QC微生物培訓(xùn)ppt課件

1、微生物實(shí)驗(yàn)室管理一發(fā)生菌液或培育液污染臺(tái)面或地面時(shí)，應(yīng)立刻以0.1新潔爾滅溶液或其它消毒液傾復(fù)其上，至少30分鐘后再行洗擦 任務(wù)衣帽口罩等遭到菌液污染時(shí)，應(yīng)立刻脫去，高壓滅菌后洗滌 如有傳染性培育物污染手部，應(yīng)先用酒精棉球拭去，再浸入0.1新潔爾滅溶內(nèi)片刻，再用肥皂及清水徹底洗刷干凈。.微生物實(shí)驗(yàn)室管理二 帶菌的實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)浸泡在消毒液內(nèi)48小時(shí)后取出，或121，30分鐘高壓滅菌后進(jìn)展洗滌。廢棄帶菌培育物應(yīng)121，30分鐘高壓滅菌后再行處置。微生物限制檢驗(yàn)室：生物限制檢驗(yàn)室每周進(jìn)展清潔消毒并填寫。消毒劑為0.1新潔爾滅溶液或84消毒液，每月輪換運(yùn)用，清潔工具與其他區(qū)域的清潔工具嚴(yán)厲分開。每次操作

2、前用消毒液或酒精棉球擦拭任務(wù)面及一些能夠污染的死角。用紫外燈殺菌至少30分鐘，并填寫。.微生物實(shí)驗(yàn)室管理三干凈實(shí)驗(yàn)室的要求：室內(nèi)墻壁光滑，應(yīng)盡量防止死角，以便于洗刷消毒。應(yīng)堅(jiān)持密閉、防塵、干凈、枯燥。進(jìn)展操作時(shí)盡量防止走動(dòng)。室內(nèi)設(shè)備簡(jiǎn)單，制止放置雜物。任務(wù)臺(tái)、地面和墻壁可以用0.1新潔爾滅溶液或0.5 84消毒液擦洗消毒。.微生物實(shí)驗(yàn)室管理三干凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的溫度應(yīng)控制在18-26，相對(duì)濕度最好在40%-60%。操作間應(yīng)安裝空氣除菌過濾層流安裝。干凈度不低于10000級(jí)，部分干凈度為100級(jí)。操作間或凈化任務(wù)臺(tái)的干凈空氣應(yīng)堅(jiān)持對(duì)環(huán)境構(gòu)成正壓，不低于10Pa，操作間與緩沖間應(yīng)堅(jiān)持相對(duì)正壓，不低于5P

3、a。.常用儀器運(yùn)用本卷須知一培育箱：取放物品應(yīng)快速進(jìn)展，并隨手封鎖箱門以維持恒溫；定期檢查加濕用水水位，留意加水。每周要斷電消毒一次。超凈任務(wù)臺(tái)：在每次操作前后用消毒液擦拭操作臺(tái)及能夠的死角，然后要翻開層流凈化安裝30min。操作者應(yīng)穿著干凈任務(wù)服、任務(wù)鞋、戴口罩。.高壓滅菌鍋：每次運(yùn)用前都要檢查水位；根據(jù)不同的物品選擇相應(yīng)的滅菌程序。當(dāng)屏幕顯示“滅菌完成，可以開門同時(shí)蜂鳴器叫時(shí)，才可以開門取出物品。提籃不可以超載，試管，玻璃瓶等的滅菌，應(yīng)是開口向下豎直放置。培育基滅菌時(shí)，裝載量不超越2/3容積，防止外溢。 常用儀器運(yùn)用本卷須知二.檢定菌管理一人員要求：菌種設(shè)雙人、雙鎖保管。用受過專業(yè)培訓(xùn)，有

4、足夠的菌種保管閱歷。檢定菌的申購：根據(jù)檢驗(yàn)種類的需求，菌種保管員現(xiàn)提出購買檢定菌的懇求，并寫明購買菌種稱號(hào)、規(guī)范編號(hào)、數(shù)量，注明要求購回時(shí)間，并交QC主管、品管部閱歷同意。檢定菌的接納：菌種保管員應(yīng)詳細(xì)核對(duì)購買回菌種與申購單中內(nèi)容一致后，方可簽字接納，并填寫。.檢定菌管理二檢定菌的保管、傳代：1 菌種應(yīng)于210公用冰箱中儲(chǔ)存，并有每天的運(yùn)轉(zhuǎn)記錄。2 每月定期對(duì)菌種進(jìn)展傳代，傳代時(shí)須核對(duì)編號(hào)、代數(shù)、傳代日期、所用培育基，并記錄。3 控制傳代次數(shù)。 普通傳代次數(shù)不得超越5代。.檢定菌管理三檢定菌傳代編號(hào)方法：1 編號(hào)由陽性菌簡(jiǎn)寫字母+代數(shù)+支數(shù)組成，中間以“銜接。2 陽性菌的簡(jiǎn)寫字母：大腸埃希菌：

5、Y ，黑曲霉：H ，金黃色葡萄球菌：JY，枯草芽孢桿菌：KY ，白色念珠菌：BY ，沙門菌：SY3 保管方式： 在陽性菌的簡(jiǎn)寫字母后加以漢子闡明。保管方式有兩種，瓊脂斜面保管和半固體加封石蠟，斜面保管不用加以闡明，如為半固體在陽性菌的簡(jiǎn)寫字母后加寫“半字。4 初次購進(jìn)的檢定菌規(guī)定為0代，以購進(jìn)時(shí)編號(hào)表示；第一次傳代后變?yōu)榈谝淮?，代?shù)“1，第二次傳代后變?yōu)榈诙?，代?shù)“2，依次類推。.培育基管理培育基的配置：按運(yùn)用闡明書上的要求操作。配置培育基時(shí)用純化水。填寫配制記錄。在每個(gè)已滅菌的培育基容器外做好標(biāo)志，注明稱號(hào)、配制日期，培育基的保管：1環(huán)境條件：210為宜，不得凍結(jié)。2保管時(shí)限：自配培育基應(yīng)

6、在2周內(nèi)用完。3瓊脂平板最好現(xiàn)配，在冰箱內(nèi)密閉保管不應(yīng)超越一周。4培育基的再融化：只允許再融化一次，4550水浴中保管不超越8小時(shí)。5培育基的處置：被污染的培育基要經(jīng)高溫滅菌后在進(jìn)展處置。.微生物限制檢驗(yàn)方法一通常微生物限制檢驗(yàn)的方法有平皿法、培育基稀釋法、薄膜過濾法等。 1.平皿法 根據(jù)菌數(shù)報(bào)告法規(guī)那么取相應(yīng)稀釋級(jí)的供試液 1ml，置直徑 90mm 的無菌平皿中，注入 1520ml 溫度不超越 45的溶化的營養(yǎng)瓊脂培育基或玫瑰紅鈉瓊脂培育基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培育基，混勻，凝固，倒置培育。每稀釋級(jí)每種培育基至少制備 2 個(gè)平板。.微生物限制檢驗(yàn)方法二2. 稀釋法：取規(guī)定量的供試液，加至較

7、大量的培育基中，使單位體積內(nèi)的供試品含量減少至不具抑菌作用。用平板法測(cè)定菌數(shù)時(shí)，1ml供試液可等量分注多個(gè)平血;控制菌檢 時(shí)，可加大增菌培育基的用量。.微生物限制檢驗(yàn)方法三3.薄膜過濾法 采用薄膜過濾法，濾膜孔徑應(yīng)不大于 0.45m，直徑普通為 50mm， 假設(shè)采用其它直徑的濾膜， 沖洗量應(yīng)進(jìn)展相應(yīng)的調(diào)整。濾器及濾膜運(yùn)用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。 運(yùn)用時(shí)， 應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完好性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在運(yùn)用前應(yīng)充分枯燥。供試液經(jīng)薄膜過濾后， 假設(shè)需求用沖洗液沖洗濾膜， 每張濾膜每次沖洗量為100ml。總沖洗量不得超越1000ml。.

8、計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證 一驗(yàn)證方法 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)分4組，至少應(yīng)進(jìn)展 3 次獨(dú)立的平行實(shí)驗(yàn)，并分別計(jì)算各實(shí)驗(yàn)菌每次實(shí)驗(yàn)的回收率。1實(shí)驗(yàn)組 平皿法計(jì)數(shù)時(shí)，取實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛴玫淖畹拖♂尲?jí)供試液 1ml 和 50100cfu 實(shí)驗(yàn)菌， 分別注入平皿中， 立刻傾注瓊脂培育基， 每株實(shí)驗(yàn)菌平行制備 2個(gè)平皿， 按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。 薄膜過濾法計(jì)數(shù)時(shí)， 取規(guī)定量實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛴玫淖畹拖♂尲?jí)供試液，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中參與 50100cfu 實(shí)驗(yàn)菌，過濾，按薄膜過濾法測(cè)定其菌數(shù)。 .計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證 二 2菌液組 測(cè)定所加的實(shí)驗(yàn)菌數(shù)。 3供試品對(duì)照組 取規(guī)定量供試液， 按菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定供試品本底菌數(shù)。 4稀釋劑對(duì)照組 假

9、設(shè)供試液制備需求分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處置時(shí)， 應(yīng)添加稀釋劑對(duì)照組， 以調(diào)查供試液制備過程中微生物受影響的程度。 實(shí)驗(yàn)時(shí)， 可用相應(yīng)的稀釋液替代供試品， 參與實(shí)驗(yàn)菌， 使最終菌濃度為每1ml 供試液含 50100cfu，按實(shí)驗(yàn)組的供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定其菌數(shù)。.計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證 三 結(jié)果判別 在 3 次獨(dú)立的平行實(shí)驗(yàn)中， 稀釋劑對(duì)照組的菌回收率應(yīng)均不低于 70%。假設(shè)實(shí)驗(yàn)組的菌數(shù)回收率均不低于 70%，照該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測(cè)定供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)；假設(shè)任一次實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組的菌回收率低于 70%，應(yīng)建立性方法，消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)展方法驗(yàn)證。 .計(jì)數(shù)

10、方法的驗(yàn)證 四稀釋劑對(duì)照組的菌落回收率=實(shí)驗(yàn)組的菌落回收率=稀釋劑對(duì)照組的平均菌落數(shù)菌液組的平均菌落數(shù)實(shí)驗(yàn)組的平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)菌液組的平均菌落數(shù)100%100%. 菌數(shù)報(bào)告規(guī)那么一 宜選取細(xì)菌、酵母菌平均菌落數(shù)小于 300cfu、 霉菌平均菌落數(shù)小于 100cfu 的平板計(jì)數(shù)作為菌數(shù)報(bào)告取兩位有效數(shù)字的根據(jù)。當(dāng)僅有一個(gè)稀釋級(jí)的菌落數(shù)符合上述規(guī)定，以該級(jí)的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告菌數(shù)；當(dāng)有2個(gè)或2個(gè)以上稀釋劑的菌落數(shù)符合上述規(guī)定，以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告.如各稀釋級(jí)的平板均無菌落生長(zhǎng)，或僅最低稀釋級(jí)的平板有菌落生長(zhǎng)，但平均菌落數(shù)小于 1時(shí)，以1 乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。 菌數(shù)報(bào)告規(guī)那么 二 .控制菌檢查控制菌檢查是用于檢查某些特定微生物控制菌或其他致病菌，規(guī)定按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn)，不準(zhǔn)復(fù)試?？刂凭鷳?yīng)在專門的陽性菌實(shí)驗(yàn)室進(jìn)展。控制菌：大腸埃希菌，大腸菌群，沙門菌，銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌，梭菌，白色念珠菌。.培育基適用性檢查一檢查目的：促生長(zhǎng)才干，抑制才干，指示才干培育基滅菌后在能取出的前提下，盡快取出，切忌在高壓鍋內(nèi)過夜