實驗六 微生物大小及數(shù)量的測定

1、 一、實驗?zāi)康暮蛢?nèi)容一、實驗?zāi)康暮蛢?nèi)容 目的：學(xué)會測微尺的使用和計算方法及對單細胞微生物目的：學(xué)會測微尺的使用和計算方法及對單細胞微生物的測量。的測量。 內(nèi)容：內(nèi)容：1. 1. 學(xué)會并掌握測微尺的使用。學(xué)會并掌握測微尺的使用。 2 2測定釀酒酵母菌體的大小。測定釀酒酵母菌體的大小。 二、實驗材料和用具二、實驗材料和用具 釀酒酵母菌懸液釀酒酵母菌懸液 顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、擦鏡紙。顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、擦鏡紙。 鏡臺測微尺鏡臺測微尺目鏡測微尺目鏡測微尺 目鏡測微尺每格實際代表的長度隨物鏡的放大倍數(shù)而改變，也會因使用不同的顯微鏡而產(chǎn)生誤差，因此在使用前必須用鏡臺測微尺進行校正。

2、 酵母菌數(shù)量的測定酵母菌數(shù)量的測定 一一 、目的要求、目的要求 1 1明確血球計數(shù)板計數(shù)的原理。明確血球計數(shù)板計數(shù)的原理。 2 2掌握使用血球計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法。掌握使用血球計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法。 二二 、 基本原理基本原理 用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)是一種常用的微生物計用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)是一種常用的微生物計數(shù)方法。該計數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三數(shù)方法。該計數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，各列有一個個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，各列有一個方格網(wǎng)，中間的大方格即為計數(shù)室。計數(shù)室的刻度

3、一般有兩種方格網(wǎng)，中間的大方格即為計數(shù)室。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一是大方格分成規(guī)格，一是大方格分成2525個中格，而每個中格又分成個中格，而每個中格又分成1616個小格個小格；另一種是大格分成；另一種是大格分成1616個中格，而每個中格又分成個中格，而每個中格又分成2525個小格，個小格，每個大格中的小格都是每個大格中的小格都是400400個。每一個大格邊長為個。每一個大格邊長為lmmlmm，面積為，面積為lmmlmm2 2，蓋玻片與載玻片之間的高度為，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.lmm0.lmm，故計數(shù)室的容積為，故計數(shù)室的容積為0.lmm0.lmm3 3。 計數(shù)時，通常數(shù)五個中格的

4、總菌數(shù)，然后求得計數(shù)時，通常數(shù)五個中格的總菌數(shù)，然后求得每個中格的平均值，然后再換算成每個中格的平均值，然后再換算成lmllml菌液中的總菌菌液中的總菌數(shù)。數(shù)。 如果是如果是2525個中方格的計數(shù)板個中方格的計數(shù)板, , 1mL1mL菌液中的總菌數(shù)菌液中的總菌數(shù)=A/5=A/5252510104 4B=50000ABB=50000AB（個）（個） A A為五個中方格中的總菌數(shù)，為五個中方格中的總菌數(shù)，B B為菌液稀釋倍數(shù)為菌液稀釋倍數(shù). .如果是如果是1616個中方格的計數(shù)板，個中方格的計數(shù)板， 1mL1mL菌液中的總菌數(shù)菌液中的總菌數(shù)=A/5=A/5161610104 4B=32000ABB

5、=32000AB（個）（個） （三）器材（三）器材 1 1菌種菌種 釀酒酵母釀酒酵母 2 2儀器或其他用具儀器或其他用具 血球計數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無血球計數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無菌毛細滴管。菌毛細滴管。 （四）操作步驟（四）操作步驟 l l菌懸液制備菌懸液制備 以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當?shù)木鷳乙?。以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當?shù)木鷳乙骸?2 2鏡檢計數(shù)室鏡檢計數(shù)室 在加樣前，先對計數(shù)室進行鏡檢。若有污物，則需清洗，在加樣前，先對計數(shù)室進行鏡檢。若有污物，則需清洗， 吹干后才能進行計數(shù)。吹干后才能進行計數(shù)。 3 3加樣品加樣品 將清潔干燥的血細胞計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛

6、細將清潔干燥的血細胞計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細 滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣凹槽滴加滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣凹槽滴加, ,菌菌 液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數(shù)室，一般計數(shù)室均液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數(shù)室，一般計數(shù)室均 能充滿菌液。能充滿菌液。 取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。 4 4顯微鏡計數(shù)顯微鏡計數(shù) 加樣后靜止加樣后靜止5min5min，然后將血球計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先，然后將血球計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進行計數(shù)。用低倍鏡找到計數(shù)室所

7、在位置，然后換成高倍鏡進行計數(shù)。 每個計數(shù)室選每個計數(shù)室選5 5個中格個中格( (可選可選4 4個角和中央的一個中格個角和中央的一個中格) )中的菌體中的菌體進行計數(shù)。壓線的菌體一般記上不記下進行計數(shù)。壓線的菌體一般記上不記下, ,記左不記右。如遇酵記左不記右。如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，即作為兩個菌體計數(shù)母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，即作為兩個菌體計數(shù)。計數(shù)一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的平均數(shù)值來計算樣品。計數(shù)一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的平均數(shù)值來計算樣品的含菌量。的含菌量。 5 5清洗血球計數(shù)板清洗血球計數(shù)板 使用完畢后，將血球計數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬使用完畢后，將血球計數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風機吹干。鏡檢，觀察每小格物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風機吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)