分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題(1)(共8頁)

1、PAGE PAGE 15分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題一、名詞解釋1、Northern Blot：Northern印記(yn j)雜交：是指RNA樣品(yngpn)經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后與標(biāo)記的核苷酸探針進(jìn)行固液相雜交，檢測RNA的方法。2、open reading frame,ORF：開放(kifng)閱讀框：從mRNA 5，端起始密碼子AUG到3，端終止密碼子之間的核苷酸序列，各個(gè)三聯(lián)體密碼連續(xù)排列編碼一個(gè)蛋白質(zhì)多肽鏈，稱為開放閱讀框架(open reading frame, ORF)。3、secondary massager：第二信使： HYPERLINK /view/3687.htm

2、細(xì)胞 HYPERLINK /view/442628.htm 表面受體接受細(xì)胞外信號后轉(zhuǎn)換而來的細(xì)胞內(nèi)信號稱為第二信使。4、receptor：受體：是細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能識別生物活性分子并與之結(jié)合的生物大分子。功能：識別并結(jié)合配體轉(zhuǎn)導(dǎo)信號引起生物學(xué)效應(yīng)。絕大多數(shù)是蛋白質(zhì)，個(gè)別是糖脂。5、probe（探針）：在雜交體系中帶有標(biāo)記的已知序列的DNA或RNA片段，通常先將待測的單鏈靶核酸固定在適當(dāng)?shù)妮d體上，然后置于含相應(yīng)單鏈核酸探針的雜交反應(yīng)體系中，通過堿基互補(bǔ)配對原則，形成雙鏈結(jié)構(gòu)，通過對標(biāo)記探針的檢測，可以判定待檢測樣品中相應(yīng)序列的存在與否與分子量大小。6、vector（載體）：在基因工程中為“攜帶

3、”外源DNA、實(shí)現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子，7、Gene therapy（基因治療）：通過在特定靶細(xì)胞中表達(dá)該細(xì)胞本來不表達(dá)或表達(dá)錯(cuò)誤的基因，或采取特定方式關(guān)閉、抑制異常表達(dá)基因，達(dá)到治療疾病目的的治療方法。8、癌基因：分為兩類：病毒癌基因(virus oncogene,v-onc)存在于病毒基因組中的癌基因，它不編碼病毒的結(jié)構(gòu)成分，對病毒復(fù)制也沒有作用，但可以使細(xì)胞持續(xù)增殖。癌基因(oncogene) 又稱 細(xì)胞癌基因(cellular-oncogene, c-onc)存在于生物正常細(xì)胞基因組中，控制細(xì)胞生長的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的特性?；蚍Q

4、原癌基因 (proto-oncogenes , pro-onc) 。9、Transgenic animal（轉(zhuǎn)基因動(dòng)物）：應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育成功的攜帶并遺傳外源基因的動(dòng)物個(gè)體或品系。10、Western Blot（蛋白質(zhì)印跡）：將電泳后分離的蛋白質(zhì)從凝膠中轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，轉(zhuǎn)以后的硝酸纖維膜就成為一個(gè)印跡，用于對蛋白質(zhì)的進(jìn)一步檢測。經(jīng)封閉后再用抗待檢蛋白質(zhì)的抗體作為探針與之結(jié)合，通過放射自顯影或原位酶反應(yīng)來確定抗原-抗體-抗抗體復(fù)合物在濾膜上的位置和豐度。11、多重PCR：在反應(yīng)體系中加入多對引物進(jìn)行PCR，同時(shí)擴(kuò)增一份DNA樣品中的不同序列區(qū)域，每對引物所擴(kuò)增的產(chǎn)物長度不同，根據(jù)電泳結(jié)果

5、中不同長度片段的存在與否，判斷是否存在某些基因片段的缺失或長度改變。12、Enhancer（增強(qiáng)子）：遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，決定基因的時(shí)間、空間特異性表達(dá)，增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的DNA序列。其發(fā)揮作用的方式通常與方向、距離無關(guān)。13、cis-acting elements（順式作用元件）：可影響自身基因表達(dá)活性的真核DNA序列。根據(jù)順式作用元件在基因中的位置、轉(zhuǎn)錄激活作用的性質(zhì)及發(fā)揮作用的方式，可將真核基因的順式作用元件分為啟動(dòng)子、增強(qiáng)子及沉默子等。14、molecular chaperone（分子伴侶）：細(xì)胞內(nèi)存在的能夠阻止未完全折疊好的其他蛋白質(zhì)之間形成的無活性不可逆聚集體而幫助多肽鏈有效折疊的一

6、類蛋白質(zhì)。15、G protein（G蛋白(dnbi)）：是一類(y li)位于細(xì)胞膜胞漿面，能與GTP或GDP相結(jié)合，由、三個(gè)亞基組成的外周蛋白。是一類重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子(fnz)，在各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中， GTP 結(jié)合蛋白起到開關(guān)的作用。16、融合蛋白：是指表達(dá)的蛋白N端是原核基因編碼，C端是克隆的真核DNA編碼17、基因芯片：把多種已知序列的DNA排列在一定面積的固體支持物上，可以同時(shí)對樣品中多種類核酸進(jìn)行檢測和分析。18、Anti-oncogene（抑癌基因）：存在于正常細(xì)胞內(nèi)的一大類可抑制細(xì)胞生長并具有潛在抑癌作用的基因，當(dāng)這類基因在發(fā)生突變、缺失或失活時(shí)可引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而導(dǎo)致腫瘤的

7、發(fā)生。19、gene superfamily（基因超家族）：由多基因家族及單基因組成的更大的基因家族，它們的結(jié)構(gòu)有程度不等的同源性，但它們的功能不一定相同。20、insertion sequence（插入序列）：一類較小的、不含表型標(biāo)志的細(xì)菌轉(zhuǎn)座成分,其插入后使靶分子位點(diǎn)處的基因失活。21、trans-acting factor（反式作用因子）：大多數(shù)真核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子由某一基因表達(dá)后，通過與另一基因的特異的順式作用元件相互作用（DNA-蛋白質(zhì)相互作用），從而激活另一基因的轉(zhuǎn)錄。22、housekeeping gene（管家基因）：對某些基因產(chǎn)物生命全過程都是必須的或必不可少的。這類基因在一個(gè)生

8、物個(gè)體的各個(gè)生長階段的大多數(shù)或幾乎全部的細(xì)胞和組織中持續(xù)表達(dá)，或變化很小，它們的表達(dá)很少受環(huán)境因素影響。23、Structural domain（結(jié)構(gòu)域）：超二級結(jié)構(gòu)可形成緊密、穩(wěn)定而且在蛋白分子構(gòu)象上明顯可分的區(qū)域。24、S-D序列：mRNA起始密碼子上游813個(gè)堿基處存在的一段序列，可與小亞基16S rRNA 3，端的互補(bǔ)序列配對結(jié)合，使起始密碼準(zhǔn)確地定位于翻譯起始部位，這段序列叫S-D序列。25、cDNA文庫：以mRNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補(bǔ)的DNA，即cDNA，再復(fù)制成雙鏈cDNA片段，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌。不同細(xì)菌包含了不同的mRNA為模板的cDNA分子或片段，

9、這樣生長的全部細(xì)菌所攜帶的各種cDNA分子或片段就代表了整個(gè)組織或細(xì)胞表達(dá)的各種mRNA信息。26、Gene targeting（基因靶向）：目的基因?qū)氚屑?xì)胞以后，通過目的基因與靶細(xì)胞內(nèi)染色體上同源DNA序列間的交換，將目的基因定點(diǎn)整合到靶細(xì)胞基因組上某一確定位點(diǎn)的技術(shù)。27、Gene diagnosis（基因診斷）：在基因水平上對疾病或人體狀態(tài)進(jìn)行診斷的一種新的診斷疾病的方法。28、自殺基因：將某些病毒或細(xì)菌的基因?qū)氚屑?xì)胞中，其表達(dá)的酶可催化無毒的藥物前體轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞毒物質(zhì)，從而導(dǎo)致攜帶該基因的受體細(xì)胞被殺死，此類基因稱為自殺基因。29、不對稱轉(zhuǎn)錄：在DNA分子雙鏈上某一區(qū)段，一股鏈用作模

10、板指引轉(zhuǎn)錄，另一股鏈不轉(zhuǎn)錄 ；模板鏈并非永遠(yuǎn)在同一條單鏈上。30、酶活性中心：酶分子上有一個(gè)必需基因比較集中的區(qū)域，這個(gè)區(qū)域能夠結(jié)合底物并催化底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物，這個(gè)區(qū)域叫酶活性中心。31、信號分子：生物體內(nèi)的某些化學(xué)分子，既非營養(yǎng)物，又非能源物質(zhì)和結(jié)構(gòu)物質(zhì)，而且也不是酶，它們主要是用來在細(xì)胞間和細(xì)胞內(nèi)傳遞信息，如激素、 HYPERLINK /view/413045.htm t _blank 神經(jīng)遞質(zhì)、 HYPERLINK /view/228686.htm t _blank 生長因子等統(tǒng)稱為信號分子，它們的惟一功能是同細(xì)胞受體結(jié)合，傳遞細(xì)胞信息。32、限制性核酸(h sun)內(nèi)切酶：識別雙鏈DNA

11、的特異序列，并在識別位點(diǎn)或其周圍切割(qig)雙鏈DNA的一類核酸內(nèi)切酶。33、operon（操縱子）：原核生物絕大多數(shù)基因按功能相關(guān)性成簇地串聯(lián)、密集于染色體上，共同組成的轉(zhuǎn)錄單位。一個(gè)操縱子通常由一個(gè)啟動(dòng)序列(xli)、一個(gè)操縱序列和數(shù)個(gè)功能相關(guān)基因組成。34、顯微注射：將外源基因通過毛細(xì)玻璃管在顯微鏡下直接注射到細(xì)胞核內(nèi)。35、多克隆位點(diǎn)（MCS）：限制性內(nèi)切酶的識別、切割、位點(diǎn)。MCS是外源DNA插入的部位。36、單核苷酸多態(tài)性（SNPs）：基因組序列中單核苷酸（A、T、G、C）改變時(shí)發(fā)生的DNA序列的多態(tài)性變化。37. Gene interference：采用特定方式關(guān)閉或抑制致病基

12、因的表達(dá)，以達(dá)到治療疾病的目的。38. Caspase（天冬氨酸特異性半胱氨酸基蛋白酶）：是一類人源的ICE/Ced同源性半胱氨酸蛋白酶，活性位點(diǎn)含有QACXG保守氨基酸序列。39. calmodulin,CaM（鈣調(diào)蛋白）：鈣調(diào)蛋白是一種分子量為17kDa，由148個(gè)氨基酸組成，能與鈣離子結(jié)合的單鏈蛋白質(zhì)。屬絲/蘇氨酸蛋白激酶類。廣泛存在于真核細(xì)胞中的一種結(jié)合鈣的調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)。40. apoptosis（細(xì)胞凋亡）：是指機(jī)體細(xì)胞在正常生理或病理狀態(tài)下發(fā)生的一種自發(fā)的、程序化死亡過程。它的發(fā)生受到機(jī)體的嚴(yán)密調(diào)控。41. 信號肽：各種新生分泌蛋白的N端有保守的氨基酸序列稱信號肽。42. 酶催化的定

13、向效應(yīng)（Orientation effect）：當(dāng)專一性底物向酶活性中心靠近時(shí)，會(huì)誘導(dǎo)酶分子構(gòu)象發(fā)生改變，使酶活性中心的相關(guān)基團(tuán)和底物的反應(yīng)基團(tuán)正確定向排列，同時(shí)使反應(yīng)基團(tuán)之間的分子軌道以正確方向嚴(yán)格定位，使酶促反應(yīng)易于進(jìn)行。43. 酶的別構(gòu)調(diào)節(jié)：酶分子的非催化部位與某些化合物可逆地非共價(jià)結(jié)合后發(fā)生構(gòu)象的改變，進(jìn)而改變酶活性狀態(tài)，稱為酶的別構(gòu)調(diào)節(jié)。44. 蛋白雙向電泳：是 HYPERLINK /view/81786.htm t _blank 等電聚焦電泳和SDS的組合，即先進(jìn)行等電聚焦電泳（按照pI分離），然后再進(jìn)行SDS（按照分子大?。?，經(jīng)染色得到的電泳圖是個(gè)二維分布的蛋白質(zhì)圖。二、問答題1

14、、真核基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)有哪些？ 1.真核生物基因組DNA與 HYPERLINK /view/15472.htm t _blank 蛋白質(zhì)結(jié)合形成染色體，儲存于 HYPERLINK /view/32286.htm t _blank 細(xì)胞核內(nèi)，除配子細(xì)胞外，體細(xì)胞內(nèi)的基因的基因組是雙份的（即雙倍體,diploid），即有兩份同源的基因組。2.真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。一個(gè)結(jié)構(gòu)基因經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯生成一個(gè)mRNA分子和一條多肽鏈。3.存在重復(fù)序列，重復(fù)次數(shù)可達(dá)百萬次以上。4.基因組中不編碼的區(qū)域多于編碼區(qū)域。5.大部分基因含有內(nèi)含子，因此，基因是不連續(xù)的。6.基因組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于 HYPERLINK

15、/view/24189.htm t _blank 原核生物的基因組，具有許多復(fù)制起點(diǎn)，而每個(gè)復(fù)制子的長度較小。2、一個(gè)完整的體外DNA重組技術(shù)主要包括哪些步驟？1、獲取目的(md)基因2、將目的基因進(jìn)行必要(byo)的改造3、選擇(xunz)和修飾克隆載體4、將目的基因與載體連接獲得含有目的基因的重組載體5、重組載體導(dǎo)入相應(yīng)細(xì)胞6、篩選出含重組DNA細(xì)胞3簡述原癌基因激活的機(jī)制。1、原癌基因的點(diǎn)突變，由物理、化學(xué)、生物等因素的作用引起2、原癌基因獲得外源啟動(dòng)子而激活（如插入突變），逆轉(zhuǎn)錄病毒，前病毒DNA插入細(xì)胞染色體DNA，LTR：含有啟動(dòng)子、增強(qiáng)子。插入到pro-onc上游啟動(dòng)子作用，插入

16、到pro-onc下游增強(qiáng)子作用。3、原癌基因甲基化程度降低而激活甲基化保持雙螺旋穩(wěn)定，抑制基因的轉(zhuǎn)錄。4、原癌基因的拷貝數(shù)增加。5、基因易位或重排使原癌基因激活。當(dāng)染色體位移時(shí)，原癌基因喪失自身的表達(dá)調(diào)控信號，移位到強(qiáng)的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子附近而被活化。癌基因激活的結(jié)果：出現(xiàn)新的表達(dá)產(chǎn)物；出現(xiàn)過量的正常表達(dá)產(chǎn)物；出現(xiàn)異常、截短的表達(dá)產(chǎn)物。4. 簡述Southern 雜交的基本過程。1、待測核算樣品的制備2、待測DNA樣品的電泳分離3、凝膠中核酸的變形（堿變性）4、Southern 印跡：將電泳分離的DNA片段轉(zhuǎn)移到一定的固相支持物上5、制備探針6、Southern 雜交7、雜交結(jié)果的檢測：通過放射自

17、顯影檢測、比色或化學(xué)發(fā)光檢測5、以乳糖操縱子為例，說明原核基因表達(dá)調(diào)控的機(jī)制1、乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)：含Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼分解乳糖的三個(gè)酶；一個(gè)操縱序列O、一個(gè)啟動(dòng)序列P、一個(gè)CAP結(jié)合位點(diǎn)，共同組成乳糖操縱子的調(diào)控區(qū)。I基因是調(diào)節(jié)基因，編碼產(chǎn)生阻礙蛋白，參與操縱子的轉(zhuǎn)錄活性調(diào)節(jié)。2、乳糖操縱子正性、負(fù)性、協(xié)調(diào)調(diào)控原理：阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：在沒有乳糖的條件下，阻遏蛋白能與操縱序列O結(jié)合，抑制了RNA聚合酶與啟動(dòng)序列P的結(jié)合，從而抑制酶與啟動(dòng)子的結(jié)合，使乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài)。CAP的正性調(diào)節(jié)：分解代謝基因激活蛋白（CAP）分子內(nèi)存在DNA和cAMP結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)沒有葡萄糖時(shí)，cAMP濃

18、度較高，cAMP與CAP結(jié)合，cAMP-CAP復(fù)合物結(jié)合于CAP結(jié)合位點(diǎn)，提高了乳糖操縱子的轉(zhuǎn)錄活性。不同生長條件下的協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：是指lac操縱子阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)與CAP的正性調(diào)節(jié)機(jī)制協(xié)調(diào)合作。CAP不能激活被阻礙封閉蛋白的基因的轉(zhuǎn)錄；反之，沒有CAP的存在來加強(qiáng)轉(zhuǎn)錄活性，即使阻遏蛋白從操縱序列上解離，基因仍無轉(zhuǎn)錄活性。具體涉及存在以下4種不同的組合狀態(tài)，決定基因的表達(dá)與否，以適應(yīng)環(huán)境中葡萄糖和乳糖的有無狀態(tài)。即有葡萄糖時(shí)，先利用葡萄糖；用完后，然后再利用乳糖作為能源。葡萄糖和乳糖都不存在：CAP可發(fā)揮作用；但無乳糖的誘導(dǎo)，阻遏蛋白與DNA結(jié)合，基因關(guān)閉。葡萄糖存在、乳糖不存在：有G存在，CA

19、P不起作用；無L存在，阻遏蛋白與DNA結(jié)合，基因關(guān)閉。葡萄糖和乳糖都存在(cnzi)：阻遏蛋白與DNA解離；但由于有G存在，CAP不起作用，基因仍關(guān)閉。葡萄糖不存在、乳糖(r tn)存在：阻遏蛋白與DNA解離；無G存在，CAP起協(xié)同作用，基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)。6、何謂載體？表達(dá)載體應(yīng)具備哪些(nxi)條件？載體：用來攜帶目的基因片段進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA。具備條件：（一）能夠在受體細(xì)胞中復(fù)制，并能攜帶重組DNA片段一同擴(kuò)增。（二）帶有遺傳標(biāo)志，便于篩選，如 Amp r 編碼一個(gè)酶，可將氨芐青霉素的-內(nèi)酰胺環(huán)水解，解除其毒性。Tet r 編碼一種膜結(jié)合蛋白，阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞。（三）帶有多克隆位點(diǎn)（mul

20、tiple cloning site, MCS )，即限制性內(nèi)切酶的識別、切割、位點(diǎn)。MCS是外源DNA插入的部位。 （四）分子量相對較小，能在細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定存在表達(dá)載體除了有克隆載體的特點(diǎn)外，尚有啟動(dòng)子（在插入 DNA片段的上游）、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄起始信號和起始密碼、插入DNA片段的下游有轉(zhuǎn)錄終止信號和終止密碼。7、簡述PCR的基本原理 依據(jù)體內(nèi)細(xì)胞分裂中DNA半保留復(fù)制機(jī)理，以及體外DNA分子在不同溫度下雙鏈和單鏈可互相轉(zhuǎn)變的性質(zhì)，人為地控制體外合成系統(tǒng)的溫度，促使雙鏈DNA變成單鏈；單鏈DNA與人工合成的引物退火，在dNTPs存在下，耐高溫的DNA聚合酶使引物沿單鏈膜板DNA（ssDNA

21、）延伸成為雙鏈DNA（dsDNA）。8、簡述信號分子（配體）與受體作用的特點(diǎn)。1、高度專一性：受體選擇性地與特定配體結(jié)合，這種選擇性是由分子的幾何形狀決定的。受體與配體的結(jié)合通過反應(yīng)基團(tuán)的定位和分子構(gòu)象的相互契合來實(shí)現(xiàn)。2、高度親和力：無論膜受體還是胞內(nèi)受體，它們與配體之間的親和力都極強(qiáng)。體內(nèi)信息物質(zhì)的濃度非常低，但卻具有顯著的生物學(xué)效應(yīng)。3、可飽和性：增加配體濃度，可使受體飽和。4、可逆性：受體與配體以非共價(jià)鍵結(jié)合，當(dāng)生物效應(yīng)產(chǎn)生后，配體與受體解離。受體可恢復(fù)到原來的狀態(tài)，并再次被利用，而配體則常被立即滅活。5、特定的作用模式：受體在細(xì)胞內(nèi)的分布，從數(shù)量到種類，均有組織特異性，并出現(xiàn)特定的作

22、用模式，提示某受體與配體結(jié)合后能引起某種特定的生理效應(yīng)。試述PCR體系的基本成分及基本反應(yīng)步驟PCR反應(yīng)體系含有耐熱的Taq DNA聚合酶、化學(xué)合成的寡聚核苷酸引物(primer)、4種dNTP、以及合適的緩沖液體系。 1、變性：將反應(yīng)系統(tǒng)加熱至95，使模板DNA完全變性成為單鏈，同時(shí)引物自身和引物之間存在的局部雙鏈也得以消除。退火：將溫度下降至適宜溫度，使模板DNA與引物退火結(jié)合。延伸：將溫度升至72，DNApol以dNTP為底物催化DNA合成，按堿基配對合成與模板互補(bǔ)的新鏈。10、試述參與原核生物DNA復(fù)制的酶類及其作用大腸桿菌有三種DNA聚合酶，分別為DNA聚合酶、。DNA聚合酶的功能是

23、填補(bǔ)空隙、切除引物、修復(fù)；DNA聚合酶的功能不清；DNA聚合酶是復(fù)制時(shí)的主要的復(fù)制酶。11、蛋白質(zhì)折疊的質(zhì)量控制系統(tǒng)及其作用機(jī)制 蛋白質(zhì)制造過程中的質(zhì)量控制主要依賴于兩類蛋白質(zhì)分子：分子伴侶和依賴于ATP的蛋白水解酶。識別并結(jié)合那些去折疊的、暴露有疏水表面的蛋白質(zhì)分子，之后，分子伴侶蛋白以及蛋白水解酶中的分子伴侶結(jié)構(gòu)域?qū)⑴c“結(jié)構(gòu)異常”蛋白質(zhì)結(jié)合并促進(jìn)其正確折疊。如果這一步失敗的話，蛋白水解酶就可能通過降解來清除這種遭遇了不可逆性損傷的蛋白質(zhì)分子。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中進(jìn)行質(zhì)量控制的蛋白質(zhì)分子包括兩大類：分子伴侶蛋白和糖基修飾蛋白。沒有正確折疊或沒有完全折疊的糖蛋白分子將再次被加上一個(gè)葡萄糖基團(tuán)，使之再次

24、與識別沒有正確折疊好的糖蛋白的分子伴侶結(jié)合而進(jìn)行新一輪的折疊努力。而最終無法正確折疊的蛋白可能被送回到細(xì)胞漿中，被泛素共價(jià)修飾再被蛋白水解體降解。12、簡述蛋白質(zhì)分離(fnl)純化的基本步驟。1、材料的預(yù)處理及細(xì)胞破碎，首先要把蛋白質(zhì)從組織(zzh)或細(xì)胞中釋放出來并保持原來的天然狀態(tài)，不喪失活性。2、蛋白質(zhì)的抽提，通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)(xngzh)而定，在抽提過程中，應(yīng)注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質(zhì)的變性。3、蛋白質(zhì)粗制品的獲得，選用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開來。比較方

25、便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進(jìn)行的分離。常用的有下列幾種方法：等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法4、樣品的進(jìn)一步分離純化，常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。13、簡述基因診斷的基本原理和應(yīng)用前景。互補(bǔ)的DNA單鏈能夠在一定條件下結(jié)合成雙鏈，即能夠進(jìn)行雜交。這種結(jié)合是特異的，即嚴(yán)格按照堿基互補(bǔ)的原則進(jìn)行，它不僅能在DNA和DNA之間進(jìn)行，也能在DNA和RNA之間進(jìn)行。因此，當(dāng)用一段已知 HYPERLINK /view/8563.htm t _blank 基因的核酸序列作出探針，與變性后的單鏈 HYPERLINK /view/152123.htm t _b

26、lank 基因組DNA接觸時(shí)，如果兩者的堿基完全配對，它們即互補(bǔ)地結(jié)合成雙鏈，從而表明被測基因組DNA中含有已知的基因序列。由此可見，進(jìn)行 HYPERLINK /view/13735.htm t _blank 基因檢測有兩個(gè)必要條件，一是必需的特異的DNA探針；二是必需的 HYPERLINK /view/152123.htm t _blank 基因組DNA。當(dāng)兩者都變性呈單鏈狀態(tài)時(shí)，就能進(jìn)行分子雜交。應(yīng)用前景：可以應(yīng)用在診斷遺傳病、感染性疾病、腫瘤。也在法醫(yī)學(xué)上應(yīng)用，親子鑒定，DNA指紋。14、何謂細(xì)胞凋亡？簡述細(xì)胞凋亡的生物化學(xué)特點(diǎn)。細(xì)胞凋亡：是指機(jī)體細(xì)胞在正常生理或病理狀態(tài)下發(fā)生的一種自發(fā)

27、的、程序化死亡過程。它的發(fā)生受到機(jī)體的嚴(yán)密調(diào)控。生化特點(diǎn)：1、非隨機(jī)性DNA降解：細(xì)胞凋亡過程中，核酸內(nèi)切酶活化，基因組DNA常常首先被降解為200-300kb的片段(“結(jié)構(gòu)域式”剪切)?；蚪MDNA的裂解產(chǎn)物在電泳圖譜上呈現(xiàn)連續(xù)的階梯狀的條帶。壞死細(xì)胞的DNA不出現(xiàn)非隨機(jī)性降解。2、細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸外翻：正常細(xì)胞的膜脂分布呈現(xiàn)膽堿類磷脂如磷脂酰膽堿、鞘磷脂大多分布在膜外層，而氨基類磷脂如磷脂酰絲氨酸（PS）和磷脂酰乙醇胺則多分布在膜內(nèi)層。在凋亡細(xì)胞，磷脂酰絲氨酸常常由細(xì)胞膜內(nèi)層轉(zhuǎn)向膜外層。這是細(xì)胞凋亡早期的重要生物化學(xué)特點(diǎn)。3、正常的能量代謝：細(xì)胞凋亡的發(fā)生要求ATP的參與。在ATP存在時(shí)

28、，PKC抑制劑Stauropsrine誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。反之，在耗竭ATP的情況下，凋亡誘導(dǎo)劑Stauropsrine和Fas配體誘導(dǎo)的T細(xì)胞死亡形式也由凋亡轉(zhuǎn)向壞死。4、胞漿蛋白交聯(lián)：凋亡細(xì)胞的mRNA和蛋白質(zhì)合成減少，編碼組織谷氨酰胺酶的基因誘導(dǎo)表達(dá)，該酶催化形式穩(wěn)定的廣泛的胞漿蛋白交聯(lián)，在胞膜下形成殼狀結(jié)構(gòu)，使凋亡小體穩(wěn)定，防止生物活性物質(zhì)釋放至細(xì)胞外而引起炎癥反應(yīng)。15、從基因水平上，怎樣進(jìn)行親子鑒定和個(gè)體識別？ 基因指紋是法醫(yī)(fy)案檢工作中個(gè)體識別與親子鑒定的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。1985年，英國遺傳學(xué)家在人體基因組DNA中發(fā)現(xiàn)了高度可變的小衛(wèi)星區(qū)域。在同一酶解物的印跡圖上，同一個(gè)體的不同

29、組織來源的DNA的譜帶完全一致；而不同個(gè)體之間譜帶都不相同，如同人的指紋具有高度個(gè)體特異性。因此，這種印跡圖稱為基因指紋，是法醫(yī)案檢工作中個(gè)體識別與親子鑒定的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。16、比較(bjio)DNA 與RNA 的異同(ytng)點(diǎn)。1、化學(xué)組成比較 堿基 戊糖 磷酸 DNA A、G、C、T -D-2，脫氧核糖 磷酸 RNA A、G、C、U -D-核糖 磷酸2、分子結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)：兩者概念相同，但基本組成單位不同二級結(jié)構(gòu)：DNA為雙螺旋結(jié)構(gòu)；RNA一般為單鏈分子，可形成局部雙螺旋，呈莖-環(huán)結(jié)構(gòu)。三級結(jié)構(gòu)：原核生物DNA為超螺旋，真核生物DNA與蛋白質(zhì)組裝成染色體；RNA的三級結(jié)構(gòu)是其二級結(jié)構(gòu)的

30、進(jìn)一步卷曲折疊所致。3、細(xì)胞內(nèi)分布：DNA存在于細(xì)胞核和線粒體；RNA存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)4、生物學(xué)作用：DNA是絕大多數(shù)生物遺傳信息的貯存和傳遞者，與生物的繁殖、遺傳及變異等有密切關(guān)系；RNA參與蛋白質(zhì)生物合成過程，也可作為某些生物遺傳信息的貯存和傳遞者。17、DNA復(fù)制的保真性如何？哪些因素保證此保真性？ 1、DNA聚合酶對堿基配對的選擇作用：DNA聚合酶能夠根據(jù)模板鏈上的核苷酸選擇正確的dNTP摻入到引物的3，末端。DNA聚合酶能夠識別正確與錯(cuò)誤的配對，接受正確的配對，催化磷酸二酯鍵的形成，錯(cuò)誤配對的dNTP將被排斥出聚合位點(diǎn)，并以正確的dNTP來取代。2、DNA聚合酶對模板的識別作用

31、：DNA聚合酶一方面要識別DNA模板，另一方面識別dNTP與二價(jià)離子的復(fù)合物。如果引物末端的配對不正確，DNA聚合酶就不能發(fā)生反應(yīng)。必須先將引物3，末端的核苷酸調(diào)整正確，下一個(gè)dNTP才能和模板結(jié)合。3、DNA聚合酶3，-5，外切活性的校正作用：引物的3，端存在錯(cuò)配堿基時(shí)，引物3，末端與DNA模板分開，引起DNA外形改變，DNA聚合酶被卡住，不能沿著DNA鏈繼續(xù)向前滑動(dòng)，延長了引物的3，末端與DNA聚合酶的3，-5，外切活性部位之間的接觸時(shí)間，將錯(cuò)配的核苷酸切除。18、膜受體介導(dǎo)的信息傳遞途徑有哪些？ cAMP-蛋白激酶途徑；Ca2+-磷脂依賴性蛋白激酶途徑；Ca2+-CaM依賴性蛋白激酶途徑

32、；cGMP-蛋白激酶途徑；Ras-Raf-MAPK途徑；JAKs-STAT途徑；核因子KB途徑。19、試述真核生物hnRNA的加工過程。hnRNA：在真核生物中，最初轉(zhuǎn)錄生成的RNA稱為 HYPERLINK /view/3157602.htm t _blank 不均一核RNA(hnRNA)。核內(nèi)不均一RNA為存在于 HYPERLINK /view/77362.htm t _blank 真核生物細(xì)胞核中的不穩(wěn)定、大小不均的一組 HYPERLINK /view/101963.htm t _blank 高分子RNA之總稱。1、5端形成特殊的帽子結(jié)構(gòu)（m7G5ppp5NmpNp-)，2、在鏈的3端切斷并加上多聚腺苷酸（polyA)尾巴， 3、通過拼接除去由內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄來的序列， 4、鏈內(nèi)部核苷被甲基化。20、真核細(xì)胞成熟mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)有哪些？1、在5，端有m7GpppNM的帽子結(jié)構(gòu)2、在3，端有polyA尾巴結(jié)構(gòu)3、由編碼區(qū)和非編碼區(qū)構(gòu)成，編碼