7第七講-第三章 實驗動物學(xué)微生物控制ppt課件

1、 一、根本概念：無特定病原體動物(specific pathogen free animal,SPF)是指機(jī)體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲存在的動物，而非特定的微生物和寄生蟲是允許存在的。1978年，英、美、日、法等國協(xié)商制定了應(yīng)排除的病原微生物小鼠有22種、大鼠18種、豚鼠18種、地鼠15種、兔16種。 第三節(jié) 無特定病原體動物SPF動物.我國1992年醫(yī)學(xué)實驗動物規(guī)范中，規(guī)定了SPF動物應(yīng)排除的病原微生物和病毒的種類如下：細(xì)菌：小鼠有19種、大鼠18種、豚鼠16種、地鼠16種、兔16種、貓2種、犬3種、猴3種。病毒：小鼠有17種、大鼠13種、豚鼠7種、地鼠5種、兔4種、貓6種、犬6種、猴6種。

2、詳見表3-1.小鼠 大鼠豚鼠地鼠兔貓狗猴細(xì)菌病毒19171813167165164263636寄生蟲無體內(nèi)外一切寄生蟲表3-2 衛(wèi)生部對實驗動物生物監(jiān)測規(guī)范.二、豢養(yǎng)與監(jiān)測SPF動物來源于無菌動物或悉生動物，必需豢養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中，所以屏障系統(tǒng)也稱為SPF設(shè)備。通常SPF動物室都經(jīng)嚴(yán)厲凈化，嚴(yán)厲控制病原微生物的侵入。.在對SPF動物豢養(yǎng)過程中，時間長了，難免不發(fā)生污染。所以不僅對SPF動物需求定期監(jiān)測，而且對SPF動物普通都作周期性重建(F56代淘汰制度)。.三、應(yīng) 用國際上公認(rèn)SPF動物適用于一切科學(xué)研討，是目前國際規(guī)范級別的實驗動物。消費各種疫苗所用的動物都應(yīng)為SPF級動物。SPF動物運用價

3、值在于它沒有人畜共患病病原體、沒有主要傳染病病原體、沒有對實驗結(jié)果能夠產(chǎn)生干擾的微生物。 SPF動物不存在隱性感染清潔級就有。隱性感染不會影響動物安康的外表，容易被忽視，但卻能給實驗帶來嚴(yán)重的干擾。.類別無菌動物SPF動物普通動物傳染病無無有或可能有寄生蟲無無有或可能有試驗結(jié)果明確明確有疑問應(yīng)用動物數(shù)少少多或大量統(tǒng)計價值很好可能好不準(zhǔn)確長期實驗可能好可能好有困難死亡率很低低高長期實驗存活率約100%約90%約40%實驗標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計可能可能不可能實驗結(jié)果的討論價值很高高有疑問 表3-3幾種實驗動物運用價值的比較.日本國立衛(wèi)生實驗所生物平安性實驗研討中心按照日本政府的規(guī)定，對一切醫(yī)藥品、化裝品、食品添

4、加物、農(nóng)藥、化學(xué)物質(zhì)、家庭用品、動物用醫(yī)藥品、飼料添加物等，都必需進(jìn)展生物平安性實驗，合格者方準(zhǔn)許正式消費，投放市場。其實驗內(nèi)容包括：普通毒性實驗、特殊毒性實驗、在體內(nèi)衍變過程、變異原性實驗及普通生物學(xué)實驗，共5大項(見表3-4)，這些實驗所用的大、小鼠必需是SPF級(表3-5)。.安全性試驗的種類醫(yī)藥品化妝品食 品添 加物農(nóng)藥化學(xué)物質(zhì)家庭用品動物用醫(yī)藥飼料添加物一 般毒 性試 驗急性毒性試驗亞急性毒慢性毒性特 殊毒 性試 驗局部刺激試驗變態(tài)反應(yīng)試驗致畸形試驗繁殖試驗依賴試驗致癌性試驗表3-4日本關(guān)于生物平安性實驗動物的規(guī)定.安 全 性 試 驗 的 種 類動 物 要 求.急性毒性試驗4周齡的S

5、PF小鼠、大鼠，經(jīng)1周適應(yīng)后使用；2.53.0kg的兔，經(jīng)兩周適應(yīng)后使用；67月齡的畢克狗，經(jīng)1周適應(yīng)使用。.大鼠的亞急性及慢性毒性試驗兔的亞急性毒性試驗畢克狗的亞急性及慢性毒性試驗4周齡的SPF大鼠，經(jīng)1周適應(yīng)后使用；約2.5kg的兔；67月齡的畢克狗，經(jīng)4周適應(yīng)后使用。. 生殖試驗（妊娠前和妊娠初期服藥反應(yīng)）5周齡雄性和12周齡雌性SPF小鼠、大鼠，經(jīng)1周檢疫適應(yīng)后使用. 致癌性試驗4周齡的SPF小鼠、大鼠，經(jīng)1周檢疫適應(yīng)后使用. 生殖試驗（器官形成期的服藥試驗）生殖試驗（產(chǎn)前1周和哺乳期服藥試驗）12周齡的SPF小鼠、大鼠，經(jīng)1周檢疫適應(yīng)后使用，2.5 kg左右的雌兔，經(jīng)4周檢疫適應(yīng)后使

6、其交配妊娠用于實驗12周齡的SPF小鼠、大鼠，經(jīng)1周檢疫適應(yīng)后，使其交配妊娠后用于實驗表3-5 日本對供平安性實驗動物的要求.一、清潔級動物CL1.根本概念：是指動物體內(nèi)、外不攜帶有人畜共患病病原體，或動物傳染病病原體，并對科學(xué)研討無干擾的動物。清潔級動物是根據(jù)我國國情而設(shè)定的等級動物，目前在我國已成為適用于科研的規(guī)范的實驗動物，其種群來源于SPF動物或剖腹產(chǎn)動物。第四節(jié) 清潔級動物與普通級動物.2、清潔級動物特點及運用清潔級動物比普通級動物要求排除的微生物和寄生蟲多，但比SPF動物少。即就微生物凈化程度CL比CV高，而比SPF低。清潔級動物除肉眼察看無病外，尸體解剖時，主要臟器、組織無論是肉

7、眼觀還是病理組織切片均應(yīng)無病變。.清潔動物豢養(yǎng)于溫濕度恒定的、十萬級空氣凈化的半屏障系統(tǒng)中，其所用的飼料、墊料、籠器具等都經(jīng)過消毒滅菌處置，飲用水除用高壓滅菌外，也可采用pH2.52.8的酸化水，任務(wù)人員需換滅菌任務(wù)服、鞋、帽、口罩等進(jìn)入動物室進(jìn)展操作。目前普通都豢養(yǎng)在IVC系統(tǒng)中。.清潔級動物近年來在我國得到較廣泛的運用。它較普通動物安康，又較SPF動物易到達(dá)質(zhì)量規(guī)范，在動物實驗中可免受動物疾病的干擾，其敏感性與反復(fù)性亦較好。但國際上普遍以為清潔動物僅適宜于短期或中期部分科研實驗。.清潔級動物微生物控制規(guī)范根本上與SPF動物一樣。不同之處是在抗體檢查中，清潔級動物經(jīng)常可以查出鼠腦膜炎病毒和鼠

8、肝炎病毒抗體的存在。這一點會對個別實驗產(chǎn)生不良的影響。如隱性感染了鼠肝炎病毒的小鼠，就會影響小鼠的免疫應(yīng)對和腫瘤研討。清潔級動物是我國常用的實驗動物，可運用于生物醫(yī)學(xué)研討的各個領(lǐng)域。.二、普通級動物conventional animal CV1.概念：不攜帶人畜共患病病原體和動物急性傳染病病原體的實驗動物。2.特點：微生物控制要求最低。生理學(xué)特性：安康的外貌，正常的飲食，眼角、鼻腔無分泌物附著，尸檢無眼觀病灶.普通級小鼠應(yīng)排除的病原微生物，常見的有：鼠疫桿菌、流行性出血熱病毒、腦膜炎病毒、沙門氏菌、皮膚真菌、弓形體及體外寄生蟲等對人體和動物危害較大的病原體。為了預(yù)防人和動物共患病及動物群中急性

9、傳染病的發(fā)生，普通級動物在豢養(yǎng)管理中必需采取一定的防護(hù)措施。.普通級動物的豢養(yǎng)管理：飼料、墊料不需求高壓消毒；飲用水要符合城市飲水衛(wèi)生規(guī)范；青飼料應(yīng)經(jīng)洗凈后再喂；外來動物必需嚴(yán)厲隔離檢疫；豢養(yǎng)室內(nèi)要有防野鼠、防昆蟲的設(shè)備；要堅持經(jīng)常性的環(huán)境衛(wèi)生及籠器具的清洗消毒，嚴(yán)厲處置淘汰及死亡動物；限制無關(guān)人員進(jìn)人動物室。 .病毒性疾病疾病病原媒介動物人類臨床癥狀傳染途徑猴皰疹病毒感染(B-Virusinfection) cercopithecine Herpesvirus Type 1獼猴類肌痛、發(fā)熱、頭痛；迅速發(fā)展的上行性麻痹；感覺異常、復(fù)視、運動失調(diào)、潴尿、抽搐、吞咽困難，死亡唾液(咬傷)、抓傷馬爾

10、堡病毒癥 (Marburg-Viresdisease) Marburg-Virus 非洲綠猴 肌痛、發(fā)熱、頭痛、器官壞死、出血性休克、眼結(jié)膜溢血、惡心、嘔吐、嚴(yán)重下痢、白細(xì)胞減少，急性死亡接觸、空氣傳染；人類之間可經(jīng)由血液、分泌物或精液傳染 痘病毒癥 (PoxMrusdisease) Pox virus其他靈長類 類似天花癥狀，如發(fā)熱、皮疹、頭痛、咽喉痛、虛脫、偶有腹痛，嚴(yán)重致死接觸傳染或呼吸道感染猴痘(Monkeypox) Pox virus獼猴類 眼瞼、臉部、身體或生殖器有局部的卵圓形或圓形隆起紅斑接觸傳染附：人畜共患病.續(xù)表疾病病原媒介動物人類臨床癥狀傳染途徑 麻疹(Measles；Ru

11、beola)Paramyxo virus 自然宿主為人群，靈長類患病后可感染人類發(fā)熱、結(jié)膜炎、鼻炎、咳嗽、有紅暈小白點于頰部黏膜，在臉部及其他部位出現(xiàn)皮疹空氣傳染、呼吸道分泌物接觸能傳染甲型肝炎(Hepatitis A)Hepatitis A virus 黑猩猩、械猴、石蟹獼猴、梟猴 發(fā)熱、身體不適、厭食、惡心、腹部不適、黃疸糞便排毒、經(jīng)口或胃腸道外途徑感染出血熱(Korean hemorrhagic fever) Hantaan Virus 大鼠、小鼠肌痛、咳嗽，發(fā)熱、腹瀉、出血、蛋白尿、腎臟損害，嚴(yán)重致死吸入感染、嚙齒類動物咬傷、傷口污染淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢 腦膜炎病毒感染癥 (Lyphocyt

12、ic choriomeningitis virus infection) Lyphocytic choriomeningitis virus 小鼠、倉鼠類似流行性感冒的癥狀，頭痛、肌痛、發(fā)熱、惡心、嘔吐、喉痛、畏光。接觸感染(接觸小鼠糞便和尿液)；吸入；咬傷，或由節(jié)肢動物如蚊子、蟑螂傳播狂犬病 (Rabies)Rhabdo virus 所有哺乳類頭痛、肌痛、發(fā)熱、恐水、狂妄、抽搐、昏厥、死亡 咬傷、皮膚傷口或黏膜感染含狂犬病毒的唾液 .細(xì)菌性疾病 疾病病原媒介動物人類臨床癥狀傳染途徑全身性感染 (Systemic infections) 布氏桿菌病 (Brucellosis)犬Brucdla

13、Canis、豬Brucella suis 犬、牛、豬、羊發(fā)熱、頭痛、惡心、體重減輕。有可能發(fā)生菌血癥，睪丸炎、不育等由接觸感染，可經(jīng)口、皮膚、呼吸道、尿液、黏膜感染鉤端螺旋體病(Leptospirosis) Leptospirosis interro-gans各種脊椎動物的哺乳類、兩棲類、爬行類 精神萎靡、體重減輕、嘔吐、下痢、發(fā)熱、黃疸、突發(fā)性死亡接觸感染動物的尿液，由創(chuàng)傷、皮膚或口腔感染鼠疫(Plague) Yersinia(Pasteurella) pestis 鼠類、貓、犬、兔、山羊 淋巴結(jié)型鼠疫：發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大與發(fā)炎?；撔褪笠撸喝硇杂绕涫欠巍⒛X膜化膿由蚤傳染。另外，接觸受感染的

14、動物，或吸入帶菌的空氣感染。皮膚傷口或黏膜亦可感染鸚鵡熱 (Psittacosis) Chlamydia psittaci 多種鳥類(鸚鵡科、火雞、鴿、鴨等) 呈急性或隱性感染，包括發(fā)熱、厭食、肌痛、干咳。與帶病原的滲出物、分泌物、排泄物接觸傳染，或經(jīng)呼吸道感染鼠咬熱(Rat-BiteFever) Streptobacillus monili-fonnis spirillum minus 大鼠等嚙齒類 發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大、發(fā)抖、頭痛、肌痛 被帶菌的大鼠、小鼠、犬、貓咬傷，由空氣、灰塵或飲用污染的牛乳感染 .續(xù)表疾病病原媒介動物人類臨床癥狀傳染途徑呼吸道感染 ( Respiratory lnfec

15、tions) 結(jié)核病(Tuberculosis) Mycobacterium tu-berculosis 犬、貓、猴 咳嗽、生痰、咳血、體重減輕、無力疲倦、發(fā)熱、發(fā)冷、惡病質(zhì) 吸入傳染，或經(jīng)口腔、傷口及消化道感染 腸道感染 ( Entericlnfections)沙門氏菌病 (Salmonellosis)Salmonella typhimu-riumSenteritidis鼠類、犬、貓、靈長類急性腸胃炎，腹痛、腹瀉、惡心、發(fā)熱、厭食經(jīng)由食物、飲水感染 志賀氏菌病 (Shigellosis) Sflexneri，SSonnei，及Sdysenteriae 豚鼠、鼠類、犬、靈長類 急性下痢、發(fā)熱、

16、惡心、有時伴有嘔吐、先急后重、痛經(jīng)與毒血癥 接觸或口腔感染 腸道耶氏癥 (Enteric Yersiniosis) Yersinia Enterocolitica 犬、貓、豚鼠、兔、靈長類 發(fā)熱、下痢、腹痛。后遺癥有關(guān)節(jié)炎，虹膜炎、皮膚潰瘍、肝脾膿腫 接觸感染動物或其糞便，亦可經(jīng)口感染 .疾病病原癥狀傳播方式控制小鼠脫腳病(ectromelia)Mouse pox virus腳、尾、鼻出現(xiàn)皮疹和潰瘍，嚴(yán)重出現(xiàn)尾壞死脫落。皮膚傷口、呼吸道、消化道兔出血癥Rabbit hemorrhagic diseaseRabbit hemorrhagic disease virus三、動物急性傳染病.由于普通

17、級動物CV是微生物控制等級最低的實驗動物，對實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性較差，因此國際上普遍以為僅可作生物醫(yī)學(xué)中教學(xué)演示之用，或作為某些科學(xué)研討為探求方法而從事的預(yù)實驗之用。不可供科研、消費和檢定之用，由于普通動物繁衍力強(qiáng)，消費量大，適宜作普通性的實驗用。3、普通級動物的運用.監(jiān)測程序：1. 微生物檢測程序 分別血清，檢查病 毒抗體或其它病原的抗體 氣管分泌物，腸內(nèi)容物， 臟器分別細(xì)菌 真菌檢查動物編號外觀檢查麻醉皮膚取樣取血無菌解剖檢測檢測報告附：第五節(jié) 實驗動物微生物及寄生蟲監(jiān)測 武漢大學(xué).2. 寄生蟲檢測程序 弓形蟲檢測 體外寄生蟲檢測 體內(nèi)寄生蟲檢測 體外寄生蟲檢測動物編號外觀檢查麻醉拔毛或梳毛取

18、血擠壓或刀片刮取皮層物取樣檢測檢測報告解剖、臟器、腸內(nèi)容物、糞便取樣.取樣要求與監(jiān)測規(guī)那么：1. 普通動物、清潔級動物和無特定病原體 動物每三個月至少檢測一次。2. 無菌動物每年至少檢測一次。3. 每2-4周檢測一次糞便標(biāo)本。.實驗動物不同消費繁衍單元取樣數(shù)量群體大小，只取樣數(shù)量5005只10只20只 每個隔離器檢測2只.監(jiān)測方法：1. 實驗動物病毒檢測：1血清學(xué)診斷：血凝抑制實驗HI；酶聯(lián)免疫吸附實驗ELISA。2病原學(xué)檢查：接種細(xì)胞培育物察看CPE出現(xiàn)鼠痘、鼠肝炎；血吸附實驗仙臺病毒；免疫酶實驗LCM病毒。延續(xù)三次傳代未有病毒跡象為陰性。接種敏打動物，察看發(fā)病、抗體產(chǎn)生、病理改動、接種動物

19、病毒再分別。動物組織細(xì)胞傳代培育。.3病毒顆粒、抗原和核酸的檢出光鏡檢查病理改動或包涵體的存在。電鏡檢查組織內(nèi)或排泄物中的病毒顆粒PAGE、PCR檢查病毒核酸。免疫法檢查組織內(nèi)、排泄物中的病毒抗原。.2. 實驗動物細(xì)菌檢測：1正常動物主要取氣管或鼻咽分泌物和盲腸內(nèi)容物作細(xì)菌培育。2發(fā)病動物對發(fā)生病變的各組織和臟器做細(xì)菌檢查。3細(xì)菌監(jiān)測多采用病原學(xué)方法。.3. 實驗動物寄生蟲檢測：1體內(nèi)寄生蟲檢查直接涂片：適于腸道蠕蟲蟲卵、腸道原蟲及血液內(nèi)寄生蟲。蟲卵搜集：飽和生理鹽水漂??；沉淀集卵，用于吸蟲卵；透明膠紙粘取，用于蟯蟲卵；尿液檢查，用于鼠膀胱線蟲卵；尸體剖檢。2體外寄生蟲檢查被毛檢查、透明膠紙粘取、皮刮取法、黑背景法.附：第六節(jié) 生物平安 武漢大學(xué)生物平安：指由于職業(yè)或現(xiàn)代生物技術(shù)的開發(fā)和運用，呵斥的對人體安康和生態(tài)環(huán)境的潛在要挾及應(yīng)采取的一系列有效預(yù)防和控制措施生物平安要素包括：病原微生物要素、轉(zhuǎn)基因動物要素、變應(yīng)緣由素。.1. 病原微生物要素1) 逸散方式： 天然逸散方式：經(jīng)尿液、唾液和糞便排出或從皮膚損害部位釋出。 人為逸散方式：采血、活體檢查和尸檢。實驗室生物平安標(biāo)志或標(biāo)識.2) 傳播方式： 污染的針頭和注射器以及直接與感染動物接觸，占引起感