土壤無機(jī)磷形態(tài)連續(xù)提取

1、磷形態(tài)分級試劑：1M NH4Cl、0.5M NH4F (pH8.2)、0.1M NaOH、0.3M NaCHO （檸檬酸鈉）、1M NaHCO、0.25M H SO、2M HCl、 36573242M NaOH、0.8M H3BO3 （硼酸）、飽和NaCl、連二亞硫酸鈉（保險 粉）1、1M NH4C1溶液:稱取NH4Cl53.30g溶于約800mL水中，稀釋至1L。2、0.5M NH4F 溶液（pH8.2）：稱取 NH4F18.50g 溶于約 800mL 水中， 稀釋至950mL，用2M NaOH調(diào)節(jié)pH至8.2 （用pH計(jì)測定），再稀 釋至1L。3、0.1M NaOH溶液：稱取NaOH 4.

2、00g溶于800mL水中，冷卻后稀 釋至1L。4、0.3M檸檬酸鈉溶液：稱取檸檬酸鈉（N&CHQ,.2HO） 88.2g溶于3 6 5 72900mL熱水中，冷卻后稀釋至1L。5、1M NaHCO3溶液：稱取84.00g NaHCO3溶于約800mL水中，稀 釋至1L。6、0.25M H2SO4溶液：加濃硫酸15mL于約800mL水中，冷卻后稀 釋至1L。7、2M HCl溶液:量取168mL濃鹽酸加入約600mL水中，稀釋至1L。8、2M NaOH溶液：稱取NaOH 80.00g溶于800mL水中，冷卻后稀 釋至1L。9、0.8M硼酸溶液：稱取硼酸（H3BO3）49.00g溶于約800mL熱水

3、中， 冷卻后稀釋至1L。10、飽和氯化鈉溶液：稱取NaCl 400g溶于1L水中，攪拌溶解至飽和后過濾。操作步驟：1、（可溶性P和弱結(jié)合態(tài)P）：稱取通過100目的風(fēng)干土樣0.500g, 置于50mL離心管中，加入1M NH4C1 25mL，振蕩30min，3000 轉(zhuǎn)離心5min，將上清液全部倒入50mL方瓶中，取2mL提取液 加入比色管，滴加2滴指示劑，用2M HC1和2M NaOH調(diào)色至 待測液微黃，用鉬銻鈧法測定。2、（A1-P）:在 NH4C1浸提過的土樣中加入 25mL0.5M NH4F （pH8.2），振蕩1h， 3000轉(zhuǎn)離心5min，上清液倒入白色50ml方瓶中，取5mL提取液

4、加入比色管，加入0.8M H3BO3溶液 7.5mL，滴加2滴指示劑，用2M HCl和2M NaOH調(diào)色至待測 液微黃，用鉬銻鈧法測定。3、（Fe-P）：用飽和NaCl溶液清洗殘?jiān)鼉纱危看?2.5mL），離 心后棄去清洗液。加入25mL 0.1M NaOH，振蕩17h，3000轉(zhuǎn) 離心5min，上清液倒入白色50ml方瓶中，用飽和NaCl溶液清 洗殘?jiān)鼉纱危看?2.5mL），離心后一并倒入50mL白色方瓶 中。取10mL提取液加入比色管，滴加2滴指示劑，用2M HCl 和2M NaOH調(diào)色至待測液微黃（調(diào)色為黃色調(diào)整至無色），用 鉬銻鈧法測定。4、（ O-P）：向上一步提取過的土樣殘?jiān)尤?/p>

5、20mL 0.3M Na3C6H5O7 檸檬酸鈉和 2.5mL NaHCO3 85C水浴加熱 15min，加入Na2S2O4（連二亞硫酸鈉）0.5g，快速攪拌后繼續(xù)加熱15min， 3000轉(zhuǎn)離心5min,上清液倒入50ml定容離心管中，用飽和NaCl 溶液清洗殘?jiān)鼉纱危看?2.5mL），離心后一并倒入50mL定 容離心管中定容，將定容離心管開蓋暴露在空氣中數(shù)小時使剩 余的Na2S2O4完全氧化（若不能氧化，可采取向提取液中通入 空氣的辦法）。取3mL提取液加入比色管，滴加2滴指示劑， 用2M HCl和2M NaOH調(diào)色至待測液微黃（調(diào)色為黃色調(diào)整至無色），用鉬銻鈧法測定。若要校正過量檸檬酸

6、對顯色的影響， 可在加酸性鉗銻鈧之前加入3mL 5%鉗酸銨溶液。5、（Ca-P）：向上一步提取過的土樣殘?jiān)尤?5mL 0.25M H2SO4，振蕩1h，上清液倒入白色50ml方瓶中，用飽和NaCl溶液清洗 殘?jiān)鼉纱危看?2.5mL），離心后一并倒入50mL白色方瓶中。取20mL提取液加入比色管，滴加2滴指示劑，用2M HCl和2M NaOH調(diào)色至待測液微黃（調(diào)色為無色調(diào)整至微黃），用鉬銻鈧法測定。6、制作磷比色標(biāo)準(zhǔn)系列溶液時要加入相同的提取劑。但由于加入H3BO3溶液可完全消除浸提液中F-離子的干擾，因此在第2步（Al-P）的測定中，磷標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中，不必加入NH4F和H3BO3。7、連二

7、亞硫酸鈉極不穩(wěn)定，易氧化和分解，受潮或露置在空氣中 會失效，要注意防潮密封貯存在陰涼處。參考文獻(xiàn)：Investigation of Soil Legacy Phosphorus Transformation in LongTerm Agricultural Fields Using Sequential Fractionation, P K edge XANES and Solution P NMR S/10.1021/es504420n | Environ. Sci. Technol. 2015, 49, 168-176Sequential Frac

8、tionation. Phosphorus was sequentially extracted using the Zhang and Kovar method for non-calcareous soils and divided into fractions of NH4C1-P (soluble and loosely bound P), NH4F-P aluminum phosphate (Al-P), NaOH-P iron phosphate (Fe-P), citrate-bicarbonate-dithionite P (CBD-P; reductant-soluble P

9、) and H2SO4-P calcium phosphate (Ca-P). The extracts were analyzed colorimetrically by the ascorbic acid method without digestion for molybdate reactive P (MRP) concentration or following persulfate digestion in an autoclave20 to determine solution TP concentration. Solution MRP was designated as inorganic P (Pi) in each fraction. Solution Po was calculated by TP minus Pi, although it may include complex Pi forms. For NH4Cl-P and H2SO4-P fractions, little Po was detected; thus,