分子生物學(xué)第4章病毒分子生物學(xué)

1、第四章第四章 病毒的分子生物學(xué)病毒的分子生物學(xué) - -疾病與人類健康疾病與人類健康Prof.& Dr. Shuqing Cao, School of Biotechnology and Food Engineering, Hefei University of Technology, E-mail: 基因的本質(zhì)及其功能基因的本質(zhì)及其功能細胞水平細胞水平組織水平組織水平精巧細胞分化個體發(fā)育生理疾病的發(fā)生內(nèi)因免疫外因適度免疫免疫缺陷過度免疫狹義的分子生物學(xué)狹義的分子生物學(xué)廣義的分子生物學(xué)廣義的分子生物學(xué)分子水平闡明生命現(xiàn)象分子水平闡明生命現(xiàn)象病理分子水平分子水平個體、群體蛋白異常RNA異常

2、基因異?；虍惓Ｎ锢砘瘜W(xué)生物健康：機體是眾多對立生理過程和物質(zhì)的相對統(tǒng)一體，健康是這些過程和物質(zhì)相互作用而維持的機體相對穩(wěn)定的生命過程（穩(wěn)態(tài)）。疾?。簷C體在一定的條件下與病因相互作用，因穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)異常而發(fā)生的一種異常生命過程（穩(wěn)態(tài)的破壞） 。 現(xiàn)代科學(xué)認為，疾病的發(fā)生直接或間接現(xiàn)代科學(xué)認為，疾病的發(fā)生直接或間接與基因有關(guān)與基因有關(guān)人類疾病都是：“基因病”經(jīng)典單基因病多基因病獲得性基因病經(jīng)典單基因病經(jīng)典單基因病：主要病因是某個基因位點上產(chǎn)生了缺陷等位基因；多基因病多基因?。荷婕岸鄠€基因及調(diào)控這些基因表達的環(huán)境因子之間的相互作用；獲得性基因?。韩@得性基因?。褐饕怯刹≡次⑸锔腥疽鸬膫魅静　Ｒ圆《?/p>

3、病為例 : 首 先 , 病毒基因組的侵染依賴于人類基因組所編碼的受體蛋白 ; 其次 , 病毒基因 組的復(fù)制與擴增依賴于人細胞中的蛋白質(zhì)合成 機器 ; 第三 , 病毒病的實質(zhì)是 破壞了人類基因之間的正常協(xié)調(diào)與功能發(fā)揮。第一節(jié)第一節(jié) 腫瘤與癌癥腫瘤與癌癥第二節(jié)第二節(jié) 人免疫缺陷病毒人免疫缺陷病毒HIV第三節(jié)第三節(jié) 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 HBV第四節(jié)第四節(jié) 基因治療基因治療第一節(jié)第一節(jié) 腫瘤與癌癥腫瘤與癌癥腫瘤腫瘤（tumor，neoplasm）：機體在各種致瘤因素作用下，局部組織的細胞在基因水平上失去對其生長的在基因水平上失去對其生長的正常調(diào)控正常調(diào)控，導(dǎo)致克隆性異常增生而形成的新生物。良性腫

4、瘤：組織來源+瘤惡性腫瘤：上皮組織的惡性腫瘤：組織來源+癌：部位+良惡性癌癥癌癥 （Cancer ）即上皮組織的惡性腫瘤間葉組織的惡性腫瘤：組織來源+肉癌骨髓白細胞的惡性腫瘤：白血?。ㄑ┤澜缑磕昙s有全世界每年約有1000萬人新患癌癥，有萬人新患癌癥，有600萬人萬人死亡。死亡。中國每年約有中國每年約有170萬人新患癌癥，有萬人新患癌癥，有120萬人喪萬人喪生。生。癌癥已分別成為城市和農(nóng)村第一和第三位的死癌癥已分別成為城市和農(nóng)村第一和第三位的死亡原因。亡原因。人類面臨著盡快征服腫瘤的艱巨任務(wù)。人類面臨著盡快征服腫瘤的艱巨任務(wù)。癌基因發(fā)現(xiàn)的足跡癌基因發(fā)現(xiàn)的足跡癌癥的發(fā)生與外部因素有關(guān)癌癥的發(fā)

5、生與外部因素有關(guān)1775年，倫敦醫(yī)生波特（perCIV.lp.ti），掃煙囪的男工上陰囊癌，首次提出癌癥與特殊因素或環(huán)境有密切關(guān)系。德國東部的瀝青鈾礦礦工患肺癌X線打交道的人皮膚癌和白血病吸煙人群肺癌發(fā)病率比不抽煙的人群高20至30倍20世紀初，日本山際克三郎，兔子耳朵反復(fù)涂抹煤焦油幾個月皮膚癌（美國：3一甲基膽蒽和二甲苯丙蒽致癌）特殊因素能夠誘發(fā)癌癥遺傳學(xué)家：X線和化學(xué)物質(zhì)能導(dǎo)致基因突變。組織細胞衰竭化學(xué)物質(zhì)和X線癌癥（組織細胞增生）基因突變細胞癌化的基本環(huán)節(jié)和檢測標(biāo)準？基因突變導(dǎo)致癌癥發(fā)生？化學(xué)物質(zhì) 高度誘變細菌的作用（-） 有效誘發(fā)嚙齒類動物腫瘤（-）致癌物質(zhì)誘變因素理論：誘變因素損害基

6、因?qū)е掳┌Y。問題：如果以上理論成立，癌細胞必定攜 有突變基因，必須找到這些突變基因。（化學(xué)致癌物細胞中所有DNA） 1909; Peyton Rous discovereda virus that causes cancer in chickens (sarcoma) The causitive agent now known as Rous Sarcoma Virus (RSV)Rous awarded Nobel Prize in 1966tumors can be caused by virusesPeyton Rousremove tumor &prepare cell-fre

7、eextractSarcomaSarcomaAvian Sarcoma Virus (ASV)Fig 3.1 Oncogenes (Cooper)Rous sarcoma virus (RSV) compared to avian leukosis virus (ALV)Isolation of Temperature-Sensitive Mutants of RSVFig 3.3 Oncogenes (Cooper)解釋：致癌的基因突變，相應(yīng)的蛋白在較高溫度時喪失功能。MartinIsolation of Transformation-Defective Mutants of RSVFig

8、3.2 Oncogenes (Cooper)推想：病毒的基因有兩部分（病毒的繁殖和致癌的基因），致癌的基因突變使病毒失去致癌能力，但不影響其增殖。VogtTransformation-Defective MutantLTRLTRGAGPOLENVLTRLTRGAGPOLENVTransforming RSVReverse transcriptionLTRLTRGAGPOLENVDNALTRLTRGAGPOLENVthe Discovery of Oncogenes法國：斯蒂朗加利福尼亞：彼紹波、法莫斯RNAsesrcBishop VarmusRouse sarcoma virus癌基因：是一類

9、與腫瘤發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)的基因，在體外可促進細胞轉(zhuǎn)化，在體內(nèi)可誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生，其蛋白產(chǎn)物可促進細胞的增殖。 癌基因可分為兩大類：病毒癌基因（virus oncogene, v-onc.） 目前發(fā)現(xiàn)的病毒癌基因有30多種，而且認為他們最初來自細胞癌基因。細胞癌基因（cellular oncogene, c-onv）通過分子雜交和細胞轉(zhuǎn)染實驗等技術(shù)發(fā)現(xiàn)細胞癌基因。目前發(fā)現(xiàn)的細胞癌基因有100多種，其中部分在病毒中存在。 癌基因Retrovirus Structure一、反轉(zhuǎn)錄病毒致癌基因（P294） 根據(jù)反轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)化細胞的能力將其分為： 急性轉(zhuǎn)化型和非急性轉(zhuǎn)化型急性轉(zhuǎn)化型主要特征： 1.感染后

10、很短時期（幾天或幾周）就出現(xiàn)實體瘤或白血瘤； 2.所帶的癌基因一般位于病毒基因組的內(nèi)部，也可位于基因組的3端，但不會插入結(jié)構(gòu)基因內(nèi)部； 3.具有體外轉(zhuǎn)化能力。非急性轉(zhuǎn)化型感染寄主細胞后需要較長時間（幾個月或幾年，甚至數(shù)十年）后才會致癌。1 急性轉(zhuǎn)化型和非急性轉(zhuǎn)化型（P295）LTRLTRGAGPOLENVSRCTransforming RSVLTRLTRGAGPOLENVTransformation-Defective Mutants of RSV2. v-onc基因的起源（P296）概念：概念： 正常細胞中存在癌基因，在正常情況下它們正常細胞中存在癌基因，在正常情況下它們不具有致癌作用，但在

11、一定情況下被激活后可變成不具有致癌作用，但在一定情況下被激活后可變成具有致癌作用的癌基因，在正常情況下它們不但無具有致癌作用的癌基因，在正常情況下它們不但無害，而且對細胞的發(fā)育、生長和分化的調(diào)節(jié)起重要害，而且對細胞的發(fā)育、生長和分化的調(diào)節(jié)起重要作用。作用。 原癌基因（原癌基因（protooncogene）v-onc病毒名稱動物品種ablAgelson白血病小鼠aktAKT8病毒小鼠cblCaxNS-1小鼠crkCT10肉瘤雞erbA禽類成紅血細胞增生癥ES4雞erbB禽類成紅血細胞增生癥ES4雞ets禽類成細血細胞增生癥E26雞fesGardner-Arnstein貓肉瘤貓fgrGardner

12、-Rasheed貓肉瘤貓finsMcDonough貓肉瘤貓fosFBJ小鼠成骨肉瘤小鼠fpsFujinami肉瘤雞jun禽類肉瘤17雞kitHardy-Zuckerman貓肉瘤貓maf禽類肉瘤AS42雞.v-onc病毒名稱動物品種mosMoloney肉瘤小鼠mpl骨髓增生性白血病小鼠myb禽類髓母細胞增生癥雞myc禽類髓細胞瘤病雞qin禽類肉瘤31雞raf3611小鼠肉瘤小鼠rasHHarvey肉瘤大鼠raskKirsten肉瘤大鼠rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥火雞rosUR2肉瘤雞sea禽類成紅血細胞增生癥S13雞sis猿猴肉瘤猴ski禽類SK雞srcRous肉瘤雞yesY73肉瘤雞.人？已發(fā)現(xiàn)的反轉(zhuǎn)

13、錄病毒癌基因(動物)致癌病毒癌基因理化因素致癌人的癌癌基因?人類癌基因的分離人類癌基因的分離DNAShearmRNAcDNA libraryTransfect CellTransfect CellTransformed PhenotypeTumor麻省工學(xué)院，溫伯格（weinberg)，EJ膀胱癌細胞，1981.8.27獲得癌基因哈佛大學(xué)，庫柏（cooper)，T24 EJ膀胱癌細胞，1981.9.30獲得癌基因哥倫比亞大學(xué)，威格勒（wigler)， T24 EJ膀胱癌細胞！美國國立癌研究所，巴巴希德，膀胱細胞，1981.11獲得癌基因NTH3T3 CELL膀胱癌癌基因肺癌大腸癌病毒癌基因ra

14、s癌基因成為癌研究的核心1989年諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎得主 美國人M.Bishop 與美國科學(xué)家Varmus因在70年代發(fā)現(xiàn)動物的致癌基因不是來自病毒而是來自動物體內(nèi)正常細胞內(nèi)所存在的一種基因原癌基因而獲1989年諾貝爾獎。 BishopVarmusOncogene 是否合適是否合適?Oncogene只是為了使機體只是為了使機體發(fā)生癌癥而存在嗎？發(fā)生癌癥而存在嗎？proto-oncogene從最簡單的生物從最簡單的生物到人的細胞中都原封不同地存在到人的細胞中都原封不同地存在Proto-oncogene與生命的最基本與生命的最基本活動密切相關(guān)活動密切相關(guān)Oncogene function? 原癌基因

15、的特點：原癌基因的特點：廣泛存在于自然界廣泛存在于自然界在進化上高度保守在進化上高度保守是調(diào)節(jié)細胞生長、發(fā)育和分化的重要蛋是調(diào)節(jié)細胞生長、發(fā)育和分化的重要蛋白質(zhì)白質(zhì)在結(jié)構(gòu)上與病毒癌基因相近在結(jié)構(gòu)上與病毒癌基因相近正常情況下表達水平很低正常情況下表達水平很低在一定條件下可被激活成癌基因在一定條件下可被激活成癌基因 二、二、 原癌基因產(chǎn)物及其分類原癌基因產(chǎn)物及其分類（P298）原癌基因的五大功能原癌基因的五大功能細胞增殖因子（細胞增殖因子（如如sis(PDGF-sis(PDGF-）) )增殖因子等的受體（增殖因子等的受體（如如erbBerbB，trktrk）蛋白磷酸化酶（蛋白磷酸化酶（如如srcs

16、rc）G蛋白蛋白如如rasras家族中的家族中的 H-ras H-ras，K-rasK-ras，轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子如如mycmyc家族，家族，fosfos家族，家族，JunJun家族，家族，三、原癌基因的表達調(diào)控三、原癌基因的表達調(diào)控（P298） 原癌基因：單拷貝、正常情況下低水平表達或原癌基因：單拷貝、正常情況下低水平表達或根本不表達根本不表達癌基因？（功能或表達異常）癌基因？（功能或表達異常）translocationamplificationpoint mutationdeletionnormalActivation of ras Oncogenes by Point Mutations

17、Ras mutations in tumors usually involve codons 12, 13, 59 and 61. Mutated ras is found in 50% of colorectal cancers（結(jié)腸直腸癌）and 95% of pancreatic cancers（胰腺癌）.NormalMet Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly GlyRasH ATG ACG GAA TAT AAG CTG GTG GTG GTG GGC GCC GGC GGT.Activated Met Thr Glu Tyr Lys

18、 Leu Val Val Val Gly Ala Val GlyEJRasH GTC1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13Activation of the c-myc proto-oncogene by retroviral promoter and enhancer insertions.(a) The promoter can be activated when the retrovirus inserts upstream (5) of the c-myc exons. The right-hand LTR may then act as a promoter if

19、 the provirus has a defect preventing transcription through to the right-hand LTR. The c-myc gene is shown as containing two exons; there is a further upstream exon but it has no coding sequences. (b) The c-myc gene can also be activated when a retrovirus inserts upstream of the c-myc gene in the op

20、posite transcriptional direction; a viral LTR acts as an enhancer, activating transcription from the c-myc promoter sequence. Modified from actual cases of retroviral insertion described in G. G. Payne et al., 1982, Nature 295:209.2、LTR插入Burkitts Lymphoma3、基因重排（基因重排（rearrange)染色體移位（染色體移位（Chromosomal

21、 translocation）Creation of the Philadelphia chromosomeFound in 95% of CML （ chronic myelogenous leukemia.慢性髓細慢性髓細胞性白血?。┌园籽。﹑atients.bcrabl22q11.29q34der (9)der (22)PhDNARNAProtein22q11.29q34Chromosomes 9 and 22 contain the genes c-abl and bcr at their breakpoint, respectively.Formation of bcr-abl

22、chimeric geneFormation of bcr-abl chimeric RNAFormation of bcr-abl chimeric protein4、缺失（Deletion）oncogene(-)cancer一些原癌基因5上游存在負調(diào)控序列，該序列的缺失或突變，則喪失抑制癌基因表達的能力。Burkitts Lymphoma c-myc因負調(diào)控序列缺失而過度表達。5、基因擴增基因擴增 Proto-oncogene amplification Multiple copies of proto-oncogenes have been found in various tumors

23、. 均勻染色區(qū)均勻染色區(qū)(Homogeneously staining region, HSR)：被復(fù)制的：被復(fù)制的DNA串聯(lián)排列在染串聯(lián)排列在染色體的同一位置。色體的同一位置。 雙微染色體雙微染色體(Double minute chromosomes)：被復(fù)制的被復(fù)制的DNA呈細小成對的染色體樣結(jié)構(gòu)。呈細小成對的染色體樣結(jié)構(gòu)。 6逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)Transduction via retroviruses點突變LTR插入基因重排（染色體易位）基因缺失基因擴增逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)原癌基因激活的機制原癌基因激活的機制Tumors Are Clonal ExpansionsNormalTumo

24、r物理、化學(xué)、生物等誘變因素Proto-oncogene oncogene1 celltumour正常細胞與癌細胞的較量Fig 9.1 Oncogenes (Cooper)正常細胞有抑正常細胞有抑制腫瘤發(fā)生的制腫瘤發(fā)生的基因？基因？1969，牛津大學(xué)哈里斯（Harris)加利福尼亞大學(xué)斯坦布里奇（Stanbridge)將單一一條正常細胞的染色體導(dǎo)入癌細胞成功地抑制細胞的癌化。四、四、抑癌基因(tumorsuppressorgene)視網(wǎng)膜母細胞瘤視網(wǎng)膜母細胞瘤(Retinoblastoma)Most common cancer of infants and children.Survival

25、90% with early diagnosis and treatment.Individuals at greater risk of developing other cancers.RetinoblastomaSporadic（散發(fā)性）：2歲后隨年齡增大而增加，多為單眼。Inherited（遺傳性）：兄弟姐妹及后代患癌，出生后隨年齡增大直線上升，雙眼多。RetinoblastomaSporadic（散發(fā)性）：2歲后隨年齡增大而增加，多為單眼。Inherited（遺傳性）：兄弟姐妹及后代患癌，出生后隨年齡增大直線上升，雙眼多。Knudson, 1971: “two-hit” modelR

26、etinoblastoma發(fā)生過程中需要有兩次基因突變的存在遺傳性：出生時從雙親獲得了變異的致病基因，之后又出現(xiàn)一次基因變異。散發(fā)性：生后發(fā)生兩次基因變異。Retinoblastoma 中存在癌基因？一個基因發(fā)生兩次變異/兩個基因分別發(fā)生變異？費城癌癥研究所Deletion in Chromosome 13 RetinoblastomaFig 9-4, Oncogenes (Cooper)明尼蘇達大學(xué)，尤尼斯（Yunis)，Retinoblastoma 細胞13號染色體長臂缺失一段推測缺失的一段包含致病基因Knudson,缺失的一段中存在抑制腫瘤發(fā)生的基因抗癌基因（anti-oncogene)

27、癌抑制基因（Tumor suppressor gene) 1986，眼科專家Dryja獲得Rb基因； 1987，Stanbridge等分離了人類13號染色體，將它注入培養(yǎng)的成骨肉瘤細胞中，結(jié)果導(dǎo)致了癌細胞逆轉(zhuǎn)。 1987，李文華獲得Rb基因；把Rb轉(zhuǎn)化到培養(yǎng)的癌細胞中使其逆轉(zhuǎn)。 Rb有抑癌作用Cloning of tumor suppressor genes 2001年是能精確瞄準導(dǎo)致癌癥的具體生化缺陷的“智能炸彈”型特定藥物出現(xiàn)的一年。第二節(jié)第二節(jié) 人免疫缺陷病毒人免疫缺陷病毒 HIV HIV人免疫缺陷病毒（HIV），俗稱艾滋?。ˋIDS)病毒，誘發(fā)人類獲得性免疫缺損綜合癥（艾滋?。?。反轉(zhuǎn)錄

28、病毒科慢病毒屬：靈長類免疫缺損病毒亞屬1983年，法國巴斯德研究所montaginer和美國國家衛(wèi)生研究院癌癥研究所Callo等人首次證實HIV是艾滋病的病因。HIV-I是從歐洲和美洲分離的毒株，與猴艾滋病毒只有約45的相識性，致病能力很強，是引起全球艾滋病流行的主要病源；HIV-II與猴艾滋病毒相識性高達75，毒力較弱，引起艾滋病的病程較長，癥狀較輕，主要局限于西部非洲。HIVHIV概述概述艾滋病感染及患者人數(shù)艾滋病感染及患者人數(shù)共共4,2004,200萬萬成人 3,860萬15歲以下兒童320萬 20022002年新感染者人數(shù)年新感染者人數(shù)共共500500萬萬成人420萬15歲以下兒童80

29、萬20022002年艾滋病死亡人數(shù)年艾滋病死亡人數(shù)共共310310萬萬成人 250萬 15歲以下兒童61萬全球艾滋病流行概況全球艾滋病流行概況 (至至2002年年12月月 ) Source:ReportontheGlobalHIV/AIDSEpidemic,UNAIDS,2002資料來源:聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署2002年全球艾滋病流行狀況報告20032003年每天有年每天有1 1萬萬4 4千人感染艾滋病毒千人感染艾滋病毒95%以上在收入較低的國家15歲以下兒童有2000人15-49歲有12000人一半是婦女一半15-24歲艾滋病造成的影響 新感染者中很大一部分是兒童、青少年年富力強者死亡家庭結(jié)構(gòu)變

30、化孤兒-在感染最嚴重的一些國家，2010年將有15%的兒童成為孤兒 。兒童受到的打擊更大（心理社會）中國（大陸）艾滋病流行概況中國（大陸）艾滋病流行概況中國艾滋病流行分為三個時期：中國艾滋病流行分為三個時期： 輸入期（輸入期（1985-19881985-1988） 播散期（播散期（1989198919931993）增長期（增長期（19941994至今）至今） 感染情況：我國艾滋病病毒（感染情況：我國艾滋病病毒（HIVHIV）感染者人數(shù)約為感染者人數(shù)約為100100萬萬，約占總?cè)丝诘模s占總?cè)丝诘?.0670.067 （1/13001/1300，截止，截止20022002年）年）高危人群：吸毒人

31、群、有償供血者、性病患者、暗娼、流高危人群：吸毒人群、有償供血者、性病患者、暗娼、流動人口醫(yī)務(wù)工作者動人口醫(yī)務(wù)工作者 一、一、HIVHIV病毒粒子的形態(tài)結(jié)構(gòu)和傳染病毒粒子的形態(tài)結(jié)構(gòu)和傳染（P308P308）HIV病毒侵犯人體T4淋巴細胞HIV 主要感染T4淋巴細胞病毒RNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA可整合進入感染細胞基因組病毒基因隨免疫細胞DNA復(fù)制表達而復(fù)制表達新增殖病毒再感染更多的細胞HIV通過感染細胞擴散到全身，在淋巴細胞、腦、胸腺、脾等組織發(fā)現(xiàn)了該病毒。摧毀人體免疫系統(tǒng)使機體一開始就處于喪失防御能力HIVHIV病毒破壞人體免疫系統(tǒng)病毒破壞人體免疫系統(tǒng)艾滋病傳播的三種途徑艾滋病傳播的三種途徑

32、HIV依靠血液、血液制品、以及人體分泌液進行傳播，主要通過以下三種途徑： 性接觸傳播 同HIV感染者發(fā)生無保護的性行為 血液傳播 接受了被HIV污染的血液 母嬰傳播 被感染的母親傳染給未出生的嬰兒性接觸傳播性接觸傳播 無論是同性、異性、還是兩性之間的性接觸都會導(dǎo)致艾滋病的傳播。 全世界約有3/4的艾滋病毒傳播是通過性接觸進行的。印度政府張貼推廣安全套的掛幅：正確使用安全套是預(yù)防艾滋病的有效途徑之一血液傳播血液傳播.輸入被病毒污染的血液（輸血前HIV的檢測， HIV感染1周3個月后能測出相應(yīng)抗體，新近HIV感染者的血液仍有危險）.接觸病毒污染注射器、針灸針、拔牙工具.接觸病毒污染的血液制品（人血

33、清白蛋白、Igs和抗凝血因子等，我國已有數(shù)例血友病人因注射進口抗凝血因子濃縮物而感染HIV）在我國，HIV病毒感染者8080是因為在吸毒中共用注射針頭而感染的。 血液傳播是HIV感染最直接的途徑靜脈注射毒品是我國艾滋病傳播的主要途徑母嬰傳播母嬰傳播HIV感染的母親可將病毒傳播給孩子 .懷孕.分娩.母乳喂養(yǎng)一名烏干達婦女帶著18個月大的孩子接受檢查。這名30歲的婦女當(dāng)天剛剛被確診為艾滋病病毒攜帶者，她的丈夫目前也染病在家日常生活接觸不會傳染艾滋日常生活接觸不會傳染艾滋病病 一般的工作生活接觸不會感染艾滋病 艾滋病不會經(jīng)馬桶圈、電話機、餐飲具、臥具、游泳池或公共浴池等公共設(shè)施傳播。 艾滋病也不會通

34、過一般社交上的接吻、擁抱傳播。 咳嗽、蚊蟲叮咬不會傳染艾滋病。二、二、HIVHIV基因組及其編碼的蛋白（基因組及其編碼的蛋白（P308P308）HIV-1GENOMEDiploid,1XRNA,Size=9,749nteachmoleculetRNA(LYS)primerattachedtoeachRNA5capand3PolyAtailCap-R-U5-PrimerBind-(TENORFs)-U3-R-PolyALTRofPROVIRUS(2XDNA):U3-R-U5=634bpeachLTRU3=453bpR=98bpU5=83bp小的非結(jié)構(gòu)性蛋白早期(early)TAT: 轉(zhuǎn)錄反式激活

35、子（TransActivatorofTranscription）REV: 病毒蛋白表達的調(diào)控子（RegulatorofVirionProtein）ExpressionNEF: 負性調(diào)控因子（NegativeRegulatoryFactor）晚期(late)VIF: 病毒侵襲性因子（VirionInfectivityFactor）VPU:病毒蛋白U（ ViralProteinU）VPR:病毒蛋白R（ ViralProteinR）TAT 和 REV 為 HIV 復(fù)制所必須4、HIV additional genes表2 HIV基因、蛋白質(zhì)產(chǎn)物及其功能Gag：P25(p24)，衣殼結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì) p17

36、，基質(zhì)蛋白質(zhì) p7/6(NC)，核衣殼蛋白質(zhì)Pol：P51、p66，逆轉(zhuǎn)錄酶（RT） IN：P32， HIVcDNA整合 pR：P10，蛋白酶Env：gp120,包膜表面蛋白質(zhì)gp41(gp36)，包膜表面蛋白質(zhì)Tat：P14，正調(diào)控因子（與LTR結(jié)合激活病毒基因表達）Rev：P19，調(diào)控因子（增強gag、env基因表達）Nef：P27，負調(diào)控因子vif：P23，侵染因子Vpr：P18，有助病毒復(fù)制；激活轉(zhuǎn)錄Vpu：P15，有助HIV的釋放；可能為新病毒子的包裝所需（？）AretrovirusLatencySpecificdestructionofCD4+cellsHowdoestheviru

37、senterandkillthecell?Mechanism三、三、HIV的復(fù)制（的復(fù)制（P311）1、 LTR序列（1）核心調(diào)控元件：多個與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的區(qū)域（U3portionoftheLTR）（2）核心轉(zhuǎn)錄單位：啟動子單位（3）反式激活因子應(yīng)答元件：反式激活應(yīng)答元件（TAR）四、四、HIVIHIVI基因的表達調(diào)控（基因的表達調(diào)控（P313P313）TARTAT binds to TAR（1）TATPROTEINBINDSTOTARSEQUENCE(only70nt)THATSTOPSRANSCRIPTIONANDALLOWSTRANSCRIPTIONTOPROCEED2 2 參與參與HI

38、VHIV復(fù)制的調(diào)控蛋白復(fù)制的調(diào)控蛋白（3）Nef：負調(diào)控因子和磷酸化蛋白，抑制由特異性轉(zhuǎn)錄的HIV-I前病毒基因的表達。（4）vif ：病毒感染性因子（5）Vpr：作用于 HIV LTR，促進病毒復(fù)制（6）Vpu：研究推測Vpu促進病毒粒子組裝、成熟和釋放艾滋病的臨床分期艾滋病的臨床分期：.急性感染期.潛伏期.艾滋病前期.典型艾滋病期不是每個感染者都會完整的出現(xiàn)四期表現(xiàn)四個時期是一個漸進的和連貫的發(fā)展過程五、五、HIVHIV的感染及致病機理（的感染及致病機理（P318P318）急性感染期（窗口期）急性感染期（窗口期） HIV侵襲人體后對機體的刺激所引起的反應(yīng) 病人發(fā)熱、皮疹、淋巴結(jié)腫大、還會發(fā)

39、生乏力、出汗、惡心、嘔吐、腹瀉、咽炎等，有的還出現(xiàn)急性無菌性腦膜炎，表現(xiàn)為頭痛、神經(jīng)性癥狀和腦膜刺激癥。 末梢血檢查，白細胞總數(shù)正常，或淋巴細胞減少，單核細胞增加。 急性感染期時，癥狀常較輕微，容易被忽略 在被感染26周后，血清HIV抗體可呈現(xiàn)陽性反應(yīng) 此后，臨床上出現(xiàn)一個長短不等的、相對健康的、無癥狀的潛伏期。 潛伏期潛伏期潛伏期指的是從感染HIV開始，到出現(xiàn)艾滋病臨床癥狀和體征的時間潛伏期感染者可以沒有任何臨床癥狀癥潛伏期不是靜止期，更不是安全期，病毒在持續(xù)繁殖，具有強烈的破壞作用艾滋病的潛伏期是2-10年，這對早期發(fā)現(xiàn)病人及預(yù)防都造成很大困難。 病毒幾乎從血循環(huán)中消失病毒幾乎從血循環(huán)中消

40、失艾滋病前期艾滋病前期艾滋病前期是潛伏期后開始出現(xiàn)與艾滋病有關(guān)的癥狀和體征，直至發(fā)展成典型的艾滋病的一段時間。也稱“艾滋病相關(guān)綜合癥”、“淋巴結(jié)病相關(guān)綜合癥” 等。這時，病人已具備了艾滋病的最基本特點，即細胞免疫缺陷，只是癥狀較輕而已。主要的臨床表現(xiàn)有：.淋巴結(jié)腫大.毒性疾病的全身不適、肌肉疼痛等全身癥狀.經(jīng)常出現(xiàn)各種特殊性或復(fù)發(fā)性的非致命性感染.口腔可出現(xiàn)毛狀白斑，毛狀白斑的存在是早期診斷艾滋病的重要線索。典型的艾滋病期典型的艾滋病期典型的艾滋病期是艾滋病病毒感染的最終階段。此期具有三個基本特點：.嚴重的細胞免疫缺陷發(fā)生各種致命性機會性感染.發(fā)生各種惡性腫瘤.艾滋病的終期，免疫功能全面崩潰，

41、病人出現(xiàn)各種嚴重的綜合病癥，直至死亡。 卡氏肺囊蟲感染卡氏肺囊蟲感染卡波濟氏肉瘤卡波濟氏肉瘤念珠菌感染：如鵝口瘡念珠菌性肺炎AIDS AIDS 病病 程程AIDS AIDS 病病 程程AIDS AIDS 病病 程程HIVHIV致病機制致病機制獲得性免疫缺陷獲得性免疫缺陷1.機體HIV感染后產(chǎn)生特異性細胞和體液免疫，但不足以清楚所有病毒終生攜帶HIV2.潛伏78年后產(chǎn)生大量病毒，HIV感染的CD4+細胞與未感染的CD4+細胞融合，改變細胞膜的通透性，引起細胞的溶解和破壞3.受HIV感染的CD4+細胞與其他細胞融合而喪失功能4.游離的gp120與未感染的CD4+T淋巴細胞結(jié)合成為靶細胞，被免疫系統(tǒng)

42、清除（ADCC、CTL）5. gp120封閉T細胞的CD4分子，抑制其輔佐功能6.gp120 與CD4結(jié)合后產(chǎn)生抗CD4抗體，阻斷T細胞功能7.gp41透膜蛋白，能抑制有絲分裂原和抗原刺激淋巴細胞的增殖反應(yīng)，從而使CD4+T淋巴細胞減少8.HIV感染對其他免疫細胞的影響，HIV還可感染其它具有CD4受體及無此受體的細胞，在其他一些淋巴細胞、腦、胸腺、脾等組織發(fā)現(xiàn)了該病毒， HIV可經(jīng)M、單核細胞擴散。促進促進AIDSAIDS發(fā)生的因素發(fā)生的因素 HIV感染后長時間在體內(nèi)保持極低水平的復(fù)制，一是由于免疫應(yīng)答抑制了病毒復(fù)制，二是HIV潛伏于CD4+淋巴細胞 一些細胞因子能激活HIV的復(fù)制和表達，糖

43、皮質(zhì)激素和白介素（IL-4，IL-6和IL-10等）能增強HIV的復(fù)制；腫瘤壞死因子（TNF）、和IL-1能增強HIV的表達 其他病毒的基因產(chǎn)物能激活HIV的復(fù)制和表達 有些病毒能協(xié)同HIV-1破壞CD4+T 淋巴細胞，臨床上AIDS患者常常合并感染巨細胞病毒、皰疹病毒、EB病毒、人類 T淋巴細胞白血病病毒等，促使病情發(fā)展。 HIV大量復(fù)制和播散、大量復(fù)制和播散、AIDSHIVHIV感染感染免疫缺陷免疫缺陷 AIDSAIDS免疫系統(tǒng)：抵抗外部感染免疫系統(tǒng)：抵抗外部感染初期：抑制初期：抑制HIVHIV的感染（但不能清除的感染（但不能清除）HIVHIV變異變異免疫系統(tǒng)被破壞免疫系統(tǒng)被破壞免疫系統(tǒng)被

44、進一步破壞免疫系統(tǒng)被進一步破壞免疫系統(tǒng)對免疫系統(tǒng)對HIVHIV的感染無能為力的感染無能為力促發(fā)因素促發(fā)因素HIVHIV感染與腫瘤感染與腫瘤在HIV感染者中卡波濟肉瘤，B細胞淋巴瘤，何杰金病及其它一些腫瘤發(fā)生率升高原因：.機體免疫功能破壞.病毒感染，如HIV感染者出現(xiàn)B細胞淋巴瘤與EBV有關(guān)HIV并不能直接引起腫瘤，在腫瘤細胞DNA內(nèi)并不能證明有病毒序列存在1.HIV侵入人體后感染CD4+細胞，復(fù)制并部分整合于細胞染色體DNA中成為潛伏型；2.機體免疫應(yīng)答對HIV的抵抗作用，使感染初期的HIV低水平復(fù)制，同時也促使HIV變異；3.在其他促發(fā)因素的作用下，潛伏的HIV被激活而大量復(fù)制， HIV廣泛

45、侵入并損傷CD4+T淋巴細胞及其它淋巴細胞，導(dǎo)致整個免疫功能缺陷；4.免疫系統(tǒng)對HIV的感染無能為力， HIV大量復(fù)制和播散，最終發(fā)生一系列頑固性機會感染和腫瘤的發(fā)生。HIV感染后的發(fā)病機理可歸納如下：感染后的發(fā)病機理可歸納如下：六、六、愛滋病的治療及預(yù)防愛滋病的治療及預(yù)防 AIDS尚無特效藥和疫苗 HIV具有迅速變異能力 人體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體總落后于病毒的變異 給目前特效藥和疫苗研制工作造成了極大困難 最強大的預(yù)防武器是宣傳教育 筑起強有力的社會“免疫系統(tǒng)”課堂作業(yè)（課堂作業(yè)（2 2）1 1、假定你從一新發(fā)現(xiàn)的病毒中提取了核酸。請用最簡單的、假定你從一新發(fā)現(xiàn)的病毒中提取了核酸。請用最簡單的方法

46、確定：方法確定：（1 1）它是）它是DNADNA還是還是RNARNA？（？（2 2）它是單鏈還是雙鏈？）它是單鏈還是雙鏈？2 2、簡述熱激蛋白調(diào)控的基因表達機制。、簡述熱激蛋白調(diào)控的基因表達機制。3 3、簡述、簡述真核細胞與原核細胞在基因轉(zhuǎn)錄、翻譯真核細胞與原核細胞在基因轉(zhuǎn)錄、翻譯 及及 DNA DNA 的空間結(jié)構(gòu)方面的差異的空間結(jié)構(gòu)方面的差異。 第三節(jié)第三節(jié) 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 HBV HBV （P320P320）病毒性肝炎病毒性肝炎 中國是病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)。 目前已知的甲、乙、丙、丁、戊、己、庚及TTV型肝炎 在我國均有發(fā)生，其中尤以甲、乙、丙、戊4個型別的流行情況嚴重。 僅乙肝病

47、毒攜帶者以達1.2億之多。 病毒性肝炎是對我國危害最為嚴重的傳染病。 肝炎病毒肝炎病毒 甲型肝炎病毒與戊型肝炎病毒由消化道傳播，引起急性肝炎，不轉(zhuǎn)為慢性肝炎或慢性攜帶者。 乙型與丙型肝炎病毒主要由輸血、血制品或注射器污染而傳播，除引起急性肝炎外，可致慢性肝炎，并與肝硬化及肝癌相關(guān)。 丁型肝炎病毒為一種缺陷病毒（與乙肝病毒有關(guān)） 已型肝炎病毒（HFV） 庚型肝炎病毒（HGV） TT型肝炎病毒（TTV）項目甲型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎戌型肝炎病毒HAVHBVHCVHDVHEV病毒分類微小核糖核酸病毒嗜肝脫氧核糖核酸病毒黃病毒缺陷病毒杯狀病毒基因組ss RNA（+）7.8kb dsDNA3,2k

48、bssRNA(+)10.5kbssRNA(-)1.7kbssRNA(+)3.5kb傳播途徑腸道傳播腸道外及性傳播多數(shù)腸道外傳播多數(shù)和腸道外傳播腸道傳播潛伏期/ 范圍（ 天）25/154575/4012050/159050/257540/2030慢性化無310%4070%270%無暴發(fā)性肝炎0.2%0.2%0.2%220%0.210%五型病毒性肝炎比較五型病毒性肝炎比較 一一 肝炎病毒的分類地位及病毒粒子結(jié)肝炎病毒的分類地位及病毒粒子結(jié)構(gòu)（構(gòu)（P321P321）HBVHBV屬屬 嗜肝嗜肝DNADNA病毒病毒土撥鼠肝炎病毒土撥鼠肝炎病毒地松鼠肝炎病毒地松鼠肝炎病毒鴨乙型肝炎病毒鴨乙型肝炎病毒蒼鷺乙

49、型肝炎病毒蒼鷺乙型肝炎病毒乙肝病毒的分類地位乙肝病毒的分類地位Animal Models of HepadnavirusesHBVHBV病毒粒子結(jié)構(gòu)病毒粒子結(jié)構(gòu)大球形（大球形（DaneDane）顆粒顆粒（直徑（直徑42 42 nmnm ）小球形顆粒小球形顆粒（直徑（直徑22 22 nmnm）數(shù)量最多數(shù)量最多管形顆粒管形顆粒（224040400 400 nmnm）Dane Dane 顆粒（完整的病毒）形態(tài)顆粒（完整的病毒）形態(tài)囊膜和核衣殼組成囊膜和核衣殼組成核衣殼為核衣殼為2020面體面體游離的核衣殼只能在肝細游離的核衣殼只能在肝細胞核內(nèi)觀察到胞核內(nèi)觀察到HBVHBV的小球形顆粒和管形顆粒的小球

50、形顆粒和管形顆?！翱招臏珗F空心湯團”均為過剩的病毒外殼僅含HBsAgi. 無感染性HBV感染后出現(xiàn)于血液由HBsAg（病毒的囊膜）組成顆粒中未檢出DNA多聚酶活性不是HBV，是HBV感染肝細胞時過剩囊膜游離于血循環(huán)中的“空空心湯團心湯團”。 二、HBVHBV基因組及其所編碼的主基因組及其所編碼的主要蛋白（要蛋白（P321P321）雙鏈部分環(huán)狀結(jié)構(gòu)：兩鏈長短不一短鏈和長鏈的5端通過240bp配對維持環(huán)狀結(jié)構(gòu)長鏈(L)完整、恒定3.2Kb ，負鏈短鏈(S)為正鏈，長度可變，約為長鏈長度的5080%（100%）S鏈可按5-3增生S鏈3端的位置是可變的5末端蛋白和具有帽子結(jié)構(gòu)的小RNA與病毒的復(fù)制有關(guān)

51、兩條鏈互補區(qū)兩惻各有一個11個堿基的直接重復(fù)序列，稱DR1和DR2。1.1. HBVHBV基因組基因組2. 2. HBVHBV轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物基因重疊基因重疊均有均有polyApolyAL L鏈鏈 3.53.5kb/kb/2.12.1kb kb S S鏈鏈 2.42.4kb/kb/0.70.7kbkb3.53.5kb kb L L鏈？推測末端來自共價閉環(huán)的雙鏈區(qū)鏈？推測末端來自共價閉環(huán)的雙鏈區(qū)(1)啟動子C啟動子：調(diào)控3.5kb mRNA 前S1啟動子：調(diào)控2.4kb mRNA附近有肝細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子HNF1的結(jié)合位點，前S2啟動子：調(diào)控2.1kb mRNA ，可與特異的調(diào)控蛋白結(jié)合而影響轉(zhuǎn)

52、錄X啟動子：調(diào)控0.7kb mRNA 3.3. HBV HBV基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控HBV基因組中存在兩個激活HPV轉(zhuǎn)錄的增強子區(qū)域：增強子I.肝細胞特異性， HBV嗜肝性的基礎(chǔ).含多個細胞反式作用因子結(jié)合位點.促進前S1、前S2、X和C啟動子的轉(zhuǎn)錄增強子II（根據(jù)與主要核蛋白的結(jié)合位點分為A、B區(qū).A區(qū)為正調(diào)控元件，與肝細胞專一性有關(guān)，單獨無活性.B區(qū)為增強子II的基本單位(2)(2)增強子增強子X 蛋白具有反式作用因子功能. 激活HBV自身啟動子（前S1、前S2、X和C啟動子）及增強子I.激活多種異源啟動子和增強子，如-IFN、HIV-I等(3)(3)反式作用因子反式作用因子pre-

53、S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-CHBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAg4. HBV4. HBV的編碼區(qū)及產(chǎn)物的編碼區(qū)及產(chǎn)物分為S基因和前S基因二部分S基因編碼主要表面蛋白（表面抗原主要成分，疫苗）前S基因編碼Pre S1和Pre S2蛋白中蛋白：PreS2蛋白-S蛋白I.大蛋白：PreS1、S2蛋白-S蛋白(1)S(1)S編碼區(qū)編碼區(qū)HBsAgHBsAg：三種形態(tài)的顆粒所共有廣義的HBsAg由三種蛋白組成：.主要表面蛋白（S蛋白，小分子HBsAg），226aa.中分子蛋白（中分子 HBsAg）， 226aa+55aa.大分子蛋白（大分子HBsAg），

54、 226aa+55aa+119aa狹義HBsAg指S蛋白，是HBV囊膜表面抗原的主要成份.以二硫鍵相連形成二聚體，代表HBsAg的結(jié)構(gòu)單位，具備完整的抗原性，二聚體解離，HBsAg抗原性明顯下降。.能刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，該抗體具有免疫保護作用。.HBsAg的檢出是HBV感染的標(biāo)志之一。前前S S蛋白蛋白 前S蛋白2(Pre S2)暴露于HBV囊膜外層，具有多聚人血清白蛋白 (Polymenized Human Serum Albumin,PHSA)的受體（PHSA-R），能與PH-SA結(jié)合。 肝細胞表面也有PHSA-R，HBV能通過血循環(huán)中存在的PHSA的介導(dǎo)，吸附到肝細胞表面，最后經(jīng)胞飲作

55、用進入肝細胞內(nèi)。 Pre S2有良好的免疫原性。 Pre S1有較強免疫原性，并能增強Pre S2和HBsAg 的免疫原性P區(qū)最長(占基因組75%以上)，包含全部S編碼區(qū)并與C和X編碼區(qū)部分重疊編碼區(qū)有三個功能區(qū)和一個間隔區(qū)組成.末端蛋白（引物酶）.間隔區(qū).反轉(zhuǎn)錄酶/DNA多聚酶.RNaseH多肽小的功能型多肽(2)P(2)P編碼區(qū)編碼區(qū)mRNA(3)C(3)C編碼區(qū)編碼區(qū)包括前包括前C C基因和基因和C C基因，編碼基因，編碼HBeAgHBeAg和和HBcAgHBcAgHBeAg是是HBcAg的降解產(chǎn)物？的降解產(chǎn)物？HBV CHBV C基因基因前前C區(qū)區(qū)C C 區(qū)區(qū)前前C 蛋白蛋白HBeAg

56、C C 蛋白蛋白HBcAgHBcAg轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄錄分泌到細胞外分泌到細胞外前前C區(qū)區(qū)C 區(qū)區(qū)C 區(qū)區(qū)翻譯、加翻譯、加工工存在于血清中存在于血清中HBcAg存在于Dane顆粒的核心和乙型肝炎患者的肝細胞核內(nèi)一般從HBcAg陽性尸檢肝或?qū)嶒灨腥镜暮谛尚筛闻K提取在乙型肝炎的急性期、恢復(fù)期和HBcAg攜帶者中?？蓽y出抗HBc該抗體對病毒無中和作用體內(nèi)如發(fā)現(xiàn)HBcAg或抗HBc表示HBV在肝內(nèi)持續(xù)復(fù)制 HBeAgHBeAg是一種溶性抗原一般不出現(xiàn)在HBV病毒粒子中X區(qū)最短，編碼X蛋白覆蓋長鏈的裂口部位X蛋白具有反式作用因子功能，與肝癌的發(fā)生有關(guān)(4) X(4) X編碼區(qū)編碼區(qū)三、HBV的復(fù)制dsDNA,dsD

57、NA,不是不是通過半保留復(fù)制方式復(fù)制通過半保留復(fù)制方式復(fù)制 病毒抗原抗體系統(tǒng)檢測結(jié)果分析病毒抗原抗體系統(tǒng)檢測結(jié)果分析第四節(jié)第四節(jié) 基因治療基因治療（P327P327）基因治療的概念基因治療的概念 基因治療（基因治療（gene therapygene therapy）就是向就是向有功能缺陷的有功能缺陷的細細胞補充相應(yīng)功能基因，以糾正或補償其基因缺陷，從而胞補充相應(yīng)功能基因，以糾正或補償其基因缺陷，從而達到治療的目的。達到治療的目的。1體細胞基因治療：把外源基因?qū)牖颊叩捏w細胞，以治療或體細胞基因治療：把外源基因?qū)牖颊叩捏w細胞，以治療或預(yù)防基因接納者個人的疾病，只有特定的個體受益，但不能遺預(yù)防基

58、因接納者個人的疾病，只有特定的個體受益，但不能遺傳給后代。傳給后代。 2 2種系細胞的基因治療：在生殖細胞（精子、卵子或未分化種系細胞的基因治療：在生殖細胞（精子、卵子或未分化的受精卵）中引入正?；蚧蛐迯?fù)缺陷基因以校正遺傳缺陷。的受精卵）中引入正?；蚧蛐迯?fù)缺陷基因以校正遺傳缺陷。引入的外源基因（整合到基因組）能遺傳給后代。引入的外源基因（整合到基因組）能遺傳給后代。優(yōu)點：目的基因轉(zhuǎn)移到機體的所有組織并遺傳給后代。優(yōu)點：目的基因轉(zhuǎn)移到機體的所有組織并遺傳給后代。目前尚未開展，一是涉及倫理學(xué)問題；二是技術(shù)困難（診斷困目前尚未開展，一是涉及倫理學(xué)問題；二是技術(shù)困難（診斷困難、引起新的插入突變的危

59、險）難、引起新的插入突變的危險） 基因治療的類型基因治療的類型一、基因治療的前景分析基因治療與基因工程比較：1.治療基因人體細胞/目的基因其它物種細胞（純化）2.基因治療：降低成本3.理論上所有治療基因（包括非分泌蛋白）均可開展基因治療4.基因治療：技術(shù)上難度大，有效性和安全性要求高5.基因治療：僅10年歷史，技術(shù)不夠成熟，風(fēng)險大二、基因治療的兩大途徑二、基因治療的兩大途徑又稱間接體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移，基本途徑是：個體供者組織或細胞移植物組織培養(yǎng)治療基因或標(biāo)記基因培養(yǎng)細胞選擇或富集轉(zhuǎn)基因細胞I.轉(zhuǎn)染細胞實驗動物或受試病人的靶器官1. 通過回體（通過回體（ex vivo）基因轉(zhuǎn)移的治療基因轉(zhuǎn)移的治療途徑

60、途徑又稱直接體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移，將插入目的基因的表達載體直接導(dǎo)入體內(nèi)的方法?；就緩绞牵汉委熁虮磉_載體直接注射/與介質(zhì)結(jié)合后直接注射或用基因槍導(dǎo)入體內(nèi)包裝細胞系中包裝好的復(fù)制缺陷型病毒顆粒優(yōu)點：簡便省時省力，能很快觀察到外源基因的表達及作用缺點：DNA在體內(nèi)不易進入細胞，易被降解，以病毒顆粒的形式導(dǎo)入人體則易引起免疫反應(yīng)和被補體滅活。2. 過體內(nèi)（過體內(nèi)（in vivo）基因轉(zhuǎn)移的途徑基因轉(zhuǎn)移的途徑基因轉(zhuǎn)移的方法基因轉(zhuǎn)移的方法1.1.生物學(xué)方法生物學(xué)方法逆轉(zhuǎn)錄病毒載體逆轉(zhuǎn)錄病毒載體腺病毒載體腺病毒載體腺病毒相關(guān)病毒載體腺病毒相關(guān)病毒載體單純皰疹病毒載體單純皰疹病毒載體2.2.非生物學(xué)方法非生物學(xué)方法直接注射直接