腦膠質(zhì)瘤中脆性組氨酸三聯(lián)體和PTEN的表達(dá)

1、腦膠質(zhì)瘤中脆性組氨酸三聯(lián)體和PTEN的表達(dá) 作者：王東林，解晶心，施公勝，鄂群【摘要】 目的 檢測抑癌基因脆性組氨酸三聯(lián)體（FHIT）、PTEN在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)，并探討其與腫瘤惡性程度的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法，檢測80例膠質(zhì)瘤、5例正常腦組織中的FHIT、PTEN蛋白的表達(dá)。結(jié)果 FHIT主要定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，PTEN主要定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核，總陽性率分別為47.5%(38/80)、55.0%( 44/80)；FHIT和PTEN在正常腦組織中表達(dá)率均為80%(4/5)，兩者在正常腦組織和不同級(jí)別膠質(zhì)瘤之間的表達(dá)均有差異(P0.05)，且隨膠質(zhì)瘤惡性程度的增加而減弱。結(jié)論 F

2、HIT和PTEN在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)減少或缺失，兩者協(xié)同作用促進(jìn)膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展。 【關(guān)鍵詞】 膠質(zhì)瘤；脆性組氨酸三聯(lián)體（FHIT）；PTEN FHIT(Fragile histidine triad)基因1又稱脆性組氨酸三聯(lián)體，是Ohta等1996年從上皮癌細(xì)胞系中克隆出的一個(gè)候選抑癌基因，它定位于染色體3p14.2，含有編碼組氨酸三聯(lián)體的功能區(qū)域，在人類多種腫瘤組織中該基因均呈現(xiàn)表達(dá)下降2。關(guān)于腦膠質(zhì)瘤中FHIT基因表達(dá)的研究目前國內(nèi)尚無報(bào)道，因此本研究采用免疫組織化學(xué)SP法，檢測80例膠質(zhì)瘤、5例正常腦組織的FHIT的表達(dá)，并與另一種抑癌基因PTEN的表達(dá)作對照分析，旨在了解抑癌基因與膠質(zhì)

3、瘤發(fā)生發(fā)展及惡性程度的關(guān)系,為臨床診治膠質(zhì)瘤提供理論依據(jù)。 1 材料與方法 1.1 材料 收集南通大學(xué)附屬醫(yī)院病理科20032005年間膠質(zhì)瘤存檔蠟塊80例，其中男 45 例，女35 例，年齡1478歲，平均年齡47.1歲。按WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤2000年分類標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)，級(jí)35 例，級(jí)30 例，級(jí)15 例，另取5例非正常死亡的人腦組織蠟塊作為正常對照組。 1.2 主要試劑 兔抗人FHIT多克隆抗體購自Zymed公司（ZA0510），小鼠抗人PTEN單克隆抗體購自Santa Cruz公司（ZM0521 SP），免疫組化試劑盒（SP9000）、 DAB顯色試劑盒（ZLI1039）購自北京中山公司。

4、 1.3 實(shí)驗(yàn)方法 常規(guī)脫蠟水化，組織抗原微波修復(fù)，10%山羊血清封閉。FHIT 和PTEN抗體的工作濃度均為1100，免疫組化染色SP法按說明書操作步驟進(jìn)行，DABH2O2顯微鏡控制下顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，常規(guī)脫水中性樹膠封片，每一抗體分別設(shè)陽性、陰性對照。 1.4 免疫組化結(jié)果判斷 FHIT以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕色染色為陽性，PTEN以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色染色為陽性，參考Gatalica的Hscore(H=IP)系統(tǒng)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行半定量判定：染色強(qiáng)度(I)依次為0(無色)，1(淡黃色)，2(棕黃色)，3(棕褐色)；染色范圍(P)根據(jù)陽性細(xì)胞的百分比：未見染色為0，染色細(xì)胞少于25為1，2550%為2

5、，大于50為3。將這兩方面得分相乘即為該病例的染色結(jié)果。在未知病理診斷的條件下，在高倍鏡下分別觀察10個(gè)視野平均而得。得分02分判為陰性（-），34分判為弱陽性()，5分判為強(qiáng)陽性()。 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用State7.0軟件對相關(guān)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。率的比較用2檢驗(yàn)，兩等級(jí)資料之間的相關(guān)分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)。 2 結(jié)果 2.1 膠質(zhì)瘤中FHIT與PTEN蛋白的表達(dá) FHIT蛋白定位于膠質(zhì)細(xì)胞的胞質(zhì)，彌漫顆粒狀著色為主，彌漫性星形細(xì)胞瘤（級(jí)）為深棕色（見圖1），多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（級(jí)）為淺黃色（見圖2），正常腦組織膠質(zhì)細(xì)胞胞漿棕黃色著色。PTEN定位于細(xì)胞核，棕黃色顆粒

6、狀，陽性細(xì)胞呈彌漫分布（見圖3）或散在分布（見圖4），正常腦組織膠質(zhì)細(xì)胞核棕黃色著色。在80例膠質(zhì)瘤中FHIT蛋白陽性表達(dá)率為47.5(38/80)，PTEN蛋白陽性表達(dá)率為55.0%(44/80)。膠質(zhì)瘤組織與正常腦組織FHIT與PTEN蛋白的表達(dá)差異有顯著性（P0.01）。 2.2 FHIT和PTEN表達(dá)與膠質(zhì)瘤WHO分級(jí)的關(guān)系 在不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤中，F(xiàn)HIT的表達(dá)有差別(2=17.00，P=0.0002,kwallis法)，其中級(jí)與級(jí)(2=18.88,P=0.000)，級(jí)與級(jí)(2=11.36,P=0.003)之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而級(jí)與級(jí)之間(2=0.1147,P=0.944)差異無統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義。做spearman相關(guān)分析(-0.4620，P=0.000)，提示FHIT表達(dá)與膠質(zhì)瘤WHO分級(jí)呈負(fù)相關(guān)。PTEN的表達(dá)也有差別(2=25.17，P=0.000，kwallis法)，其中級(jí)與級(jí)(2=26.75, P=0.000)，級(jí)與級(jí)(2=16.35,P=0.000)之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而級(jí)與級(jí)之間(2=0.2250, P=0.894)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。做spearman相關(guān)分析(-0.5456，P=0.000)，提示PTEN表達(dá)與膠質(zhì)瘤WHO分級(jí)呈負(fù)相關(guān)。FHIT和PTEN在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)結(jié)果相比較可知兩者表達(dá)具有相關(guān)性(rS=0.5430,P0.01），提示兩種蛋白表達(dá)呈正相

8、關(guān),詳見表1。表1 FHIT、PTEN表達(dá)與膠質(zhì)瘤WHO分級(jí)的關(guān)系 2.3 FHIT和PTEN在膠質(zhì)瘤中的分布 FHIT和PTEN在膠質(zhì)瘤中的分布：同時(shí)陰性組：2=9.33，P=0.007；一種蛋白表達(dá)組（FHIT陽性或PTEN陽性）：2=2.31，P=0.315；兩種蛋白同時(shí)表達(dá)組（FHIT陽性和PTEN陽性）：2=14.00，P=0.001(詳見表2)，提示FHIT和PTEN在膠質(zhì)瘤中的分布狀況與膠質(zhì)瘤的WHO分級(jí)有關(guān)，高級(jí)別（、）組兩種抑癌基因多同時(shí)為陰性，低級(jí)別組（）兩種抑癌基因多同時(shí)為陽性。表2 FHIT和PTEN蛋白在膠質(zhì)瘤中的分布 3 討論 膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展與癌基因的激活和抑癌基因的失活有關(guān)，其中抑癌基因的失活發(fā)揮了重要作用。FHIT基因含染色體脆性部位FRA3B，是第一個(gè)將脆性位點(diǎn)與腫瘤聯(lián)系的抑癌基因。Geradts等3對99例NSCLC(非小細(xì)胞肺癌)的切片進(jìn)行免疫組化研究發(fā)現(xiàn)，53的病例FHIT表達(dá)缺失， 并認(rèn)為表達(dá)的缺失與FHIT位點(diǎn)發(fā)生的雜合性缺失（LOH）有關(guān)，F(xiàn)HIT表達(dá)缺失與p53、RB及p16的表達(dá)異常一樣頻繁發(fā)生。Ishii H 等4研究了1948例FHIT基因在原發(fā)腫瘤組織中的表