2.2.25 紫外—可見分光光度吸收法

1、2.2.25紫外可見分光光度吸收法吸光度的檢測(cè)：溶液的吸光度可以定義為以10為底的單色光輻射的透光率的倒數(shù)的對(duì)數(shù)。A=log10（1/T）=log10（I0/I）T=I0/II0=單色光反射的入射光強(qiáng)度上單色光反射的透射光的強(qiáng)度吸光度A與輻射路徑的長(zhǎng)度和溶液中物質(zhì)的濃度成正比:A=cb二摩爾吸光度，當(dāng)b的單位是厘米，c的單位是摩爾每升時(shí)。A1%代表10g/L的溶液在1cm比色池中在特定波長(zhǎng)下的吸光度。1cm10E%=1cmMr除另有規(guī)定外，用1cm的比色池在規(guī)定的波長(zhǎng)下測(cè)得吸光度。除非另有規(guī)定，測(cè)定時(shí)對(duì)照采用相同的溶劑或者相同的混合溶劑。溶劑在規(guī)定波長(zhǎng)處以空氣為空白對(duì)照的吸光度不應(yīng)該超過0.4

2、，最好是小于0.2。將吸光度或者吸光度的函數(shù)作為縱坐標(biāo)，波長(zhǎng)或波長(zhǎng)的函數(shù)作為橫坐標(biāo)繪制吸收?qǐng)D譜。如果專論中規(guī)定的最大吸收處的單一值，則可認(rèn)為測(cè)得值不超過2nm。儀器適用于紫外及可見區(qū)光譜測(cè)定的分光光度計(jì)由一個(gè)能在200-800nm范圍內(nèi)提供單色光的光學(xué)系統(tǒng)和一個(gè)測(cè)定吸光度的測(cè)定裝置所組成。波長(zhǎng)的控制用欽高氯酸鹽溶液R的最大吸收、氫或氘高壓燈、汞蒸汽來確認(rèn)波長(zhǎng)范圍的準(zhǔn)確性。如表2.2.25-1所示。在紫外區(qū)域的偏差為1nm,在可見光區(qū)的偏差為土3nm.。也可以用已校驗(yàn)過的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來確認(rèn)波長(zhǎng)范圍的準(zhǔn)確性。表2.2.25-1控制波長(zhǎng)范圍的最大吸收241.15nm(Ho)404.66nm(Hg)253

3、.7nm(Hg)435.83nm(Hg)287.15nm(Ho)486.0nm(Dp)302.25nm(Hg)486.1nm(Hp)313.16nm(Hg)536.3nm(Ho)334.15nm(Hg)546.07nm(Hg)361.5nm(Ho)576.96nm(Hg)365.48nm(Hg)579.07nm(Hg)吸光度的控制用合適的濾片或重鉻酸鉀溶液R來確認(rèn)吸光度的準(zhǔn)確性。表2.2.25-2給出了重鉻酸鉀溶液R的吸收波長(zhǎng)的準(zhǔn)確值和特征吸光度的允許范圍。表示根據(jù)吸光度的偏差為土0.01制定的。對(duì)于吸光度的控制，重鉻酸鉀在使用之前要在130下干燥至恒重。對(duì)于波長(zhǎng)為235nm、257nm、31

4、3nm、350nm的吸光度的確認(rèn)，取57.063.0mg的重鉻酸鉀R用0.005M的硫酸R溶解并稀釋至1000.0ml。對(duì)于波長(zhǎng)為430nm的吸光度的確認(rèn)，取57.063.0mg的重鉻酸鉀R用0.005M的硫酸R溶解并稀釋至100.0ml0也用已校驗(yàn)過的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來確認(rèn)吸光度的準(zhǔn)確性。表2.2.25-2波長(zhǎng)（nm）特征吸收A1%1cm最大接受限度235124.5122.9to126.2257144.5142.8to146.231348.647.0to50.3350107.3105.6to109.043015.915.7to16.1雜散光的限度可以用合適的濾片或溶液在規(guī)定的波長(zhǎng)處檢定雜散光。例如：

5、用水作為補(bǔ)償溶液時(shí)，12g/L的氯化鉀R溶液在1cm比色池中的吸光度在220nm到200nm之間陡然增大，且比198nm處的吸光度大2.0。也用已校驗(yàn)過的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來確認(rèn)雜散光的限度。分辨能力（用于定量分析）當(dāng)專論中規(guī)定時(shí)，按以下測(cè)量?jī)x器的分辨能力：記錄0.02%（v/v）的甲苯正己烷溶液的圖譜。在最大吸收處269nm的吸光度與在最小吸收處266nm處的吸光度的比率的最小值應(yīng)符合專論中的規(guī)定。也用已校驗(yàn)過的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)來確認(rèn)分辨能力。光譜的狹縫寬度（用于定量分析）為了避免光譜狹縫寬度引起的誤差，當(dāng)使用的儀器在選擇的波長(zhǎng)時(shí)其狹縫寬度是變化的，則要求其狹縫寬度與吸收帶的半寬度相比應(yīng)小一些，但是它又必須能

6、夠獲得較大的I0值（入射光強(qiáng)度）。所以應(yīng)逐步降低狹縫寬度而不引起吸光度讀數(shù)的改變。比色池比色池的光路長(zhǎng)度的偏差為0.005cm。當(dāng)使用相同溶劑時(shí)，比色池中包含供試品溶液和參比溶液必須具有相同的透光率。否則必須進(jìn)行校正。比色池必須潔凈并小心使用。分光光度法的衍生衍生分光光度法涉及吸收光譜（零級(jí)）轉(zhuǎn)化為一級(jí)、二級(jí)或更高級(jí)圖譜。一級(jí)衍生光譜圖是吸光度曲線（吸光度與波長(zhǎng)的變化率dA/d入）與波長(zhǎng)的梯度圖。二級(jí)衍生光譜圖是吸光光譜與波長(zhǎng)的曲率圖（d2A/D入2）。在任何波長(zhǎng)下的二級(jí)衍生圖通過以下方程與濃度建立關(guān)系：d2Ad2A1%c0dd2A1Qcb=icm?d入2d入210d入210c吸收溶液的濃度，g/L0儀器：使用符合以上要求的儀器，并且安裝有模擬耐電容區(qū)分組件或者數(shù)字微分器或其他產(chǎn)生衍射圖譜的裝置。一些產(chǎn)生二級(jí)圖譜的方法相對(duì)于零級(jí)圖譜產(chǎn)生一個(gè)波長(zhǎng)轉(zhuǎn)移，這個(gè)是需要考慮的。分辨力：當(dāng)在藥典中有規(guī)定時(shí)，記錄0.02%（v/v）甲苯的甲醇溶液的二級(jí)衍生圖譜，甲醇作