項目九 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) ppt課件

1、工程九 細(xì)胞培育技術(shù)工程導(dǎo)入：Vero細(xì)胞和狂犬病毒的培育工藝DMEM培育基胎牛血清其他成分錐形瓶逐級放大培育加堿碳酸氫鈉加糖葡萄糖灌注培育液微載體5L種子罐培育培育液50L生物反應(yīng)器接種狂犬病毒出液口收獲病毒動物細(xì)胞培育、 動物細(xì)胞交融、單克隆抗體、胚胎移植、動物細(xì)胞核移植等動物細(xì)胞培育技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的根底。提問：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培育, 植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？動物細(xì)胞培育和核移植技術(shù)動物細(xì)胞培育就是從動物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后，放在適宜的培育基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。1、選材： 動物胚胎或幼齡動物的組織

2、、器官，它們細(xì)胞增殖才干強(qiáng)，分裂旺盛，分化程度低，容易培育。在進(jìn)展動物細(xì)胞培育時，用胰蛋白酶分散細(xì)胞，闡明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。動物細(xì)胞培育適宜的PH為7.27.4，此環(huán)境下胃蛋白酶2.0沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。2.分散成單個細(xì)胞3.動物細(xì)胞生長特性：細(xì)胞貼壁： 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。要求： 培育瓶或培育皿的內(nèi)外表光滑、無毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制： 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到外表相互接觸時，細(xì)胞就會停頓分裂增殖，這種景象稱為細(xì)胞的接觸抑制。 4.過程：細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞無限傳代原代培育傳代培育細(xì)胞株細(xì)胞系5.如何界定原代培育和

3、傳代培育；細(xì)胞株和細(xì)胞系？多數(shù)組織細(xì)胞固定在外表生長和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停頓分裂增殖遺傳物質(zhì)改動動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培育液制成細(xì)胞懸浮液細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞增值無限傳代去掉組織間蛋白動物細(xì)胞培育不能最終培育成生物體動物細(xì)胞培育條件：1、無菌、無毒的環(huán)境 添加一定量的抗生素，定期改換培育液2、營養(yǎng)葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動物血清等。3、溫度和PH 36.5+-0.5度, 7.2-7.44、氣體環(huán)境： O2和CO295%空氣和5% CO2 保證細(xì)胞順利的生長增殖動物細(xì)胞培育液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清等。與植物培育基相比其特點(diǎn)是

4、：1液體培育基2含有動物血清一動物細(xì)胞培育動物體細(xì)胞大都生活在液體的環(huán)境2.動物細(xì)胞培育技術(shù)的運(yùn)用1消費(fèi)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。3用于檢測有毒物質(zhì)2獲得大量本身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。4用于生理、病理、藥理等方面的研討，為治療和預(yù)防疾病提供實際根據(jù)細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體培育結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁衍、培育無病毒植株等培育目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培育基特有成分液體培育基固體培育基培育基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培育植物組織培育比較工程植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培育的比較二動物細(xì)胞交融1.過程：誘導(dǎo)方式物理法化學(xué)法生物法：滅活的病毒仙臺病毒紫外線喪失感染性不感染細(xì)

5、胞保管交融活性誘導(dǎo)細(xì)胞交融二動物細(xì)胞交融1.過程：滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞外表細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜銜接細(xì)胞交融，構(gòu)成雜種細(xì)胞細(xì)胞膜具有一定的流動性主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法同左滅活的病毒物理離心、振動、電刺激化學(xué)聚乙二醇誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞交融去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體交融細(xì)胞交融的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性原理動物細(xì)胞交融植物體細(xì)胞雜交比較工程植物、動物細(xì)胞交融的比較(三單克隆抗體 抗體1?？乖?動物體內(nèi)刺激效應(yīng)B 抗原 動物體內(nèi)刺激效應(yīng)B 抗體抗原不純抗體不純挑選單一效應(yīng)B細(xì)胞不能增值產(chǎn)生大量抗體2。特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反響

6、不夠靈敏(三單克隆抗體設(shè)計方案：一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖-化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。雜種細(xì)胞 ？ ？誘導(dǎo)其交融的方法有哪些？ 抗原 效應(yīng)B細(xì)胞(三單克隆抗體2.制備過程：除經(jīng)過雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生單克隆抗體外，還有什么方法？3.單克隆抗體的運(yùn)用： 在根底實際研討中具有重要意義 在疾病診斷、治療和預(yù)防方面，具有特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。生物導(dǎo)彈(三單克隆抗體總結(jié)一種誘導(dǎo)細(xì)胞交融的新方法一種新細(xì)胞滅活病毒雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢動物的胚胎移植 處理某些妊娠時間長、每胎產(chǎn)子數(shù)量少的優(yōu)良種畜的繁衍速度問題。二、動物體細(xì)胞核移植技術(shù):將動物的

7、一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個曾經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植難度高受體細(xì)胞：M期的卵母細(xì)胞多莉與“母親卵細(xì)胞母綿羊母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程交融后的卵細(xì)胞克隆動物的研討意義1.克隆動物作為生物反響器，消費(fèi)醫(yī)用蛋白2.改良動物種類 3.治療人類疾病，作為供體4.維護(hù)瀕危動物體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。6.世界上第一只

8、克隆綿羊“多莉的培育等程序如下圖。請仔細(xì)看圖后回答以下問題：黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊卵腺細(xì)胞核重組細(xì)胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處置妊娠、出生寫出 、所指的細(xì)胞工程各稱：。實施細(xì)胞工程時，所需的受體細(xì)胞大多采用動物卵細(xì)胞的緣由是： 。多莉面部的毛色是 ，判別根據(jù)： 。繼植物組織培育之后，克隆綿羊培育勝利，證明動物細(xì)胞也具有 。 請舉例闡明克隆綿羊培育勝利的實踐意義： 。1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞交融，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培育可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細(xì)胞交融的是 A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞 B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 D.沒經(jīng)過免疫的淋巴

9、細(xì)胞A穩(wěn)定練習(xí)2.動物細(xì)胞交融的目的中最重要的是- A.抑制遠(yuǎn)緣雜交不親和 B. 制備單克隆抗體 C.培育新種類 D.消費(fèi)雜種細(xì)胞3.動物細(xì)胞交融與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的選項是 誘導(dǎo)交融的方法完全一樣 B.所用的技術(shù)手段根本一樣 C. 所采用的原理完全一樣 D. 都能構(gòu)成雜種細(xì)胞 BD4. 單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是- A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞交融 B.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)交融而成 C.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)交融而成 D.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)交融而成 D 1、在動物細(xì)胞培育過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改動的細(xì)胞是 - A細(xì)胞系 B細(xì)胞株

10、C原代細(xì)胞 D傳代細(xì)胞2、動物細(xì)胞工程技術(shù)的根底是 - A.動物細(xì)胞交融 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動物細(xì)胞培育AD3、用于動物細(xì)胞培育的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要緣由是這樣的組織細(xì)胞 A.容易產(chǎn)生各種變異 B具有更強(qiáng)的全能性 C.取材非常方便 D分裂增殖的才干強(qiáng)D 4.動物細(xì)胞培育與植物細(xì)胞培育的重要區(qū)別在于- A.培育基不同； B.動物細(xì)胞培育不需求在無菌條件下進(jìn)展； C.動物細(xì)胞可以傳代培育，而植物細(xì)胞不能； D.動物細(xì)胞可以大量培育，而植物細(xì)胞只能培 養(yǎng)成植株。A作業(yè)：1、在動物細(xì)胞培育過程中，為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進(jìn)展處置？ 胰蛋白酶處置動物組織，可以使動物組織細(xì)胞間的膠原纖維和細(xì)胞外的其他成分酶解，獲得單個細(xì)胞，從而使每個細(xì)胞都能與培育液充分接觸。2、在動物細(xì)胞培育過程中為什么不用胃蛋白酶？ 胰蛋白酶最適PH值為7.2 8.4 胃蛋白酶最適P