香豆素分析PPT學習教案

1、會計學1第1頁/共59頁舉例舉例定量分析定量分析定性分析定性分析定義、分布、性質(zhì)定義、分布、性質(zhì)第2頁/共59頁OHCOOH-H2OOO12345678第3頁/共59頁n 簡單香豆素簡單香豆素只在苯環(huán)上有取代基的只在苯環(huán)上有取代基的n呋喃香豆素呋喃香豆素 線型（線型（6 6、7 7）；）； 角型（角型（7 7、8 8）n吡喃香豆素吡喃香豆素線型（線型（6 6、7 7）；）； 角型（角型（7 7、8 8）n其他香豆素其他香豆素 吡喃酮環(huán)上有取代基吡喃酮環(huán)上有取代基的的第4頁/共59頁OOHOOOHOROOOCH3OCH3O傘形花內(nèi)酯傘形花內(nèi)酯 七葉內(nèi)酯七葉內(nèi)酯 R = H R = H 濱蒿內(nèi)酯濱

2、蒿內(nèi)酯 七葉苷七葉苷 R = glc R = glc 第5頁/共59頁第6頁/共59頁OOOOOOOCH3OOOH3CCH3HO 補骨脂內(nèi)酯補骨脂內(nèi)酯 花椒毒內(nèi)酯花椒毒內(nèi)酯 紫花前胡內(nèi)酯紫花前胡內(nèi)酯 第7頁/共59頁 異補骨脂內(nèi)酯異補骨脂內(nèi)酯 茴芹內(nèi)酯茴芹內(nèi)酯 異佛手內(nèi)酯異佛手內(nèi)酯 OOOOOOOCH3CH3O OOOOCH3第8頁/共59頁第9頁/共59頁 花椒內(nèi)酯花椒內(nèi)酯 OOO OOOOCH3美花椒內(nèi)酯美花椒內(nèi)酯第10頁/共59頁 邪蒿內(nèi)酯邪蒿內(nèi)酯 OOO OOOOOOCH3黃曲霉素黃曲霉素B1第11頁/共59頁OOOHOHO O 紫苜蓿酚紫苜蓿酚 OO茵陳炔茵陳炔第12頁/共59頁芎、

3、防風、蛇床子等。芎、防風、蛇床子等。第13頁/共59頁第14頁/共59頁第15頁/共59頁1234第16頁/共59頁 多具芳香氣，能隨水蒸氣揮發(fā)或升華。多具芳香氣，能隨水蒸氣揮發(fā)或升華。 不溶于水或難溶于水，可溶于石油醚、不溶于水或難溶于水，可溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿或乙醇等溶劑中；一般苯、乙醚、氯仿或乙醇等溶劑中；一般含氧取代基的香豆素衍生物，在石油醚含氧取代基的香豆素衍生物，在石油醚中的溶解度比較小，冷的情況下更小。中的溶解度比較小，冷的情況下更小。 在定量測定時，多用氯仿和乙醇來提取在定量測定時，多用氯仿和乙醇來提取。 1第17頁/共59頁2n香豆素類化合物分子中具香豆素類化合物分子中

4、具,-,-不飽和內(nèi)酯結(jié)構(gòu)不飽和內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，具有內(nèi)酯化合物的通性。如在稀堿性條件，具有內(nèi)酯化合物的通性。如在稀堿性條件下加熱可水解開環(huán)，生成易溶于水的順式鄰下加熱可水解開環(huán)，生成易溶于水的順式鄰羥基桂皮酸鹽。酸化后又閉環(huán)恢復為親脂性羥基桂皮酸鹽。酸化后又閉環(huán)恢復為親脂性內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。n與堿液長時間加熱，順式鄰羥基桂皮酸鹽則與堿液長時間加熱，順式鄰羥基桂皮酸鹽則發(fā)生雙鍵構(gòu)型的異構(gòu)化，轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的反式發(fā)生雙鍵構(gòu)型的異構(gòu)化，轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的反式鄰羥基桂皮酸鹽，此時，再經(jīng)酸化也不能環(huán)鄰羥基桂皮酸鹽，此時，再經(jīng)酸化也不能環(huán)合為內(nèi)酯。合為內(nèi)酯。 順式鄰羥基桂皮酸順式鄰羥基桂皮酸 反式鄰羥基桂皮酸反式鄰羥基桂

5、皮酸OOOH-H+COO-O-OH-O-COO-第18頁/共59頁3 3（1 1）異羥基肟酸鐵反應(yīng)：）異羥基肟酸鐵反應(yīng)： 因香豆素具有內(nèi)酯環(huán)，所以能與異羥基肟酸鐵因香豆素具有內(nèi)酯環(huán)，所以能與異羥基肟酸鐵反應(yīng)，產(chǎn)生紫紅色，可被用來鑒別和比色測定，反應(yīng)，產(chǎn)生紫紅色，可被用來鑒別和比色測定，其反應(yīng)如下：其反應(yīng)如下： OONH2OHNaOHONaNHOHOFe3+, H+ONaNHOOFe13第19頁/共59頁（2 2）酚類試劑反應(yīng)：）酚類試劑反應(yīng)： 因該類化合物多具酚羥基，能和常規(guī)酚類試劑因該類化合物多具酚羥基，能和常規(guī)酚類試劑反應(yīng)，如三氯化鐵、硝酸銀的氨溶液、三氯化鐵反應(yīng)，如三氯化鐵、硝酸銀的氨溶

6、液、三氯化鐵- - 鐵氰化鉀。鐵氰化鉀。 如果香豆素化合物的如果香豆素化合物的C C6 6位上（即酚羥基的對位）位上（即酚羥基的對位）沒有取代基，則能和沒有取代基，則能和 EmersonEmerson試劑反應(yīng)現(xiàn)橙試劑反應(yīng)現(xiàn)橙 紅色紅色；與；與GibbsGibbs試劑反應(yīng)現(xiàn)藍色。試劑反應(yīng)現(xiàn)藍色。 EmersonEmerson反應(yīng)是將香豆素類化合物溶于堿性溶液反應(yīng)是將香豆素類化合物溶于堿性溶液中，加入中，加入2% 4- 2% 4- 氨基安替比林溶液數(shù)滴及氨基安替比林溶液數(shù)滴及8%8%鐵氰鐵氰化鉀溶液化鉀溶液2323滴即可顯色，其反應(yīng)如下：滴即可顯色，其反應(yīng)如下： OOCOO-OHOH-+NNC6H

7、5OCH3NCOO-OHNNC6H5OCH3NH2CH3CH3第20頁/共59頁4 4（1 1）香豆素類化合物在紫外光的照射下顯藍）香豆素類化合物在紫外光的照射下顯藍色熒光，不但作為定性鑒別，而且作為定量測色熒光，不但作為定性鑒別，而且作為定量測定依據(jù)。定依據(jù)。 但具有熒光的化合物不一定都是香豆素，如咖但具有熒光的化合物不一定都是香豆素，如咖啡酸、綠原酸等在啡酸、綠原酸等在UVUV下也能呈現(xiàn)藍色熒光，下也能呈現(xiàn)藍色熒光，二氫黃酮則呈天藍色熒光。二氫黃酮則呈天藍色熒光。 此外，個別的香豆素類化合物（如雙香豆素此外，個別的香豆素類化合物（如雙香豆素）不產(chǎn)生熒光。）不產(chǎn)生熒光。 第21頁/共59頁（

8、2 2）羥基香豆素在紫外光下有強的熒光，不難辨）羥基香豆素在紫外光下有強的熒光，不難辨認；呋喃香豆素較弱，但也能在紫外光下顯示藍認；呋喃香豆素較弱，但也能在紫外光下顯示藍、紫、棕、綠、黃等色。必要時可噴、紫、棕、綠、黃等色。必要時可噴10% KOH10% KOH醇醇液，或液，或20% SbCl20% SbCl3 3氯仿液以顯色。氯仿液以顯色。 （3 3）香豆素類化合物羥基和芳環(huán)形成的共軛體）香豆素類化合物羥基和芳環(huán)形成的共軛體系具較強的紫外特征吸收，不同的香豆素化合物系具較強的紫外特征吸收，不同的香豆素化合物在不同在不同pHpH條件下表現(xiàn)不同的光譜特性，對該類成條件下表現(xiàn)不同的光譜特性，對該類

9、成分的分析具重要意義。分的分析具重要意義。 第22頁/共59頁 熒光法熒光法 顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) 薄層色譜法薄層色譜法 高效液相法高效液相法 氣相色譜法氣相色譜法第23頁/共59頁第24頁/共59頁第25頁/共59頁第26頁/共59頁 1 1應(yīng)用特點應(yīng)用特點 薄層色譜法可用于含多類成分的中藥的鑒別，可用標薄層色譜法可用于含多類成分的中藥的鑒別，可用標準品或標準藥材對照，再與上述熒光反應(yīng)、顏色反準品或標準藥材對照，再與上述熒光反應(yīng)、顏色反應(yīng)配合，即可方便、快速鑒別含香豆素類化合物的應(yīng)配合，即可方便、快速鑒別含香豆素類化合物的中藥。中藥。 因香豆素類成分大都具熒光，含香豆素類中藥提取物因香豆素類成分

10、大都具熒光，含香豆素類中藥提取物，在硅膠板上的色譜指紋圖具一定的鑒別意義，在硅膠板上的色譜指紋圖具一定的鑒別意義，可用化學對照品對照；可用化學對照品對照；可以使用經(jīng)準確鑒定學名的標準藥材做對照品；可以使用經(jīng)準確鑒定學名的標準藥材做對照品；第27頁/共59頁29第28頁/共59頁30第29頁/共59頁 含香豆素成分的中藥定量測定方法有比色法、熒含香豆素成分的中藥定量測定方法有比色法、熒光法、極譜法、紫外分光光度法、薄層色譜法、高光法、極譜法、紫外分光光度法、薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法等。效液相色譜法、氣相色譜法等。 每種方法都有其特點，有的簡單，有的操作麻煩每種方法都有其特點，有的簡

11、單，有的操作麻煩，有的則需要一定的儀器設(shè)備。，有的則需要一定的儀器設(shè)備。 相比之下，因該類成分多具有較強的熒光，故可相比之下，因該類成分多具有較強的熒光，故可熒光分光光度法進行定量分析；薄層掃描法測其紫熒光分光光度法進行定量分析；薄層掃描法測其紫外吸收或熒光的方法較簡便快速，兼有分離功能，外吸收或熒光的方法較簡便快速，兼有分離功能，應(yīng)用日趨普遍；近年來又有了分離效率較高的高效應(yīng)用日趨普遍；近年來又有了分離效率較高的高效液相色譜技術(shù)，對復雜的中藥樣品更為合適。液相色譜技術(shù)，對復雜的中藥樣品更為合適。 第30頁/共59頁321 1、應(yīng)用概況、應(yīng)用概況第31頁/共59頁33第32頁/共59頁34第3

12、3頁/共59頁352 2紫外光區(qū)掃描法測定獨活中蛇床子素含量紫外光區(qū)掃描法測定獨活中蛇床子素含量 取獨活粗粉約取獨活粗粉約1g1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇，加乙醇20ml20ml，超聲處理，超聲處理30min30min，放冷，濾過，濾，放冷，濾過，濾液置液置25ml25ml量瓶中，用少量乙醇分次洗殘渣，洗液并量瓶中，用少量乙醇分次洗殘渣，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，作為供試入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取蛇床子素對照品適量，精密稱定，品溶液。另取蛇床子素對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每加乙醇制成每1ml1ml含含1mg1m

13、g的溶液，作為對照品溶液的溶液，作為對照品溶液。 精密吸取供試品溶液精密吸取供試品溶液2l2l、對照品溶液、對照品溶液1l1l與與2l2l，分別交叉點于同一硅膠，分別交叉點于同一硅膠G G薄層板上，以苯薄層板上，以苯- -乙酸乙酸乙酯（乙酯（3030：1 1）為展開劑，展開，取出，晾干，置）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（紫外光燈（365nm365nm）下檢視定位，照薄層色譜法進）下檢視定位，照薄層色譜法進行掃描，行掃描，s322nms322nm， R R370nm370nm，測量供試品吸收度，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算，即得。積分值與對照品吸收度積分值，計算，即

14、得。 本品含蛇床子素（本品含蛇床子素（C C1515H H1616O O3 3）不得少于）不得少于0.30%0.30%。 第34頁/共59頁第35頁/共59頁 按下述條件進行按下述條件進行HPLCHPLC分析：以分析：以-Bondapak C-Bondapak C1818柱為色譜柱為色譜分離柱，加預(yù)柱以防樣品污染分析柱，流動相為甲醇分離柱，加預(yù)柱以防樣品污染分析柱，流動相為甲醇- - 水（水（7070：3030），流速），流速minmin，UV 254nmUV 254nm檢測各組分峰，檢測各組分峰，進樣進樣10l10l，以峰面積為縱坐標，各成分濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，各成分濃度為橫坐標

15、，得得3 3條通過原點的直線，線性范圍條通過原點的直線，線性范圍mlml，其回歸方程如，其回歸方程如下：下： 氧化前胡素氧化前胡素 ， 歐前胡素歐前胡素 ， 異歐前胡素異歐前胡素 ， 精密稱取白芷粉（精密稱取白芷粉（4040目）目）2g2g，置索氏提取器中，用乙，置索氏提取器中，用乙醚提取醚提取9h9h，回收乙醚，真空干燥，殘渣溶于乙酸乙酯并，回收乙醚，真空干燥，殘渣溶于乙酸乙酯并定容成定容成25ml25ml，經(jīng)，經(jīng)MilliporeMillipore樣品過濾器過濾，同上色譜條樣品過濾器過濾，同上色譜條件測定。標準品與樣品分離情況（見圖件測定。標準品與樣品分離情況（見圖 13-113-1）較好

16、。）較好。 第36頁/共59頁第37頁/共59頁39第38頁/共59頁40OOOH3CO+N NSO3HOH-COOHOH3COOHN NSO3H第39頁/共59頁41OH-OOOHCOO-+NClOClClOClClNO-OOC第40頁/共59頁42第41頁/共59頁（3 3）呋喃香豆素的吸收峰向紫位移，它的）呋喃香豆素的吸收峰向紫位移，它的 maxmax在在 220 230nm220 230nm及及250nm250nm。 （4 4）pHpH影響：在堿性溶液中香豆素的最大影響：在堿性溶液中香豆素的最大吸收峰位置較其在中性或酸性溶液中多數(shù)有吸收峰位置較其在中性或酸性溶液中多數(shù)有顯著地向紅位移現(xiàn)

17、象，且吸收系數(shù)也有所增顯著地向紅位移現(xiàn)象，且吸收系數(shù)也有所增大。例如傘形花內(nèi)酯大。例如傘形花內(nèi)酯 maxmax325nm325nm（），但在（），但在堿性溶液中，其堿性溶液中，其 maxmax 372nm 372nm（）。（）。 第42頁/共59頁 秦皮為木犀科植物白蠟樹秦皮為木犀科植物白蠟樹Fraxinus chinensis Roxb.、苦栃白蠟樹苦栃白蠟樹F. rhynchophylla Hance、尖葉白蠟樹、尖葉白蠟樹F. chinensis Roxb. var. acuminata Lingelsh.、宿柱白蠟樹、宿柱白蠟樹F. stylosa Ungelsh .等的干燥樹皮或干皮

18、。具清熱燥濕等的干燥樹皮或干皮。具清熱燥濕、收澀明目之功效。、收澀明目之功效。第43頁/共59頁45第44頁/共59頁第45頁/共59頁47OOOglcHOaesculinOOHOHOaesculetinOOH3COHOOglcfraxin第46頁/共59頁48第47頁/共59頁49第48頁/共59頁50第49頁/共59頁第50頁/共59頁52第51頁/共59頁 照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液50l50l，沿硅膠薄層板的起始線點成沿硅膠薄層板的起始線點成5cm5cm的長條，另精的長條，另精密吸取對照品溶液密吸取對照品溶液5l5l，點于供試品條斑一側(cè)間，點于供試品條斑一側(cè)間隔處，作為對照。以正丁醇隔處，作為對照。以正丁醇- - 氯仿氯仿- - 甲苯甲苯- - 甲酸（甲酸（8 8：1 1：1 1：1 1）為展開劑，展開，取出，晾干，）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈置紫外光燈(365nm)(365nm)下檢視，刮取與對照品色譜下檢視，刮取與對照品色譜中斑點相應(yīng)位置上的供試品色譜中的條斑，照中斑點相應(yīng)位置上的供試品色譜中的條斑，