表面微生物測試操作規(guī)程

1、表面微生物測試操作規(guī)程ZLSO版面微生物測試操作規(guī)程執(zhí)行日期起草審核批準(zhǔn)部門質(zhì)控部質(zhì)控部質(zhì)保部質(zhì)量技術(shù)副總姓名張淑萍周里欣李海軍章運典簽名日期分發(fā)部門質(zhì)量控制部1目的：建立潔凈室（區(qū)）表面微生物測試操作規(guī)程，確定潔凈區(qū)中物體（包括工作服）表面微生物污染的程度以及潔凈區(qū)的消毒效果。2適用范圍：適用于公司潔凈室（區(qū)）、無菌室和凈化工作臺的表面，潔凈室（區(qū)）設(shè)備表面，進入潔凈室區(qū)人員表面。日常動態(tài)檢測和空氣凈化系統(tǒng)確認時的檢測。3責(zé)任者：質(zhì)量控制部、質(zhì)量保證部、化驗員、負責(zé)潔凈區(qū)潔凈度動態(tài)測試的質(zhì)監(jiān)員。內(nèi)容1測試方法：接觸平皿法、棉簽擦拭法、表面沖洗法。測試方法必須考慮取樣的準(zhǔn)確性和代表性，可以從定

2、性和定量來選擇。接觸平皿法：只適用于規(guī)則物體的表面。棉簽擦拭法：適用于平皿接觸法不適用的設(shè)備和不規(guī)則表面的取樣。棉質(zhì)和滌綸棉簽可以浸入到肉湯培養(yǎng)基內(nèi)得到定性結(jié)果。表面沖洗法：當(dāng)需要確定設(shè)備表面的生物載荷時，或面積較大時。用無菌水來沖洗內(nèi)表面，然后收集、膜過濾后得到定量結(jié)果。2儀器、用具與培養(yǎng)基：儀器：電熱恒溫干燥箱、壓力蒸汽滅菌器、藥物天平、冰箱。用具：培養(yǎng)皿（655mmx18mm的培養(yǎng)皿）培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）。3操作前準(zhǔn)備及要求培養(yǎng)基平皿的制備培養(yǎng)皿的清洗與滅菌：取培養(yǎng)皿，用飲用水清洗，涼干后浸入清潔液中，浸泡12小時以上，用飲用水沖洗干凈，再用純化水沖洗三遍，置鐵筒等密閉

3、容器內(nèi)，121c濕熱滅菌20分鐘，備用。培養(yǎng)基的制備：稱取大豆酪蛋白瓊脂40g,置2000ml燒杯中，加水1000m1,置電熱爐上，加熱煮沸使溶解，濾過，分裝于500ml三角瓶中，用棉塞把瓶口塞好，包扎牛皮紙，在121c濕熱滅菌15分鐘，備用。培養(yǎng)基平皿的制備：將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45c時，在無菌操作下取培養(yǎng)基約10ml,注入無菌培養(yǎng)皿中，加蓋后室溫放至凝固，制備后培養(yǎng)基平皿在2c8c存放。使用前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)皿及培養(yǎng)基有變質(zhì)、破損或污染的不能使用，存放時間不得超過一周。表面微生物檢測人員穿戴與生產(chǎn)區(qū)空氣潔凈度級別相適應(yīng)的工作服，按照微生物檢查實驗室管理規(guī)程進入潔凈室（

4、區(qū)），外面的衣服不能帶進潔凈區(qū)，盛裝培養(yǎng)皿的容器從物流通道或傳遞窗進入潔凈區(qū)。4測試狀態(tài)：潔凈室（區(qū)）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)，設(shè)備在指定的方式下運行，并且有指定的人員按照規(guī)范操作。潔凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度：溫度應(yīng)控制在1826C,相對濕度控制在45%65%之間。壓差：潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間，不同級別潔凈區(qū)之間的壓差應(yīng)當(dāng)不低于10帕斯卡，產(chǎn)塵量大的操作間對相鄰房間應(yīng)保持相對負壓。5取樣取樣點數(shù)目及其布局應(yīng)根據(jù)以下幾個方面設(shè)置：空調(diào)系統(tǒng)初始確認的結(jié)果；房間（或區(qū)域）的大小和布局；房間（或區(qū)域）的用途；與暴露產(chǎn)品的距離，人流物流方向等。對于同一潔凈區(qū)或區(qū)域，每個相同取樣物體應(yīng)采1個樣。取樣方法及步驟培

5、養(yǎng)基平皿進入潔凈室培養(yǎng)基平皿隨檢測人員進入一更后緩沖間，檢測人員換潔凈工作鞋、洗手消毒后，用蘸有75%乙醇溶液的絲光毛巾擦拭盛放培養(yǎng)基平皿的鐵桶外表面，進入二更室，檢測人員按照相應(yīng)更衣程序更衣后，進入二更后緩沖問，手消毒后，再用蘸有75%乙醇溶液的絲光毛巾擦拭盛放培養(yǎng)基平皿的鐵桶外表面，烘干，即可進入C、D級潔凈區(qū)使用；培養(yǎng)基平皿在進入A級潔凈區(qū)前應(yīng)先將盛放培養(yǎng)基平皿的鐵桶置紫外燈下滅菌20min。取樣方法A級潔凈區(qū)檢測人員戴上無菌手套，將密閉鐵桶放置于A級環(huán)境下，打開鐵桶蓋，取出所需數(shù)量的培養(yǎng)基平皿后蓋上鐵桶蓋，取出的培養(yǎng)基平皿其中1只平皿不打開平皿蓋，正放在A級環(huán)境下作為空白對照。為檢測培

6、養(yǎng)皿運輸或搬動過程中培養(yǎng)基是否受到污染，另取3只培養(yǎng)基平皿作為空白對照。其余平皿進行下列取樣操作：設(shè)備環(huán)境?。簶釉陉P(guān)鍵生產(chǎn)操作完成后，打開培養(yǎng)基平皿，將培養(yǎng)皿扣在灌裝機表面，使培養(yǎng)基與灌裝機表面接觸，10s后蓋蓋，在取樣培養(yǎng)皿外編號標(biāo)識，將培養(yǎng)皿放回密閉鐵桶內(nèi)。采樣結(jié)束后立即用注射用水及消毒劑對取樣部位清洗消毒。人員取樣：在關(guān)鍵生產(chǎn)操作完成后，對在A級環(huán)境下的操作人員進行五指手套取樣。打開培養(yǎng)皿，使操作人員五指輕輕按在培養(yǎng)基表面，10s后蓋蓋，在取樣培養(yǎng)皿外編號標(biāo)識，將培養(yǎng)皿放回密閉鐵桶內(nèi)。取樣結(jié)束后在空白對照培養(yǎng)皿外編號標(biāo)識，將空白對照培養(yǎng)皿放入鐵桶內(nèi)。C、D級潔凈區(qū)檢測人員將盛放培養(yǎng)皿的密

7、閉鐵桶放在C、D級潔凈區(qū)工作臺上，打開密閉鐵桶，取出所需數(shù)量的培養(yǎng)基平皿后蓋上鐵桶蓋，取出的培養(yǎng)基平皿中1只平皿不打開平皿蓋，正放在C、D級環(huán)境下做為空白對照，以檢測培養(yǎng)皿運輸或搬動過程中培養(yǎng)基是否受到污染，其余平皿進行下列取樣操作：設(shè)備環(huán)境取樣：打開培養(yǎng)基平皿，將培養(yǎng)皿扣在墻壁、地面、天花板、設(shè)備表面等任意部位取樣，使培養(yǎng)基與取樣部位接觸，10折蓋蓋，在取樣培養(yǎng)皿外編號標(biāo)識，將培養(yǎng)皿放回密閉鐵桶內(nèi)。采樣結(jié)束后立即用純化水及消毒劑對取樣部位清洗消毒。52222人員取樣:打開培養(yǎng)皿，對操作人員口罩、潔凈工作帽前額處、兩只眼鏡鏡片，工作鞋與工作褲連接處、前胸處、手肘處取樣，將培養(yǎng)基輕壓在取樣部位，

8、10s后蓋蓋，在取樣培養(yǎng)皿外編號標(biāo)識，將培養(yǎng)皿放回密閉鐵桶內(nèi)。取樣結(jié)束后在空白對照培養(yǎng)皿外編號標(biāo)識，將空白對照培養(yǎng)皿放入鐵桶內(nèi)。培養(yǎng)將取樣培養(yǎng)皿及空白對照培養(yǎng)皿倒置于3035。叵溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時另取3只同批次配制的培養(yǎng)基倒置于3035C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)做另一空白對照試驗，以檢測培養(yǎng)基保存過程中是否受到污染。培養(yǎng)48h。菌落計數(shù)：對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接用肉眼計數(shù)、標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用510倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若出現(xiàn)在平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辯時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。用做空白對照的培養(yǎng)基平皿均應(yīng)無菌落生長。6注意事項：測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可

9、靠性、正確性。采取一切措施防止采樣過程中的污染和其他可能對樣本的污染。對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)做詳細的記錄。由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)基背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并必須注意細菌菌落與培養(yǎng)物沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。采樣前仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行對照試驗，每個區(qū)域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿（TSA）一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長7潔凈室區(qū)微生物檢測限度7.1表面微生物動態(tài)監(jiān)測限度潔凈度級別接觸（55mm）cfu/碟5指手套cfu/手套A級11B級55C級25D級508結(jié)果評定每個采樣點表面微生物菌落數(shù)必須低于所選定評定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。測試時若某測點的表面微生物菌落數(shù)超過評定標(biāo)準(zhǔn)，則重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格。才能判為合格，否則查明原因及時采取糾正預(yù)防措施。測試時若取樣過程中留出的空白對照培養(yǎng)基長菌則重新取樣，若質(zhì)量控制部留樣用空白對照培養(yǎng)基長菌