實驗一微生物實驗課介紹與要求及環(huán)境、人體表面微生物的檢測(張理珉)

1、微生物學實驗課介紹與要求微生物學實驗課介紹與要求及環(huán)境、人體表面微生物的檢測及環(huán)境、人體表面微生物的檢測任課教師任課教師程立忠（程立忠王紹輝（王紹輝張理珉（張理珉余澤芬（余澤芬教材用書 1沈萍，范秀容，李廣武主編微生物學實驗沈萍，范秀容，李廣武主編微生物學實驗（第三版）北京：高等教育出版社，（第三版）北京：高等教育出版社，1999第四版已于第四版已于2007年年11月出版月出版主要參考書主要參考書1杜連祥，路福平主編微生物學實驗技術(shù)杜連祥，路福平主編微生物學實驗技術(shù)M北京：中國輕工業(yè)出版社，

2、北京：中國輕工業(yè)出版社，20052周德慶微生物學實驗教程（第周德慶微生物學實驗教程（第2版）版）M北京：高等教育出版社，北京：高等教育出版社，20063楊文博主編微生物學實驗楊文博主編微生物學實驗M北京：化北京：化學工業(yè)出版社，學工業(yè)出版社，20044趙斌，何紹江主編微生物學實驗趙斌，何紹江主編微生物學實驗M北北京：科學出版社，京：科學出版社，20025東秀珠，蔡妙英主編常見細菌系統(tǒng)分類東秀珠，蔡妙英主編常見細菌系統(tǒng)分類和鑒定方法和鑒定方法M北京：科學出版社，北京：科學出版社，2001 1、明確實驗課的目的；、明確實驗課的目的；2、實驗課的內(nèi)容介紹；、實驗課的內(nèi)容介紹；3、實驗課的具體安排和要

3、求；、實驗課的具體安排和要求；4、實驗安全知識介紹、實驗安全知識介紹5、實驗室環(huán)境及人體表面微生物檢測、實驗室環(huán)境及人體表面微生物檢測實實 驗驗 內(nèi)內(nèi) 容容 一一微生物學實驗課介紹微生物學實驗課介紹與安全教育與安全教育 1、實驗課的目的、實驗課的目的意義：意義： 微生物學是生命科學中最基礎的學科微生物學是生命科學中最基礎的學科之一，實驗技術(shù)的獨特性和重要性。之一，實驗技術(shù)的獨特性和重要性。 促進了多個學科的建立和發(fā)展促進了多個學科的建立和發(fā)展生生物化學、分子生物學、生物工程學、物化學、分子生物學、生物工程學、免疫學、病毒學等等免疫學、病毒學等等 廣泛的應用廣泛的應用基礎理論研究、工業(yè)、基礎理論

4、研究、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)境、醫(yī)學、食品等，農(nóng)業(yè)、環(huán)境、醫(yī)學、食品等，實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容 無菌操作技術(shù)；無菌操作技術(shù)； 培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌技術(shù)；培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌技術(shù)； 微生物的分離培養(yǎng)純化技術(shù)；微生物的分離培養(yǎng)純化技術(shù)； 菌種的保藏技術(shù)菌種的保藏技術(shù) 微生物制片染色技術(shù)；微生物制片染色技術(shù)； 微生物數(shù)量和大小測定技術(shù)；微生物數(shù)量和大小測定技術(shù)； 噬菌體的分離純化及效價的測定；噬菌體的分離純化及效價的測定； 微生物生理生化反應；微生物生理生化反應； 微生物微生物DNA提取技術(shù)介紹；提取技術(shù)介紹； 免疫學技術(shù)介紹；免疫學技術(shù)介紹； 實驗課安排實驗課安排 根據(jù)教學計劃，本門實驗課程根據(jù)教學計劃，本

5、門實驗課程2 2學分，學分，4 4學時學時/ /周，周，1414周共周共5656學時，每學時學時，每學時4545分鐘，每次課分鐘，每次課3 3小時小時；實驗結(jié)果的觀察實驗結(jié)果的觀察是實驗過程的重要內(nèi)容。是實驗過程的重要內(nèi)容。 分組分組兩人一組，登記聯(lián)系電話；兩人一組，登記聯(lián)系電話；穿白色實驗服進入實驗室；穿白色實驗服進入實驗室； 每組準備記號筆和打火機各一個；每組準備記號筆和打火機各一個； 值日生由班委每次實驗前委派；值日生由班委每次實驗前委派； 下午實驗課改在下午實驗課改在1313：3030上，上， 不遲到，不缺席，有事提前請假；遲到不遲到，不缺席，有事提前請假；遲到5 5分分鐘以上以缺席計

6、入實驗習慣成績；鐘以上以缺席計入實驗習慣成績； 愛護實驗用具；愛護實驗用具； 實驗完成后認真清洗實驗用具，并擺放整實驗完成后認真清洗實驗用具，并擺放整齊；齊； 離開實驗室要經(jīng)教師檢查同意方可離開；離開實驗室要經(jīng)教師檢查同意方可離開； 認真做好值日生工作，有人具體負責安排認真做好值日生工作，有人具體負責安排檢查。檢查。實驗報告的格式實驗報告的格式實驗報告要求實驗報告要求 1.每位學生準備規(guī)定式樣的實驗報告紙。每位學生準備規(guī)定式樣的實驗報告紙。 2.上課時每給出一次作業(yè)，就在下一次上上課時每給出一次作業(yè)，就在下一次上課前上交這一次的實驗報告，不得拖延時間，課前上交這一次的實驗報告，不得拖延時間，否

7、則后果自負。否則后果自負。 3.報告要求寫清楚實驗目的、原理、步驟、報告要求寫清楚實驗目的、原理、步驟、結(jié)果及思考題。希望簡潔、工整。結(jié)果及思考題。希望簡潔、工整。 4.本門課結(jié)束前，要求使用統(tǒng)一的封面，本門課結(jié)束前，要求使用統(tǒng)一的封面，把自己的所有實驗報告按實驗先后順序裝訂把自己的所有實驗報告按實驗先后順序裝訂成一冊，交給實驗教師。成一冊，交給實驗教師。實驗成績實驗成績 實驗用到儀器設備實驗用到儀器設備 顯微鏡（光學顯微鏡（光學普通、相差、微分干涉差、普通、相差、微分干涉差、暗視野；電子暗視野；電子掃描、透射）；高壓蒸汽掃描、透射）；高壓蒸汽滅菌鍋（立式和臥式）；超凈工作臺、隔水滅菌鍋（立式

8、和臥式）；超凈工作臺、隔水式恒溫培養(yǎng)箱；鼓風恒溫干燥箱；恒溫振蕩式恒溫培養(yǎng)箱；鼓風恒溫干燥箱；恒溫振蕩培養(yǎng)箱（旋轉(zhuǎn)式和往復式）；旋渦振蕩器；培養(yǎng)箱（旋轉(zhuǎn)式和往復式）；旋渦振蕩器；恒溫水浴鍋；恒溫水浴鍋；pH計；分光光度計（紫外、可計；分光光度計（紫外、可見光、紅外、原子吸收等）；離心機；電泳見光、紅外、原子吸收等）；離心機；電泳儀、儀、PCR儀、發(fā)酵罐、酶標儀、冰箱；微波儀、發(fā)酵罐、酶標儀、冰箱；微波爐等。爐等。實驗用到器械實驗用到器械 試管（試管（test tube） 德漢氏小管（德漢氏小管（Durham tube） 小塑料離心管，又稱小塑料離心管，又稱Eppendorf管管 玻璃吸管（玻璃

9、吸管（glasspipette） 微量吸管（微量吸管（micropipette） 微量加樣槍微量加樣槍 培養(yǎng)皿（培養(yǎng)皿（petri dish） 三角燒瓶（三角燒瓶（erlenmeyer flask）實驗用到器械實驗用到器械 載玻片（載玻片（slide）和蓋玻片（）和蓋玻片（coverslip） 滴瓶滴瓶(dropper bottle) 接種工具接種工具接種環(huán)、接種針、接種鉤、接種環(huán)、接種針、接種鉤、接種鏟、接種刀、涂布器（玻璃或不銹接種鏟、接種刀、涂布器（玻璃或不銹鋼制作）等。鋼制作）等。 常見的接種工具常見的接種工具（可根據(jù)要求自已定做）（可根據(jù)要求自已定做）常用玻璃儀器常用玻璃儀器實驗室安

10、全實驗室安全 1 1、火災；、火災； 2 2、觸電；、觸電； 3 3、跑（漏）水；、跑（漏）水； 4 4、化學品傷害及中毒；、化學品傷害及中毒； 5 5、灼傷；、灼傷； 6 6、割（劃）傷。、割（劃）傷。先保護好自身的安全，再施救先保護好自身的安全，再施救不要慌張，按安全預案處理不要慌張，按安全預案處理認真負責，不推缷責任認真負責，不推缷責任逐級上報，不隱瞞事故逐級上報，不隱瞞事故(一一)化學藥品及溶劑的處理方法化學藥品及溶劑的處理方法(二二)安全用電，防止事故安全用電，防止事故 （三）節(jié)約用水，防止跑漏（三）節(jié)約用水，防止跑漏1.不用水時，隨手關(guān)閉閥門。2.廢物廢液不準倒在水槽內(nèi)，實驗完了放

11、水沖洗水槽和下水管，勿使廢液殘留其中。（四）安全用藥，防中毒（四）安全用藥，防中毒 1.使用化學藥品前，要充分了解其化學性質(zhì)、物理性質(zhì)和使用注意事項。 2.不能嘗化學藥品，也不能直接去聞化學藥品，避免用手直接去接觸藥品；使用藥品和實驗結(jié)束后立即用肥皂水洗手。 3.盡量不可在實驗室進餐。 4.有毒或帶剌激味的實驗要在通風櫥內(nèi)進行，實驗期間要開排風扇，或開窗通風。 5. 做好廢液處理，防止環(huán)境污染；發(fā)現(xiàn)中毒現(xiàn)象，及時對癥治療，必要時送醫(yī)院。實驗時需特別注意：實驗時需特別注意：人身安全人身安全 防止割傷、灼傷，如有防止割傷、灼傷，如有發(fā)生，應用急救藥品施治。發(fā)生，應用急救藥品施治。意意 外外 對對

12、策策學生衣服著火的對策學生衣服著火的對策 以滅火氈包以滅火氈包裹該同學，并使裹該同學，并使其在地上滾動其在地上滾動 其他同學立刻通其他同學立刻通知老師。知老師。實驗室的窗簾布著火的對策：實驗室的窗簾布著火的對策： 取出滅火器，拔出安取出滅火器，拔出安全針。全針。 把噴咀對準火源。把噴咀對準火源。 按掣使滅火器噴出二按掣使滅火器噴出二氧化碳。氧化碳。 其他同學立刻通知老其他同學立刻通知老師。師。酒精濺在實驗桌上并著火的對策：酒精濺在實驗桌上并著火的對策： 利用沙桶或濕抹布把燃燒的液體用沙蓋著。利用沙桶或濕抹布把燃燒的液體用沙蓋著。 其他同學立刻通知老師。其他同學立刻通知老師。學生打破了燒杯，被碎

13、片割傷流血的學生打破了燒杯，被碎片割傷流血的對策對策 以清水沖洗傷口。以清水沖洗傷口。 貼上干凈的消毒膠布。貼上干凈的消毒膠布。 其他同學立刻通知老師。其他同學立刻通知老師?；瘜W藥品濺進學生的眼睛內(nèi)的對策化學藥品濺進學生的眼睛內(nèi)的對策 用洗眼瓶以大量清水沖洗眼睛。用洗眼瓶以大量清水沖洗眼睛。 其他同學立刻通知老師。其他同學立刻通知老師。一個學生在傾倒酸時意外地接觸到酸一個學生在傾倒酸時意外地接觸到酸的對策的對策 立刻以大量清水沖洗患處最少五分鐘。立刻以大量清水沖洗患處最少五分鐘。 立刻通知老師。立刻通知老師。實驗物品常見警告標識符號滅火器及其使用方法滅火器及其使用方法實實 驗驗 內(nèi)內(nèi) 容容 二

14、二 一、目的要求一、目的要求 檢查實驗室空氣中及各人手檢查實驗室空氣中及各人手上的微生物上的微生物(細菌為主細菌為主)，并加以，并加以統(tǒng)計、比較和描述（數(shù)量、菌落統(tǒng)計、比較和描述（數(shù)量、菌落形態(tài)等）。形態(tài)等）。 使學生認識到微生物無處不使學生認識到微生物無處不在，以便在以后的實驗中重視無在，以便在以后的實驗中重視無菌操作。菌操作。二、實驗原理二、實驗原理 微生物廣泛分布于室內(nèi)外、水、空微生物廣泛分布于室內(nèi)外、水、空氣和土壤中；氣和土壤中； 通過對環(huán)境和人體表面微生物的檢通過對環(huán)境和人體表面微生物的檢測及觀察，建立起測及觀察，建立起“微生物無處不微生物無處不在、無孔不入在、無孔不入”的概念。的概

15、念。 形成自身良好的衛(wèi)生習慣，認識到形成自身良好的衛(wèi)生習慣，認識到在微生物實驗中無菌操作的重要性。在微生物實驗中無菌操作的重要性。 平板培養(yǎng)基含有微生物生長所需的營養(yǎng)平板培養(yǎng)基含有微生物生長所需的營養(yǎng)成分，當不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基成分，當不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)，上，在適宜溫度下培養(yǎng)，12天內(nèi)每一菌天內(nèi)每一菌體細胞即能通過很多次細胞分裂而進行體細胞即能通過很多次細胞分裂而進行繁殖，形成一個肉眼可見的細胞群體繁殖，形成一個肉眼可見的細胞群體（菌落）；（菌落）； 每種微生物都有其特有的菌落形態(tài)，一每種微生物都有其特有的菌落形態(tài)，一般情況下一個菌落對應一個微生物活細般情況下一個菌落對應一個微生物活細胞，這樣就可以統(tǒng)計不同微生物在某樣胞，這樣就可以統(tǒng)計不同微生物在某樣品中的數(shù)量。品中的數(shù)量。 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板 3 3個個/ /組；組； 洗手液、酒精燈、記號筆、恒溫培洗手液、酒精燈、記號筆、恒溫培養(yǎng)箱等。養(yǎng)箱等。 )/(100100532mrtNX個 多級撞擊式空氣微生多級撞擊式空氣微生物采樣器物采樣器34 2、計算出相應的空氣中微生物數(shù)量？、計算出相應的空氣中微生物數(shù)量？ 3、洗手前后的手指平板，菌落數(shù)有無、洗手前后的手指平板，菌落數(shù)有無區(qū)別，為什么？如果想定量測定人體某區(qū)別，為什么？如果想定量測定人體某部分皮膚上的細菌如何