微生物的顯微直接計數

1、實驗四微生物的顯微直接計數微生物的顯微直接計數目的要求目的要求實驗原理實驗原理實驗材料實驗材料實驗程序實驗程序思考題思考題目的要求目的要求 了解血球計數板的構造和使用方法。了解血球計數板的構造和使用方法。 學習使用血球記數板測定微生物數量的方學習使用血球記數板測定微生物數量的方法。法。實驗原理實驗原理血球計數板血球計數板通常是一塊特制的厚載玻片，載玻通常是一塊特制的厚載玻片，載玻片上有四條槽而構成三個平臺。中間的平臺較片上有四條槽而構成三個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽而隔成兩半，每個半寬，其中間又被一短橫槽而隔成兩半，每個半邊上面各刻有一個方格網，每個方格網共分九邊上面各刻有一個方

2、格網，每個方格網共分九大格，其中間的一大格又稱為計數室，微生物大格，其中間的一大格又稱為計數室，微生物的計數就在此大格中進行。的計數就在此大格中進行。常用的血球計數板的計數室有兩種規(guī)格常用的血球計數板的計數室有兩種規(guī)格的刻度網格。一種是一個大方格分成的刻度網格。一種是一個大方格分成16個中個中方格，而每個中方格又分成方格，而每個中方格又分成25個小方格，即個小方格，即為為1625。另一種是一個大方格分成。另一種是一個大方格分成25個中個中方格，而每個中方格又分成方格，而每個中方格又分成16個小方格，即個小方格，即2516。但是不管計數室是那種規(guī)格，其計。但是不管計數室是那種規(guī)格，其計數室的小格

3、數總是相同的，即數室的小格數總是相同的，即162525l6400（小格）。（小格）。計算計算每一個大方格邊長為每一個大方格邊長為1毫米，則每一大方格毫米，則每一大方格面積為面積為1平方毫米。蓋上蓋玻片后，載玻片計數平方毫米。蓋上蓋玻片后，載玻片計數室與蓋玻片之間的高度為室與蓋玻片之間的高度為0.1毫米，所以每個計毫米，所以每個計數室（大方格）的體積為數室（大方格）的體積為0.1立方毫米。立方毫米。在計數時，通常數五個中方格的總菌數，求在計數時，通常數五個中方格的總菌數，求得平均值。再乘上得平均值。再乘上16或或25就得一大方格中的總菌就得一大方格中的總菌數。然后再換算成數。然后再換算成1毫升菌

4、液中的總菌數。毫升菌液中的總菌數。（1毫升毫升1立方厘米立方厘米1,000立方毫米）立方毫米）彼得羅夫彼得羅夫-霍瑟（霍瑟（Petroff Hausser）細菌計數板）細菌計數板兩種計數板的原理和部件相同。只是細兩種計數板的原理和部件相同。只是細菌計數板較薄，可以用油鏡觀察。而血球計菌計數板較薄，可以用油鏡觀察。而血球計數板較厚，不能使用油鏡，故細菌不易看清。數板較厚，不能使用油鏡，故細菌不易看清。實驗材料實驗材料酵母菌懸液酵母菌懸液 顯微鏡，血球計數板。顯微鏡，血球計數板。 蓋玻片，無菌滴管，吸水紙，擦鏡紙，香柏蓋玻片，無菌滴管，吸水紙，擦鏡紙，香柏油、鏡頭洗液。油、鏡頭洗液。 實驗程序實驗

5、程序計數步驟：計數步驟：1. 取清潔無油的血球計數板，在計數室上面加蓋玻片。取清潔無油的血球計數板，在計數室上面加蓋玻片。2. 取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴（取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴（不宜過多），使菌液自行滲入，計數室內不得有氣泡。不宜過多），使菌液自行滲入，計數室內不得有氣泡。3. 靜置靜置5分鐘后，將血球計數板置于顯微鏡載物臺上，分鐘后，將血球計數板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數板的大方格網位置。尋找時光圈要先用低倍鏡找到計數板的大方格網位置。尋找時光圈要縮小，光線要偏暗些，并將計數室移至視野中央。縮小，光線要偏暗些，并將計數室移至視野中央。4.

6、 在高倍鏡下計數：隨機地計數五個中格內的菌數，在高倍鏡下計數：隨機地計數五個中格內的菌數，然后求得每個中格的平均值。乘上然后求得每個中格的平均值。乘上16（或（或25）就得出）就得出一大格中的總菌數，最后再換算到每毫升菌液中的含一大格中的總菌數，最后再換算到每毫升菌液中的含菌數量。由于菌體細胞在血球計數板上處于不同的空菌數量。由于菌體細胞在血球計數板上處于不同的空間位置，要在不同的焦距下才能看到，故觀察時必須間位置，要在不同的焦距下才能看到，故觀察時必須不斷調節(jié)微調節(jié)器，方能數到全部菌體，以免遺漏。不斷調節(jié)微調節(jié)器，方能數到全部菌體，以免遺漏。5. 計算方法：計算方法：酵母菌細胞數毫升酵母菌細

7、胞數毫升=（X1+X2+X3+X4+X5）/5*25（或（或16）101000稀釋倍數稀釋倍數6. 注意事項。注意事項。計數時，為避免重復或遺漏計數，凡是遇到壓在計數時，為避免重復或遺漏計數，凡是遇到壓在方格線上的菌體，一般以壓在底線和右側線上的方格線上的菌體，一般以壓在底線和右側線上的菌體計入本格內，遇到有芽體的酵母時，如果芽菌體計入本格內，遇到有芽體的酵母時，如果芽體和母體同等大時，就按兩個酵母菌體計數。體和母體同等大時，就按兩個酵母菌體計數。7. 計數完畢后，血球計數板要立即清洗干凈，并計數完畢后，血球計數板要立即清洗干凈，并用吸水紙吸干，最后用擦鏡紙擦干凈并放回盒。用吸水紙吸干，最后用擦鏡紙擦干凈并放回盒。思考題思考題為什么計數室內不能有氣泡？試分析產生氣為什么計數室內不能有氣泡？試分析產