǒng)尸解和組織病理學(xué)檢查l）臟器重量和臟器系數(shù)：一般稱取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、卵巢或睪丸、腦等臟器濕重，并計(jì)算其臟器系數(shù)。 2）病理學(xué)檢查：目的是確定化學(xué)毒物對機(jī)體毒作用的靶部位、損害的性質(zhì)和程度。 病理學(xué)檢查包括：大體檢查、常規(guī)組織病理學(xué)檢查、酶組織化學(xué)檢查、免疫組織化學(xué)檢查、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)檢查等，編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（4）分子生物學(xué)和免疫學(xué)指標(biāo)分子生物學(xué)和分子免疫學(xué)手段可應(yīng)用于測定許多具有毒理學(xué)意義的指標(biāo)?；钚匝踉黾?、細(xì)胞凋亡、免疫功能異常選擇相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測定，有利于探

30、討有害作用的機(jī)理和對安全性的評價(jià)。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（5）分析劑量-效應(yīng)關(guān)系生物體產(chǎn)生的某種效應(yīng)只有與其接觸的化學(xué)物劑量之間呈現(xiàn)相關(guān)關(guān)系，才能確定此種效應(yīng)是該接觸物引起的。否則，可能另有原因。對于進(jìn)一步的毒理學(xué)試驗(yàn)觀察指標(biāo)的選擇和毒理機(jī)制的研究具有一定的指導(dǎo)意義。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（6）其他指標(biāo)的檢查心電圖、血壓、眼底檢測； 對神經(jīng)系統(tǒng)有影響，可進(jìn)行神經(jīng)行為、神經(jīng)反射等檢查； 對電解質(zhì)、微量元素代謝有毒作用，則檢測血鈣、血磷等含量； 還可增加眼科、骨髓象檢查等。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一

31、內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄四、亞慢性毒性作用評價(jià)亞慢性毒性作用評價(jià)： 如某物質(zhì)的亞慢性毒性無作用劑量小于或等于人的可能攝入量的100倍，則表示毒性很強(qiáng)，應(yīng)放棄該化學(xué)物的使用： 在100300倍之間者，可進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)； 若大于或等于300倍者則不必進(jìn)行慢性試驗(yàn)，可直接進(jìn)行毒性評價(jià)。編輯ppt第三節(jié) 蓄積毒性作用 一、蓄積毒性作用的基本概念 二、蓄積作用的研究方法 編輯ppt一、基本概念 多次間隔給予小劑量受試物，當(dāng)給予受試物的時(shí)間間隔和劑量超過機(jī)體的解毒和排泄能力時(shí)，導(dǎo)致受試物在體內(nèi)蓄積，由此引起的毒性作用稱為蓄積性毒性作用。編輯ppt（二）目的： 1. 了解受試物是否具有蓄積作用及

32、蓄積性大小如何; 2. 評定該化合物是否可引起潛在的慢性毒性危害; 3. 為制訂該物質(zhì)在食品中的衛(wèi)生限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí),安全系數(shù)的選擇提供依據(jù)。 4. 確定該受試物是否可以用于食品供人類長期食用。編輯ppt物質(zhì)蓄積：是指機(jī)體少量反復(fù)多次接觸毒物后，該毒物在機(jī)體內(nèi)逐漸積累?？梢杂靡欢ǖ姆治龇椒z測出體內(nèi)該物質(zhì)或其代謝產(chǎn)物在體內(nèi)的增加過程，這種累計(jì)隨著時(shí)間延長而含量增加，當(dāng)達(dá)到中毒閾值時(shí)而產(chǎn)生毒性作用。功能蓄積：是指機(jī)體少量反復(fù)多次接觸化學(xué)毒物或其他形式的危害物，每次引起的輕微功能損害逐漸積累，當(dāng)積累到一定程度時(shí)出現(xiàn)毒性效應(yīng)，而這時(shí)用檢測手段卻查不出體內(nèi)毒物的的存在或增加。編輯ppt蓄積毒性作用產(chǎn)生的因素

33、（1）與接觸劑量大小和時(shí)間間隔有關(guān)（2）與毒物本身的性質(zhì)有關(guān)脂溶性物質(zhì) 水溶性物質(zhì)貯存庫：如血漿蛋白、脂肪組織、肝臟、腎臟、骨骼等是某些毒物的常見貯存庫。（3）與動物種屬的代謝特點(diǎn)有關(guān)編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄二、蓄積作用的研究方法 蓄積毒性作用的研究方法有多種，常用方法有蓄積系數(shù)法和生物半減期法。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（一）蓄積系數(shù)法 蓄積系數(shù)是多次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)效應(yīng)（或死亡）的蓄積劑量ED50(n)與一次染毒使半數(shù)動物出現(xiàn)相同效應(yīng)（或死亡）的劑量ED50(1)的比值，即：編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返

34、回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄在毒理學(xué)中研究化學(xué)毒物蓄積作用多選擇動物來進(jìn)行，以動物死亡一半為效應(yīng)指標(biāo)，那么上式可改寫為： LD50(n) K= LD50(1)編輯pptK值越小，表示化學(xué)毒物的蓄積性越大。 實(shí)驗(yàn)動物對化學(xué)毒物發(fā)生過敏現(xiàn)象，則可能出現(xiàn)K1。隨著化學(xué)毒物蓄積作用減弱，K值增加，通常認(rèn)為K5，其蓄積毒性極弱。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄1、固定劑量法測定蓄積系數(shù)法常選用大、小鼠等小型實(shí)驗(yàn)動物，染毒途徑多用經(jīng)口灌胃或腹腔注射。 先求出某毒物的LD50，然后選取相同條件的40只（或更多）實(shí)驗(yàn)動物，隨機(jī)分為兩組：染毒試驗(yàn)組和對照組，每組至

35、少20只，雌雄各半。 在1/201/5 LD50的范圍內(nèi)選定一個(gè)劑量，每日以固定劑量，定時(shí)和相同途徑對試驗(yàn)組進(jìn)行染毒，觀察記錄動物死亡數(shù)。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄當(dāng)試驗(yàn)組累積發(fā)生一半動物死亡即可終止試驗(yàn)。此時(shí)，計(jì)算累積總接觸劑量，根據(jù)公式計(jì)算K值，然后依上表進(jìn)行評價(jià)。若接觸劑量已累積達(dá)到5個(gè)LD50劑量，也可終止試驗(yàn)，此時(shí)計(jì)算出K5。 固定劑量法試驗(yàn)期為25100天。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄2、劑量遞增法 試驗(yàn)方案同上，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)按0.1LD50劑量給予試驗(yàn)組染毒，以4天為一期，每期增加1.5倍。 第一個(gè)四

36、天按0.1LD504天 第二個(gè)四天按0.15LD504天 第三個(gè)四天按0.22LD504天 依次類推。 這一方案試驗(yàn)期最長28天。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄在試驗(yàn)期間，當(dāng)化學(xué)毒物引起動物累積死亡一半時(shí)即可終止試驗(yàn)，計(jì)算K值進(jìn)行評價(jià)。 一般來說，在試驗(yàn)第21天也可結(jié)束試驗(yàn)，因?yàn)檫@之前如果動物沒有死亡或死亡數(shù)不足一半，說明其累積量已達(dá)5.26LD50，即K5。 編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄3、劑量固定的20天蓄積法 該法是基于蓄積系數(shù)的原理而設(shè)計(jì)的。它通常采用經(jīng)口灌胃染毒方式，將動物隨機(jī)分為5個(gè)組，包括陰性對照組和1

37、/20LD50、l/10LD50、l/5LD50和1/2LD50四個(gè)劑量組，每組動物數(shù)10只，雌雄各半。每日染毒一次，連續(xù)染毒20天。觀察每組雌雄合計(jì)的死亡動物數(shù)量。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄試驗(yàn)結(jié)束時(shí)根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評定： 1/20LD50組有死亡，且各組呈劑量-反應(yīng)關(guān)系，則為強(qiáng)蓄積性； 1/20LD50組無死亡，且各組呈劑量-反應(yīng)關(guān)系，則為中等蓄積性； 1/20LD50組無死亡，各組也不呈劑量-反應(yīng)關(guān)系，則為無明顯蓄積性；如僅1/2LD50組有死亡，其他組均無死亡，則為弱蓄積性。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄二

38、、蓄積作用的研究方法（二）生物半減期法 生物半減期(Biological Half-life, BL, T1/2)，指化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)以后，在體內(nèi)每減少一半所需的時(shí)間。對同一化合物在同一種動物體內(nèi)是一恒值。 生物半減期法（t1/2）是用毒物動力學(xué)原理描述化學(xué)毒物在機(jī)體內(nèi)的蓄積作用。 化學(xué)毒物在體內(nèi)蓄積的速度和量與機(jī)體單位時(shí)間內(nèi)吸收該物質(zhì)的速度以及清除速度有關(guān)。 編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄一般來說，tl/2較短的化學(xué)毒物達(dá)到蓄積極限所需的時(shí)間也短，t1/2長者達(dá)到蓄積極限的時(shí)間也長。 一種化學(xué)毒物若以tl/2相等的時(shí)間間距染毒，其在體內(nèi)經(jīng)過6個(gè)t1/2的

39、接觸期就可以基本上達(dá)到蓄積的極限，此時(shí)理論蓄積量達(dá)到極限的98.4。此后即使繼續(xù)接觸該物質(zhì)，機(jī)體內(nèi)的蓄積量基本上也不會增加。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄蓄積過程: 第一個(gè)BL(T1/2)末蓄積量=L50% 第二個(gè)BL(T1/2)末蓄積量=L75% 第三個(gè)BL(T1/2)末蓄積量=L87.5% 第四個(gè)BL(T1/2)末蓄積量=L93.75% 第五個(gè)BL(T1/2)末蓄積量=L96.88% 第六個(gè)BL(T1/2)末蓄積量=L98.44% 一般經(jīng)過6個(gè)生物半減期 即可達(dá)蓄積極限值編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄根據(jù)tl/2=

40、0.693Ke，通過動物血漿中化學(xué)毒物濃度求得tl/2。 蓄積極限值A(chǔ)蓄積極限值（mg）a 單位時(shí)間內(nèi)毒物的吸收量（mg/d）T1/2生物半減期（d）應(yīng)用：可根據(jù)一個(gè)化合物的t1/2值，計(jì)算出它在人體內(nèi)達(dá)到的A值，并可計(jì)算出達(dá)到值所需的時(shí)間編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄（三）蓄積率測定法常用的動物為小鼠或大鼠，首先將受試動物分成蓄積試驗(yàn)組和對照組兩大組，每組動物數(shù)6070只。蓄積性試驗(yàn)組動物每次以一定劑量（低于最小致死量）按同一染毒途徑預(yù)先給受試物，經(jīng)過一定時(shí)間之后，按常規(guī)方法測定蓄積性試驗(yàn)組和對照組的LD50，并按下列公式計(jì)算蓄積率。蓄積率=蓄積組給予受

41、試物的總劑量蓄積組給予受試物的總劑量蓄積組給予受試物的總劑量蓄積組給予受試物的總劑量蓄積率應(yīng)標(biāo)明預(yù)先給予受試物的時(shí)間及劑量。在相同時(shí)間及劑量條件下，蓄積率越大表示該物質(zhì)在體內(nèi)的蓄積作用越強(qiáng)；反之，蓄積性則越弱。蓄積組給予受試物的總劑量對照組LD50-蓄積組LD50蓄積組給予受試物的總劑量100%對照組LD50-蓄積組LD50蓄積組給予受試物的總劑量對照組LD50-蓄積組LD50100%蓄積組給予受試物的總劑量對照組LD50-蓄積組LD50蓄積組給予受試物的總劑量對照組LD50-蓄積組LD50蓄積組給予受試物的總劑量100%對照組LD50-蓄積組LD50蓄積組給予受試物的總劑量編輯ppt一、慢性

42、毒性的概念 二、慢性毒性試驗(yàn)的目的 三、慢性毒性試驗(yàn)方法要點(diǎn) 四、慢性毒件試驗(yàn)的注意事項(xiàng)第四節(jié) 慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì) 編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄一、慢性毒性的概念 是指實(shí)驗(yàn)動物或人長期（甚至終生）反復(fù)接觸外源化學(xué)物所產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。 所謂“長期”，一般是指2年。 對大鼠相當(dāng)于終生染毒，對兔相當(dāng)于生命期的36%，對犬為20%，對猴為13。對于有些遠(yuǎn)期毒性評價(jià)，試驗(yàn)期要求達(dá)到710年，甚至在有些動物上要包括若干代試驗(yàn)。編輯ppt上一內(nèi)容回主目錄返回下一內(nèi)容返回 上一內(nèi)容下一內(nèi)容回主目錄1、研究慢性毒性劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系。 確定長期接觸造成有害作用的最低劑量（LOAEL)或閾劑量和未造成有害作用的劑量（NOAEL)；2、為制定外來化學(xué)物質(zhì)在食品中的安全限量，如人體ADI值，最高殘留限量MRL值，以及