細菌感染的類型及檢測

1、一、檢測細菌或其抗原（一）直接涂片顯微鏡檢查自病人標本直接涂片作染色鏡檢是簡便而快速的方法之一。自一定部位采集標本作直接檢查需考慮細菌的形態(tài)特征與可能存在的細菌數(shù)量。腦膜炎患者的腦脊液和瘀斑刺破涂片，?？娠@示在細胞內(nèi)的革蘭氏陰性腎形雙球菌，有診斷價值。白喉患者咽部假膜涂片中可見典型的桿菌有時可有異染顆粒，也有參考診斷價值。結(jié)核患者痰直接或濃集后，涂片抗酸染色檢出結(jié)核桿菌有診斷價值。在少數(shù)情況下，也有利用免疫熒光或酶標記抗體染色鏡檢方法進行快速診斷，如糞例中的霍亂弧菌、痢疾桿菌等，可用這種技術(shù)檢出。（二）培養(yǎng)大多數(shù)病菌的形態(tài)與染色并無特征，因此需用培養(yǎng)方法來分離與鑒定細菌。雖然這一方法需要的時間

2、較長，但比較可靠。此外，只有通過這一方法才能獲得細菌的純培養(yǎng)，可用于做藥敏試驗或毒力試驗。應(yīng)根據(jù)不同細菌需要的營養(yǎng)、生長條件（如厭氧或CO2）、菌落生長特征來初步識別細菌。如溶血性鏈球菌需在血瓊脂平板上生長，菌落小而透明，菌落周圍有完全溶血圈，可資鑒別。多數(shù)細菌欲確定為何種病原菌尚需進一步獲得純培養(yǎng)及接種各種特殊培養(yǎng)基進行生化反應(yīng)試驗或確定其抗原性與致病力等。（三）生化反應(yīng)細菌的合成與分解代謝過程中，能通過酶利用一些物質(zhì)或分解一些物質(zhì)。不同的細菌具有不同的酶，因此各種細菌能夠利用與分解的物質(zhì)也各不相同。利用各種細菌的不同生化反應(yīng)幫助鑒別細菌在某些細菌如腸道桿菌中是很重要的步驟。例如腸道桿菌均為

3、革蘭氏陰性桿菌。菌落形態(tài)亦相似，但對于糖的發(fā)酵結(jié)果不同，因此可利用不同種糖作為培養(yǎng)基質(zhì)進行生化反應(yīng)予以區(qū)別。（四）抗原檢測與分析有些細菌即使用生化反應(yīng)變難區(qū)別，但其細菌抗原成份（包括菌體抗原、鞭毛抗原）卻不同。利用已知的特異抗體測定有無相應(yīng)的細菌抗原可以確定菌種或菌型。常用的方法為玻片凝集反應(yīng)，用已知的特異免疫血清與待鑒定的細菌在玻片上做凝集反應(yīng)，如出現(xiàn)凝集菌團則為陽性，說明該菌有相應(yīng)的特異抗原。近年采用了各種檢測抗原的敏感方法，如對流免疫電泳、放射免疫、酶免疫、氣相色譜等方法，試圖直接從患者標本中檢測細菌抗原作快速診斷。如果在細菌性腦膜炎中，利用對流免疫電泳在腦脊液中可分別檢測肺炎球菌、腦膜

4、炎球菌及流感桿菌，特異性高，敏感性亦高。氣相色譜方法系列利用細菌代謝產(chǎn)生的揮發(fā)性短鏈有機酸，進行氣相色譜分析可鑒別細菌，這在厭氧菌中應(yīng)用很廣。檢測抗原的另一優(yōu)點為在應(yīng)用了抗生素治療后，細菌生長被抑制，利用培養(yǎng)方法不能檢出的細菌，因尚有抗原存在，在短期內(nèi)仍可被檢出，從而有助于明確病因。個別情況下還可利用噬菌體對細菌抗原型別分析，用于流行病學(xué)追蹤調(diào)查。二、檢測抗體人體受病菌感染后，經(jīng)一定時間產(chǎn)生抗體，抗體的量隨病菌感染過程而增多，表現(xiàn)為效價升高。因此用已知的細菌或抗原檢測患者體液（主要為血清）中有無相應(yīng)抗體及抗體量的動態(tài)變化，可輻助診斷。一般采用血清進行試驗，故又稱為血清學(xué)試驗。血清學(xué)試驗適用于抗

5、原性較強的病原菌及病程較長的傳染病診斷。正常人如已經(jīng)受過某些病原菌隱性感染或近期進行過預(yù)防接種，血清中可能含有對該種病原菌的一定量的抗體，因此必須有抗體效價升高或隨病程遞增才有參考價值。例如傷寒患者血清抗體的檢查稱為肥達氏試驗（Widal test，即將患者血清不同稀釋后，與傷寒、副傷寒菌抗原在試管中做凝集反應(yīng)。根據(jù)最高血清稀釋度仍有明顯凝集的血清抗體效價，結(jié)合患者具體情況作為診斷。多數(shù)血清學(xué)試驗的診斷需取患者雙份血清，即一份在疾病的急性期，另一份在恢復(fù)期（一般為26周后），當(dāng)抗體效價升高4倍以上方有診斷價值。因此血清學(xué)診斷主要為病后的回顧性診斷。但目前有利用檢測某些細菌某些細菌特lgM抗體的

6、早期診斷方法。此外，在檢測測抗體時至少應(yīng)有懷疑可能致病細菌的線索方可采用相應(yīng)抗原，否則就無從選擇做何種血清學(xué)試驗。有些患者因早期使用抗生素治療，細菌在體內(nèi)繁殖不多，患者可不產(chǎn)生抗體，因而并非每一患者均有抗體效價升高的表現(xiàn)。然而當(dāng)病原菌未能被檢出時，有些患者仍可通過血清抗本效價的升高予以診斷，因此檢測細菌是互相輔助的診斷方法。三、檢測細菌遺傳物質(zhì)通過檢測病原體遺傳物質(zhì)來確認病原體也許是檢查病原體為直接的方法了。目前比較成熟的技術(shù)包括基因探針技術(shù)和PCR技術(shù)。（一）基因探針技術(shù)用標記物標記細菌染色體或質(zhì)粒DNA上的特異性片段制備成細菌探針，待檢標本經(jīng)過短時間培養(yǎng)后，經(jīng)過點膜、裂解變性、預(yù)雜交和雜交

7、后，利用探針上標記物發(fā)出的信號可以知道雜交結(jié)果并判斷病原體的性質(zhì)?；蛱结樇夹g(shù)操作比較復(fù)雜，加之同位素污染等問題，目前尚不能普及應(yīng)用。近年來發(fā)展起來的地高辛標記的非同位素探針，從探針標記到雜交都很方便，只是價格昂貴，仍限于科研應(yīng)用，尚不能普及。（二）PCR技術(shù)這是八十年代末發(fā)展起來的一項極有應(yīng)用價值的技術(shù)，設(shè)計病原體基因的特異引物，細菌標本（不經(jīng)培養(yǎng)）經(jīng)過簡單裂解、變性后，就可在PCR儀上進行擴增反應(yīng)，經(jīng)過2530個循環(huán)，通過瓊脂糖電泳即可觀察擴增結(jié)果，檢出病原體。這種技術(shù)的特點是簡便、快速。它尤其適于那些培養(yǎng)時間較長的病原菌的檢查，如結(jié)核桿菌、支原體等。PCR高度的敏感性使該技術(shù)在病原體診斷

8、過程中極易出現(xiàn)假陽性，避免污染是提高PCR診斷準確性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。細菌感染的類型感染的類型：病原體通過各種適宜的途徑進入人體，開始了感染過程。侵入的病原體可以被機體清除，也可定植并繁殖，引起組織損傷、炎癥和其他病理變化。感染類型可出現(xiàn)不感染、隱性感染、顯性感染、持續(xù)性感染和帶菌狀態(tài)等不同表現(xiàn)，這些表現(xiàn)并非一成不變，可以隨感染雙方力量的增減而移行，轉(zhuǎn)化或交替出現(xiàn)。（1）不感染：病原體侵入人體后，由于毒力弱或數(shù)量不足，或侵入的部位不適宜，或機體具有完備的非特異性免疫和高度的特異性免疫力，病原體迅速被機體清除，不發(fā)生感染。（2）隱性感染：是指病原體侵入人體后，僅引起機體發(fā)生特異性免疫應(yīng)答，不出現(xiàn)或只出

9、現(xiàn)不明顯的臨床癥狀、體征，甚至生化改變，是為隱性感染，或稱亞臨床感染，只能通過免疫學(xué)檢查才能發(fā)現(xiàn)有過感染。（3）顯性感染：即感染性疾病。指病原體侵入人體后，由于毒力強、入侵數(shù)量多，加之機體的免疫病理反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷，生理功能發(fā)生改變，并出現(xiàn)一系列臨床癥狀和體征。按其發(fā)病快慢和病程長短，可分為急性感染和慢性感染。急性感染發(fā)病急驟，病程短，一般數(shù)日至數(shù)周，如麻疹、流行性腦脊髓膜炎、流感及甲型肝炎等慢性感染病程緩慢，常持續(xù)數(shù)日至數(shù)年，如結(jié)核、麻風(fēng)等；介于急性和慢性之間者為亞急性感染，如牙齦炎、心內(nèi)膜炎等。顯性感染按感染部位及性質(zhì)可分為局部感染和全身感染。全身感染可有下列不同類型：菌血癥：病原菌由原

10、發(fā)部位一時性或間歇性侵入血流，但不在血中繁殖。敗血癥：病原菌不斷侵入血流，并在其中大量繁殖，引起機體嚴重損害并出現(xiàn)全身中毒癥狀。毒血癥：病原菌在局部組織生長繁殖，不侵入血流，但細菌產(chǎn)生的毒素進入血流，引起全身癥狀。膿毒血癥：由于化膿性細菌引起敗血癥時，細菌通過血流擴散到全身其他臟器或組織，引起新的化膿性病灶。（4）持續(xù)性感染：是指某些微生物感染機體后，可以持續(xù)存在于宿主體內(nèi)很長時間，短則幾個月，長可達數(shù)年甚至數(shù)十年，尤其有些病毒的感染可使病人長期帶病毒，引起慢性進行性疾病，并可成為重要的傳染源。持續(xù)性感染一般可分為以下三種類型：慢性感染：顯性或隱性感染后，微生物未完全清除，可持續(xù)存在于血液或細

11、胞中并不斷排出體外，可出現(xiàn)癥狀，也可無癥狀。在慢性感染的全過程均可檢出微生物，如CMV、EB病毒、HBV、HIV等所致的慢性感染。潛伏感染：顯性或隱性感染后，病毒基因存在于一定的組織或細胞中，但不能產(chǎn)生有感染性的病毒體，如單純皰疹病毒在三叉神經(jīng)節(jié)中潛伏，此時機體既無臨床癥狀又無病毒體排出，用常規(guī)方法多不能分離和檢出病毒的存在。但在某些條件下，醫(yī)學(xué).教育網(wǎng).整理潛伏的病毒可被激活，完成病毒的復(fù)制后可沿感染神經(jīng)到達皮膚、黏膜，發(fā)生單純皰疹。在急性發(fā)作期可檢出病毒的存在，發(fā)作期過后病毒又返回到潛伏的神經(jīng)節(jié)中，形成長期存留體內(nèi)的持續(xù)性感染。慢發(fā)病毒感染：病毒感染后有很長的潛伏期，既不能分離出病毒也無癥狀，經(jīng)數(shù)年或數(shù)十年后，可發(fā)生某些進行性疾病，逐漸惡化直至死亡，如麻疹病毒引起的亞急性硬化性全腦炎，朊粒引起的克雅病和庫魯病等。（