痛覺(jué)研究與阿片系統(tǒng)

1、痛覺(jué)及其控制以及阿片痛覺(jué)及其控制以及阿片系統(tǒng)研究進(jìn)展系統(tǒng)研究進(jìn)展陳強(qiáng)陳強(qiáng)2009年年3月月一、痛覺(jué)的機(jī)理和控制一、痛覺(jué)的機(jī)理和控制疼痛是一種令人不快的感覺(jué)和情緒上的感受，伴隨著現(xiàn)有的或潛在的組織損傷。疼痛是一種知覺(jué)體驗(yàn),痛本質(zhì)至今仍是難解之謎。迄今我們知道痛是一種自身保護(hù)機(jī)制,但過(guò)度的痛反應(yīng)能使機(jī)體產(chǎn)生一系列生理病理反應(yīng),重者甚至導(dǎo)致體克、死亡。 疼痛的意義疼痛的意義疼痛是一種警戒信號(hào),表示機(jī)體已經(jīng)發(fā)生組織損傷或預(yù)示即將遭受損傷，通過(guò)神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，引起一系列防御反應(yīng)，保護(hù)機(jī)體避免傷害。疼痛長(zhǎng)期持續(xù)不止，便失去警戒意義，反而對(duì)機(jī)體構(gòu)成難以忍受的精神折磨，嚴(yán)重影響學(xué)習(xí)、工作、飲食和睡眠，降低生活

2、質(zhì)量，產(chǎn)生一種不可忽視的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)問(wèn)題。疼痛的產(chǎn)生疼痛的產(chǎn)生由一定的刺激（傷害性刺激）作用于外周感受器（傷害性感受器），換能后轉(zhuǎn)變成神經(jīng)沖動(dòng)（傷害性信息），循相應(yīng)的感覺(jué)傳入通路（傷害性傳入通路）進(jìn)人中樞神經(jīng)系統(tǒng)，經(jīng)脊髓、腦干、間腦中繼后直到大腦邊緣系統(tǒng)和大腦皮質(zhì)，通過(guò)各級(jí)中樞整合后產(chǎn)生疼痛感覺(jué)和疼痛反應(yīng)。傷害性感受器通常是指接受身體和內(nèi)臟傷害刺激的第一級(jí)神經(jīng)元。它們大多數(shù)是游離神經(jīng)末梢少數(shù)帶有附屬結(jié)構(gòu)，分布在皮膚、肌肉、關(guān)節(jié)和內(nèi)臟器官。目前已確定的傷害性感受器主要有以下三類(lèi)：（1）與C類(lèi)纖維有關(guān)的機(jī)械熱傷害性感受器，對(duì)高強(qiáng)度的機(jī)械、物理（冷和熱）和化學(xué)刺激均可發(fā)生反應(yīng)，又稱(chēng)多模式傷害性感受器。

3、（2）與A類(lèi)纖維有關(guān)的機(jī)械熱傷害性感受器，信號(hào)傳導(dǎo)速度比第一種快。（3）非機(jī)械傷害性感受器，大多位于關(guān)節(jié)部位，正常時(shí)對(duì)機(jī)械性刺激不敏感，有炎癥時(shí)可對(duì)機(jī)械刺激發(fā)生反應(yīng)。游離的神經(jīng)末梢，廣泛分布于機(jī)體的皮膚、肌肉、關(guān)節(jié)和內(nèi)臟等不同組織。傷害性感受器一般是由傷害性脊神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion, DRG）神經(jīng)元發(fā)出，這種傷害性DRG神經(jīng)元的動(dòng)作電位具有明顯的特征，即在動(dòng)作電位的下降支有一“駝峰”，這是Ca2離子緩慢內(nèi)流所致，也是判斷一個(gè)神經(jīng)元是否為傷害性神經(jīng)元的重要依據(jù)。傷害信息的傳入傷害信息的傳入 主要是A和C纖維 沿背根進(jìn)入脊髓背角 再將傷害信息傳向脊髓以上的結(jié)構(gòu)，最后到達(dá)大

4、腦皮層。傷害性信號(hào)的上行通路主要有以下幾條：軀干、四肢的痛覺(jué)通路軀干、四肢的痛覺(jué)通路： 脊髓丘腦束 脊髓網(wǎng)狀 脊髓中腦束 后索-內(nèi)側(cè)丘系 脊髓固有束 頭面部的痛覺(jué)通路頭面部的痛覺(jué)通路： 三叉神經(jīng) 三叉丘系內(nèi)臟痛覺(jué)通路：內(nèi)臟痛覺(jué)通路： 交感神經(jīng) 脊髓丘腦束 丘腦內(nèi)有三組核群與痛覺(jué)有關(guān)；它們是生腦腹側(cè)基底復(fù)合體、后核群和內(nèi)側(cè)核群。 大腦皮層的第二體感區(qū)與痛覺(jué)有很大的關(guān)系，并可引起情緒反應(yīng)。痛覺(jué)的整合中樞痛覺(jué)的整合中樞痛覺(jué)的整合中樞痛覺(jué)的整合中樞疼痛的中樞機(jī)制疼痛的中樞機(jī)制閘門(mén)控制學(xué)說(shuō)閘門(mén)控制學(xué)說(shuō) 閘門(mén)控制學(xué)說(shuō)是由Melzac & Wall在1965年提出來(lái)的該學(xué)說(shuō)設(shè)想在脊髓后角存在一種神經(jīng)

5、調(diào)節(jié)機(jī)制，使神經(jīng)信號(hào)在誘發(fā)痛知覺(jué)和痛反應(yīng)前就受到閘門(mén)控制，這個(gè)閘門(mén)可以增強(qiáng)或減弱傷害性信號(hào)的傳遞。 傳導(dǎo)疼痛的神經(jīng)纖維有二，即直徑大的粗纖維和直徑小的細(xì)纖維。前者傳導(dǎo)淺表性的銳痛，后者傳導(dǎo)深部性鈍痛和灼痛。這兩種纖維傳到閘門(mén)外的信號(hào)的對(duì)比可以決定閘門(mén)的開(kāi)和關(guān)。當(dāng)粗纖維（ A ）傳導(dǎo)時(shí)，形成閘門(mén)關(guān)閉效應(yīng)，而細(xì)纖維（C）傳達(dá)時(shí)，形成閘門(mén)開(kāi)放效應(yīng)。閘門(mén)的活動(dòng)可以受到來(lái)自大腦的下行性影響。 現(xiàn)已證明高位腦的下行抑制系統(tǒng)至少包括內(nèi)源性阿片肽、5-羥色胺(5-HT)和去甲腎上腺素(NA)三種遞質(zhì)系統(tǒng)。脊髓背角的第二層,被認(rèn)為是閘門(mén)所在NNN+-Pain fibreSensory fibreAscendin

6、g pain CDescendinginhibitionPainSensationDescending facilitation-NTouch A 疼痛的效應(yīng)疼痛的效應(yīng) 疼痛可使機(jī)體各系統(tǒng)發(fā)生相應(yīng)的改變，如疼痛刺激心血管系統(tǒng)，使脈博加快，血壓升高，心肌耗氧量增加，對(duì)老年或有心臟病者就注意疼痛可能引起冠狀動(dòng)脈供血中足而產(chǎn)生心絞痛，組織缺血甚至心缺梗塞。 在內(nèi)分泌系統(tǒng)，疼痛使可的松（腎上腺皮質(zhì)激素）釋放增加，物質(zhì)代謝增強(qiáng)，病人出現(xiàn)消瘦，傷口愈合緩慢。疼痛與心理活動(dòng)的關(guān)系疼痛與心理活動(dòng)的關(guān)系 不同的病人疼痛的反應(yīng)不同。病人的心理狀態(tài)如病人的個(gè)性、對(duì)疼痛的耐受力、對(duì)疼痛的理解等均可影響病人的疼痛行為。

7、焦慮和疼痛通常難以分清，疼痛病人常可表現(xiàn)出與焦慮有關(guān)的行為，如出汗、發(fā)顫、畏縮等；而與焦慮有關(guān)的感覺(jué)如恐懼等?？捎绊懲吹母杏X(jué)。有證據(jù)顯示，生活充滿焦慮的人，表達(dá)疼痛的計(jì)分比較少焦慮的人為高。疼痛的控制疼痛的控制 麻醉性鎮(zhèn)痛藥如嗎啡，非類(lèi)固醇抗炎癥藥物如阿司匹林都具有明顯的緩解疼痛的作用，但是有很多類(lèi)型的疼痛仍然很難控制，并且這些藥物的也有較大副作用。 由于神經(jīng)科學(xué)的快速發(fā)展，在痛覺(jué)和鎮(zhèn)痛方面的研究也已取得了很大成績(jī)，關(guān)于鎮(zhèn)痛藥物的研究也已顯露出了曙光。 階梯用藥止痛法： WHO提出止痛治療的框架方案是依疼痛程度使用止痛藥的系統(tǒng)方法。 第一階梯為非麻醉止痛藥，如非類(lèi)固醇類(lèi)抗炎藥非那西丁、阿斯匹林

8、等，適用于因高度炎癥性反應(yīng)所致的外周性輕、中度疼痛、慢性疼痛，如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、頭痛、腰痛等。這類(lèi)藥物能抑制外同周前列腺素合成中的關(guān)鍵酶環(huán)加氧酶的活性，使受損傷細(xì)胞列腺素的產(chǎn)生和釋放減少，從而使傷害性感受器的活動(dòng)減弱。副作用為使?jié)儾∪说臐兗觿∩踔脸鲅?第二階梯為弱效麻醉性藥物，如可待因等，可與非類(lèi)固醇類(lèi)抗炎藥共用，兩者有協(xié)同鎮(zhèn)痛作用。適用于中等疼痛或第一階梯止痛藥效果不理想的病人。副作用為連續(xù)使用可發(fā)生耐受性及成癮性，宜控制使用。 第三階梯為強(qiáng)效麻醉性止痛藥，如度冷丁、嗎啡等。適用于中重度疼痛如內(nèi)臟痙攣性疼痛、手術(shù)后疼痛、癌癥疼痛等。此類(lèi)藥物能與脊髓及腦內(nèi)的阿片受體結(jié)合，提高痛閾，還可改

9、善疼痛心理反應(yīng)，抑制焦慮情緒，止痛效果明顯。副作用有惡心、嘔吐頭暈、呼吸抑制等，易產(chǎn)生成癮性及耐受性。 鎮(zhèn)痛藥（analgesics）是指作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在不影響患者意識(shí)狀態(tài)下選擇性地解除或減輕疼痛的藥物。鎮(zhèn)痛藥物鎮(zhèn)痛藥物 阿斯匹林： 屬于非固醇類(lèi)抗炎藥nonsteroidal anti-inflammatory medications (NSAIDs) 的一種。人們一直希望找到一種具有多種功能的藥，阿司匹林就是。它抑制機(jī)體的一個(gè)中間過(guò)程，即阻礙前列腺素（用于攜帶局部信息的關(guān)鍵激素）的產(chǎn)生。大多數(shù)激素是由專(zhuān)門(mén)的腺體產(chǎn)生，然后通過(guò)血液運(yùn)送到全身。而前列腺素不同，它是由細(xì)胞產(chǎn)生，在被分解之前，

10、只作用于周?chē)鷧^(qū)域。它傳遞和增強(qiáng)疼痛信號(hào)，并緩解炎癥。前列腺素有多種，但都由一種普通的前體分子產(chǎn)生。 環(huán)氧合酶完成脂肪酸產(chǎn)生前列腺素的第一步。它把2分子氧加到花生四烯酸上，從而激活一系列的反應(yīng)，最后產(chǎn)生大量不尋常的分子。在環(huán)氧合酶的活性部位，阿斯匹林抑制花生四烯酸的聚合。由于這些普通的信號(hào)不被傳遞，所以我們感覺(jué)不到疼痛， 也不會(huì)引起炎癥反應(yīng)。 實(shí)際上，我們?yōu)椴煌挠猛緲?gòu)造了兩種環(huán)氧合酶（環(huán)氧合酶1和環(huán)氧合酶2）。環(huán)氧合酶1在許多不同的細(xì)胞內(nèi)存在，用來(lái)產(chǎn)生處理全身基本信息的前列腺素。第二種酶只存在于專(zhuān)門(mén)的細(xì)胞內(nèi)，用來(lái)發(fā)出疼痛和炎癥信號(hào)?？上У氖牵⑺蛊チ謱?duì)兩種酶都攻擊。一旦環(huán)氧合酶1被攻擊，阿斯匹

11、林就能導(dǎo)致令人討厭的并發(fā)癥狀，如胃出血。但可喜的是，我們現(xiàn)在可以得到一些特殊的藥物，它們只抑制環(huán)氧合酶2，使環(huán)氧合酶1可以執(zhí)行它的基本功能。這些新藥是選擇性的止痛藥和退燒藥， 并沒(méi)有副作用。 塞來(lái)昔布塞來(lái)昔布(Celecoxib) 新型非甾體抗炎藥、新型COX-2專(zhuān)一性抑制劑，由Pharmacia和Pfizer公司共同開(kāi)發(fā)，1999年1月上市，上市當(dāng)年即成為“重磅炸彈”級(jí)藥物，一直位居全球藥品銷(xiāo)售額前十名，年銷(xiāo)售額超過(guò)30億美金。最近，該藥用于家族性結(jié)腸息肉的新適應(yīng)癥獲得又FDA通過(guò)；其用于老年癡呆癥的研究也已進(jìn)入期臨床階段。 一項(xiàng)新的研究表明，Celecoxib能夠通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞死亡、抑制細(xì)胞

12、增殖。 People who take nonsteroidal anti-inflammatory medications (NSAIDs) such as celecoxib may have a higher risk of having a heart attack or a stroke than people who do not take these medications. These events may happen without warning and may cause death. 阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥 通過(guò)激動(dòng)中樞神經(jīng)特定部位阿片受體而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用，故稱(chēng)為阿片

13、類(lèi)鎮(zhèn)痛藥（opioid analgesics）。阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥包括阿片生物堿類(lèi)及其人工合成品，鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)大，抑制呼吸和欣快（euphoria）作用明顯，長(zhǎng)期應(yīng)用易產(chǎn)生耐受性（tolerance）和依賴(lài)性（dependence）。 阿阿片（opium）為罌粟科植物罌粟（Papaver somniferum）未成熟蒴果漿汁的干燥物，含20余種生物堿，其中僅有嗎啡（morphine）、可待因和罌粟堿具有臨床藥用價(jià)值。嗎啡屬于菲類(lèi)生物堿，1803年德國(guó)學(xué)者Sertrner首次從阿片中分離出來(lái)?？纱蚴前⑵械牧硪恢匾祁?lèi)生物堿，也能產(chǎn)生阿片樣作用，但鎮(zhèn)痛作用較嗎啡弱。罌粟堿屬異喹啉類(lèi)生物堿，具有松弛平滑

14、肌作用。 嗎啡(Morphine)是鴉片中的主要生物堿，已有200多年歷史。嗎啡為白色針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，有苦味，遇光易變質(zhì)，溶于水，略溶于乙醇。嗎啡為麻醉性鎮(zhèn)痛藥，有強(qiáng)大的止痛作用，對(duì)各種疼痛都有鎮(zhèn)痛效果。臨床上主要用于外科手術(shù)和外傷性劇痛、晚期癌癥劇痛等，也用于心絞痛發(fā)作時(shí)止痛和鎮(zhèn)靜作用。 久用可產(chǎn)生嚴(yán)重的依賴(lài)性，一旦失去供給，將會(huì)產(chǎn)生流汗、顫抖、發(fā)熱、血壓升高、肌肉疼痛和痙攣等明顯的戒斷癥狀。長(zhǎng)期使用嗎啡，會(huì)引發(fā)精神失常，大劑量吸食嗎啡，會(huì)導(dǎo)致呼吸停止而死亡。 嗎啡可影響膽堿能系統(tǒng)活性致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙。 度冷丁(哌替啶)是人工合成的阿片受體激動(dòng)劑，度冷丁普遍地使用于臨床，它對(duì)人體的作

15、用和機(jī)理與嗎啡相似，但鎮(zhèn)痛、麻醉作用較小，僅相當(dāng)于嗎啡的1/101/8，注射度冷丁后，血液和腦內(nèi)的濃度迅速上升，容易引起“飄”感。它在體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生一種名為去甲 哌替啶的毒性代謝物，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有著明顯興毒性。度冷丁有一定的成癮性，連續(xù)使用1-2周便可產(chǎn)生藥物依賴(lài)性。藥物耐受性和藥物依賴(lài)性藥物耐受性和藥物依賴(lài)性 耐受性tolerance是指人體對(duì)藥物反應(yīng)性降低的一種狀態(tài)，按其性質(zhì)有先天性和后天獲得性之分。前者對(duì)藥物的耐受性可長(zhǎng)期保留，多與這類(lèi)患者體內(nèi)某些藥物代謝酶過(guò)度活躍有關(guān)。后者往往是連續(xù)多次用藥后才發(fā)生的，增加劑量后可能達(dá)到原有的效應(yīng)；停止用藥一段時(shí)間后，其耐受性可以逐漸消失，重新恢復(fù)到原有

16、的對(duì)藥物反應(yīng)水平。容易產(chǎn)生耐受性的藥物如硝酸甘油、安定等。 耐藥性resistance又稱(chēng)抗藥性是指病原微生物對(duì)藥物反應(yīng)性降低的一種狀態(tài)。這種情況主要是由于長(zhǎng)期應(yīng)用抗菌藥物，病原微生物通過(guò)產(chǎn)生使藥物失活的酶，改變?cè)写x過(guò)程等機(jī)理，而產(chǎn)生的一種使藥物效果降低的反應(yīng)。要想達(dá)到原有殺菌效果，往往需要加大藥物劑量；有時(shí)加大藥物劑量也不能再殺死這些耐藥病菌。 藥物依賴(lài)性dependence 與成癮性藥物依賴(lài)性是指藥物與人體相互作用所產(chǎn)生的一種精神狀態(tài)，有時(shí)也包括身體狀態(tài)，表現(xiàn)出一種強(qiáng)烈使用或定期使用該藥行為反應(yīng)，目的是為了體驗(yàn)這種藥物的精神效應(yīng)，有的也是為了避免由于斷藥所引起的不舒適。 根據(jù)依賴(lài)情況，

17、可分為：（1）身體依賴(lài)性，又稱(chēng)生理依賴(lài)性，是由于反復(fù)用藥所造成的一種適應(yīng)狀態(tài)，中斷用藥后可產(chǎn)生一種強(qiáng)烈的軀體方面的損害，即戒斷綜合征，如肌肉關(guān)節(jié)疼痛、全身難受、四肢不適、全身乏力、心慌、煩躁不安、納差、流涕、哈欠連連等，不同成癮藥物引起的戒斷綜合征略有不同，這種情況也就是通常人們所說(shuō)的“成癮性”。能產(chǎn)生身體依賴(lài)性的藥物主要是中樞鎮(zhèn)痛藥物，如嗎啡、度冷丁、阿片等。（2）精神依賴(lài)性，又稱(chēng)心理依賴(lài)性，它使人產(chǎn)生一種要周期性或連續(xù)性地使用藥物的欲望，產(chǎn)生強(qiáng)烈的用藥行為，以獲得滿足或避免不適感。產(chǎn)生精神依賴(lài)性的藥物在斷藥時(shí)一般不出現(xiàn)身體戒斷癥狀，這是與身體依賴(lài)性的區(qū)別點(diǎn)。常導(dǎo)致產(chǎn)生精神依賴(lài)性的藥物主要有

18、催眠類(lèi)藥物，如安定、舒樂(lè)安定、利眠寧、阿普唑倫等。 為了避免藥物耐受性、耐藥性、依賴(lài)性和成癮性的產(chǎn)生，關(guān)鍵要合理用藥，而且要在醫(yī)生指導(dǎo)下，根據(jù)病情需要使用。二、疼痛的動(dòng)物模型與研究方法二、疼痛的動(dòng)物模型與研究方法 疼痛是多種疾病的癥狀，動(dòng)物疼痛模型建立對(duì)闡明疼痛疾病的發(fā)病機(jī)理以及探討藥物作用原理都具有重要的理論意義和臨床前研究?jī)r(jià)值。動(dòng)物疼痛模型除了常用的熱刺激法、電刺激法、機(jī)械刺激和化學(xué)刺激等試驗(yàn)方法外，近幾年來(lái)建立動(dòng)物疼痛模型，主要是通過(guò)疾病或外傷誘發(fā)模型動(dòng)物的疼痛來(lái)模擬人類(lèi)疼痛的動(dòng)物模型。 神經(jīng)病理性痛模型神經(jīng)病理性痛模型神經(jīng)損傷：神經(jīng)瘤、慢性壓迫性損傷、部分神經(jīng)損傷、背根節(jié)慢性壓迫、低溫

19、神經(jīng)損傷中樞神經(jīng)痛模型炎癥痛模型炎癥痛模型癌癥痛模型癌癥痛模型甩尾反射模型甩尾反射模型熱輻射或熱水甩尾機(jī)械刺激甩尾熱熱(冷冷)板反應(yīng)模型板反應(yīng)模型內(nèi)臟痛模型內(nèi)臟痛模型化學(xué)誘導(dǎo)的軀體扭動(dòng)模型膨脹結(jié)腸模型扭體模型扭體模型 可采用小鼠或大鼠 有多種刺激物都可誘發(fā)動(dòng)物扭體(writhing)行為 最常見(jiàn)的刺激物是醋酸(acetic acid)。將1克阿拉伯膠(arabic gum)加入9ml濃度為1%的醋酸溶液中，再注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)，觀察注射后90分鐘期間每15分鐘內(nèi)出現(xiàn)典型扭體癥狀的次數(shù) 該模型可以模擬腹腔炎癥引起的腹痛癥狀白陶土白陶土-鹿角菜膠炎癥模型鹿角菜膠炎癥模型 白陶土(Kaolin)是一種

20、細(xì)顆粒狀物質(zhì)，成分為氧化鋁，起機(jī)械刺激作用；鹿角菜膠(carrageenan)是由水生植物鹿角菜中提取的膠體物質(zhì)，具有過(guò)敏刺激作用。鹿角菜膠單獨(dú)實(shí)驗(yàn)即可誘發(fā)炎癥，若與白陶土合并使用，則炎癥更為強(qiáng)烈 可采用家兔或大鼠 麻醉動(dòng)物，由一側(cè)后肢足底注入4%白陶土混懸液0.1ml，并按摩5分鐘使之在組織中分散。在注射后1小時(shí)，再注入2%鹿角菜膠溶液0.05ml并按摩5分鐘。炎癥過(guò)程一般在第一次注射后2小時(shí)內(nèi)開(kāi)始。動(dòng)物后足紅腫，皮溫升高，PWT值降低等類(lèi)似痛敏的癥狀 一般能持續(xù)12小時(shí)以上，24小時(shí)后基本復(fù)原。因而本模型屬于亞急性炎癥痛模型范圍 本模型亦可采用關(guān)節(jié)腔注射福爾馬林致痛模型福爾馬林致痛模型 模

21、擬組織急性炎癥損傷所致的持續(xù)性疼痛 大鼠或小鼠 足底福爾馬林致痛模型：在動(dòng)物一肢足底皮下注射稀釋的福爾馬林(formalin)溶液，動(dòng)物的行為改變，如安靜時(shí)的屈腿、運(yùn)動(dòng)時(shí)的跛行以及舔足等。這些行為的程度(如舔足時(shí)間)與福爾馬林濃度成正比 面部福爾馬林致痛模型：把不同濃度的福爾馬林溶液(0.210%)皮下注射到大鼠的右上唇，記錄注射后每3分鐘時(shí)間內(nèi)動(dòng)物用同側(cè)前肢或后肢摩擦注射部位的秒數(shù)作為痛分?jǐn)?shù) 各種癥狀普遍分為兩個(gè)時(shí)相： 急性相或第一相：前5分鐘。之后有5-10分鐘的間歇 持續(xù)相或第二相：1560分鐘 兩相均可用于實(shí)驗(yàn)，但以第二相為常用。兩個(gè)時(shí)相的發(fā)生機(jī)制并不相同炎癥痛模型炎癥痛模型 infl

22、ammatory pain model 多發(fā)性佐劑關(guān)節(jié)炎模型 含高濃度結(jié)核桿菌的福氏佐劑，向大鼠尾根部或足底作皮內(nèi)注射，一側(cè)或雙側(cè)后肢通常首先出現(xiàn)多個(gè)關(guān)節(jié)的炎癥 單發(fā)性佐劑關(guān)節(jié)周?chē)啄Ｐ?完全福氏佐劑注射到動(dòng)物后肢足底，造成單個(gè)關(guān)節(jié)周?chē)植拷M織的炎癥反應(yīng) 單發(fā)性佐劑關(guān)節(jié)腔炎模型 將高濃度的福氏佐劑直接注射到大鼠后肢踝關(guān)節(jié)腔中，引起一個(gè)具有急性、慢性?xún)上嗟母叨染窒薜年P(guān)節(jié)炎癥 福氏佐劑關(guān)節(jié)炎模型 福氏佐劑足底炎癥模型Chronic Inflammatory Pain Model - MonoarthritisAnkle joint:intra-articular injection of CFAW

23、eek 1: acute periodWeek 2-3: subacute periodWeek 4-9: chronic period常用的痛刺激方法常用的痛刺激方法 熱刺激 冷刺激 機(jī)械刺激 化學(xué)刺激 電刺激 缺血實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的疼痛評(píng)價(jià)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的疼痛評(píng)價(jià)方法 較理想的行為學(xué)評(píng)價(jià)方法應(yīng)該具備 能區(qū)分動(dòng)物對(duì)傷害性和非傷害性刺激的不同反應(yīng) 痛刺激引起的行為反應(yīng)隨刺激強(qiáng)度從痛閾到耐痛閾間出現(xiàn)相應(yīng)改變 測(cè)得的行為改變可以反映動(dòng)物的痛感受 動(dòng)物的行為反應(yīng)對(duì)鎮(zhèn)痛藥物的處理敏感 能將非感覺(jué)性變化，如注意力、活動(dòng)能力等與感覺(jué)性變化區(qū)分開(kāi) 反復(fù)刺激不引起或只引起極小的組織損傷 小鼠甩尾實(shí)驗(yàn)或熱板法熱刺激的痛覺(jué)

24、檢測(cè)方法化學(xué)刺激的痛覺(jué)檢測(cè)方法福爾馬林試驗(yàn)（formalin test）和小鼠扭體試驗(yàn)（writhing test） 在本實(shí)驗(yàn)中主要是利用福爾馬林（化學(xué)刺激、延長(zhǎng)的保護(hù)性活動(dòng)）試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)阿司匹林的鎮(zhèn)痛藥效，并觀察0.6 %的醋酸溶液所引起的小鼠扭體反應(yīng)。稱(chēng)量小鼠的體重，用于注射福爾馬林的后右腳掌進(jìn)行標(biāo)記，以便于行為學(xué)反應(yīng)觀察；將小鼠放入大玻璃燒杯（1500或2000 ml）中，讓它適應(yīng)環(huán)境1015min；下面放置傾斜30度的鏡子，以便于觀察小鼠的足部反應(yīng)；配好藥物：生理鹽水（0.9 %的NaCl溶液）和不同濃度的阿司匹林溶液（1 mg/ml；10 mg/ml；100 mg/ml）；在注射福爾馬

25、林溶液前30 min提前腹腔注射空白對(duì)照（溶劑對(duì)照）待測(cè)的藥物；然后迅速將小鼠放回玻璃大燒杯中；在腹腔注射后30 min，將小鼠取出，將小鼠裝入小紙筒或用手輕柔的抓住后，在其標(biāo)記的后右腳掌的腳底中間皮膚下用微量進(jìn)樣器注射20 l的福爾馬林溶液，迅速放回?zé)校婚_(kāi)始計(jì)時(shí)，并在注射后40 min記錄小鼠的行為學(xué)反應(yīng)；一般福爾馬林會(huì)引起兩個(gè)時(shí)相的反應(yīng)：010min出現(xiàn)的第I相（早期相），此反應(yīng)主要是直接刺激C纖維所致；1060min出現(xiàn)的第II相，一般認(rèn)為有炎癥機(jī)制參與。近年來(lái)用于用于記錄方法有兩種：v第一種：記錄每分鐘內(nèi)出現(xiàn)各級(jí)反應(yīng)的秒數(shù)，并根據(jù)反應(yīng)的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：舔、咬或抖足為3分； 提足

26、2分；輕觸面但不負(fù)重，行走時(shí)跛行1分；正常負(fù)重，走動(dòng)自如0分）來(lái)計(jì)算相應(yīng)的每分鐘的反應(yīng)分?jǐn)?shù)，即各級(jí)反應(yīng)的秒數(shù)乘以相應(yīng)反應(yīng)的分?jǐn)?shù)，以乘積之和為疼痛定量的指標(biāo)（最大值為60秒3分180）v第二種：記錄不同時(shí)相舔、抖被注射足時(shí)間為疼痛指標(biāo)。重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)操作，直至獲得所需的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物只數(shù)。熱板測(cè)痛儀熱板測(cè)痛儀光熱測(cè)痛儀光熱測(cè)痛儀三、內(nèi)源性痛覺(jué)調(diào)節(jié)系統(tǒng)三、內(nèi)源性痛覺(jué)調(diào)節(jié)系統(tǒng) 人們?cè)O(shè)想腦內(nèi)的阿片受體不可能專(zhuān)為外源性阿片堿類(lèi)藥物而存在，在體內(nèi)很可能存在相應(yīng)的內(nèi)源性阿片樣物質(zhì)與之結(jié)合參與疼痛的調(diào)節(jié)。（一）內(nèi)源性阿片肽（一）內(nèi)源性阿片肽 哺乳動(dòng)物體內(nèi)天然產(chǎn)生的具有嗎啡或鴉片樣活性的物質(zhì)，在結(jié)構(gòu)上屬于肽類(lèi)可以分為五

27、大類(lèi)。 強(qiáng)啡肽孤啡肽內(nèi)嗎啡肽-內(nèi)啡肽腦啡肽內(nèi)阿片肽內(nèi)阿片肽（二）阿片受體（二）阿片受體是典型的G蛋白耦聯(lián)受體,通過(guò)藥理學(xué)試驗(yàn)可分為四大類(lèi)Opioid receptorreceptorreceptorreceptororphan receptor( (三三) )內(nèi)阿片肽和阿片受體的發(fā)現(xiàn)內(nèi)阿片肽和阿片受體的發(fā)現(xiàn) 1973年采用放射性配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)和藥理學(xué)手段發(fā)現(xiàn)阿片受體。 1975年運(yùn)用生物化學(xué)方法分離和純化阿片受體的內(nèi)源性配基內(nèi)源性阿片肽(腦啡肽，內(nèi)啡肽和強(qiáng)啡肽)，這兩個(gè)發(fā)現(xiàn)使人們對(duì)阿片類(lèi)藥物作用的分子基礎(chǔ)有了深入的認(rèn)識(shí)。 1992年采用分子生物學(xué)技術(shù)從NGlOS15細(xì)胞上克隆出受體后，已相繼從不

28、同種屬的動(dòng)物上克隆出阿片受體三個(gè)亞型、和受體。 1994年從人和大鼠cDNA文庫(kù)中篩選到另一類(lèi)阿片受體，其藥理性質(zhì)明顯不同于己發(fā)現(xiàn)的阿片受體，稱(chēng)之為阿片受體家族中的“孤兒受體”(orphan receptor)。 1995年從猴及大鼠中分離到孤兒受體的內(nèi)源性配基，稱(chēng)為孤啡肽(nociceptin) 1996年-1998年阿片受體（、和）基因敲出小鼠制備成功，這將對(duì)三類(lèi)阿片受體在嗎啡類(lèi)鎮(zhèn)痛及成癮機(jī)理的進(jìn)一步了解有十分重要的作用。 1997年的又一重要新發(fā)現(xiàn)：即從牛前 腦皮層中分離純化得到兩個(gè)高選擇性 受體的內(nèi)源性配體，叫 endomorphine-1（內(nèi)源性嗎啡-1）及 endomorphine

29、-2（內(nèi)源性嗎啡-2）。( (四四) )內(nèi)源性阿片肽家族各成員概述內(nèi)源性阿片肽家族各成員概述腦啡肽(enkephalin)：包括蛋氨酸腦啡肽和亮啡肽，對(duì)受體的選擇性較強(qiáng)，被認(rèn)為是受體的內(nèi)源性配體。前腦啡肽原基因編碼263或267個(gè)氨基酸殘基的前腦啡肽原，經(jīng)酶切加工出蛋氨酸腦啡肽和亮啡肽。腦啡肽主要由腦內(nèi)和下行痛覺(jué)調(diào)制神經(jīng)元以及腎上腺髓質(zhì)表達(dá)，在中樞腦啡肽是重要的鎮(zhèn)痛介質(zhì)，許多抑制性遞質(zhì)通過(guò)腦啡肽介導(dǎo)的阿片受體作用發(fā)揮鎮(zhèn)痛效應(yīng)。 腦啡肽在疼痛信號(hào)弱時(shí)釋放不增加，而在強(qiáng)烈刺激時(shí)才有大量的釋放 。亮腦啡肽序列和三維結(jié)構(gòu)亮腦啡肽序列和三維結(jié)構(gòu) Tyr-G1y-G1y-Phe-Leu-OHTyr-G1y

30、-G1y-Phe-Leu-OH甲腦啡肽序列和三維結(jié)構(gòu) Tyr-G1y-G1y-Phe-Met-OH強(qiáng)啡肽(dynorphindynorphin)：強(qiáng)啡肽由前強(qiáng)啡肽原基 因編碼，經(jīng)酶切加工出強(qiáng)啡肽A和強(qiáng)啡肽B，腦內(nèi)和脊髓神經(jīng)元都可分泌。強(qiáng)啡肽是受體的特異性配體。在脊髓水平，強(qiáng)啡肽的作用存在比較復(fù)雜。生理水平的強(qiáng)啡肽起鎮(zhèn)痛作用，同時(shí)它能維持其他阿片肽在脊髓的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，而在脊髓損傷和坐骨神經(jīng)損傷時(shí)腦脊液中的強(qiáng)啡肽水平明顯升高，研究表明，強(qiáng)啡肽能通過(guò)NMDA受體誘導(dǎo)脊髓損傷。許多慢性疼痛動(dòng)物或病人腦脊液內(nèi)強(qiáng)啡肽水平并未減少，相反，隨著疼痛時(shí)間延長(zhǎng)，強(qiáng)啡肽的水平越高。 強(qiáng)啡肽A序列和三維結(jié)構(gòu)圖 Tyr-

31、Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-Ile-Arg-Pro-Lys-Leu-Lys-Trp-Asp-Asn-Gln-OH 強(qiáng)啡肽B序列和三維結(jié)構(gòu)圖 Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Arg-Gln-Phe-Lys-Val-Val-Thr -內(nèi)啡肽(beta-endorphin)：-內(nèi)啡肽由POMC基因編碼的趨脂素經(jīng)蛋白水解酶PC2水解產(chǎn)生，對(duì)u和受體均有較強(qiáng)的親和力 。 在脊髓蛛網(wǎng)膜下腔內(nèi)注射-內(nèi)啡肽，除了可以直接作用于受體外，還可以通過(guò)結(jié)合脊髓后角受體促進(jìn)腦啡肽分泌而產(chǎn)生強(qiáng)鎮(zhèn)痛效應(yīng)。 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)只有腺垂體和下丘腦的神經(jīng)分泌細(xì)胞分泌通路細(xì)胞器中含有PC2水解酶能

32、夠產(chǎn)生成熟的-內(nèi)啡肽，而感覺(jué)神經(jīng)元和中間神經(jīng)元不能分泌-內(nèi)啡肽。 -內(nèi)啡肽序列和三維結(jié)構(gòu)圖 Tyr-G1y-G1y-Phe-Met-Thr-Ser-G1u-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-A1a-Ile-I1e-Lys-Asn-Val-His-Lys-Lys-G1y-Gln-OH 孤啡肽(nociceptin，OFQ) ：孤啡肽的氨基酸序列結(jié)構(gòu)與強(qiáng)啡肽比較相似，都是17肽，但它對(duì)、受體的親和力很弱，對(duì)孤兒(ORL1)受體親和力強(qiáng)。孤啡肽可引起痛敏，腦室內(nèi)微量注射可導(dǎo)致大鼠痛閾降低基因，并且可以抑制嗎啡的抗傷害鎮(zhèn)痛效應(yīng)。 孤啡肽序列

33、和三維結(jié)構(gòu)圖 Phe-G1y-G1y-Phe-Thr-G1y-Ala-Arg-Lys-Ser-A1a-Arg-Lys-Leu-A1a-Asn-G1n-OH內(nèi)嗎啡肽(endomorphin)：一種四肽氨基酸，對(duì)受體具有高選擇性、強(qiáng)效的親和力，它的氨基酸序列是Tyr-Pro-Trp-Phe-NH，主要分布于腦內(nèi)。根據(jù)EM-1特異抗體又找到結(jié)構(gòu)類(lèi)似的EM-2，主要分布于腦內(nèi)和脊髓內(nèi)，與前者的區(qū)別在于第三位上的氨基酸改為Phe，它對(duì)受體的親和力比EM-1更高。腦和脊髓蛛網(wǎng)膜下腔內(nèi)注射內(nèi)嗎啡肽或類(lèi)似物，可產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，對(duì)于炎性疼痛的治療作用更為明顯，對(duì)于神經(jīng)痛EM也能有效鎮(zhèn)痛，同時(shí)對(duì)嗎啡耐受的大鼠

34、神經(jīng)痛仍具有效果。內(nèi)嗎啡肽是一個(gè)比較合適的治療頑固性疼痛的分子。但是內(nèi)嗎啡肽成癮還是不能解決的一個(gè)問(wèn)題。 EM-1: Tyr-Pro-Trp-Phe-NH2 EM-2: Tyr-Pro-Phe-Phe-NH2內(nèi)源性阿片肽的前體內(nèi)源性阿片肽的前體 前阿黑皮素(POMC)是內(nèi)啡肽的前體。 前腦啡肽(或稱(chēng)前腦啡肽A)是甲硫腦啡肽和亮腦啡肽的前體。 前強(qiáng)啡肽(或稱(chēng)前腦啡肽)是各類(lèi)強(qiáng)啡肽的前體。 阿片肽是其前體經(jīng)過(guò)系列酶解后產(chǎn)生的。(五五) 阿片受體研究阿片受體研究受體由398個(gè)氨基酸組成，具有G蛋白相關(guān)受體結(jié)構(gòu)特征endomorphine-1（內(nèi)源性嗎啡-1）及 endomorphine-2（內(nèi)源性嗎啡-2）是其高選擇性的內(nèi)源性配體。 研究表明，受體主要介導(dǎo)嗎啡鎮(zhèn)痛、位置偏愛(ài)和身體依賴(lài)性作用.受體有受體有372372個(gè)氨基酸組成，該受體有七個(gè)疏水性的跨個(gè)氨基酸組成，該受體有七個(gè)疏水性的跨膜區(qū)域。膜區(qū)域。2005年8