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1、名稱作用基本工程微專題突破一、與核酸有關(guān)的各種酶的比較參與生理過程應(yīng)用作用位點(diǎn)(如下圖)DNA連接酶連接兩個(gè)DNA片段基因工程a限制性核切割某種特定的脫氧酸內(nèi)切酶核苷酸序列aDNA聚合酶RNA聚合酶解旋酶在脫氧核苷酸鏈上添加單個(gè)脫氧核苷酸在核糖核苷酸鏈上添加單個(gè)核糖核苷酸使堿基間氫鍵斷裂形成單個(gè)脫氧核苷酸鏈DNA復(fù)制a轉(zhuǎn)錄及RNA復(fù)制DNA復(fù)制及轉(zhuǎn)錄b以RNA為模板合成逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄、基因工程aDNA1在DNA連接酶的催化下形成的化學(xué)鍵和位置分別是()A氫鍵堿基與脫氧核糖之間B氫鍵堿基與堿基之間C磷酸二酯鍵磷酸與脫氧核糖之間D磷酸二酯鍵脫氧核糖與堿基之間【解析】本題考查DNA連接酶的作用。DN
2、A連接酶的作用只是催化DNA片段的“縫合”,能恢復(fù)被限制酶切開了的兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵,不能催化氫鍵形成?!敬鸢浮緾2下列黏性末端屬于同種限制性核酸內(nèi)切酶切割而成的是()ABCD【解析】同種限制酶切割形成的黏性末端堿基能互補(bǔ)配對?!敬鸢浮緽3下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化,圖中依次表示限制性核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是()ACBD【解析】將DNA分子切割成含有黏性末端的兩個(gè)DNA片段的是限制性核酸內(nèi)切酶,即;DNA聚合酶則可以催化DNA單鏈的合成,即;DNA連接酶可以連接具有相同黏性末端或平口末端的兩個(gè)DNA片段,即;解旋酶催化DNA雙
3、螺旋氫鍵的斷裂,使DNA分子解旋,即?!敬鸢浮緾二、DNA復(fù)制、PCR技術(shù)和DNA重組技術(shù)的比較場所酶載體遵循原則結(jié)果DNA復(fù)制細(xì)胞核解旋酶、DNA聚合酶不需要堿基互補(bǔ)配對DNA分子PCR技術(shù)生物體外DNA聚合酶不需要堿基互補(bǔ)配對DNA分子片段DNA重組技術(shù)生物體外限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶需要堿基互補(bǔ)配對DNA分子4下列有關(guān)PCR技術(shù)的說法,不正確的是()APCR是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的DNA片段的核酸合成技術(shù)BPCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制C利用PCR技術(shù)獲取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列DPCR擴(kuò)增中必須有解旋酶才能解開雙鏈DNA【解析】PCR是利用DNA雙鏈復(fù)
4、制的原理,將基因的核苷酸序列不斷地加以復(fù)制,使其數(shù)量呈指數(shù)方式增加。利用PCR技術(shù)獲取目的基因的前提是要有一段已知的目的基因的核苷酸序列,以便根據(jù)這一序列合成引物。擴(kuò)增的過程是目的基因DNA受熱變性后解旋為單鏈,引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合,然后在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸,如此重復(fù)循環(huán)多次。【答案】D5以下為形成cDNA過程和PCR擴(kuò)增過程示意圖。據(jù)圖分析,下列說法正確的是()A催化過程的酶是RNA聚合酶B過程發(fā)生的變化是引物與單鏈DNA結(jié)合C催化過程的酶都是DNA聚合酶,都能耐高溫D如果RNA單鏈中A與U之和占該鏈堿基含量的40%,則一個(gè)雙鏈DNA中,A與U之和也占該DNA堿基含量的40%【
5、解析】據(jù)圖分析可知,過程分別表示反轉(zhuǎn)錄、DNA的復(fù)制、變性、復(fù)性和延伸。過程由反轉(zhuǎn)錄酶催化完成;過程表示當(dāng)溫度降至5560時(shí),引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上。過程表示DNA的復(fù)制,需在常溫條件下完成;過程在表示Taq酶催化作用下從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成,需在7075的高溫條件下進(jìn)行,但催化過程的酶都是DNA聚合酶;在DNA分子中有T無U?!敬鸢浮緽6請回答基因工程方面的有關(guān)問題。(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似(如下圖所示)。圖中引物為單鏈DNA片段,它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。從理論上推測,第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為_。在第_輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)
6、兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。(2)設(shè)計(jì)引物是PCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物(只標(biāo)注了部分堿基序列)都不合理(如下圖),請分別說明理由。第1組:_;第2組:_。(3)PCR反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶,下面的表達(dá)式不能正確反映DNA聚合酶的功能,這是因?yàn)開。(4)用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRV、Mbo單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒,得到的DNA片段長度如下圖(1kb即1000個(gè)堿基對),請畫出質(zhì)粒上EcoRV、Mbo的切割位點(diǎn)?!窘馕觥?1)依據(jù)圖解特點(diǎn),第四輪循環(huán)產(chǎn)物中可以得到16個(gè)DNA分子,其中有14個(gè)含引物A、B的DNA分子,一個(gè)只含有引物B的DNA分子和一個(gè)只含引物A的
7、DNA分子。從圖解原DNA與引物A、B的比例關(guān)系分析,經(jīng)三次復(fù)制后開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。(2)比較第1組引物的堿基順序,可以發(fā)現(xiàn)引物與引物有兩對堿基能發(fā)生互補(bǔ)配對,形成局部雙鏈結(jié)構(gòu)而失效;而第2組引物中,引物折疊后會發(fā)生堿基互補(bǔ)配對而導(dǎo)致失效。(3)在PCR反應(yīng)體系中,引物首先與模板DNA單鏈互補(bǔ)配對形成局部雙鏈DNA片段,然后在DNA聚合酶的作用下將單個(gè)脫氧核苷酸依次連接到引物鏈上。(4)分析本小題中圖解可知,用EcoRV切割質(zhì)粒只得到長度為14kb的一個(gè)片段,說明該酶在質(zhì)粒上只有1個(gè)切點(diǎn);同理可以推測Mbo在質(zhì)粒上有2個(gè)切點(diǎn);由圖中可以看出同時(shí)用兩種限制性核酸內(nèi)切酶切割時(shí)得到了3個(gè)片段,由此可以推測限制性核酸內(nèi)切酶EcoRV的切點(diǎn)在5.5kb和
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