實驗二-中藥顯微鑒定技術(shù)(二)匯編

1、實驗二中藥顯微鑒定技術(shù)（二）【目的要求】掌握常用細(xì)胞壁顯微鑒定技術(shù)掌握常用細(xì)胞內(nèi)含物顯微鑒定方法練習(xí)顯微觀察方法【儀器、試劑、材料】儀器生物顯微鏡，目鏡測微尺，鏡臺測微尺，顯微描繪器，鑷子，解剖針，載玻片，蓋玻片，酒精燈，單面刀片，粉碎機(jī)，繪圖板，鉛筆等。試劑水合氯醛試劑，蘇丹川試液，稀甘油試劑，鹽酸，硝酸，碘化鉍鉀試劑，氯化鋅碘試液，硫酸，a-萘酚濃硫酸試液，碘試液，間苯三酚試液，釘紅試液，硝酸汞試液，乙醚，石油醚，90%乙醇，70%乙醇，a-萘酚乙醇溶液，稀鹽酸，稀醋酸等。藥材樣品牛膝、薄荷、石斛、藥材粉末大黃、肉桂、山藥、黃芪、金銀花、紅花、洋金花、半夏、桔梗、木香、穿心蓮【實驗內(nèi)容】一

2、、用于組織切片及粉末藥材的封藏劑1水合氯醛試液為常用優(yōu)良的化學(xué)透明劑之一，特點是能迅速透入組織，使干燥收縮的細(xì)胞逐漸膨脹復(fù)原，并能溶解大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)含物，如淀粉粒、葉綠體、菊糖、樹脂、蛋白質(zhì)、揮發(fā)油等，使細(xì)胞組織清晰透明，易于觀察。用水合氯醛裝片可觀察各種組織特征，各種結(jié)晶，如草酸鈣結(jié)晶、碳酸鈣結(jié)晶和硅質(zhì)塊，各類細(xì)胞形狀，如導(dǎo)管、纖維、石細(xì)胞、木栓細(xì)胞等。不加熱裝片可觀察菊糖、橙皮苷結(jié)晶等。天冷時，水合氯醛裝片后易析出結(jié)晶，可加一滴稀甘油避免。2稀甘油為物理性透明劑，能較快的透入組織，形成良好的透光條件，一般作臨時封藏劑，常用于觀察胡粉粒和菌絲等。3甘油醋酸（斯氏液）用于觀察淀粉?；驕y量其大小的

3、封藏劑。也可以用乳酸酚溶液代替。乙醇根據(jù)不同目的，選用不同濃度的乙醇裝片。50%以上濃度的乙醇可以固定乳管；80/90濃度的乙醇可以固定和觀察菊糖；95的乙醇可以觀察黏液細(xì)胞；100%乙醇可用于植物葉綠體脫色；低濃度（1030%）乙醇可以代替水軟化含黏液質(zhì)的材料。蒸餾水可以溶解水溶性物質(zhì)，透入組織較快，但不能溶解大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)含物，透明度差，易干燥?？捎糜跈z查淀粉粒的有無或配合其他試劑檢查細(xì)胞壁和細(xì)胞內(nèi)含物的性質(zhì)。二、用于檢查細(xì)胞壁和細(xì)胞內(nèi)含物性質(zhì)的試劑間苯三酚試液常與濃鹽酸配用，檢查木化細(xì)胞壁。加間苯三酚試液12滴，稍放置，再加濃鹽酸1滴，木化細(xì)胞壁因木化程度不同，顯淡紅色、紅色或紫紅色。氯化

4、鋅碘試液檢查纖維素細(xì)胞壁。加氯化鋅碘試液或先加碘試液后，稍放置，用濾紙條吸去多余的碘液，再加66%硫酸溶液，纖維素細(xì)胞壁顯藍(lán)色或紫色。蘇丹川試液檢查角質(zhì)化或栓質(zhì)化細(xì)胞壁，以及脂肪油、揮發(fā)油和樹脂等細(xì)胞內(nèi)含物。加蘇丹川試液，放置15min以上，或微加熱，角質(zhì)化、栓化細(xì)胞壁顯桔紅色至紅色；脂肪油、揮發(fā)油和樹脂顯桔紅色、紅色或紫紅色。碘試液檢查淀粉粒和糊粉粒。力口碘試液，淀粉粒顯藍(lán)色或藍(lán)紫色；糊粉粒顯棕色或黃棕色，后者加硝酸汞試液，顯磚紅色。5a萘酚試液常與濃硫酸配用，檢查菊糖等。6釕紅試液檢查黏液質(zhì)。加釕紅試液，黏液質(zhì)顯紅色。也可用95乙醇裝片，觀察黏液細(xì)胞形狀后，自玻片的一邊引入1滴蒸餾水，可見

5、黏液細(xì)胞逐漸膨脹，黏液質(zhì)溶解而擴(kuò)散。7稀醋酸草酸鈣結(jié)晶加稀醋酸后不溶解。8稀鹽酸加稀鹽酸，草酸鈣結(jié)晶和碳酸鈣結(jié)晶均溶解，而碳酸鈣結(jié)晶溶解并產(chǎn)生氣泡。9?。?0）硫酸加20硫酸，草酸鈣結(jié)晶和碳酸鈣結(jié)晶均溶解，并可產(chǎn)生硫酸鈣針晶，而碳酸鈣結(jié)晶溶解并產(chǎn)生氣泡。硅質(zhì)塊在各種稀酸中均不溶解。三、試驗觀察淀粉粒取半夏粉末水裝片，觀察淀粉粒的類型、形狀，觀察臍點的形狀、位置，層紋的有無。用碘試液檢驗。石細(xì)胞取黃柏粉末少許，制水合氯醛加熱透化片，觀察并描述石細(xì)胞的形狀、顏色，觀察細(xì)胞壁及孔溝的特征。用間苯三酚-濃鹽酸制片，觀察和描述石細(xì)胞壁的木化情況。纖維取肉桂粉末少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述韌皮纖維的

6、分布狀態(tài)、形狀、顏色、細(xì)胞壁的特征，測量細(xì)胞的長度和直徑。用間苯三酚-濃鹽酸制片，觀察和描述細(xì)胞壁的木化情況。木栓細(xì)胞取黃芪粉末少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述木栓細(xì)胞的存在狀態(tài)、切面觀和表面觀的形狀、顏色。用間苯三酚-濃鹽酸試液制片，觀察和描述木栓細(xì)胞的木化情況；用蘇丹川試液制片，觀察和描述木栓細(xì)胞的木栓化情況。草酸鈣針晶取山藥粉末少許，制水合氯醛加熱透化片，觀察并描述草酸鈣晶體的類型、存在狀態(tài)。碳酸鈣晶體（鐘乳體）取穿心蓮粉末少許，制水合氯醛加熱透化片，觀察并描述碳酸鈣晶體的分布狀態(tài)、形狀、顏色。在制片邊緣滴加少許鹽酸，觀察鐘乳體的變化和產(chǎn)生的現(xiàn)象。草酸鈣晶體取大黃粉末少許，制水合氯醛加

7、熱透化片，觀察并描述草酸鈣晶體的形態(tài)、大小、顏色。加20硫酸檢查。硅質(zhì)塊晶體取石斛粉末或藥材縱切，制水合氯醛加熱透化。觀察并描述硅質(zhì)塊形狀、大小、顏色。加稀酸檢查。菊糖取木香或桔梗粉末少許，用水或水合氯醛制片（不透化），觀察并描述菊糖的分布狀態(tài)、形狀、顏色，表面特征。加a-萘酚試液與濃硫酸檢查。非腺毛分別取石韋、金銀花、艾葉粉末或藥材碎片少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述非腺毛的分布狀態(tài)、類型、形狀、顏色、表面特征、細(xì)胞的數(shù)目和組成情況。腺毛分別取金銀花、洋金花等粉末少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述腺毛的分布狀態(tài)、形狀、顏色、表面特征、腺頭和腺柄細(xì)胞的數(shù)目和組成情況。腺鱗取薄荷粉末或藥材碎片

8、少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述腺鱗的分布狀態(tài)、形狀、顏色、表面特征、腺頭和腺柄細(xì)胞的數(shù)目和組成情況，測量腺毛頭部柄部的直徑?；ǚ哿７謩e取洋金花、紅花等粉末，水合氯醛透化，觀察并描述花粉粒的形狀、顏色、表面特征等。【作業(yè)】熟記常用顯微鑒定試劑的性質(zhì)和應(yīng)用方法。記錄實驗觀察內(nèi)容和檢查結(jié)果。學(xué)習(xí)-好資料實驗三中藥品質(zhì)常規(guī)檢測技術(shù)【目的要求】掌握中藥水分測定法掌握中藥灰分測定法熟悉中藥浸出物測定方法熟悉中藥揮發(fā)油測定方法【儀器、試劑、材料】儀器水分測定儀，坩堝、馬福爐、揮發(fā)油測定儀，粉碎機(jī)，電熱套、玻璃冷凝器、硬質(zhì)圓底燒瓶、干燥器、電子天平、扁型稱量瓶、二號篩、錐形瓶、沸石或玻璃珠等。試劑甲苯、蒸

9、餾水、乙醇、五氧化二磷干燥劑、稀鹽酸、乙醚。藥材樣品牛膝、薄荷、石斛、藥材粉末大黃、肉桂、山藥、黃芪、金銀花、紅花、洋金花、半夏、桔梗、木香、穿心蓮【實驗內(nèi)容】一、中藥品質(zhì)常規(guī)檢測技術(shù)介紹1水分測定法測定用的供試品，一般先破碎成直徑不超過3mm勺顆?；蛩槠恢睆胶烷L度在3mm以下的可不破碎；減壓干燥法需通過二號篩。第一法（烘干法）本法適用干不含或少含揮發(fā)性成分的藥品。測定法取供試品25g,平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm疏松供試品不超過10mm,精密稱定。打開瓶蓋在100105C干燥5h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30min,精密稱定，再在上述溫度干燥1h.冷卻，稱重，至連

10、續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計算供試品中含水量）。第二法（甲苯法）本法適用于含揮發(fā)性成分的藥品。儀器裝置，如圖。A為500ml的短頸圓底燒瓶；B為水分測定管；C為直形冷凝管，夕卜管長40cm。使用前，全部儀器應(yīng)清潔。并置烘箱中烘干。測定法取供試品適量約相當(dāng)于含水量I4ml，精密稱定，置A瓶中，加甲苯約200ml，必要時加入干燥、潔凈的沸石或玻璃珠數(shù)粒。將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加人甲苯，至充滿B管的狹細(xì)部分。將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱，待甲苯開始沸騰時，調(diào)節(jié)溫度。使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測定管刻度部分的水量不再增加時。將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗

11、。再用飽蘸甲苯的長刷或其他適宜的方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離可加亞甲藍(lán)粉末少量，使水染成藍(lán)色。以便分離觀察。檢讀水量，并計算供試品中的含水量。附注用化學(xué)純甲苯直接測定，必要時甲苯可先加水少量、充分振搖后放置。將水層分離棄去，經(jīng)蒸餾后使用。第三法(減壓干燥法)本法適用于含有揮發(fā)性成分的貴重藥品。減壓干燥器取直徑12cm左右的培養(yǎng)皿，加人五氧化二磷干燥劑適量，使鋪成0.5Icm的厚度，放人直徑30cm的減壓干燥器中。測定法取供試品24g,混合均勻，分取約0.51g,置已在供試品同樣條件

12、下干燥并稱重的稱量瓶中，精密稱定，打開瓶蓋，放入上述減壓干燥器中，減壓至2.67kPa(20mmHg)以下持續(xù)半小時，室溫放置24小時。在減壓干燥器出口連接無水氧化鈣干燥管，打開活塞，待內(nèi)外壓一致，關(guān)閉活塞，打開干燥器，蓋上瓶蓋，取出稱量瓶迅速精密稱定重量，計算供試品中的含水量(%)。五氧化二磷和無水氧化鈣為干燥劑，干燥劑應(yīng)保持有效狀態(tài)。第四法(氣相色潛法)詳見中國藥典2005年版附錄區(qū)Ho灰分測定(1)總灰分測定法測定用的供試品須粉碎，使能通過二號篩，混合均勻后，取供試品23g(如須測定酸不溶性灰分，可取供試品35g)，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g),緩緩熾熱，注意避免燃

13、燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500600C，使完全灰化并至恒重；根據(jù)殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量(%)。如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸銨溶液2ml，使殘渣濕潤、然后置水浴上蒸干，殘渣照前法熾灼，至坩堝內(nèi)容物完全灰化。(2)酸不溶性灰分測定法取上項所得的灰分，在坩堝中小心加人稀鹽酸約l0ml，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10min，表面皿用熱水5ml沖洗、洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內(nèi)的殘渣用水洗于濾紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移置同一坩堝中、干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中酸不溶性灰分的含量(%)。浸出物含量測定(1)水

14、溶性浸出物測定法測定用的供試品需粉碎，使能通過二號篩，并混合均勻。冷浸法取供試品約4g,精密稱定，置250300m的錐形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6小時內(nèi)時時振搖，再靜置18小時，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續(xù)濾液20ml,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105C干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，除另有規(guī)定外、以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。熱浸法取供試品約24g,精密稱定，置100250ml的錐形瓶中，精密加水50100ml,密塞，稱定重量，靜置1小時后，連接回流冷凝管。加熱至沸騰、并保持微沸1小時。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定

15、重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105C干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。除另有規(guī)定外，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。(2)醇溶性浸出物測定法照水溶性浸出物測定法測定。除另有規(guī)定外。以各品種項下規(guī)定濃度的乙醇代替水為溶劑。(3)揮發(fā)性醚浸出物測定法取供試品(過四號篩)25g，精密稱定，置五氧化二磷干燥器中干燥12小時。置索氏提取器中，加乙醚適量，除另有規(guī)定外，加熱回流8小時，取乙醚液，置干燥至學(xué)習(xí)-好資料恒重的蒸發(fā)皿中，放置，揮去乙醚，殘渣置五氧化二磷干燥器中干燥18小時，精密

16、稱定，緩緩加熱至姆105C，并于105C干燥至恒熏。其減失重量即為揮發(fā)性醚浸出物的重量。揮發(fā)油測定測定用的供試品。除另有規(guī)定外，須粉碎使能通過二號至三號篩，井混合均勻。儀器裝置如圖。A為1000ml（或500m1,2000ml）的硬質(zhì)圓底燒瓶。上接揮發(fā)油測定器B,B的上端連接回流冷凝管C,以上各部均用玻璃磨口連接，測定器B應(yīng)具有0.1ml的刻度。全部儀器應(yīng)充分洗凈，并檢查接合部分是否嚴(yán)密、以防揮發(fā)油逸出。注：裝置中揮發(fā)油測定器的支管分岔處應(yīng)與基準(zhǔn)線平行。測定法甲法適用于測定相時密度在1.0以下的揮發(fā)油。取供試品適量（約相當(dāng)于含揮發(fā)油0.51.0ml），稱定重量（準(zhǔn)確至0.01g），置燒瓶中，加

17、水300-500ml（或適量）與玻璃珠數(shù)粒，振搖混合后，連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，并溢流人燒瓶時為止。置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸。并保持微沸約5小時，至測定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5mm處為止。放置1小時以上，再開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量、并計算供試品中揮發(fā)油的含量（）。乙法適用于測定相對密度在1以上的揮發(fā)油，取水約300ml與玻璃珠數(shù)粒，置燒瓶中，連接揮發(fā)油測定器。自測定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時為止，再用移液管

18、加人二甲苯1ml,然后連接回流冷凝管。將燒瓶內(nèi)容物加熱至沸騰，并繼續(xù)蒸餾，其速度以保持冷凝管的中部呈冷卻狀態(tài)為度。30分鐘后，停止加熱，放置15分鐘以上，讀取二甲苯的容積。然后照甲法自“取供試品適量”起，依法測定，自油層量中減去二甲苯量，即為揮發(fā)油量，再計算供試品中揮發(fā)油的含量（%）。二、丁香水分測定選擇哪種水分測定法適宜丁香的水分測定設(shè)計實驗流程與步驟準(zhǔn)備實驗儀器，安裝水分測試裝置稱量丁香樣品30g，按實驗步驟進(jìn)行水分測定計算丁香樣品含水量，判斷含水量是否合格。（照水分測定法（附錄區(qū)H第二法）測定，不得過12.0%）6寫出實驗報告。三、大黃灰分測定選擇哪種灰分測定法適宜大黃的灰分測定，是否要測定酸不溶性灰分。設(shè)計實驗流程與步驟準(zhǔn)備實驗儀器，安裝灰分測試裝