實驗三培養(yǎng)基制備和滅菌

1、關(guān)于實驗三培養(yǎng)基的制備與滅菌第一張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2022年6月一、實驗?zāi)康?明確培養(yǎng)基的配制原理 通過對基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制，掌握配 制培養(yǎng)基的一般方法和步驟第二張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物 生長繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的 營養(yǎng)物質(zhì)的混合物 培養(yǎng)基的原材料：碳源、氮源、無機鹽、 生長因素、水二、基本原理第三張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2022年6月根據(jù)微生物的種類和實驗?zāi)康牟煌囵B(yǎng)基有不同的種類按成分：天然培養(yǎng)基，合成培養(yǎng)基，半合成培養(yǎng)基按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基， 液體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基第四張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2

2、022年6月三、實驗器材與試劑溶液和試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂 1mol/L NaOH、1mol/L HCl儀器或其它用具：三腳架、培養(yǎng)基分裝器、 天平、牛角匙、 高壓蒸汽滅菌鍋等第五張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 稱量溶化調(diào)pH 過濾分裝加塞 包扎滅菌擱置斜面四、操作步驟第六張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 1）稱量：按實際用量計算后，按配方稱取各種藥品放入大燒 杯中。牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱 水溶解后倒入大燒杯；也可放在稱量紙上稱量，隨 后放人熱水中，牛肉膏便會與稱量紙分離，立即取 出紙片。蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速。 2）加熱溶化：在燒杯中加

3、入少于所需要的水量，并用玻棒 攪拌，待藥品完全溶解后再補充水分至所需 量。若配制固體培養(yǎng)基，則加入瓊脂再加熱 融化，此過程中需不斷攪拌，以防瓊脂糊底 或溢出，最后補足所失的水分。 第七張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3）調(diào)pH：檢測培養(yǎng)基的pH，若偏酸，可逐滴滴加1molL-1NaOH 邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙檢測，直至達到所需pH 范圍。若偏堿，則用1molL-1HCl進行調(diào)節(jié)。 pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前。應(yīng)注意pH值不要調(diào)過 頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。4）過濾 趁熱過濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過濾，以利結(jié) 果的觀察。但是供一般使用的培養(yǎng)基，該步可省略。第八

4、張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2022年6月固體分裝5）分裝：披實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角 瓶內(nèi)。分裝時可用漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶 口上面造成污染 分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度的15，滅菌后制成斜 面。分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積的一半為宜。 半固體培養(yǎng)基以試管高度的1/3為宜。滅菌后垂直 待凝 半固體 液體分裝試管 三角燒瓶試管 三角燒瓶 1/31/4 1/21/51/2第九張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2022年6月6）加塞：試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制 作的棉塞。以阻止外界微生物進入培養(yǎng)，并保 持良好通氣性7）包扎：加塞后，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙，以

5、防 滅菌時冷凝水沾濕棉塞8）滅菌：將上述培養(yǎng)基以0.103MPa，121， 20min高壓蒸氣滅菌9）擱置斜面：將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50左右（以防 斜面上冷凝水太多），將試管口端擱在玻 棒或其他合適高度的器具上，擱置的斜面 長度以不超過試管總長的一半為宜。第十張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 培養(yǎng)基分裝斜面制作包扎成捆掛標簽第十一張，PPT共十三頁，創(chuàng)作于2022年6月附：高壓蒸汽滅菌法1加水 將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的 水，以水面與三角架相平為至。2裝料 將裝料桶放回鍋內(nèi)，裝入待滅菌的物品。裝有培 養(yǎng)基的容器放置時要防止液體溢出，瓶塞不要緊 貼桶壁，以防冷凝水沾濕棉塞。3加蓋 將蓋上的排氣軟管插人內(nèi)層的排氣槽內(nèi)，再以兩 兩對稱的方式同時旋轉(zhuǎn)相對的兩個螺栓，使螺栓 松緊一致，勿使漏氣。4排氣 加熱，待水煮沸后，水蒸汽和空氣一起從排氣孔 排出。一般認為，當水沸后約5min，表明鍋內(nèi)空 氣已