農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之

1、會計學(xué)1農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)培訓(xùn)系列之速測方法3準(zhǔn)確定性定量檢測法4當(dāng)前常用檢測方法2前言1以前農(nóng)殘檢測方法的頒布：國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會頒布國家標(biāo)準(zhǔn)國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會頒布國家標(biāo)準(zhǔn)（GBGB）; ;農(nóng)業(yè)部頒布行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)業(yè)部頒布行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（NYNY）; ;國家進(jìn)出口商品檢驗(yàn)檢疫總局頒布行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，編號國家進(jìn)出口商品檢驗(yàn)檢疫總局頒布行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，編號為為SNSN。已頒布標(biāo)準(zhǔn)截至截至目前，已頒布的農(nóng)產(chǎn)品和食品農(nóng)藥殘留檢測方法目前，已頒布的農(nóng)產(chǎn)品和食品農(nóng)藥殘留檢測方法標(biāo)準(zhǔn)共有標(biāo)準(zhǔn)共有39390 0多多個個。其中其中：國家標(biāo)準(zhǔn)國家標(biāo)準(zhǔn)9292個個，農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)353

2、5個個，商檢行業(yè)商檢行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)約標(biāo)準(zhǔn)約270270個。個。前 言 根據(jù)根據(jù)20092009年年6 6月月1 1日實(shí)施的中華人民共和國食品安日實(shí)施的中華人民共和國食品安全法第二十一條和第二十二條的規(guī)定，今后凡涉全法第二十一條和第二十二條的規(guī)定，今后凡涉及食品安全的標(biāo)準(zhǔn)（八個方面），統(tǒng)一由及食品安全的標(biāo)準(zhǔn)（八個方面），統(tǒng)一由國務(wù)院國務(wù)院衛(wèi)衛(wèi)生行政部門部制定和頒布生行政部門部制定和頒布，國務(wù)院標(biāo)準(zhǔn)化行政部門，國務(wù)院標(biāo)準(zhǔn)化行政部門提供國家標(biāo)準(zhǔn)編號提供國家標(biāo)準(zhǔn)編號 。 對現(xiàn)行的食用農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)、食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、對現(xiàn)行的食用農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)、食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、食品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)食品的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中強(qiáng)制執(zhí)行的食

3、品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)食品的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中強(qiáng)制執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)予以整合，統(tǒng)一公布為食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)予以整合，統(tǒng)一公布為食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)。 農(nóng)殘檢測方法標(biāo)準(zhǔn)全部統(tǒng)一為農(nóng)殘檢測方法標(biāo)準(zhǔn)全部統(tǒng)一為食品安全食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)。國家標(biāo)準(zhǔn)。前 言1.速測方法GB/T 5009.199-2003蔬蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測類農(nóng)藥殘留量的快速檢測NY/T 448-2001蔬菜蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測方法測方法一、當(dāng)前常用檢測方法NY/T 761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)

4、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定藥多殘留的測定QuEChERS Method（美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)（美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究服務(wù)中心）修訂方法研究服務(wù)中心）修訂方法NY/T 761-2008 、GB/T 19648-2006水果和蔬菜水果和蔬菜中中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留的測定種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留的測定 氣相色譜氣相色譜-質(zhì)譜法質(zhì)譜法、GB/T 20769-2008水果和蔬菜中水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜液相色譜-串串聯(lián)質(zhì)譜法聯(lián)質(zhì)譜法等方法糅合在一起的實(shí)施細(xì)則等方法糅合在一起的實(shí)施細(xì)則2.準(zhǔn)確定性定量檢測法一、當(dāng)前常用檢測方

5、法1快速檢測程序試樣試樣檢測檢測 陰性陰性陽性陽性復(fù)測（兩次以上）復(fù)測（兩次以上）陰性陰性陽性陽性根據(jù)市場根據(jù)市場規(guī)定處理規(guī)定處理 準(zhǔn)確定量準(zhǔn)確定量定性定性分析分析GB/T 5009.199-2003NY/T 448-2001適用適用范圍范圍 蔬菜蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)，易導(dǎo)致假陽性；菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)，易導(dǎo)致假陽性；葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣）葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣） 適用適用葉菜葉菜(除韭菜除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜、果菜、豆菜、瓜菜、根菜(除蘿除蘿卜、

6、茭白等卜、茭白等)方法方法速測卡法速測卡法(紙片法紙片法)和酶抑制率法和酶抑制率法(分光光度法分光光度法)酶抑制率法酶抑制率法(分光光度法分光光度法)波長波長412nm4103nm酶酶乙酰膽堿酯酶（用乙酰膽堿酯酶（用pH8磷酸緩沖液溶解）磷酸緩沖液溶解）（3min吸光度變化值吸光度變化值0.3，4冰箱保存不超過冰箱保存不超過4天）天）丁酰膽堿酯酶（用丁酰膽堿酯酶（用pH8磷酸緩沖液溶解）磷酸緩沖液溶解）3min吸光度變化值吸光度變化值0.40.8之間之間底物底物硫代乙酰膽堿硫代乙酰膽堿（蒸餾水溶解，（蒸餾水溶解，4冰箱保存不超過冰箱保存不超過2周）周）碘化硫代丁酰膽堿（碘化硫代丁酰膽堿（BTC

7、I）（用（用pH8磷酸緩沖液溶解）磷酸緩沖液溶解）顯色劑顯色劑二硫代二硝基苯甲酸（二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）+碳酸氫鈉碳酸氫鈉緩沖液溶液，緩沖液溶液，4冰箱保存冰箱保存二硫代二硝基苯甲酸（二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）緩沖液溶解緩沖液溶解步驟步驟取表面干凈的蔬菜或瓜果，葉菜類取葉片部分，瓜取表面干凈的蔬菜或瓜果，葉菜類取葉片部分，瓜果取表皮帶肉，剪成果取表皮帶肉，剪成1cm左右見方碎片。左右見方碎片。取樣取樣1g置于小燒杯內(nèi)，加入置于小燒杯內(nèi)，加入5mL緩沖溶液，振蕩緩沖溶液，振蕩1-2min，倒出并靜置，倒出并靜置3-5分鐘；分鐘；于小試管內(nèi)分別加入于小試管內(nèi)分別加入2.5mL樣本提取液

8、、樣本提取液、100uL酶液、酶液、100uL顯色劑，搖勻后于顯色劑，搖勻后于37放置放置15min以上，加入以上，加入100uL底物，應(yīng)立即倒入儀器比色皿中，記錄底物，應(yīng)立即倒入儀器比色皿中，記錄3min吸光度變化吸光度變化值。值。取取2g切碎的樣本（非葉菜類取切碎的樣本（非葉菜類取4g）放入提取瓶內(nèi)，）放入提取瓶內(nèi)，加入加入20mL緩沖液，振蕩緩沖液，振蕩1-2min，倒出并靜置，倒出并靜置3-5分鐘；分鐘；于小試管內(nèi)分別加入于小試管內(nèi)分別加入50uL酶液、酶液、3mL樣本提取液、樣本提取液、50uL顯色劑，于顯色劑，于37-38下放置下放置30min后分別加入后分別加入50uL底物，底物

9、，倒入比色皿中，用儀器測定。倒入比色皿中，用儀器測定。結(jié)果結(jié)果抑制率抑制率50%：陽性：陽性（陽性樣品需要重復(fù)檢測（陽性樣品需要重復(fù)檢測2次次以上以上，若，若不合格不合格, 用用色譜、色譜、質(zhì)譜等質(zhì)譜等進(jìn)一步定性定量分析進(jìn)一步定性定量分析）抑制率抑制率70%：陽性：陽性（陽性樣品應(yīng)有（陽性樣品應(yīng)有2次以上的重復(fù)檢測次以上的重復(fù)檢測，若若不合格不合格, 用用色譜、色譜、質(zhì)譜等質(zhì)譜等進(jìn)一步定性定量分析進(jìn)一步定性定量分析）備注備注1、當(dāng)溫度低于、當(dāng)溫度低于37時，酶時，酶反應(yīng)速度反應(yīng)速度放慢，加入酶液和顯放慢，加入酶液和顯色劑后色劑后反應(yīng)時間反應(yīng)時間應(yīng)該延長，延長時間的確定，應(yīng)應(yīng)該延長，延長時間的確

10、定，應(yīng)以空白以空白對照測試對照測試3min吸光度變化值吸光度變化值0.3方可進(jìn)行方可進(jìn)行下一步下一步操作。操作。2、3min吸光度變化值吸光度變化值0.3原因：酶的活性不夠；原因：酶的活性不夠；酶的活性太低。酶的活性太低。3、樣品檢測放置時間與空白的時間應(yīng)該一致。、樣品檢測放置時間與空白的時間應(yīng)該一致。1、樣品檢測放置時間與空白的時間應(yīng)該一致。、樣品檢測放置時間與空白的時間應(yīng)該一致。2、丁酰膽堿酯酶對樂果、甲基對硫磷、毒死蜱、二嗪、丁酰膽堿酯酶對樂果、甲基對硫磷、毒死蜱、二嗪磷等農(nóng)藥不太靈敏，檢出濃度均在磷等農(nóng)藥不太靈敏，檢出濃度均在10mg/kg以上。以上。2結(jié)果計算抑制率（抑制率（% %）

11、= = 抑制率：酶被抑制的程度抑制率：酶被抑制的程度A Ac c 對照組對照組3min 3min 后與后與3min 3min 前吸光值之差前吸光值之差; ; A A 樣本樣本3min 3min 后與后與3min 3min 前吸光值之差。前吸光值之差。100cscAAA3注意事項(xiàng)20112011年首屆全省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)人員大比武現(xiàn)場操作年首屆全省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術(shù)人員大比武現(xiàn)場操作評分細(xì)評分細(xì)則（農(nóng)殘速測類）則（農(nóng)殘速測類） (2011(2011年年) )中對中對取樣部位、處理方法取樣部位、處理方法等等內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)的分項(xiàng)打分，這些打分項(xiàng)都是平時檢測中需要注意的地方。的分項(xiàng)

12、打分，這些打分項(xiàng)都是平時檢測中需要注意的地方。適用范圍：蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番適用范圍：蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)，易導(dǎo)致假陽性；葉綠素高的也會干擾，茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)，易導(dǎo)致假陽性；葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣）這兩類可整株取樣） ；農(nóng)藥：有機(jī)磷和氨基甲酸酯類。；農(nóng)藥：有機(jī)磷和氨基甲酸酯類。所有操作步驟順序、加液量、處理時間一定要嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。所有操作步驟順序、加液量、處理時間一定要嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。建議使用同一批比色皿，不同批次的比色皿對結(jié)果可能存在影響。一建議使用同一批比色皿，不同批次的比色皿對

13、結(jié)果可能存在影響。一批上機(jī)樣品同時檢測，共用一個對照。批上機(jī)樣品同時檢測，共用一個對照。 檢測前一定要檢查酶液活性（檢測前一定要檢查酶液活性（3min3min吸光度變化值吸光度變化值0.30.3）；酶液反復(fù)）；酶液反復(fù)解凍最多不超過兩次解凍最多不超過兩次, ,否則會影響酶活性。否則會影響酶活性。4如何看待農(nóng)殘快速測定方法n 何為快速檢測方法？ 指檢測速度相對較快、便于現(xiàn)場篩查的檢測方法。其主要適合于定性和半定量測定，檢測準(zhǔn)確度相對要差一些。n 法律地位 中華人民共和國農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法第三十六條規(guī)定“采用國務(wù)院農(nóng)業(yè)行政主管部門會同有關(guān)部門認(rèn)定的快速檢測方法進(jìn)行農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督抽查檢測，被抽查人

14、對檢測結(jié)果有異議的，可以自收到檢測結(jié)果時起四小時內(nèi)申請復(fù)檢。復(fù)檢不得采用快速檢測方法?！?5農(nóng)殘速測與色譜、質(zhì)譜等方法的結(jié)果比較n 時間時間：從：從20052005年至年至20072007年。年。n 項(xiàng)目項(xiàng)目：農(nóng)業(yè)部開展的省份間農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全例行監(jiān)測互查。：農(nóng)業(yè)部開展的省份間農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全例行監(jiān)測互查。n 要求要求：承擔(dān)任務(wù)的：承擔(dān)任務(wù)的3737個部級中心分別用農(nóng)殘速測進(jìn)行初步篩查，并把所有樣個部級中心分別用農(nóng)殘速測進(jìn)行初步篩查，并把所有樣品用品用NY/T 761NY/T 761等方法進(jìn)行色譜、質(zhì)譜定量檢測。等方法進(jìn)行色譜、質(zhì)譜定量檢測。n 目的目的：想驗(yàn)證速測與色譜檢測的相關(guān)性，如果有相關(guān)性

15、，就可以先用速測初：想驗(yàn)證速測與色譜檢測的相關(guān)性，如果有相關(guān)性，就可以先用速測初步篩查，然后把陽性（超標(biāo)的）樣品再用色譜等方法準(zhǔn)確定量，那樣可以大大步篩查，然后把陽性（超標(biāo)的）樣品再用色譜等方法準(zhǔn)確定量，那樣可以大大減少工作量。減少工作量。n 結(jié)論結(jié)論：速測結(jié)果和色譜等定量檢測結(jié)果幾乎沒有任何相關(guān)性。說白了就是速：速測結(jié)果和色譜等定量檢測結(jié)果幾乎沒有任何相關(guān)性。說白了就是速測超標(biāo)的，色譜檢測不出來，速測不超標(biāo)的，色譜可能會超標(biāo)。因?yàn)闆]有什么測超標(biāo)的，色譜檢測不出來，速測不超標(biāo)的，色譜可能會超標(biāo)。因?yàn)闆]有什么相關(guān)性，農(nóng)業(yè)部在省部級檢測中心這個層級最終導(dǎo)致放棄速測方法。相關(guān)性，農(nóng)業(yè)部在省部級檢測中

16、心這個層級最終導(dǎo)致放棄速測方法。所以，速測僅僅是法律認(rèn)可的一項(xiàng)工作，不要較真，如被檢方有異議，更所以，速測僅僅是法律認(rèn)可的一項(xiàng)工作，不要較真，如被檢方有異議，更不能拿速測陽性結(jié)果進(jìn)行處罰和仲裁。不能拿速測陽性結(jié)果進(jìn)行處罰和仲裁。6為什么采用農(nóng)殘快速檢測法 （非官方解釋最實(shí)在的理解） 鮮活農(nóng)產(chǎn)品不宜長時間保存，快速檢測方法克服了當(dāng)前所有準(zhǔn)確定量方法（色譜、質(zhì)譜方法等）檢測周期過長的問題。【時限性考慮時限性考慮】 我國研究院所和各地市針對特殊樣品，采用酶抑制法取得了與準(zhǔn)確定量方法（色譜、質(zhì)譜方法等）一致性結(jié)果。【所謂的科學(xué)依據(jù)所謂的科學(xué)依據(jù)】 快速檢測方法是經(jīng)過農(nóng)業(yè)部會同有關(guān)部門認(rèn)定發(fā)布的，經(jīng)法律

17、認(rèn)可的方法，具有權(quán)威性和統(tǒng)一性（不過可靠性談不上不過可靠性談不上）。【法律依據(jù)法律依據(jù)】 快速檢測方法所需設(shè)備簡單，易掌握，平時運(yùn)營成本相對較低，選用該法主要是從我國從業(yè)人員素質(zhì)、經(jīng)濟(jì)狀況的國情出發(fā)來考慮的（不可能要求大家都去買質(zhì)譜、色譜等設(shè)備）?！痉椒ń?jīng)濟(jì)性、操控性方法經(jīng)濟(jì)性、操控性】 明知快速檢測方法準(zhǔn)確度不高，選用該法，主要是在縣級、鄉(xiāng)鎮(zhèn)等一級進(jìn)行普及，讓經(jīng)營戶、老百姓發(fā)現(xiàn)有人在抓農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全，更主要的是起到震懾作用。【震懾作用震懾作用】1基本步驟：u檢測前工作準(zhǔn)備檢測前工作準(zhǔn)備u提取提取u凈化凈化、濃縮定容、濃縮定容u標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和測定標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和測定u結(jié)果計算結(jié)果計算2提取條件的

18、優(yōu)化：uQuEChERSQuEChERS方法選擇方法選擇單一單一乙腈為提取溶劑乙腈為提取溶劑。u含水量低或含糖量高的樣品應(yīng)加入一定量的水后再含水量低或含糖量高的樣品應(yīng)加入一定量的水后再進(jìn)行提取，以提高提取效率。進(jìn)行提取，以提高提取效率。u乙腈對乙腈對N N- -三鹵甲硫基殺菌劑類農(nóng)藥，具有降解作用，三鹵甲硫基殺菌劑類農(nóng)藥，具有降解作用，如克菌丹、抑菌靈等；通過加入如克菌丹、抑菌靈等；通過加入1%1%的醋酸，調(diào)節(jié)的醋酸，調(diào)節(jié)pHpH值，值，能夠抑制上述農(nóng)藥的分解。能夠抑制上述農(nóng)藥的分解。3鹽析：u鹽析鹽析劑種類：氯化鈉、醋酸鈉和硫酸銨等；劑種類：氯化鈉、醋酸鈉和硫酸銨等；u鹽析劑能與水結(jié)合使游離

19、水分子減少，減少了農(nóng)藥鹽析劑能與水結(jié)合使游離水分子減少，減少了農(nóng)藥在水相中的溶解度；在水相中的溶解度；u鹽析劑能減少有機(jī)溶劑在水中的溶解度；鹽析劑能減少有機(jī)溶劑在水中的溶解度；u鹽析劑能使水相的比重增大，有助于分離。鹽析劑能使水相的比重增大，有助于分離。4脫水劑的選擇：u無無水硫酸鎂吸水能力比無水硫酸鈉高水硫酸鎂吸水能力比無水硫酸鈉高3 3倍倍。u無無水硫酸鎂吸水的同時也放熱，促進(jìn)農(nóng)藥的萃取。水硫酸鎂吸水的同時也放熱，促進(jìn)農(nóng)藥的萃取。無機(jī)鹽無機(jī)鹽加入量（加入量（g）乙腈中的水分乙腈中的水分（加入前，（加入前，%）乙腈中的水分乙腈中的水分（加入后，（加入后，%）NaCl2g / 27mL276.

20、0Na2SO40.8g / 4mL63.9MgSO40.8g / 4mL60.65凈化劑的選擇：uPSAPSA提供伯氨基和仲氨基，相比氨基更能去除基質(zhì)提供伯氨基和仲氨基，相比氨基更能去除基質(zhì)干擾；主要干擾；主要用來用來消除各種有機(jī)酸、色素以及一些糖和脂肪酸消除各種有機(jī)酸、色素以及一些糖和脂肪酸。為了。為了減少儀減少儀器的維護(hù)，往往在器的維護(hù)，往往在PSAPSA的基礎(chǔ)上加的基礎(chǔ)上加C18C18凈化。凈化。uPSAPSA可去除可去除9090以上的脂肪酸和以上的脂肪酸和5050左右的左右的色素。色素。uGCBGCB可去除可去除9090以上的色素，但對脂肪酸的凈化能力僅有以上的色素，但對脂肪酸的凈化能

21、力僅有1010左右。對于一些含色素高的樣品，將兩者聯(lián)合左右。對于一些含色素高的樣品，將兩者聯(lián)合使用。使用。但用量要但用量要適當(dāng)適當(dāng)，否則會，否則會吸附一些平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥，影響回收率，如六氯吸附一些平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥，影響回收率，如六氯苯、百菌清等。苯、百菌清等。凈化劑凈化劑去雜種類去雜種類PSAPSA糖、有機(jī)酸、色素等糖、有機(jī)酸、色素等C18C18油脂、非極性干擾物等油脂、非極性干擾物等GCBGCB色素、甾醇、非極性干擾物等色素、甾醇、非極性干擾物等 方法名稱及來源：方法名稱及來源：蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法氨基甲

22、酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法NY/T 761-2008NY/T 761-2008。 農(nóng)藥種類和個數(shù)：農(nóng)藥種類和個數(shù)：有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥藥等共等共104種。種。 使用儀器：使用儀器：GC、LC。 檢測步驟：檢測步驟：依次依次5mL丙酮丙酮+正己烷正己烷(10+90), 5mL正己烷預(yù)淋正己烷預(yù)淋4 mL甲醇甲醇二氯甲烷二氯甲烷(1+99)預(yù)淋預(yù)淋方法名稱及來源：方法名稱及來源： NY/T 761-2008NY/T 761-2008、GB/T 19648-2006GB/T 19648-2006和和GB/T 20769-GB/T 207

23、69-20082008等，其中以等，其中以GB/T 19648-2006GB/T 19648-2006為主。為主。農(nóng)藥種類和個數(shù)：農(nóng)藥種類和個數(shù)： 有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯類和有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯類和苯并咪唑類農(nóng)藥等苯并咪唑類農(nóng)藥等800800多種。多種。使用儀器：使用儀器： GCGC、LCLC、GC-MS/MSGC-MS/MS和和LC-MS/MSLC-MS/MS。 檢測步驟：檢測步驟：5mL乙腈乙腈+甲苯預(yù)淋甲苯預(yù)淋剩余約剩余約20mL乙腈乙腈+甲苯分甲苯分次或次或1次倒入次倒入，淋洗小柱，淋洗小柱洗脫液用量洗脫液用量約為約為25mL25mL方法名稱及來源：方

24、法名稱及來源： 在美國農(nóng)業(yè)部的在美國農(nóng)業(yè)部的QuEChERS MethodQuEChERS Method基礎(chǔ)上做了基礎(chǔ)上做了優(yōu)化和調(diào)整。優(yōu)化和調(diào)整。 農(nóng)藥種類：農(nóng)藥種類： 有機(jī)磷，有機(jī)氯，氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農(nóng)有機(jī)磷，有機(jī)氯，氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥等多殘留檢測。藥等多殘留檢測。使用儀器：使用儀器： GC-MS/MS GC-MS/MS、LC/MS/MSLC/MS/MS。原理原理： 與固相萃取與固相萃取(SPE)(SPE)相似，都是利用吸附劑填料與相似，都是利用吸附劑填料與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達(dá)到除雜凈化基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達(dá)到除雜凈化的目的。的目的。優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)

25、： 回收率高，對大量極性及揮發(fā)性的農(nóng)藥品種的回收率高，對大量極性及揮發(fā)性的農(nóng)藥品種的回收率大于回收率大于85%85%；精確度和準(zhǔn)確度高；可分析的；精確度和準(zhǔn)確度高；可分析的農(nóng)藥范圍廣；速度快；溶劑使用量少，污染小，農(nóng)藥范圍廣；速度快；溶劑使用量少，污染小，價格低廉且不使用含氯化物溶劑；操作簡便；使價格低廉且不使用含氯化物溶劑；操作簡便；使用很少的玻璃器皿，裝置簡單。用很少的玻璃器皿，裝置簡單。檢測步驟：檢測步驟：(1)(1)樣品粉碎；樣品粉碎；(2)(2)單一溶劑乙腈提取分離；單一溶劑乙腈提取分離；(3)(3)加入加入MgSOMgSO4 4等鹽類除水；等鹽類除水；(4)(4)加入乙二胺加入乙二

26、胺-N-N-丙基硅烷丙基硅烷(PSA)(PSA)等吸附劑除雜；等吸附劑除雜；(5)(5)上清液進(jìn)行上清液進(jìn)行GC-MS/MSGC-MS/MS、LC-MS/MS LC-MS/MS 檢測。檢測。 檢測步驟：檢測步驟：稱取10g樣品于50mL離心管中，加20mL乙腈,高速均質(zhì)2 min吸取0.5mL上層提取液于15mL離心管中，加入0.5 mL50%甲醇水溶液，渦旋混勻振搖后,5000 r/min 離心35 min將8g氯化鈉與無水硫酸鎂混合粉末（重量比為1:1）倒入上述50mL離心管中吸取1.0mL上層提取液于10mL離心管中（離心管中含有40mg的PSA、40mg的C18、20mg的GCB、1m

27、L甲苯），劇烈振搖后，靜置5min。過0.22m微孔濾膜LC-MS/MS檢測劇烈振搖劇烈振搖1min1min過0.22m微孔濾膜GC-MS/MS檢測GB/T 5009.199-2003NY/T 448-2001適用適用范圍范圍 蔬菜蔬菜（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑（蔥蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)，易導(dǎo)致假陽性；菇和番茄含有抑制酶的植物次生物質(zhì)，易導(dǎo)致假陽性；葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣）葉綠素高的也會干擾，這兩類可整株取樣） 適用適用葉菜葉菜(除韭菜除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜、果菜、豆菜、瓜菜、根菜(除蘿除蘿卜、茭白等卜、茭白等

28、)方法方法速測卡法速測卡法(紙片法紙片法)和酶抑制率法和酶抑制率法(分光光度法分光光度法)酶抑制率法酶抑制率法(分光光度法分光光度法)波長波長412nm4103nm酶酶乙酰膽堿酯酶（用乙酰膽堿酯酶（用pH8磷酸緩沖液溶解）磷酸緩沖液溶解）（3min吸光度變化值吸光度變化值0.3，4冰箱保存不超過冰箱保存不超過4天）天）丁酰膽堿酯酶（用丁酰膽堿酯酶（用pH8磷酸緩沖液溶解）磷酸緩沖液溶解）3min吸光度變化值吸光度變化值0.40.8之間之間底物底物硫代乙酰膽堿硫代乙酰膽堿（蒸餾水溶解，（蒸餾水溶解，4冰箱保存不超過冰箱保存不超過2周）周）碘化硫代丁酰膽堿（碘化硫代丁酰膽堿（BTCI）（用（用pH

29、8磷酸緩沖液溶解）磷酸緩沖液溶解）顯色劑顯色劑二硫代二硝基苯甲酸（二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）+碳酸氫鈉碳酸氫鈉緩沖液溶液，緩沖液溶液，4冰箱保存冰箱保存二硫代二硝基苯甲酸（二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）緩沖液溶解緩沖液溶解步驟步驟取表面干凈的蔬菜或瓜果，葉菜類取葉片部分，瓜取表面干凈的蔬菜或瓜果，葉菜類取葉片部分，瓜果取表皮帶肉，剪成果取表皮帶肉，剪成1cm左右見方碎片。左右見方碎片。取樣取樣1g置于小燒杯內(nèi)，加入置于小燒杯內(nèi)，加入5mL緩沖溶液，振蕩緩沖溶液，振蕩1-2min，倒出并靜置，倒出并靜置3-5分鐘；分鐘；于小試管內(nèi)分別加入于小試管內(nèi)分別加入2.5mL樣本提取液、樣本提取液、1

30、00uL酶液、酶液、100uL顯色劑，搖勻后于顯色劑，搖勻后于37放置放置15min以上，加入以上，加入100uL底物，應(yīng)立即倒入儀器比色皿中，記錄底物，應(yīng)立即倒入儀器比色皿中，記錄3min吸光度變化吸光度變化值。值。取取2g切碎的樣本（非葉菜類取切碎的樣本（非葉菜類取4g）放入提取瓶內(nèi)，）放入提取瓶內(nèi)，加入加入20mL緩沖液，振蕩緩沖液，振蕩1-2min，倒出并靜置，倒出并靜置3-5分鐘；分鐘；于小試管內(nèi)分別加入于小試管內(nèi)分別加入50uL酶液、酶液、3mL樣本提取液、樣本提取液、50uL顯色劑，于顯色劑，于37-38下放置下放置30min后分別加入后分別加入50uL底物，底物，倒入比色皿中，

31、用儀器測定。倒入比色皿中，用儀器測定。結(jié)果結(jié)果抑制率抑制率50%：陽性：陽性（陽性樣品需要重復(fù)檢測（陽性樣品需要重復(fù)檢測2次次以上以上，若，若不合格不合格, 用用色譜、色譜、質(zhì)譜等質(zhì)譜等進(jìn)一步定性定量分析進(jìn)一步定性定量分析）抑制率抑制率70%：陽性：陽性（陽性樣品應(yīng)有（陽性樣品應(yīng)有2次以上的重復(fù)檢測次以上的重復(fù)檢測，若若不合格不合格, 用用色譜、色譜、質(zhì)譜等質(zhì)譜等進(jìn)一步定性定量分析進(jìn)一步定性定量分析）備注備注1、當(dāng)溫度低于、當(dāng)溫度低于37時，酶時，酶反應(yīng)速度反應(yīng)速度放慢，加入酶液和顯放慢，加入酶液和顯色劑后色劑后反應(yīng)時間反應(yīng)時間應(yīng)該延長，延長時間的確定，應(yīng)應(yīng)該延長，延長時間的確定，應(yīng)以空白以空白對照測試對照測試3min吸光度變化值吸光度變化值0.3方可進(jìn)行方可進(jìn)行下一步下一步操作。操作。2、3min吸光度變化值吸光度變化值0.3原因：酶的活性不夠；原因：酶的活性不夠；酶的活性太低。酶的活性太低。3、樣品檢測放置時間與空白的時間應(yīng)該一致。、樣品檢測放置時間與空白的時間應(yīng)該一致。1、樣品檢測放置時間與空白的時間應(yīng)該一致。、樣品檢測放置時間與空白的時間應(yīng)該一致。2、丁酰膽堿酯酶對樂果、甲基對硫磷、毒死蜱、二嗪、丁酰膽堿酯酶對樂果、甲基對硫磷、毒死蜱、二嗪磷等農(nóng)藥不太靈敏，檢出濃度均在磷等農(nóng)藥不太靈敏，檢出濃度均在10mg/kg以上。