實(shí)驗(yàn)十細(xì)菌生化實(shí)驗(yàn)-微生物實(shí)驗(yàn)

1、實(shí) 驗(yàn) 十 細(xì)菌生化實(shí)驗(yàn)1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、證明不同微生物對各種有機(jī)大分子的水解能力不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系統(tǒng)。2、掌握進(jìn)行微生物大分子水解試驗(yàn)的原理和方法。3、了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細(xì)菌鑒定中的重要作用。4、掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法。5、了解IMViC與硫化氫反應(yīng)的原理及其在腸道菌鑒定中的意義和方法。 2二、實(shí)驗(yàn)原理1、微生物對生物大分子的分解利用淀粉水解：淀粉酶油脂水解：脂肪酶明膠液化：蛋白酶石蕊牛乳試驗(yàn)：產(chǎn)酸、產(chǎn)堿、胨化、酸凝固等。2、糖發(fā)酵試驗(yàn)產(chǎn)酸：溴甲酚紫指示劑大腸桿菌：產(chǎn)氣腸桿菌：產(chǎn)氣：杜氏小管檢測大腸桿菌：產(chǎn)氣腸桿菌：3、IMViC試驗(yàn)3IMViC試驗(yàn)吲哚

2、試驗(yàn)：甲基紅試驗(yàn)（M.R.試驗(yàn)）：伏-普試驗(yàn)（乙酰甲基甲醇試驗(yàn)）：檸檬酸鹽試驗(yàn)：色氨酸酶：色氨酸吲哚對二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚（紅色）大腸桿菌：產(chǎn)氣腸桿菌：產(chǎn)酸能力：強(qiáng)，甲基紅變紅；弱：甲基紅不變色大腸桿菌：陽性產(chǎn)氣腸桿菌：陰性葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇2,3-丁二醇乙酰甲基甲醇OH二乙酰精氨酸的胍基紅色化合物大腸桿菌：陽性產(chǎn)氣腸桿菌：陰性能否利用檸檬酸作為碳源大腸桿菌：陰性產(chǎn)氣腸桿菌：陽性4三、實(shí)驗(yàn)材料1、菌種：枯草芽孢桿菌，大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa），普通變形桿菌（Proteus vularis），產(chǎn)氣腸桿菌。2、培養(yǎng)基：固體油脂培

3、養(yǎng)基，固體淀粉培養(yǎng)基，明膠培養(yǎng)基試管，石蕊牛奶試管，尿素瓊脂試管、葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管各3支，普通變形桿菌（內(nèi)裝有倒置的德漢氏小管） ，蛋白胨水培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基，醋酸鉛培養(yǎng)基。3、溶液或試劑：革蘭氏染色用盧氏碘液（Lugols iodine solution），甲基紅指示劑，40% KOH，5% -萘酚，乙醚，吲哚試劑等。 4、儀器或其他用具：無菌平板，無菌試管，接種環(huán)，接種針，試管架。5四、實(shí)驗(yàn)步驟1、細(xì)菌水解大分子物質(zhì)試驗(yàn) 淀粉水解試驗(yàn)培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基平板菌種：大腸桿菌和枯草芽孢桿菌方法：平板上劃“十”字接種注意：接種前在平板底部作記號(hào)

4、；“十”字不要太大 油脂水解試驗(yàn)培養(yǎng)基：油脂培養(yǎng)基平板菌種：大腸桿菌和金黃色葡萄球菌方法：平板上劃折線接種注意：接種前在平板底部作記號(hào) 明膠液化試驗(yàn)培養(yǎng)基：試管明膠培養(yǎng)基菌種：大腸桿菌或 產(chǎn)氣腸桿菌方法：穿刺接種注意：20培養(yǎng) 石蕊牛乳試驗(yàn)培養(yǎng)基：試管石蕊牛乳培養(yǎng)基（2支）菌種：粘乳產(chǎn)堿菌或銅綠假單胞菌方法：斜面劃線接種注意：觀察結(jié)構(gòu)注意牛乳產(chǎn)酸、產(chǎn)堿、凝固、胨化現(xiàn)象是連續(xù)出現(xiàn)的。6四、實(shí)驗(yàn)步驟1、細(xì)菌水解大分子物質(zhì)試驗(yàn)2、糖發(fā)酵試驗(yàn)培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基（內(nèi)裝杜氏小管）（各3支）菌種：大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌方法：分別接種于葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基7四、實(shí)驗(yàn)步驟1、細(xì)菌

5、水解大分子物質(zhì)試驗(yàn)2、糖發(fā)酵試驗(yàn)3、IMViC試驗(yàn)8IMViC試驗(yàn)試驗(yàn)名稱培養(yǎng)基名稱菌種名稱接種方式接種管數(shù)吲哚試驗(yàn)蛋白胨水培養(yǎng)基大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌液體1甲基紅試驗(yàn)葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基液體1伏普試驗(yàn)葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基液體1檸檬酸鹽試驗(yàn)檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面19五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、分別記錄試驗(yàn)菌種對淀粉水解、脂肪水解、明膠液化、石蕊牛奶及尿素試驗(yàn)的結(jié)果。以“”表示陽性，“”表示陰性。2、記錄大腸桿菌及普通變形桿菌對葡萄糖和乳糖的發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果。以“+”表示產(chǎn)酸或產(chǎn)氣，“”表示不產(chǎn)酸或不產(chǎn)氣。3、記錄大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌的吲哚試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、伏-普試驗(yàn)、檸檬酸鹽試驗(yàn)及硫化氫試驗(yàn)結(jié)果，以“+”表示陽性反應(yīng)?！啊北硎娟幮苑磻?yīng)。4、不利用碘液，你怎樣證明淀粉水解的存在？10五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告5、假如某種微生物可以有氧代謝葡萄糖，發(fā)酵試驗(yàn)應(yīng)該出現(xiàn)什么結(jié)果？6、為什么大