DB15T 2602-2022苜蓿中咪草煙殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法

1、ICS65.020.01CCSB 2515內(nèi) 蒙 古 自 治 區(qū) 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB15/T 26022022苜蓿中咪草煙殘留量的測(cè)定高效液相色譜法Determination ofImazethapyr residue in alfalfa-Highperformance liquidchromatography2022-06-24 發(fā)布2022-07-24 實(shí)施內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā) 布DB15/T 26022022DB15/T 26022022目次 HYPERLINK l _bookmark0 前言II HYPERLINK l _bookmark1 范圍1 HYPERLINK l _

2、bookmark2 規(guī)范性引用文件1 HYPERLINK l _bookmark3 術(shù)語(yǔ)和定義1 HYPERLINK l _bookmark4 原理1 HYPERLINK l _bookmark5 試劑和材料1 HYPERLINK l _bookmark6 儀器和設(shè)備2 HYPERLINK l _bookmark7 試樣制備2 HYPERLINK l _bookmark8 測(cè)定步驟2 HYPERLINK l _bookmark9 結(jié)果計(jì)算和表示3 HYPERLINK l _bookmark10 精密度4 HYPERLINK l _bookmark11 附錄 A（資料性） 高效液相色譜法測(cè)定咪草

3、煙標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜法5I前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC 19）歸口。本文件起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所、內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全中心、內(nèi)蒙古自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院、太仆寺旗現(xiàn)代農(nóng)牧業(yè)綜合服務(wù)中心。本文件主要起草人：吳洪新、王文曦、云穎、盈盈、付慧、黃奕穎、楊紅東、姚繼紅、王冠、云巖春、張慧澤、劉洪林、衛(wèi)媛、李薇、李潤(rùn)航、降曉偉、李坤娜、張燕東、劉宇寧、湖日爾、劉江英、趙志惠。II苜蓿中咪草煙殘留量的測(cè)定高效液相色譜法范圍本文件規(guī)定了高效液相色譜法測(cè)定苜蓿中咪草

4、煙殘留量的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、試樣制備、測(cè)定步驟、結(jié)果計(jì)算和表示、精密度。本文件適用于苜蓿中咪草煙殘留量的測(cè)定。本文件的檢出限為0.025 mg/kg。本文件的定量限為0.10 mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件， 僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 14699.1 飼料采樣GB/T 20195 動(dòng)物飼料試樣的制備3 術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4 原 理試樣中咪草煙殘留物樣品經(jīng)過(guò)甲醇和碳酸鈉提取液提取、離心、萃取、旋蒸，用

5、離子交換型（SCX）固相萃取小柱凈化，甲醇和氨水洗脫，用高效液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。5 試劑和材料乙腈（CH3CN）：色譜純。甲醇（CH3OH）：色譜純。磷酸（H3PO4）：優(yōu)級(jí)純。二氯甲烷（CH2Cl2）。冰乙酸（CH3COOH）：優(yōu)級(jí)純。氨水（NH4OH）。無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4）：優(yōu)級(jí)純。碳酸鈉（Na2CO3）：優(yōu)級(jí)純。碳酸鈉溶液（0.1mol/L）：稱(chēng)取 10.6 g 碳酸鈉，用水溶解，定容至 1 L 容量瓶中。1GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 甲醇-碳酸鈉溶液（1+1，v/v）：量取 100 mL 甲醇，加入 100 mL 碳酸鈉溶液（5.9），混勻。 磷酸溶

6、液（1+9，v/v）：量取 10 mL 磷酸，用水稀釋定容至 100 mL。 氨水-甲醇（1+9，v/v）：量取 10 mL 氨水，加入 90 mL 甲醇，混勻。 水+甲醇（1+9，v/v）：量取 10 mL 水，加入 90 mL 甲醇，混勻。 乙酸溶液（5+95，v/v）：量取 5 mL 冰乙酸，用水稀釋定容至 100 mL。 標(biāo)準(zhǔn)品：咪草煙（C15H19N3O3）：純度不小于 95%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.00 mg/mL)：準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的咪草煙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇溶解并配制成(1.00 mg/mL)的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于-18 冰箱內(nèi)，可使用 6 個(gè)月。

7、標(biāo)準(zhǔn)使用液：準(zhǔn)確吸取 0.10 mL 咪草煙的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(5.16)至 10 mL 容量瓶?jī)?nèi)，用甲醇稀釋定容至刻度，配制成 10.0 g/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于-18 冰箱內(nèi)避光保存，可使用 1 個(gè)月。 標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別吸取濃度為 10.0 g/mL 咪草煙標(biāo)準(zhǔn)液 0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL 于 10.00 mL 容量瓶，用水+甲醇(5.13)定容至刻度，該標(biāo)準(zhǔn)系列咪草煙濃度分別為0.25 g/mL、0.50 g/mL、1.00 g/mL、1.50 g/mL、2.00 g/mL。 固相萃取柱：SCX，60 mg/3mL。微孔過(guò)濾膜（尼龍）：

8、13 mm0.22 m。注：除非另有規(guī)定，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和GB/T 6682所規(guī)定的一級(jí)水。6 儀器和設(shè)備高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器（或二極管陣列檢測(cè)器）。電子天平：感量 0.01 mg 和 0.01 g。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速大于等于 4000 r/min。超聲波水浴。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。渦旋混合器。氮吹儀。組織粉碎機(jī)。樣品篩：篩孔尺寸 1.0 mm。7 試樣制備按照GB/T 14699.1中有關(guān)規(guī)定采集樣品，去雜質(zhì)后充分混勻，按照GB/T 20195制備試樣，利用四分法取樣后，充分研磨，過(guò)1.0 mm篩，新鮮樣品利用四分法取樣后，充分破碎作為分析樣品備用，將處理好的試樣放置-18冰箱保

9、存。8 測(cè)定步驟提取準(zhǔn)確稱(chēng)取苜蓿新鮮樣品5 g（精確至0.01g）或草粉2 g（精確至0.01g）于50 mL的塑料離心管中， 加入30 mL的甲醇-碳酸鈉溶液（5.10），混勻，超聲提取30 min，用磷酸溶液（5.11）調(diào)至pH=2.5，于4000 r/min離心10 min，收集上清液于分液漏斗中，用50 mL二氯甲烷（5.4）萃取兩次（25 mL+25 mL），2有機(jī)相加適量無(wú)水硫酸鈉（5.7）除水后收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，于45 減壓蒸至近干，加適量甲醇（5.2）溶解。凈化強(qiáng)陽(yáng)離子交換固相萃取柱SCX（5.19）凈化，用1 mL水、1 mL甲醇（5.2）活化固相萃取柱，試樣全部過(guò)柱，用1

10、 mL水、1 mL甲醇（5.2）淋洗固相萃取柱，再用6 mL氨水-甲醇（5.12）洗脫，收集流出液于10 mL比色管中，整個(gè)固相萃取過(guò)程流速不超過(guò)1 mL/min 。洗脫液于50 條件下氮吹至近干，用2.00 mL水-甲醇（5.13）溶解、渦旋混勻，過(guò)0.22 m微孔過(guò)濾膜（5.20），待測(cè)。測(cè)定相液色譜測(cè)定參考條件液相色譜法測(cè)定參考條件如下：色譜柱：C18 型柱，長(zhǎng) 150 mm，內(nèi)徑 3.9 mm，粒徑 5 m，或等效的色譜柱；b) 流動(dòng)相：A:乙酸（5.14）+B:乙腈（5.1）= 60+40（v/v）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10.00 L；e) 柱溫：40 ；f) 檢測(cè)波

11、長(zhǎng)：258 nm。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作按照8.3.1測(cè)定條件，將標(biāo)準(zhǔn)工作液（5.18）注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)試。測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液（5.18）的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。8.3.3 試樣溶液的測(cè)定按照8.3.1測(cè)定條件，將待測(cè)樣品溶液注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)試。待測(cè)樣品溶液中目標(biāo)物質(zhì)的響應(yīng)值應(yīng)在儀器線性范圍內(nèi)，否則應(yīng)適當(dāng)稀釋。標(biāo)準(zhǔn)工作液與待測(cè)樣品溶液等體積進(jìn)樣。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰的保留時(shí)間和峰面積，對(duì)試樣溶液的色譜峰根據(jù)保留時(shí)間進(jìn)行定性，外標(biāo)法定量。咪草煙標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)附錄A中圖A.1。平行實(shí)驗(yàn)按上述步驟，對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。 空白實(shí)驗(yàn)除不稱(chēng)取試樣外，均按上述分析步驟進(jìn)行。9 結(jié)果計(jì)算和表示試樣中咪草煙含量X按式（1）計(jì)算：X= （C-C0）V(1)m式中：X 試樣中咪草煙的含量，mg/kg；3C 待測(cè)液中咪草煙的濃度，g/mL； C0試劑空白；V 試樣溶液定容體積，mL； m 試樣的稱(chēng)樣量，g。注：測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)