實(shí)驗(yàn)五 巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的觀察

1、實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的觀察巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?1、通過對小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞活動(dòng)的觀察，加深理解細(xì)胞吞噬作用的過程及其意義；2、掌握小白鼠腹腔注射給藥和頸椎脫臼處死方法。 實(shí)驗(yàn)原理 細(xì)胞吞噬作用原來是單細(xì)胞動(dòng)物攝取營養(yǎng)物質(zhì)的方法，也是原始防御作用。隨著動(dòng)物界的進(jìn)化，在大多數(shù)高等動(dòng)物體內(nèi)，吞噬作用不再是細(xì)胞的進(jìn)食方式，而是作為防御細(xì)菌、病毒、真菌、原生生物感染的保護(hù)機(jī)制而存在，此外，吞噬作用還能幫助多細(xì)胞動(dòng)物清除受傷后形成的組織碎片和發(fā)育過程中的凋亡細(xì)胞。在高等動(dòng)物體內(nèi)，具有吞噬功能的細(xì)胞包括中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞，即大小兩類吞噬細(xì)胞，專司吞噬作用

2、，成為非特非特異性免疫功能異性免疫功能的重要組成部分。非特異性免疫功能非特異性免疫功能是人類在種系進(jìn)化過程中形成的由遺傳而獲得的免疫防衛(wèi)功能，它是先天就具備的。非特異免疫構(gòu)成機(jī)體生存必不可少的抵抗外來病原體的第一道防線，它對病原體的識(shí)別不具有特異性，也無記憶。實(shí)驗(yàn)原理 巨噬細(xì)胞由骨髓干細(xì)胞分化生成，然后進(jìn)入血液到達(dá)各組織內(nèi)，并進(jìn)一步分化為各種巨噬細(xì)胞各種巨噬細(xì)胞。他們是機(jī)體內(nèi)吞噬能力最強(qiáng)的細(xì)胞。單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞都能消滅侵入機(jī)體的細(xì)胞，吞噬異物顆粒，消除體內(nèi)衰老、損傷的細(xì)胞和變性的細(xì)胞間質(zhì)、殺傷腫瘤。當(dāng)病原微生物或其它異物侵入機(jī)體時(shí)，能招引巨噬細(xì)胞，而巨噬細(xì)胞又有趨化性，能響應(yīng)招引因子的招引，

3、產(chǎn)生活躍的變形運(yùn)動(dòng)，主動(dòng)向病原體和異物移行，在接觸到病原體或異物時(shí)，即伸出偽足，將之包圍并內(nèi)吞入胞質(zhì)，形成吞噬體，繼而細(xì)胞質(zhì)中的初級溶酶體與吞噬泡發(fā)生融合，形成吞噬性溶酶體，通過其中水解酶等作用下，將病原體殺死，消化分解，最后將不能消化的殘?jiān)懦黾?xì)胞外。 參與非特異性免疫的單核細(xì)胞進(jìn)入組織后，可分化成巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞分布廣泛，由于其分布的器官組織不同，使巨噬細(xì)胞不僅具有不同的名稱，而且在形態(tài)和功能上也表現(xiàn)異質(zhì)性，如存在于胸腹腔的游離巨噬細(xì)胞，脾與淋巴結(jié)中的游走和固定的巨噬細(xì)胞，結(jié)締組織中的組織細(xì)胞，肺泡中的塵細(xì)胞，肝組織中的枯氏細(xì)胞、神經(jīng)組織中的小膠質(zhì)細(xì)胞等，這些細(xì)胞都具有吞噬功能。 巨噬細(xì)

4、胞是機(jī)體免疫應(yīng)答的主要細(xì)胞之一，對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物巨噬細(xì)胞吞噬能力的測定，是其非特異免疫能力的檢測的一項(xiàng)重要指標(biāo)，目前本實(shí)驗(yàn)在病理、免疫、腫瘤學(xué)研究領(lǐng)域仍然廣泛使用。由于巨噬細(xì)胞含有大量的溶酶體、吞噬體和殘余體，因此以臺(tái)盼藍(lán)、卡紅染料注射到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)，可以見到巨噬細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)聚集很多藍(lán)色、紅色顆粒，而其他細(xì)胞則不攝取或僅少量攝取染料顆粒，因此常用該方法鑒別巨噬細(xì)胞和其他細(xì)胞。巨噬細(xì)胞的生成單核細(xì)胞（上）和巨噬細(xì)胞（下）單核細(xì)胞（上）和巨噬細(xì)胞（下）吞噬作用吞噬作用溶酶體的功能巨噬細(xì)胞正在吞噬衰老的紅細(xì)胞巨噬細(xì)胞正在吞噬衰老的紅細(xì)胞巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)菌（電鏡）（電鏡）實(shí)驗(yàn)用品實(shí)驗(yàn)用品1.器材：顯微鏡，解剖盤

5、，剪刀，鑷子，離心機(jī)，注射器，吸管，玻片，吸水紙。2.材料 ：小白鼠，1%雞紅細(xì)胞懸液（取無污染的雞血1ml，放入盛有4ml Alsever溶液瓶中，混勻置4冰箱保存?zhèn)溆?，一周?nèi)使用。使用前加入0.85%生理鹽水以1500r/min離心10min，洗滌兩次，再用生理鹽水配成1%濃度懸液。 抽取靜脈血試劑3.試劑：（1）0.85%生理鹽水（2）Alsever溶液：葡萄糖 2.05g檸檬酸鈉 0.89g檸檬酸 0.05g氯化鈉 0.42g蒸餾水 100ml 調(diào)PH值至7.2，過濾滅菌或高壓滅菌10min，置4冰箱保存。 （3）0.4%臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue)染液 臺(tái)盼藍(lán)染粉 0.4g 0.

6、85%生理鹽水 100ml（4）6%淀粉肉湯（含臺(tái)盼藍(lán)染液） 牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1.0g 氯化鈉 0.5g 蒸餾水 100ml 加熱后加入可溶性淀粉6.0克，促使溶解，再煮沸滅菌，置4冰箱保存。用時(shí)水浴融化，加入適量臺(tái)盼藍(lán)染液混勻，使呈藍(lán)色。 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1、在實(shí)驗(yàn)前一天，給小白鼠腹腔注射6%的淀粉肉湯（含臺(tái)盼藍(lán)）1ml。2、實(shí)驗(yàn)時(shí)，取一只注射過淀粉肉湯的小白鼠，腹腔注射1%的雞紅細(xì)胞懸液1ml，輕按小白鼠腹部，使懸液分散。3、20min后，用頸椎脫臼法處死小白鼠（用右手抓住鼠尾，左手拿一把剪刀或鑷子按住頸椎，右手用力向后拉即可）。徒手抓小白鼠給小白鼠腹腔注射給藥給小白鼠腹腔注射給

7、藥實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟4、將小白鼠置于解剖盤中，把腹部剪開一小口子，把內(nèi)臟推向一側(cè)，用吸管吸取適量的生理鹽水沖洗腹腔，并吸取腹腔液，吸時(shí)一吸一松，以免把內(nèi)臟吸出。5、每人取一張干凈載玻片，滴一滴腹腔液，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。6、每人取一張干凈載玻片，滴一滴沒有注射淀粉肉湯的腹腔液，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。 取腹腔液觀察與結(jié)果觀察與結(jié)果 由于細(xì)胞未經(jīng)染色，因此觀察時(shí)視野亮度需要適當(dāng)調(diào)低。巨噬細(xì)胞體積較大，呈圓形或者不規(guī)則形，表面有偽足，胞質(zhì)中含有數(shù)量不等、大小不一的藍(lán)色顆粒，為淀粉顆粒被吞噬后形成的吞噬體。雞紅細(xì)胞為橢圓形、淡黃色，細(xì)胞核也為橢圓形。在顯微鏡下可以觀察到巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的過程：有的紅細(xì)胞位于巨噬細(xì)胞的表面，有的被部分吞入，有的被完全吞入，形成吞噬泡。有的吞噬泡體積縮小、呈圓形，表明已與溶酶體發(fā)生融合，泡內(nèi)物質(zhì)正被消化分解。 巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞過程巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞過程巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞過程巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞過程巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞過程巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞過程吞噬了雞紅細(xì)胞吞噬了雞紅細(xì)胞的吞噬細(xì)胞的吞噬細(xì)胞未被吞噬的雞紅細(xì)胞未被吞噬的雞紅細(xì)胞思考題思考題 1、在高倍鏡下繪出在不同吞噬階段的巨噬細(xì)胞