化學(xué)藥品中雜質(zhì)控制及測定方法李莉318

1、化學(xué)藥品中雜質(zhì)控制及測定方法 2010年3月1內(nèi)容提要一、雜質(zhì)控制的方法二、雜質(zhì)對照品的使用三、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)的命名四、復(fù)方制劑雜質(zhì)控制2一、雜質(zhì)控制的方法1、雜質(zhì)的檢測方法2、雜質(zhì)限度的確定31、雜質(zhì)的檢測方法一般的物理或化學(xué)方法、光譜法、生物檢定法、色譜法。檢測方法需要做到專屬、靈敏、準(zhǔn)確、簡捷。由于各種分析方法均具有一定的局限性，因此在進(jìn)行雜質(zhì)分析時，應(yīng)注意不同原理的分析方法間的相互驗(yàn)證。單一方法不能滿足多個雜質(zhì)的檢測時，可采用兩種或兩種以上的方法互為補(bǔ)充，控制雜質(zhì)。4HPLC法具有專屬、靈敏、準(zhǔn)確、簡捷優(yōu)點(diǎn)峰面積歸一法 簡便、快捷、重現(xiàn)（可產(chǎn)生較大誤差）：全部出峰、完全分離、響應(yīng)一

2、致；各雜質(zhì)響應(yīng)因子不一定相同；雜質(zhì)量與主成分量不一定在同一線性范圍內(nèi)；儀器對微量雜質(zhì)和常量主成分的積分精度及準(zhǔn)確度不相同等因素；在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用有一定的局限性 不加校正因子的主成分自身對照法 可用于未知雜質(zhì)（有一定誤差） 加校正因子的主成分自身對照法 定量準(zhǔn)確（已知雜質(zhì)，定位） 雜質(zhì)對照法 定位、定量準(zhǔn)確（已知雜質(zhì)，需用雜質(zhì)對照品） 52、雜質(zhì)限度的確定完全除去雜質(zhì)既不可能也沒必要，而是控制在安全、合理的范圍內(nèi)，這個允許的范圍就是雜質(zhì)限度。通過系統(tǒng)、全面的研究，最終確定雜質(zhì)限度的基本原則是：盡可能的低，行得通的低?？紤]的基本因素：雜質(zhì)的特性（毒性、生物活性）；安全性實(shí)驗(yàn)和臨床研究用樣品的雜質(zhì)情

3、況及其表現(xiàn)；藥品本身的穩(wěn)定性；適當(dāng)考慮大生產(chǎn)的可行性及批間的正常波動（GMP控制）；檢測方法的重現(xiàn)性。來源于原料藥的雜質(zhì)，如果不是其降解產(chǎn)物，且限度已在原料藥標(biāo)準(zhǔn)中控制，則制劑中可不作控制，重點(diǎn)控制降解產(chǎn)物。具體國家標(biāo)準(zhǔn)參見雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則中的規(guī)定。（報告限度、鑒定限度和質(zhì)控限度）62、雜質(zhì)限度的確定仿制藥仿制已有國家標(biāo)準(zhǔn)（仿國外的也一樣）的藥品：在進(jìn)行仿制藥品雜質(zhì)研究時，要對已上市的同品種產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行詳細(xì)研究（首選原發(fā)廠效期內(nèi)產(chǎn)品），分析其雜質(zhì)的種類與含量，與在研產(chǎn)品進(jìn)行全面的質(zhì)量對比。如果雜質(zhì)譜一致根據(jù)已有國家標(biāo)準(zhǔn)制訂相應(yīng)的雜質(zhì)限度，或適當(dāng)提高標(biāo)準(zhǔn)；如果雜質(zhì)譜不一致，新雜質(zhì)的含量高

4、于表中規(guī)定的合理限度，或在研產(chǎn)品的雜質(zhì)含量高于已上市的同品種產(chǎn)品的雜質(zhì)實(shí)測值應(yīng)考慮優(yōu)化產(chǎn)品的處方與制備工藝，將雜質(zhì)的含量降到規(guī)定的限度以內(nèi)，不能達(dá)到要求，則應(yīng)做必要的安全性研究。 7雜質(zhì)研究具有階段性雜質(zhì)研究是藥物研究的重要環(huán)節(jié)，貫穿于整個藥物研究的始終。在申報臨床研究前，應(yīng)對已有批次產(chǎn)品的雜質(zhì)進(jìn)行比較全面的檢測，根據(jù)安全性研究用樣品的雜質(zhì)含量情況，來證明臨床研究用藥品是安全的。隨著研究的深入，可對雜質(zhì)分析方法做相應(yīng)的改進(jìn)。創(chuàng)新藥物雜質(zhì)限度的最終確定需要根據(jù)臨床研究結(jié)果綜合權(quán)衡，申報臨床研究時，只能對雜質(zhì)限度做一初步規(guī)定如因生產(chǎn)規(guī)模放大產(chǎn)生了新的雜質(zhì)，或已有雜質(zhì)含量超出原有限度時，應(yīng)根據(jù)ICH

5、中對原料藥和制劑的雜質(zhì)限度規(guī)定來判斷該雜質(zhì)含量是否合理，如不合理，應(yīng)考慮進(jìn)一步的研究工作。8雜質(zhì)控制的方法重點(diǎn)：關(guān)注雜質(zhì)檢測方法的選擇與驗(yàn)證。注意研究過程中所有批次樣品（包括各種生產(chǎn)規(guī)模）中的雜質(zhì)進(jìn)行完整的記錄，為制訂雜質(zhì)限度提供重要的依據(jù)。確定雜質(zhì)限度時，要綜合考慮雜質(zhì)的安全性、生產(chǎn)的可行性、合理性與產(chǎn)品的穩(wěn)定性。確定仿制藥品雜質(zhì)限度時，要注意與已上市產(chǎn)品的質(zhì)量對比研究，以充分保證安全性。 9二、雜質(zhì)對照品的使用 貫穿研發(fā)整個過程，涵蓋注冊標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和藥典標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中是否采用已知雜質(zhì)對照品應(yīng)慎重選擇，并不是在標(biāo)準(zhǔn)中引入已知雜質(zhì)對照品就意味著標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量的提高。在國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中引入雜質(zhì)對照

6、品應(yīng)滿足下述條件之一。1、色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)需要，即分離度需要?？蓮浹a(bǔ)只規(guī)定理論板數(shù)的不足，既可以是已知的“有關(guān)物質(zhì)”，也可以是與主成分或“已知雜質(zhì)”結(jié)構(gòu)相近的指示性物質(zhì)。2、該雜質(zhì)與主成分的相對響應(yīng)因子差異較大（超出0.52.0）時，加校正因子自身對照法怕不夠準(zhǔn)確反映雜質(zhì)的真實(shí)含量。特別是響應(yīng)因子較小的雜質(zhì)，怕低估其雜質(zhì)含量。3、該雜質(zhì)的毒性較大，需要專門嚴(yán)格控制。4、雜質(zhì)定位需要。 10三、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)的命名 1.存在需要：雜質(zhì)檢查HPLC法、TLC法和GC等各種色譜方法，過去采用主成分自身對照法，現(xiàn)在越來越多的標(biāo)準(zhǔn)中采用已知結(jié)構(gòu)的化學(xué)。或用于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、或用于雜質(zhì)定位、或用于外

7、標(biāo)法測定該雜質(zhì)的含量。需要對藥品標(biāo)準(zhǔn)中涉及到的結(jié)構(gòu)已知的雜質(zhì)進(jìn)行命名。11三、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)的命名2、命名原則通用名稱，如果該雜質(zhì)也是一個藥物，可能已有藥品通用名稱，應(yīng)直接采用該藥品的通用名稱（比如氯乙酰左卡尼汀的一個已知雜質(zhì)為左卡尼汀，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中該雜質(zhì)名稱即為“左卡尼汀”）化學(xué)名稱，一般情況，雜質(zhì)沒有藥品通用名稱，但如果化學(xué)名稱比較簡單，可根據(jù)有機(jī)化學(xué)命名原則直接采用化學(xué)名稱。（如鹽酸乙胺丁醇中的雜質(zhì)（）-2-氨基丁醇）“某某雜質(zhì)A、某某雜質(zhì)B”的命名方式 （如格列本脲的兩個雜質(zhì)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中分別命名為格列本脲雜質(zhì)A、格列本脲雜質(zhì)B，這種命名方式需要在標(biāo)準(zhǔn)后提供詳細(xì)結(jié)構(gòu)式和化學(xué)名稱）12

8、三、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)的命名注意：當(dāng)只有一個已知雜質(zhì)時，需要特別強(qiáng)調(diào)的是當(dāng)只有一個已知雜質(zhì)時，仍然應(yīng)該以“某某雜質(zhì)A”命名，不能只是“某某雜質(zhì)”，否則，當(dāng)將來標(biāo)準(zhǔn)中需要增加已知雜質(zhì)時，命名會出現(xiàn)困難或混亂 ?！澳衬常ù郎y藥品的活性組分）雜質(zhì)*（如A）對照品格列本脲雜質(zhì)A”給出雜質(zhì)對照品的全稱，在同一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中 再次提到該雜質(zhì)名稱時可簡稱雜質(zhì)A。某某（待測藥品的活性組分）雜質(zhì)*（如A）對照品：以鹽酸比哌立登為例，在其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，其雜質(zhì)對照品的名稱是“比哌立登雜質(zhì)A對照品，而不是 “鹽酸比哌立登雜質(zhì)A對照品”。酸基亦然 。13三、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)的命名注意：如果B品種中采用的化學(xué)對照品在A品種中

9、已經(jīng)出現(xiàn)，應(yīng)使用A品種中已經(jīng)出現(xiàn)的對照品全稱，同時，還應(yīng)在括號中給出該雜質(zhì)在B品種中的命名 。如甲氧氯普胺雜質(zhì)E和硫必利雜質(zhì)C是同一物質(zhì)，在鹽酸硫必利雜質(zhì)C檢查項(xiàng)下“取20.0mg甲氧氯普胺雜質(zhì)E對照品（硫必利雜質(zhì)C），用溶解 ”如果一個品種項(xiàng)下有多個雜質(zhì)，而且除了取代基團(tuán)的差異外，這些雜質(zhì)都有共同的母核或化學(xué)結(jié)構(gòu)，可以用一個通用的化學(xué)結(jié)構(gòu)表述，取代基用R1、R2 表示 如果該雜質(zhì)有CAS號的話，可給出CAS 號。 14四、復(fù)方制劑雜質(zhì)控制目前現(xiàn)有國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中多數(shù)復(fù)方制劑沒有相應(yīng)有關(guān)物質(zhì)控制。或者雖有控制，但沒有考慮復(fù)方制劑的特點(diǎn)，研究思路 與單方制劑一般沒有明顯區(qū)別。此外存在方法專屬性欠佳

10、，雜質(zhì)歸屬控制少，籠統(tǒng)控制為主的現(xiàn)象。 2010年版藥典的起草修訂工作過程中注重了雜質(zhì)研究和控制方法的制定。因此今后研制新的復(fù)方制劑時必須注重雜質(zhì)的研究和控制。難題：在已公布的國內(nèi)外雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則中沒有關(guān)于復(fù)方制劑雜質(zhì)研究的專門說明。15復(fù)方制劑雜質(zhì)控制主要內(nèi)容一、復(fù)方制劑雜質(zhì)控制的主要難點(diǎn) 二、復(fù)方制劑雜質(zhì)控制的思考 三、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)控制的具體方法 16一、復(fù)方制劑雜質(zhì)控制的主要難點(diǎn)1、相對復(fù)雜。2、準(zhǔn)確定量困難。建立簡單有效的分析方法，同時分離、檢出所有的雜質(zhì)并準(zhǔn)確定量更加困難。3、更要使用雜質(zhì)對照品。由于歸屬和定量方面的復(fù)雜性，不可避免的要用到較多的雜質(zhì)對照品。17二、復(fù)方制劑雜

11、質(zhì)控制的思考 復(fù)方制劑雜質(zhì)研究與單方制劑一樣，它包括選擇合適的分析方法、雜質(zhì)的定性和定量、方法驗(yàn)證并綜合藥學(xué)、毒理及臨床研究的結(jié)果確定雜質(zhì)的合理限度。復(fù)方制劑進(jìn)行雜質(zhì)研究，可以根據(jù)制劑的實(shí)際情況，確定首要研究對象，然后采用適當(dāng)?shù)姆椒?，分析確定相應(yīng)雜質(zhì)的來源，對雜質(zhì)進(jìn)行定性研究和歸屬確定。 18復(fù)方制劑雜質(zhì)控制的思考內(nèi)容（一）首要研究對象的確定（二） 復(fù)方制劑雜質(zhì)來源歸屬研究19（一）首要研究對象的確定1、復(fù)方制劑中各藥物穩(wěn)定性均較好，但含量相差較大，可主要針對含量較大的藥物進(jìn)行雜質(zhì)研究（不推薦采用） 。采用該方法研究應(yīng)有明確文獻(xiàn)支持小組分不會產(chǎn)生毒 性的雜質(zhì)，如產(chǎn)生毒性雜質(zhì)，應(yīng)對該毒性雜質(zhì)進(jìn)行

12、定性研 究并制定合理的限度予以控制。2、復(fù)方制劑中各藥物結(jié)構(gòu)差異可能較大，其穩(wěn)定性亦不盡相同，穩(wěn)定性相差較大時，在經(jīng)過嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證或有明確的文獻(xiàn)資料支持下，可主要針對不穩(wěn)定藥物的雜質(zhì)進(jìn)行研究。3、復(fù)方制劑中各藥物的穩(wěn)定性均較差，或者各藥物含量相近、穩(wěn)定性亦相近的復(fù)方制劑，建議均進(jìn)行相應(yīng)雜質(zhì)的研究。20（一）首要研究對象的確定4、對組分較多的復(fù)方制劑，如復(fù)方氨基酸，多種維生素等復(fù)方制劑，應(yīng)詳細(xì)分析各組分的穩(wěn)定性情況，有針對性地進(jìn)行雜質(zhì)研究。5、其他情況，如對雙層或多層片但不同片層僅含單一組分的復(fù)方片劑，或多種色澤/形狀顆粒且不同色澤/形狀顆粒僅含單一組分的膠囊/顆粒劑等固體復(fù)方制劑，如能采用物

13、理手段 （如小心切開、分揀等）將不同藥物組分簡單地分離，可參照各藥物單方制劑的雜質(zhì)檢查方法分別進(jìn)行研究。這些特殊劑型采用該方法時應(yīng)注意藥物之間有無遷移現(xiàn)象。21（二） 復(fù)方制劑雜質(zhì)來源歸屬研究 復(fù)方制劑的雜質(zhì)研究，肯定是在對相應(yīng)原料藥及各自單方制劑研究的已有基礎(chǔ)上的，因此，自然要借鑒已有的雜質(zhì)研究成果。如果已有的雜質(zhì)研究結(jié)果不充分，那么首先應(yīng)研究其各自雜質(zhì)的來源和特點(diǎn)。復(fù)方中雜質(zhì)結(jié)構(gòu)差異較大時，應(yīng)注意不同原理的分析方法間的相互補(bǔ)充與驗(yàn)證 由于復(fù)方制劑雜質(zhì)數(shù)目多及來源的多樣性，HPLC法應(yīng)該是最常用或者說是首選的雜質(zhì)檢查方法。在采用紫外檢測器時，使用二極管陣列檢測器有著重要的意義，通過該檢測器可

14、獲得各雜質(zhì)的紫外光譜信息，有助于判斷雜質(zhì)檢測波長選擇的合理性，避免雜質(zhì)的漏檢，同時還可以進(jìn)行峰純度的檢查。22（二） 復(fù)方制劑雜質(zhì)來源歸屬研究建立了初步的色譜方法，對復(fù)方制劑中各藥物、雜質(zhì)、輔料能夠有效分離檢出之后，可采用以下方法對雜質(zhì)進(jìn)行分步歸屬研究：1、確定各自原料帶入雜質(zhì)在復(fù)方制劑測定方法中的歸屬，方法為分別測定各原料藥、原料藥按處方比例混合物、輔料、原輔料混合物、制劑樣品在確定的雜質(zhì)檢查色譜條件下的HPLC圖譜，對上述圖譜進(jìn)行對比研究，以確定制劑色譜圖中輔料峰、由各原料藥引入的雜質(zhì)峰。另外，可通過比較各原料藥的HPLC圖譜與原料藥混合物的HPLC圖譜初步確定原料藥之間是否有相互作用；通

15、過比較原料藥混合物的HPLC圖譜、輔料的HPLC圖譜以及原輔料混合物的HPLC圖譜，可初步確定原輔料之間是否有相互作用；通過比較原輔料混合物的HPLC圖譜與制劑的HPLC圖譜，可初步確定制劑過程是否引起主藥的降解和雜質(zhì)的增加。（電子刊物，化學(xué)藥物復(fù)方制劑雜質(zhì)來源歸屬研究的基本思路，張玉琥） 23（二） 復(fù)方制劑雜質(zhì)來源歸屬研究2、確定制劑工藝中新增雜質(zhì)的歸屬，確定是輔料峰還是制劑過程的分解產(chǎn)物，方法為對各原料藥、原料藥按處方比例混合物、輔料、原輔料混合物、制劑分別進(jìn)行光、熱、濕影響因素試驗(yàn)，測定試驗(yàn)前后樣品的HPLC圖譜并進(jìn)行比較分析，可明確制劑中各藥物在強(qiáng)光、高溫、高濕條件下的主要降解產(chǎn)物，

16、對復(fù)方制劑中的降解產(chǎn)物進(jìn)行歸屬，并可通過上述比較研究，基本確定藥物與藥物之間、藥物與輔料之間在劇烈條件下是否存在相互作用，是否產(chǎn)生新的雜質(zhì)。 24（二） 復(fù)方制劑雜質(zhì)來源歸屬研究3、貯藏期（或加速實(shí)驗(yàn)）新增雜質(zhì)的歸屬。方法為對各原料藥、原料藥混合物、輔料、原輔料混合物、制劑分別進(jìn)行穩(wěn)定性加速試驗(yàn)，測定不同時間樣品的HPLC圖譜并進(jìn)行比較分析，并與制劑長期留樣試驗(yàn)樣品的測定結(jié)果進(jìn)行比較。通過這些研究工作，可進(jìn)一步明確復(fù)方制劑中各雜質(zhì)的歸屬，明確各藥物在加速試驗(yàn)條件下及一般貯藏條件下的主要降解產(chǎn)物，為確定貯藏條件及質(zhì)量控制重點(diǎn)建立基礎(chǔ)。4、多種分析方法（幾種色譜方式）、多種檢測手段（包括多種檢測器

17、、多波長），特別是HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)在雜質(zhì)研究和歸屬方面以及色譜峰中有無疊加方面能起重要作用。 25三、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)控制的具體方法 對復(fù)方中雜質(zhì)的充分、全面研究，最終要科學(xué)、合理地體現(xiàn)到質(zhì)量控制中，應(yīng)落實(shí)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，方法建立包括：（一）分離和檢測方法的確定 （二）雜質(zhì)定量方法 （三）方法學(xué)驗(yàn)證 （四）雜質(zhì)限度的確定 26（一）分離和檢測方法的確定 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，今后采用的雜質(zhì)檢測方法主要為：高效液相色譜法。國家局現(xiàn)在的審評標(biāo)準(zhǔn)是有單位采用梯度洗脫檢測的，不再批準(zhǔn)采用等度方法檢測的申請。薄層色譜法。HPLC法不是萬能的，歐洲藥典、美國藥典或者日本藥典如采用薄層色譜法的，不建議更改，并要作充

18、分的對比試驗(yàn)。氣相色譜法。毛細(xì)管電泳法 。27（二）雜質(zhì)定量方法 以HPLC法為例，其他色譜方法也基本相同。與單方制劑的有關(guān)物質(zhì)一樣，一般采用峰面積法，具體定量方法有外標(biāo)法（雜質(zhì)對照品法）、加校正因子的主成分自身對照法、不加校正因子的主成分自身對照法。具體可以按如下層次分步考慮：（1）復(fù)方制劑中的已知毒性雜質(zhì)和易于獲得對照品的雜質(zhì)適于采用雜質(zhì)對照品法。（2）若采用加或不加校正因子的某主成分自身對照法，應(yīng)考察不同色譜柱、色譜條件的一定變化對相對保留時間的波動，一般只有色譜條件耐用并雜質(zhì)個數(shù)較少時，方可適用。（3）采用一個系統(tǒng)適用性溶液或混合雜質(zhì)對照品溶液，外加對照圖譜，標(biāo)明雜質(zhì)位置，然后采用加或不加校正因子的相應(yīng)主成分自身對照法。28（二）雜質(zhì)定量方法 （4）對于未能明確指定歸屬的，同時量又較少的雜質(zhì)，建議與含量較少（或者響應(yīng)較弱）的主成分進(jìn)行對照。（5）藥物含量（或響應(yīng)）和所有雜質(zhì)響應(yīng)均接近時，雜質(zhì)定量可與復(fù)方制劑中藥物峰面積之和的平均值比較。 （6）藥物含量相近、雜質(zhì)響應(yīng)相差較大，或藥物含量相差較大、雜質(zhì)響應(yīng)相差較小，或藥物含量和雜質(zhì)響應(yīng)均相差較大，又沒有建立成上述的質(zhì)控方法時，或無法建