1-微生物鑒定技術(shù)在藥品檢驗(yàn)及監(jiān)管中的應(yīng)用(簡(jiǎn)版)-徐_偉_東[1]

1、上海市食品藥品檢驗(yàn)所上海市食品藥品檢驗(yàn)所2021年年5月月27徐徐 偉偉 東東微生物鑒定技術(shù)在藥品檢驗(yàn)微生物鑒定技術(shù)在藥品檢驗(yàn)和監(jiān)管中的應(yīng)用和監(jiān)管中的應(yīng)用微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)二二樣品微生物的鑒定及同源性分析樣品微生物的鑒定及同源性分析三三微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)微生物新技術(shù)的應(yīng)用微生物新技術(shù)的應(yīng)用四四微生物污染監(jiān)管方式的思考微生物污染監(jiān)管方式的思考五五背景介紹背景介紹一一一、背景介紹一、背景介紹v 在在1993-1998年間，美國(guó)年間，美國(guó)FDA報(bào)告的由微生物污染引起的召報(bào)告的由微生物污染引起的召回案件到達(dá)回案件到達(dá)1370件，占所有產(chǎn)品召回案件的件

2、，占所有產(chǎn)品召回案件的36%v 我國(guó)藥品微生物污染的調(diào)查數(shù)據(jù)較少，但微生物污染仍居首位，我國(guó)藥品微生物污染的調(diào)查數(shù)據(jù)較少，但微生物污染仍居首位，近期披露的黑龍江完達(dá)山刺五加注射液受微生物污染的問題，近期披露的黑龍江完達(dá)山刺五加注射液受微生物污染的問題，已經(jīng)造成了十分嚴(yán)重后果和無(wú)法挽回的損失。已經(jīng)造成了十分嚴(yán)重后果和無(wú)法挽回的損失。v 藥品平安管理仍存在監(jiān)管漏洞，造成定性難、溯源難、應(yīng)變慢藥品平安管理仍存在監(jiān)管漏洞，造成定性難、溯源難、應(yīng)變慢等問題，以及新的致病微生物或變異體的出現(xiàn)，導(dǎo)致藥品受到等問題，以及新的致病微生物或變異體的出現(xiàn)，導(dǎo)致藥品受到微生物污染微生物污染v 我國(guó)各大城市不斷承辦國(guó)際

3、大型體育賽事和國(guó)際會(huì)議尤其是我國(guó)各大城市不斷承辦國(guó)際大型體育賽事和國(guó)際會(huì)議尤其是2021年在我國(guó)召開的上海世界博覽會(huì)，也進(jìn)一步增強(qiáng)了對(duì)藥年在我國(guó)召開的上海世界博覽會(huì)，也進(jìn)一步增強(qiáng)了對(duì)藥品的監(jiān)督管理水平的要求。品的監(jiān)督管理水平的要求。 對(duì)微生物分類水平較低，只能鑒定對(duì)微生物分類水平較低，只能鑒定到到“屬，鑒定微生物種類有限屬，鑒定微生物種類有限傳統(tǒng)微生物鑒定方法的局限傳統(tǒng)微生物鑒定方法的局限分子方法分子方法v 分子生物學(xué)技術(shù)研究的是分子生物學(xué)技術(shù)研究的是微生物微生物DNA序列信息，常序列信息，常用于細(xì)菌分類的用于細(xì)菌分類的16S r DNA也有也有1500個(gè)堿基，個(gè)堿基，每個(gè)堿基位置由每個(gè)堿基位

4、置由ATGC四四種核苷酸中的一種組成，種核苷酸中的一種組成，多樣性可達(dá)種可能約多樣性可達(dá)種可能約10900。v 新版的新版的?伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)手冊(cè)?微生物微生物DNA變異信變異信息為主息為主 傳統(tǒng)方法傳統(tǒng)方法v 人類的土壤微生物已到達(dá)人類的土壤微生物已到達(dá)10萬(wàn)種萬(wàn)種 v 現(xiàn)在常用的微生物鑒定用生現(xiàn)在常用的微生物鑒定用生化反響只有化反響只有20多種，實(shí)際多種，實(shí)際經(jīng)過研究形成一致標(biāo)準(zhǔn)的、經(jīng)過研究形成一致標(biāo)準(zhǔn)的、有意義的生化鑒定結(jié)果僅有意義的生化鑒定結(jié)果僅2000多種。多種。 v 微生物生化鑒定金標(biāo)準(zhǔn)的微生物生化鑒定金標(biāo)準(zhǔn)的API鑒定系統(tǒng)鑒定系統(tǒng)僅能鑒定僅能鑒定550種細(xì)菌種

5、細(xì)菌v 通過碳源利用進(jìn)行微生物鑒通過碳源利用進(jìn)行微生物鑒定的定的Biolog系統(tǒng)也僅能鑒系統(tǒng)也僅能鑒定定2000種微生物種微生物 微生物變異能力強(qiáng)，生化反響準(zhǔn)確微生物變異能力強(qiáng)，生化反響準(zhǔn)確度不高，錯(cuò)檢漏檢現(xiàn)象普遍度不高，錯(cuò)檢漏檢現(xiàn)象普遍傳統(tǒng)微生物鑒定方法的局限傳統(tǒng)微生物鑒定方法的局限v 生化反響鑒定主要是利用不同微生物自身所特有的生化反響鑒定主要是利用不同微生物自身所特有的不同酶系統(tǒng)，根據(jù)微生物利用分解底物的種類和營(yíng)不同酶系統(tǒng)，根據(jù)微生物利用分解底物的種類和營(yíng)養(yǎng)來源進(jìn)行分類鑒定。在大多數(shù)情況下，同養(yǎng)來源進(jìn)行分類鑒定。在大多數(shù)情況下，同“屬屬微生物的酶系統(tǒng)根本相同，可以到達(dá)鑒定的目的微微生物的

6、酶系統(tǒng)根本相同，可以到達(dá)鑒定的目的微生物生物DNA突變能力強(qiáng)，如果這些突變點(diǎn)涉及到微生突變能力強(qiáng)，如果這些突變點(diǎn)涉及到微生物酶系統(tǒng)的表達(dá)，就會(huì)造成酶活性降低甚至酶缺陷，物酶系統(tǒng)的表達(dá)，就會(huì)造成酶活性降低甚至酶缺陷，導(dǎo)致鑒定失敗導(dǎo)致鑒定失敗 v 在現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，只有血漿凝固酶陽(yáng)性反響才會(huì)在現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，只有血漿凝固酶陽(yáng)性反響才會(huì)被確證為金黃色葡萄球菌陽(yáng)性，陰性反響的微生物被確證為金黃色葡萄球菌陽(yáng)性，陰性反響的微生物那么被作為無(wú)害菌處理。然而，近幾年引起高度關(guān)那么被作為無(wú)害菌處理。然而，近幾年引起高度關(guān)注的血漿凝固酶陰性金黃色葡萄球菌的流行使得金注的血漿凝固酶陰性金黃色葡萄球菌的流行使得金黃色

7、葡萄球菌被漏檢，血漿凝固酶陰性金黃色葡萄黃色葡萄球菌被漏檢，血漿凝固酶陰性金黃色葡萄球菌往往含有腸毒素和其他毒素，是引起醫(yī)院感染、球菌往往含有腸毒素和其他毒素，是引起醫(yī)院感染、社區(qū)食物中毒的重要污染源。社區(qū)食物中毒的重要污染源。 不能對(duì)微生物污染進(jìn)行準(zhǔn)確溯源分析不能對(duì)微生物污染進(jìn)行準(zhǔn)確溯源分析傳統(tǒng)微生物鑒定方法的局限傳統(tǒng)微生物鑒定方法的局限v 在進(jìn)化過程中生物在進(jìn)化過程中生物DNA分子會(huì)形成大量分子會(huì)形成大量DNA多態(tài)性多態(tài)性區(qū)域和非編碼區(qū)域和非編碼DNA序列。序列。 不會(huì)造成生物種屬歸類爭(zhēng)議不會(huì)造成生物種屬歸類爭(zhēng)議 也不會(huì)造成任何形態(tài)上或酶系統(tǒng)表達(dá)的改變也不會(huì)造成任何形態(tài)上或酶系統(tǒng)表達(dá)的改變

8、 通過生化鑒定方法無(wú)法對(duì)這類變化進(jìn)行有效的分析通過生化鑒定方法無(wú)法對(duì)這類變化進(jìn)行有效的分析DNA位點(diǎn)變化卻包含大量重要的微生物所獨(dú)有的進(jìn)位點(diǎn)變化卻包含大量重要的微生物所獨(dú)有的進(jìn)化信息，可以與其他來源的同種微生物相區(qū)別，也是化信息，可以與其他來源的同種微生物相區(qū)別，也是微生物種內(nèi)差異的來源微生物種內(nèi)差異的來源v 如常用于真菌種類鑒定的如常用于真菌種類鑒定的ITS基因基因v ITS片段能保持相對(duì)穩(wěn)定的變異頻率片段能保持相對(duì)穩(wěn)定的變異頻率v 親緣關(guān)系非常接近的親緣關(guān)系非常接近的2個(gè)種都能在個(gè)種都能在ITS序列上表現(xiàn)出序列上表現(xiàn)出差異，顯示最近的進(jìn)化特征差異，顯示最近的進(jìn)化特征微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)

9、微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)二二樣品微生物的鑒定及同源性分析樣品微生物的鑒定及同源性分析三三微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)微生物新技術(shù)的應(yīng)用微生物新技術(shù)的應(yīng)用四四微生物污染監(jiān)管方式的思考微生物污染監(jiān)管方式的思考五五背景介紹背景介紹一一2.1 技術(shù)手段技術(shù)手段2.2 方法比較方法比較2.1 技術(shù)手段技術(shù)手段2.2 方法比較方法比較革蘭氏染色鏡鑒革蘭氏染色鏡鑒按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行傳統(tǒng)的生化反響鑒定傳統(tǒng)的生化反響鑒定API試劑條試劑條菌鑒定國(guó)際金標(biāo)準(zhǔn)菌鑒定國(guó)際金標(biāo)準(zhǔn) 半自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀半自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀ATB Expression 全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀（VITEK 2）微生物鑒定手

10、段微生物鑒定手段 Mini VIDAS篩選系統(tǒng)篩選系統(tǒng)免疫凝集免疫凝集/免疫沉淀實(shí)驗(yàn)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)微生物檢測(cè)手段微生物檢測(cè)手段熒光定量熒光定量PCR(BAX)色譜、光譜分析技術(shù)色譜、光譜分析技術(shù)分子生物分子生物學(xué)技術(shù)學(xué)技術(shù) 傳統(tǒng)篩選方法傳統(tǒng)篩選方法2.1 技術(shù)手段技術(shù)手段PCR基因分型基因分型分子雜交分子雜交陽(yáng)性菌分子水平上的鑒定陽(yáng)性菌分子水平上的鑒定12341.形態(tài)學(xué)鑒定形態(tài)學(xué)鑒定3.核糖體水平上核糖體水平上的鑒定的鑒定APIVITEK16S rDNA序列分析序列分析分子雜交分子雜交Dupont RiboPrinter2.生化鑒定生化鑒定傅里葉紅外光譜傅里葉紅外光譜Rep-PCR (Diver

11、siLab)4.全基因組水平上全基因組水平上的鑒定的鑒定5.脈沖場(chǎng)電泳技術(shù)脈沖場(chǎng)電泳技術(shù)(PFGE),多位點(diǎn)序多位點(diǎn)序列分析列分析(MLST),多多位點(diǎn)重復(fù)串聯(lián)序列位點(diǎn)重復(fù)串聯(lián)序列分析分析(MLVA),隨機(jī)擴(kuò)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性分析技術(shù)增多態(tài)性分析技術(shù)RAPD)API試劑條試劑條菌鑒定國(guó)際金標(biāo)準(zhǔn)菌鑒定國(guó)際金標(biāo)準(zhǔn)無(wú)需專用儀器，標(biāo)準(zhǔn)化手工方法完成細(xì)菌的生化鑒無(wú)需專用儀器，標(biāo)準(zhǔn)化手工方法完成細(xì)菌的生化鑒定，為低本錢替代傳統(tǒng)手工細(xì)菌生化鑒定的最正確產(chǎn)定，為低本錢替代傳統(tǒng)手工細(xì)菌生化鑒定的最正確產(chǎn)品。品。特點(diǎn)：特點(diǎn)：完整的鑒定譜：完整的鑒定譜：15種試條，可鑒定的細(xì)菌多于種試條，可鑒定的細(xì)菌多于550種種簡(jiǎn)單

12、方便：標(biāo)準(zhǔn)化方法，本錢低廉，判讀結(jié)果簡(jiǎn)單簡(jiǎn)單方便：標(biāo)準(zhǔn)化方法，本錢低廉，判讀結(jié)果簡(jiǎn)單快速結(jié)果：快速結(jié)果：4-24小時(shí)。小時(shí)。半自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀半自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀ATB Expression檢測(cè)工程：可鑒定由環(huán)境、原料及制成品別離出的菌檢測(cè)工程：可鑒定由環(huán)境、原料及制成品別離出的菌種和藥敏試驗(yàn)包括：腸桿菌、非發(fā)酵種和藥敏試驗(yàn)包括：腸桿菌、非發(fā)酵G-桿菌、桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、酵母菌、厭氧菌。可鑒定葡萄球菌、鏈球菌、酵母菌、厭氧菌?？设b定770種細(xì)菌和分析近種細(xì)菌和分析近80種抗生素藥敏實(shí)驗(yàn)。種抗生素藥敏實(shí)驗(yàn)。v 原理：鑒定試條包含風(fēng)干底物的反響孔，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)濁原理：鑒定試條包含風(fēng)干底物的反響孔，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)

13、濁度的菌液活化，于指定溫度培養(yǎng)度的菌液活化，于指定溫度培養(yǎng)4小時(shí)小時(shí)/24小時(shí)后小時(shí)后即可。計(jì)算機(jī)根據(jù)閱讀器檢測(cè)到的結(jié)果自動(dòng)調(diào)用相即可。計(jì)算機(jī)根據(jù)閱讀器檢測(cè)到的結(jié)果自動(dòng)調(diào)用相應(yīng)試劑條數(shù)據(jù)庫(kù)，得出生化應(yīng)試劑條數(shù)據(jù)庫(kù)，得出生化/同化結(jié)果和藥敏試驗(yàn)同化結(jié)果和藥敏試驗(yàn)結(jié)果。系統(tǒng)將所得編碼跟數(shù)據(jù)庫(kù)的典型菌株生化譜結(jié)果。系統(tǒng)將所得編碼跟數(shù)據(jù)庫(kù)的典型菌株生化譜比較，以客觀的比較，以客觀的2個(gè)參數(shù)鑒定百分率及個(gè)參數(shù)鑒定百分率及T-值計(jì)值計(jì)算鑒定結(jié)果算鑒定結(jié)果v 特點(diǎn)：特點(diǎn)：v 速度快捷速度快捷ATB Expression提供自動(dòng)化接種，閱提供自動(dòng)化接種，閱讀及分析試條結(jié)果。讀及分析試條結(jié)果。v 準(zhǔn)確可靠的結(jié)果

14、準(zhǔn)確可靠的結(jié)果ID 32及快速及快速ID 32 試條由金牌試條由金牌標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)API試條改進(jìn)而成，配合自動(dòng)化概念，結(jié)合成試條改進(jìn)而成，配合自動(dòng)化概念，結(jié)合成完整的細(xì)菌鑒定系統(tǒng)完整的細(xì)菌鑒定系統(tǒng)全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀VITEK 2檢測(cè)工程：根據(jù)需要鑒定的微生物的種類的不同，設(shè)計(jì)檢測(cè)工程：根據(jù)需要鑒定的微生物的種類的不同，設(shè)計(jì)了不同的鑒定卡片，比方革蘭氏陰性菌卡，革蘭氏陽(yáng)性了不同的鑒定卡片，比方革蘭氏陰性菌卡，革蘭氏陽(yáng)性菌卡，酵母菌卡等?？设b定菌卡，酵母菌卡等?？设b定405種細(xì)菌，種細(xì)菌，70多種藥物多種藥物約約50多種藥物組合的藥敏卡。多種藥物組合的藥敏卡。v 原理：儀器的原理其實(shí)就是我

15、們進(jìn)行細(xì)菌鑒定中使用原理：儀器的原理其實(shí)就是我們進(jìn)行細(xì)菌鑒定中使用的生化反響。儀器把的生化反響。儀器把30個(gè)對(duì)細(xì)菌鑒定必需的生化反個(gè)對(duì)細(xì)菌鑒定必需的生化反響培養(yǎng)基固定到卡片上，然后通過培養(yǎng)后儀器對(duì)顯色響培養(yǎng)基固定到卡片上，然后通過培養(yǎng)后儀器對(duì)顯色反響進(jìn)行判斷，利用數(shù)值法進(jìn)行判定。反響進(jìn)行判斷，利用數(shù)值法進(jìn)行判定。v 特點(diǎn)：特點(diǎn)：v 快速：鑒定結(jié)果平均只需快速：鑒定結(jié)果平均只需4-6小時(shí)。對(duì)與快速生長(zhǎng)細(xì)小時(shí)。對(duì)與快速生長(zhǎng)細(xì)菌菌(大腸埃希氏、糞腸球菌、變形桿菌、克雷伯氏菌大腸埃希氏、糞腸球菌、變形桿菌、克雷伯氏菌等等)鑒定可提前到鑒定可提前到2小時(shí)。小時(shí)。v 操作簡(jiǎn)便：全部操作自動(dòng)化，簡(jiǎn)單而方便操

16、作簡(jiǎn)便：全部操作自動(dòng)化，簡(jiǎn)單而方便v 資料處理：資料處理：bioLIAISON軟件集中管理實(shí)驗(yàn)室資料軟件集中管理實(shí)驗(yàn)室資料v 獲得獲得AOAC 國(guó)際認(rèn)證：保證提供的微生物鑒定結(jié)果國(guó)際認(rèn)證：保證提供的微生物鑒定結(jié)果是公認(rèn)的是公認(rèn)的全自動(dòng)熒光免疫分析儀全自動(dòng)熒光免疫分析儀(mini-VIDAS) 檢測(cè)工程：食品及環(huán)境中最常見致病性細(xì)菌李斯特檢測(cè)工程：食品及環(huán)境中最常見致病性細(xì)菌李斯特菌屬、單核增生李斯特菌、彎曲菌屬、大腸桿菌菌屬、單核增生李斯特菌、彎曲菌屬、大腸桿菌O157、沙門氏菌屬、葡萄球菌腸毒素檢測(cè)的快速篩檢。沙門氏菌屬、葡萄球菌腸毒素檢測(cè)的快速篩檢。v 原理：原理： 以免疫技術(shù)捕獲目標(biāo)微生

17、物，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法，以免疫技術(shù)捕獲目標(biāo)微生物，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法，最后測(cè)藍(lán)色熒光最后測(cè)藍(lán)色熒光ELFA。包被針上有抗體包被，。包被針上有抗體包被，所測(cè)得的熒光與標(biāo)本中抗原的含量成正比。所測(cè)得的熒光與標(biāo)本中抗原的含量成正比。v 特點(diǎn)：特點(diǎn)：v 結(jié)果準(zhǔn)確：對(duì)每個(gè)標(biāo)本做兩次免疫反響，保證結(jié)果的結(jié)果準(zhǔn)確：對(duì)每個(gè)標(biāo)本做兩次免疫反響，保證結(jié)果的可靠。靈敏度比可見光方法高出可靠。靈敏度比可見光方法高出1000倍。已獲得美倍。已獲得美國(guó)國(guó)FDA、日本厚生省、日本厚生省、AOAC、USDA、中國(guó)進(jìn)出口、中國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)局等政府及權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)可。商品檢驗(yàn)局等政府及權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)可。v 可同時(shí)進(jìn)行可同時(shí)進(jìn)行12個(gè)相同或不同

18、的測(cè)試。每天進(jìn)行約個(gè)相同或不同的測(cè)試。每天進(jìn)行約6080項(xiàng)測(cè)試項(xiàng)測(cè)試v 特異性強(qiáng)：標(biāo)本不需別離出目標(biāo)微生物即可上機(jī)檢測(cè)。特異性強(qiáng)：標(biāo)本不需別離出目標(biāo)微生物即可上機(jī)檢測(cè)。v 防止交叉污染：沒有采樣針，防止標(biāo)本之間交叉污染；防止交叉污染：沒有采樣針，防止標(biāo)本之間交叉污染；樣品不與儀器接觸，儀器內(nèi)沒有抽吸樣品的管路，杜樣品不與儀器接觸，儀器內(nèi)沒有抽吸樣品的管路，杜絕了標(biāo)本對(duì)環(huán)境的污染絕了標(biāo)本對(duì)環(huán)境的污染v 全自動(dòng)化、操作簡(jiǎn)便全自動(dòng)化、操作簡(jiǎn)便熒光定量熒光定量PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒错懠夹g(shù)聚合酶鏈?zhǔn)椒错懠夹g(shù)PCR是分子生物學(xué)技術(shù)最具有是分子生物學(xué)技術(shù)最具有代表性的技術(shù)。它是一種能在體外將微量生物代表性的技術(shù)

19、。它是一種能在體外將微量生物DNA分子分子進(jìn)行數(shù)百萬(wàn)倍放大的新型檢測(cè)技術(shù)。進(jìn)行數(shù)百萬(wàn)倍放大的新型檢測(cè)技術(shù)。熒光定量熒光定量PCR技術(shù)在普通技術(shù)在普通PCR技術(shù)根底上，通過熒光染技術(shù)根底上，通過熒光染料的結(jié)合，將檢測(cè)信號(hào)進(jìn)一步放大，其靈敏度是普通料的結(jié)合，將檢測(cè)信號(hào)進(jìn)一步放大，其靈敏度是普通PCR的幾百倍，并且整個(gè)擴(kuò)增和檢測(cè)過程由儀器自動(dòng)完的幾百倍，并且整個(gè)擴(kuò)增和檢測(cè)過程由儀器自動(dòng)完成，檢測(cè)同量高，速度快，減少了人為誤差和環(huán)境干擾成，檢測(cè)同量高，速度快，減少了人為誤差和環(huán)境干擾因素，克服了普通因素，克服了普通PCR易污染的問題，除去樣品前增菌易污染的問題，除去樣品前增菌時(shí)間，時(shí)間，5小時(shí)內(nèi)可得到

20、檢測(cè)結(jié)果。小時(shí)內(nèi)可得到檢測(cè)結(jié)果。微生物檢測(cè)限可能到微生物檢測(cè)限可能到達(dá)達(dá)1 CFU/mL以下，以下，而且抗雜菌干擾能力而且抗雜菌干擾能力強(qiáng)強(qiáng)DNA測(cè)序技術(shù)測(cè)序技術(shù)u DNA測(cè)序技術(shù)可以將生物的遺傳信息完整的破譯測(cè)序技術(shù)可以將生物的遺傳信息完整的破譯出來，通過直接比較不同類群個(gè)體同源核酸的核出來，通過直接比較不同類群個(gè)體同源核酸的核苷酸排列順序，獲得生物進(jìn)化、變異的詳細(xì)信息苷酸排列順序，獲得生物進(jìn)化、變異的詳細(xì)信息u 如細(xì)菌的如細(xì)菌的16S r DNA和真菌的和真菌的ITS序列，已經(jīng)被廣序列，已經(jīng)被廣泛測(cè)定應(yīng)用于菌種鑒定研究之中。由于泛測(cè)定應(yīng)用于菌種鑒定研究之中。由于DNA測(cè)序測(cè)序方法耗時(shí)短，準(zhǔn)

21、確度高，在細(xì)菌、真菌、植物、方法耗時(shí)短，準(zhǔn)確度高，在細(xì)菌、真菌、植物、動(dòng)物的種類鑒定和系統(tǒng)發(fā)育研究方面得到了越來動(dòng)物的種類鑒定和系統(tǒng)發(fā)育研究方面得到了越來越廣泛的應(yīng)用越廣泛的應(yīng)用a) 微生物污染溯源分析微生物污染溯源分析目前微生物分型技術(shù)常用于流行病學(xué)調(diào)查和毒力分析目前微生物分型技術(shù)常用于流行病學(xué)調(diào)查和毒力分析國(guó)際上普遍認(rèn)同脈沖凝膠電泳技術(shù)作為微生物分型的標(biāo)國(guó)際上普遍認(rèn)同脈沖凝膠電泳技術(shù)作為微生物分型的標(biāo)準(zhǔn)方法準(zhǔn)方法現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)可用來區(qū)別近緣種，并在研究微生現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)可用來區(qū)別近緣種，并在研究微生物種內(nèi)或種組間不同的污染來源及地理親緣關(guān)系的研物種內(nèi)或種組間不同的污染來源及地理親緣

22、關(guān)系的研究中顯示出廣泛的應(yīng)用前景究中顯示出廣泛的應(yīng)用前景 b) 相似微生物相似微生物DNA序列比對(duì)和微生物進(jìn)化分析序列比對(duì)和微生物進(jìn)化分析根據(jù)生物根據(jù)生物DNA序列的特異性分析，可檢測(cè)生物基因的微序列的特異性分析，可檢測(cè)生物基因的微小變化，監(jiān)控和預(yù)測(cè)微生物污染的爆發(fā)小變化，監(jiān)控和預(yù)測(cè)微生物污染的爆發(fā)16S rDNA分型已被廣泛認(rèn)可，微生物分型已被廣泛認(rèn)可，微生物16S rDNA進(jìn)化樹進(jìn)化樹對(duì)目標(biāo)微生物進(jìn)行詳細(xì)的基因分型，同時(shí)還可了解不對(duì)目標(biāo)微生物進(jìn)行詳細(xì)的基因分型，同時(shí)還可了解不同來源微生物的進(jìn)化關(guān)系和親緣關(guān)系。該技術(shù)應(yīng)用范同來源微生物的進(jìn)化關(guān)系和親緣關(guān)系。該技術(shù)應(yīng)用范圍寬，開展前景廣，開展?jié)?/p>

23、力巨大圍寬，開展前景廣，開展?jié)摿薮笾讣y圖譜技術(shù)指紋圖譜技術(shù)分子雜交技術(shù)首先用限制性內(nèi)切酶對(duì)細(xì)菌分子雜交技術(shù)首先用限制性內(nèi)切酶對(duì)細(xì)菌基因組基因組DNA進(jìn)行酶消化，通過特異性探進(jìn)行酶消化，通過特異性探針與目標(biāo)針與目標(biāo)DNA序列的雜交結(jié)合，經(jīng)過轉(zhuǎn)序列的雜交結(jié)合，經(jīng)過轉(zhuǎn)膜技術(shù)和顯色技術(shù)形成該細(xì)菌特有的雜交膜技術(shù)和顯色技術(shù)形成該細(xì)菌特有的雜交圖譜?，F(xiàn)有成熟的基于圖譜?，F(xiàn)有成熟的基于16S r DNA的分子的分子雜技圖譜庫(kù)涵蓋了雜技圖譜庫(kù)涵蓋了200個(gè)屬的個(gè)屬的1200多種多種6950株微生物，為各研究和實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)提株微生物，為各研究和實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)提供了一個(gè)統(tǒng)一的微生物分型標(biāo)準(zhǔn)。為環(huán)境供了一個(gè)統(tǒng)一的微生物分型

24、標(biāo)準(zhǔn)。為環(huán)境別離物、致病菌、有害生物體、質(zhì)控菌株、別離物、致病菌、有害生物體、質(zhì)控菌株、有益生物體和任何細(xì)菌建立了一個(gè)全自動(dòng)有益生物體和任何細(xì)菌建立了一個(gè)全自動(dòng)的基因指紋圖庫(kù)。這一精確到菌株水平的的基因指紋圖庫(kù)。這一精確到菌株水平的鑒定系統(tǒng)能夠追溯細(xì)菌污染源，并且具有鑒定系統(tǒng)能夠追溯細(xì)菌污染源，并且具有對(duì)所有微生物環(huán)境進(jìn)行控制及流行病學(xué)調(diào)對(duì)所有微生物環(huán)境進(jìn)行控制及流行病學(xué)調(diào)查等強(qiáng)大功能。查等強(qiáng)大功能。近紅外傅立葉光譜分析近紅外傅立葉光譜分析色譜分析色譜分析物質(zhì)成分分析物質(zhì)成分分析紅外傅立葉光譜分析紅外傅立葉光譜分析 FT-IR技術(shù)以未損傷細(xì)胞的技術(shù)以未損傷細(xì)胞的FT-IR光譜的特殊指紋區(qū)為根光

25、譜的特殊指紋區(qū)為根底，光譜反映的是整個(gè)細(xì)胞組成分子的振動(dòng)特征，也就底，光譜反映的是整個(gè)細(xì)胞組成分子的振動(dòng)特征，也就是蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)的特征是蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)的特征 由于這些細(xì)胞組分與基因表達(dá)有關(guān)，反響了全細(xì)胞組分由于這些細(xì)胞組分與基因表達(dá)有關(guān)，反響了全細(xì)胞組分的綜合信息所得圖譜有效地反映了細(xì)胞表型和基因型信的綜合信息所得圖譜有效地反映了細(xì)胞表型和基因型信息，從而區(qū)分生化信息上的差異息，從而區(qū)分生化信息上的差異德國(guó)德國(guó)Bruker公司微生物公司微生物FT-IR分析分析用戶手冊(cè)主要采用用戶手冊(cè)主要采用1200-900-1，3000-2800-1，1500-1400-1譜段組合進(jìn)行微生物判別分析

26、，譜段組合進(jìn)行微生物判別分析，這這3個(gè)譜段分別主要代表了微生物個(gè)譜段分別主要代表了微生物細(xì)胞壁多聚糖、細(xì)胞膜脂肪酸以細(xì)胞壁多聚糖、細(xì)胞膜脂肪酸以及細(xì)胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)和類脂成分的及細(xì)胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)和類脂成分的信息。信息。色譜分析色譜分析 微生物中含有的一些稱為生物標(biāo)志物的化學(xué)物質(zhì)微生物中含有的一些稱為生物標(biāo)志物的化學(xué)物質(zhì)，其含量或結(jié)構(gòu)具其含量或結(jié)構(gòu)具有種屬特征或與其分類位置密切相關(guān)有種屬特征或與其分類位置密切相關(guān) 通過分析微生物的化學(xué)組成鑒定微生物，開辟了一個(gè)微生物檢測(cè)和通過分析微生物的化學(xué)組成鑒定微生物，開辟了一個(gè)微生物檢測(cè)和鑒定的新途徑鑒定的新途徑 高效液相色譜高效液相色譜(High - perf

27、ormance liquid chromatography，HPLC) 氣相色譜氣相色譜(Gas chromatography，GC) 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(Gas chromatography - mass spectrometry，GC-MS) 液相色譜液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)建立各種生物標(biāo)志物在微生物中分布情況建立各種生物標(biāo)志物在微生物中分布情況的數(shù)據(jù)庫(kù)及相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)分析程序，仍然是的數(shù)據(jù)庫(kù)及相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)分析程序，仍然是色譜分析微生物的主要方向色譜分析微生物的主要方向2.1 技術(shù)手段技術(shù)手段2.2 方法比較方法比較各種鑒定方法的比較各種鑒定方法的比較我所抗生

28、素室通過比較分析近百我所抗生素室通過比較分析近百種微生物的生化鑒定方法種微生物的生化鑒定方法API和和VITEK 2鑒定和分子生物學(xué)鑒定和分子生物學(xué)方法鑒定方法，客觀準(zhǔn)確的多方方法鑒定方法，客觀準(zhǔn)確的多方面評(píng)價(jià)各種方法的優(yōu)劣面評(píng)價(jià)各種方法的優(yōu)劣微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)二二樣品微生物的鑒定及同源性分析樣品微生物的鑒定及同源性分析三三微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)微生物新技術(shù)的應(yīng)用微生物新技術(shù)的應(yīng)用四四微生物污染監(jiān)管方式的思考微生物污染監(jiān)管方式的思考五五背景介紹背景介紹一一3.1 細(xì)菌鑒定細(xì)菌鑒定3.2 溯源分析溯源分析3.1 細(xì)菌鑒定細(xì)菌鑒定3.2 溯源分析溯源

29、分析3.1 細(xì)菌鑒定細(xì)菌鑒定3.2 溯源分析溯源分析微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)二二樣品微生物的鑒定及同源性分析樣品微生物的鑒定及同源性分析三三微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)微生物新技術(shù)的應(yīng)用微生物新技術(shù)的應(yīng)用四四微生物污染監(jiān)管方式的思考微生物污染監(jiān)管方式的思考五五背景介紹背景介紹一一四、四、微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用 增強(qiáng)藥品中微生物檢驗(yàn)?zāi)芰?，做到?shù)據(jù)可信，增強(qiáng)藥品中微生物檢驗(yàn)?zāi)芰Γ龅綌?shù)據(jù)可信，國(guó)際認(rèn)可，為執(zhí)法、仲裁提供依據(jù)國(guó)際認(rèn)可，為執(zhí)法、仲裁提供依據(jù)政府檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、藥廠微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室潔政府檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、藥廠微生物檢

30、測(cè)實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境監(jiān)控，構(gòu)建環(huán)境微生物分布圖，提高凈環(huán)境監(jiān)控，構(gòu)建環(huán)境微生物分布圖，提高檢測(cè)結(jié)果公信力檢測(cè)結(jié)果公信力與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，監(jiān)控藥品生產(chǎn)環(huán)境，構(gòu)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，監(jiān)控藥品生產(chǎn)環(huán)境，構(gòu)建藥品生產(chǎn)微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系建藥品生產(chǎn)微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，醫(yī)療器械、食應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，醫(yī)療器械、食品、醫(yī)院等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用品、醫(yī)院等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用4.14.24.34.4四、四、微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用 增強(qiáng)藥品中微生物檢驗(yàn)?zāi)芰Γ龅綌?shù)據(jù)可信，增強(qiáng)藥品中微生物檢驗(yàn)?zāi)芰?，做到?shù)據(jù)可信，國(guó)際認(rèn)可，為執(zhí)法、仲裁提供依據(jù)國(guó)際認(rèn)可，為執(zhí)法、仲裁提供依據(jù)

31、政府檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、藥廠微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室潔政府檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、藥廠微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境監(jiān)控，構(gòu)建環(huán)境微生物分布圖，提高凈環(huán)境監(jiān)控，構(gòu)建環(huán)境微生物分布圖，提高檢測(cè)結(jié)果公信力檢測(cè)結(jié)果公信力與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，監(jiān)控藥品生產(chǎn)環(huán)境，構(gòu)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，監(jiān)控藥品生產(chǎn)環(huán)境，構(gòu)建藥品生產(chǎn)微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系建藥品生產(chǎn)微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，醫(yī)療器械、食應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，醫(yī)療器械、食品、醫(yī)院等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用品、醫(yī)院等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用4.14.24.34.4v微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)首先確保實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施和微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)首先確保實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施和環(huán)境不會(huì)對(duì)檢驗(yàn)過程帶來微生物污染環(huán)境不會(huì)對(duì)檢驗(yàn)過程帶來微生物污染v只有

32、排除檢測(cè)過程中的微生物污染，才能保證只有排除檢測(cè)過程中的微生物污染，才能保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，才能有足夠的理由相信，檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，才能有足夠的理由相信，樣品污染來自藥品本身，而不在檢驗(yàn)過程中被樣品污染來自藥品本身，而不在檢驗(yàn)過程中被污染的污染的v對(duì)檢測(cè)機(jī)構(gòu)而言，自身檢測(cè)環(huán)境的控制要比樣對(duì)檢測(cè)機(jī)構(gòu)而言，自身檢測(cè)環(huán)境的控制要比樣品檢測(cè)更加重要品檢測(cè)更加重要四、四、微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用 公正公正準(zhǔn)確準(zhǔn)確科學(xué)科學(xué)高效高效v加強(qiáng)檢測(cè)的“過程控制v建立實(shí)驗(yàn)室環(huán)境微生物信息庫(kù)、動(dòng)態(tài)監(jiān)控環(huán)境微生物的變化、建立環(huán)境微生物污染趨勢(shì)分析圖，預(yù)測(cè)微生物污染方向，從被

33、動(dòng)的排查污染措施上升到主動(dòng)的預(yù)防、預(yù)警。v如果樣品檢驗(yàn)過程中不合格，別離鑒定樣品中的微生物，與環(huán)境微生物數(shù)據(jù)庫(kù)比較、分析微生物污染來源，出具客觀的檢測(cè)報(bào)告，杜絕實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽(yáng)性和假陰性的發(fā)生樣品接收樣品接收樣品擺放樣品擺放樣品分發(fā)樣品分發(fā)環(huán)境環(huán)境設(shè)施設(shè)施儀器儀器實(shí)驗(yàn)過程實(shí)驗(yàn)過程結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告登記樣品名稱，檢查是否具有唯一性登記樣品名稱，檢查是否具有唯一性標(biāo)識(shí)，并檢查是否與運(yùn)轉(zhuǎn)表內(nèi)容一致標(biāo)識(shí)，并檢查是否與運(yùn)轉(zhuǎn)表內(nèi)容一致看樣品外包裝是否完整、密封看樣品外包裝是否完整、密封,是否能是否能保持無(wú)菌狀態(tài)符合檢驗(yàn)要求保持無(wú)菌狀態(tài)符合檢驗(yàn)要求樣品數(shù)量是否符合檢驗(yàn)要求樣品數(shù)量是否符合檢驗(yàn)要求樣品接收樣品接收原

34、始記錄原始記錄原始記錄審核原始記錄審核檢測(cè)過程控制檢測(cè)過程控制樣品分發(fā)樣品分發(fā)環(huán)境環(huán)境設(shè)施設(shè)施儀器儀器實(shí)驗(yàn)過程實(shí)驗(yàn)過程結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告 根據(jù)樣品的貯存條件進(jìn)行冷藏、冷凍根據(jù)樣品的貯存條件進(jìn)行冷藏、冷凍或常溫放置或常溫放置 將樣品分區(qū)域在檢、待檢、檢畢將樣品分區(qū)域在檢、待檢、檢畢擺置擺置冰箱和冰柜的溫度記錄冰箱和冰柜的溫度記錄樣品擺放樣品擺放樣品擺放樣品接收樣品接收原始記錄原始記錄原始記錄審核原始記錄審核檢測(cè)過程控制檢測(cè)過程控制環(huán)境環(huán)境設(shè)施設(shè)施儀器儀器實(shí)驗(yàn)過程實(shí)驗(yàn)過程結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告環(huán)境和設(shè)施等的質(zhì)量管理環(huán)境和設(shè)施等的質(zhì)量管理儀器狀態(tài)是否正常是否在計(jì)量標(biāo)志儀器狀態(tài)是否正常是否在計(jì)量標(biāo)志的有效期內(nèi)

35、的有效期內(nèi)做好儀器使用記錄做好儀器使用記錄儀器設(shè)施環(huán)境樣品接收樣品接收樣品擺放樣品擺放樣品分發(fā)樣品分發(fā)原始記錄原始記錄原始記錄審核原始記錄審核檢測(cè)過程控制檢測(cè)過程控制樣品分發(fā)樣品分發(fā)環(huán)境環(huán)境設(shè)施設(shè)施儀器儀器實(shí)驗(yàn)過程實(shí)驗(yàn)過程結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告 核對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是否現(xiàn)行有效核對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是否現(xiàn)行有效 培養(yǎng)基的質(zhì)量評(píng)估工作的審查培養(yǎng)基的質(zhì)量評(píng)估工作的審查 關(guān)鍵步驟用試劑的質(zhì)量控制關(guān)鍵步驟用試劑的質(zhì)量控制 陽(yáng)性對(duì)照菌的管理陽(yáng)性對(duì)照菌的管理 留樣管理留樣管理 廢棄物管理廢棄物管理 對(duì)滅菌效果評(píng)價(jià)的審查對(duì)滅菌效果評(píng)價(jià)的審查 實(shí)驗(yàn)過程質(zhì)量控制管理人員技術(shù)能力，方法比對(duì)實(shí)驗(yàn)過程質(zhì)量控制管理人員技術(shù)能力，方法比對(duì)實(shí)驗(yàn)，

36、人員比對(duì)實(shí)驗(yàn)，制備質(zhì)控樣品加菌隨行檢查實(shí)驗(yàn)，人員比對(duì)實(shí)驗(yàn)，制備質(zhì)控樣品加菌隨行檢查 應(yīng)急事件處理程序應(yīng)急事件處理程序?qū)嶒?yàn)過程樣品接收樣品接收樣品擺放樣品擺放原始記錄原始記錄原始記錄審核原始記錄審核檢測(cè)過程控制檢測(cè)過程控制樣品分發(fā)樣品分發(fā)環(huán)境環(huán)境設(shè)施設(shè)施儀器儀器實(shí)驗(yàn)過程實(shí)驗(yàn)過程結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告完全按完全按SOP書寫，所寫即所做的內(nèi)容書寫，所寫即所做的內(nèi)容統(tǒng)一原始記錄的格式和內(nèi)容統(tǒng)一原始記錄的格式和內(nèi)容按既定期限完成原始記錄的書寫按既定期限完成原始記錄的書寫按不同來源分別輸入結(jié)果按不同來源分別輸入結(jié)果原始記錄樣品接收樣品接收樣品擺放樣品擺放原始記錄原始記錄原始記錄審核原始記錄審核檢測(cè)過程控制檢測(cè)過

37、程控制樣品分發(fā)樣品分發(fā)環(huán)境環(huán)境設(shè)施設(shè)施儀器儀器實(shí)驗(yàn)過程實(shí)驗(yàn)過程結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告原始記錄的完整性原始記錄的完整性檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的正確性檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的正確性結(jié)果判斷的合理性結(jié)果判斷的合理性原始記錄審核樣品接收樣品接收樣品擺放樣品擺放原始記錄審核原始記錄審核原始記錄原始記錄檢測(cè)過程控制檢測(cè)過程控制樣品分發(fā)樣品分發(fā)環(huán)境環(huán)境設(shè)施設(shè)施儀器儀器實(shí)驗(yàn)過程實(shí)驗(yàn)過程結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告 陰性結(jié)果直接報(bào)告陰性結(jié)果直接報(bào)告 陽(yáng)性結(jié)果陽(yáng)性結(jié)果鑒定鑒定結(jié)果報(bào)告結(jié)果報(bào)告樣品接收樣品接收樣品擺放樣品擺放原始記錄原始記錄原始記錄審核原始記錄審核檢測(cè)過程控制檢測(cè)過程控制 建立環(huán)境微生物菌株信息庫(kù)建立環(huán)境微生物菌株信息庫(kù) 實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境微生物監(jiān)

38、控實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境微生物監(jiān)控頭狀葡萄球菌頭狀葡萄球菌Staphylococcus capitis溶血葡萄球菌溶血葡萄球菌Staphylococcus haemolyticus緩癥鏈球菌緩癥鏈球菌Streptococcus mitis科氏葡萄球菌科氏葡萄球菌Staphylococcus cohnii藤黃微球菌藤黃微球菌Micrococcus luteus常見潔凈環(huán)境微生物污染常見潔凈環(huán)境微生物污染 實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境微生物監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境微生物監(jiān)控v 建立實(shí)驗(yàn)室潔凈區(qū)采樣方案建立實(shí)驗(yàn)室潔凈區(qū)采樣方案v ?醫(yī)藥工業(yè)潔凈室區(qū)懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法醫(yī)藥工業(yè)潔凈室區(qū)懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試

39、方法?GB/T 16292162941996v ?藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)?1998v 以一個(gè)月為周期，連續(xù)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以一個(gè)月為周期，連續(xù)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境v 不定期對(duì)無(wú)菌室潔凈環(huán)境進(jìn)行抽樣調(diào)查，積累潔凈環(huán)境微生物種不定期對(duì)無(wú)菌室潔凈環(huán)境進(jìn)行抽樣調(diào)查，積累潔凈環(huán)境微生物種群和分布數(shù)據(jù)群和分布數(shù)據(jù)檢查內(nèi)容包括沉降菌檢測(cè)、浮游菌檢測(cè)、檢查內(nèi)容包括沉降菌檢測(cè)、浮游菌檢測(cè)、表面微生物檢測(cè)和操作人員衛(wèi)生檢測(cè)等表面微生物檢測(cè)和操作人員衛(wèi)生檢測(cè)等v 在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中以葡萄球菌屬在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中以葡萄球菌屬Staphylococcus別離數(shù)目最多別離數(shù)目最多為為34%v 微球菌屬微球菌屬M(fèi)icroco

40、ccus和芽孢桿菌屬和芽孢桿菌屬Bacillus次之，次之，分別為分別為19.15%和和17.04%v 假單胞菌屬假單胞菌屬M(fèi)icrococcus、莫拉菌群、莫拉菌群Moraxella、短、短波單胞菌屬波單胞菌屬Brevundimonas占占4.26%v 短桿菌屬短桿菌屬Brevibacterium、不動(dòng)桿菌屬、不動(dòng)桿菌屬Acinetobacter、鞘氨醇單胞菌屬、鞘氨醇單胞菌屬Sphingomonas、泛菌屬泛菌屬Pantoea等所占比例歸于其他項(xiàng)中等所占比例歸于其他項(xiàng)中v 收集的環(huán)境微生物中酵母菌占收集的環(huán)境微生物中酵母菌占8.51%，主要為近平滑假絲酵母，主要為近平滑假絲酵母Candid

41、a parapsilosis和粘紅酵母和粘紅酵母Rhodotorula mucilaginosav 霉菌等絲狀真菌占霉菌等絲狀真菌占4.26%，主要為青霉菌屬，主要為青霉菌屬 我所實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境微生物監(jiān)控我所實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境微生物監(jiān)控 我所環(huán)境微生物菌株信息庫(kù)的建立我所環(huán)境微生物菌株信息庫(kù)的建立我們連續(xù)三個(gè)月對(duì)實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境中我們連續(xù)三個(gè)月對(duì)實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境中局部環(huán)境微生物進(jìn)行追蹤，并進(jìn)行同局部環(huán)境微生物進(jìn)行追蹤，并進(jìn)行同源性分析源性分析以葡萄球菌屬為例，本實(shí)驗(yàn)室共收集到以葡萄球菌屬為例，本實(shí)驗(yàn)室共收集到16株葡萄球球菌屬細(xì)菌。株葡萄球球菌屬細(xì)菌。7、8月分別收集到的細(xì)菌月分別收集到的細(xì)菌239與

42、與250和和232與與246之間同源性較高，之間同源性較高，歸在一個(gè)子類中，屬于同源污染。歸在一個(gè)子類中，屬于同源污染。說明說明7月和月和8月之間的消毒滅菌過程不徹底，存在消毒漏洞。月之間的消毒滅菌過程不徹底，存在消毒漏洞。經(jīng)過消毒，在經(jīng)過消毒，在9月份監(jiān)測(cè)過程中收集到的葡萄球菌中未發(fā)現(xiàn)有和前兩月份監(jiān)測(cè)過程中收集到的葡萄球菌中未發(fā)現(xiàn)有和前兩月同源的菌株，說明前期的污染已經(jīng)消除，月同源的菌株，說明前期的污染已經(jīng)消除，9月份收集到的局部葡月份收集到的局部葡萄球菌為新進(jìn)入環(huán)境的微生物。萄球菌為新進(jìn)入環(huán)境的微生物。同一株菌反復(fù)污染潔凈環(huán)境要引起檢驗(yàn)人員高度重視僅靠潔凈室內(nèi)部消毒措施很可能起不到排除污染

43、的作用要對(duì)潔凈室送風(fēng)系統(tǒng)和檢驗(yàn)人員攜帶污染進(jìn)行全面調(diào)查建立環(huán)境微生物污染趨勢(shì)分析圖，預(yù)測(cè)微生物污染方向，從被動(dòng)的排查污染措施上升到主動(dòng)的預(yù)防、預(yù)警。將污染信息并與歷史污染物比對(duì)，回憶調(diào)查，幫助質(zhì)量體系的改進(jìn)。微生物進(jìn)行鑒定菌株來源微生物進(jìn)行鑒定菌株來源共241株四、四、微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用 增強(qiáng)藥品中微生物檢驗(yàn)?zāi)芰Γ龅綌?shù)據(jù)可信，增強(qiáng)藥品中微生物檢驗(yàn)?zāi)芰?，做到?shù)據(jù)可信，國(guó)際認(rèn)可，為執(zhí)法、仲裁提供依據(jù)國(guó)際認(rèn)可，為執(zhí)法、仲裁提供依據(jù)政府檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、藥廠微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室潔政府檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、藥廠微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境監(jiān)控，構(gòu)建環(huán)境微生物分布圖，提高凈環(huán)境

44、監(jiān)控，構(gòu)建環(huán)境微生物分布圖，提高檢測(cè)結(jié)果公信力檢測(cè)結(jié)果公信力與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，監(jiān)控藥品生產(chǎn)環(huán)境，構(gòu)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，監(jiān)控藥品生產(chǎn)環(huán)境，構(gòu)建藥品生產(chǎn)微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系建藥品生產(chǎn)微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，醫(yī)療器械、食應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，醫(yī)療器械、食品、醫(yī)院等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用品、醫(yī)院等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用4.14.24.34.4 在藥品微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用在藥品微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用v 在嚴(yán)格依據(jù)法定方法進(jìn)行檢驗(yàn)的同時(shí)，結(jié)合微生物在嚴(yán)格依據(jù)法定方法進(jìn)行檢驗(yàn)的同時(shí)，結(jié)合微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)，對(duì)檢驗(yàn)過程和檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行雙重復(fù)鑒定技術(shù)平臺(tái)，對(duì)檢驗(yàn)過程和檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行雙重復(fù)合和監(jiān)控。通過比照環(huán)境監(jiān)測(cè)的微生物種群類別

45、和合和監(jiān)控。通過比照環(huán)境監(jiān)測(cè)的微生物種群類別和樣品微生物種群情況，客觀準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)檢驗(yàn)質(zhì)量，樣品微生物種群情況，客觀準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)檢驗(yàn)質(zhì)量，增菌檢驗(yàn)報(bào)告的含金量。增菌檢驗(yàn)報(bào)告的含金量。 在細(xì)菌污染檢查中的應(yīng)用在細(xì)菌污染檢查中的應(yīng)用分離純化得到單菌落菌落形態(tài)檢驗(yàn)DNA提取構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹分子生物學(xué)鑒定通用引物擴(kuò)增細(xì)菌16S rDNA 序列16S rDNA序列分析鑒定結(jié)論樣品接收革蘭氏染色API鑒定形態(tài)鑒定生化鑒定VITEK鑒定細(xì)菌的鑒定流程圖細(xì)菌的鑒定流程圖 在真菌污染檢查中的應(yīng)用在真菌污染檢查中的應(yīng)用 在真菌污染檢查中的應(yīng)用在真菌污染檢查中的應(yīng)用v 現(xiàn)行國(guó)標(biāo)僅能夠?qū)η箤?，青霉屬，鐮刀菌屬等少?shù)現(xiàn)行國(guó)

46、標(biāo)僅能夠?qū)η箤?，青霉屬，鐮刀菌屬等少?shù)幾個(gè)種屬的霉菌進(jìn)行鑒定。幾個(gè)種屬的霉菌進(jìn)行鑒定。v 我國(guó)的食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)于青霉我國(guó)的食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)于青霉菌的鑒定需要在別離純化后培養(yǎng)菌的鑒定需要在別離純化后培養(yǎng)12-14天，再對(duì)其孢天，再對(duì)其孢子及菌絲進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。子及菌絲進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。v 真菌孢子易于在空氣中飄散，難以殺滅，對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)真菌孢子易于在空氣中飄散，難以殺滅，對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和檢驗(yàn)人員平安具有潛在污染風(fēng)險(xiǎn)。境和檢驗(yàn)人員平安具有潛在污染風(fēng)險(xiǎn)。分子生物學(xué)鑒定技術(shù)有效的解決了區(qū)分污染來源的分子生物學(xué)鑒定技術(shù)有效的解決了區(qū)分污染來源的問題。該方法不需要使用選擇

47、性培養(yǎng)基，純化后即問題。該方法不需要使用選擇性培養(yǎng)基，純化后即可進(jìn)行菌種鑒定。對(duì)真菌的菌絲體和孢子均能夠進(jìn)可進(jìn)行菌種鑒定。對(duì)真菌的菌絲體和孢子均能夠進(jìn)行行DNA的提取，避免霉菌產(chǎn)生的大量孢子對(duì)實(shí)驗(yàn)的提取，避免霉菌產(chǎn)生的大量孢子對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作環(huán)境帶來的潛在污染危害室工作環(huán)境帶來的潛在污染危害真菌的鑒定流程圖真菌的鑒定流程圖分離純化得到真菌樣品的單菌落真菌菌落形態(tài)觀察真菌DNA的提取構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹分子生物學(xué)評(píng)價(jià)通用引物擴(kuò)增真菌ITS 序列ITS序列在GenBank中進(jìn)行Blast分析鑒定結(jié)論四、四、微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用 增強(qiáng)藥品中微生物檢驗(yàn)?zāi)芰?，做到?shù)

48、據(jù)可信，增強(qiáng)藥品中微生物檢驗(yàn)?zāi)芰Γ龅綌?shù)據(jù)可信，國(guó)際認(rèn)可，為執(zhí)法、仲裁提供依據(jù)國(guó)際認(rèn)可，為執(zhí)法、仲裁提供依據(jù)政府檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、藥廠微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室潔政府檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、藥廠微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境監(jiān)控，構(gòu)建環(huán)境微生物分布圖，提高凈環(huán)境監(jiān)控，構(gòu)建環(huán)境微生物分布圖，提高檢測(cè)結(jié)果公信力檢測(cè)結(jié)果公信力與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，監(jiān)控藥品生產(chǎn)環(huán)境，構(gòu)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，監(jiān)控藥品生產(chǎn)環(huán)境，構(gòu)建藥品生產(chǎn)微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系建藥品生產(chǎn)微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，醫(yī)療器械、食應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，醫(yī)療器械、食品、醫(yī)院等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用品、醫(yī)院等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用4.14.24.34.4美國(guó)美國(guó)FDA在要求藥廠將微生物鑒定到在要求

49、藥廠將微生物鑒定到“種一級(jí)，并種一級(jí)，并建議在微生物形態(tài)和生化反響鑒定之外采用基因分型建議在微生物形態(tài)和生化反響鑒定之外采用基因分型技術(shù)進(jìn)行分析，以便對(duì)生產(chǎn)環(huán)境的微生物污染進(jìn)行監(jiān)技術(shù)進(jìn)行分析，以便對(duì)生產(chǎn)環(huán)境的微生物污染進(jìn)行監(jiān)控控對(duì)藥廠生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)管和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估上應(yīng)用對(duì)藥廠生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)管和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估上應(yīng)用 上海某藥業(yè)產(chǎn)品受微生物潛在污染風(fēng)險(xiǎn)上海某藥業(yè)產(chǎn)品受微生物潛在污染風(fēng)險(xiǎn) 上海某藥業(yè)無(wú)菌產(chǎn)品微生物污染溯源上海某藥業(yè)無(wú)菌產(chǎn)品微生物污染溯源 某醫(yī)療器材滅菌方法研究某醫(yī)療器材滅菌方法研究對(duì)藥廠生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)管和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估上應(yīng)用對(duì)藥廠生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)管和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估上應(yīng)用某制藥廠沉降菌同源性分析某制藥廠沉降菌同源性分析檢測(cè)實(shí)

50、驗(yàn)室檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室微生物信息庫(kù)微生物信息庫(kù)制藥企業(yè)制藥企業(yè)微生物信息庫(kù)微生物信息庫(kù)同同源源性性分分析析比比對(duì)對(duì)污染源污染源是是否否微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用 鑒鑒 定定四、四、微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)建設(shè)的意義及運(yùn)用 增強(qiáng)藥品中微生物檢驗(yàn)?zāi)芰?，做到?shù)據(jù)可信，增強(qiáng)藥品中微生物檢驗(yàn)?zāi)芰Γ龅綌?shù)據(jù)可信，國(guó)際認(rèn)可，為執(zhí)法、仲裁提供依據(jù)國(guó)際認(rèn)可，為執(zhí)法、仲裁提供依據(jù)政府檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、藥廠微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室潔政府檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、藥廠微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室潔凈環(huán)境監(jiān)控，構(gòu)建環(huán)境微生物分布圖，提高凈環(huán)境監(jiān)控，構(gòu)建環(huán)境微生物分布圖，提高檢測(cè)結(jié)果公信力檢測(cè)結(jié)果公

51、信力與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，監(jiān)控藥品生產(chǎn)環(huán)境，構(gòu)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)接軌，監(jiān)控藥品生產(chǎn)環(huán)境，構(gòu)建藥品生產(chǎn)微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系建藥品生產(chǎn)微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，醫(yī)療器械、食應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，醫(yī)療器械、食品、醫(yī)院等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用品、醫(yī)院等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用4.14.24.34.44.4 應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，可進(jìn)行產(chǎn)應(yīng)用范圍廣，擴(kuò)展能力強(qiáng)，可進(jìn)行產(chǎn)品真?zhèn)舞b別和致敏原檢測(cè)品真?zhèn)舞b別和致敏原檢測(cè)v 國(guó)際上普遍加強(qiáng)了有關(guān)食品標(biāo)簽的法律法規(guī)，對(duì)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)不斷國(guó)際上普遍加強(qiáng)了有關(guān)食品標(biāo)簽的法律法規(guī)，對(duì)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)不斷細(xì)化。越來越多國(guó)家和地區(qū)開始全面實(shí)施對(duì)食品致敏原成分加細(xì)化。越來越多國(guó)家和地區(qū)開始全面實(shí)施對(duì)食品致敏

52、原成分加以標(biāo)識(shí)的規(guī)定以標(biāo)識(shí)的規(guī)定 酶聯(lián)免疫技術(shù)酶聯(lián)免疫技術(shù) PCR技術(shù)等技術(shù)等v 動(dòng)植物產(chǎn)品的真?zhèn)舞b定動(dòng)植物產(chǎn)品的真?zhèn)舞b定 追蹤產(chǎn)品產(chǎn)地追蹤產(chǎn)品產(chǎn)地 鑒別產(chǎn)品主要組成成分鑒別產(chǎn)品主要組成成分微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)微生物鑒定技術(shù)平臺(tái)的建設(shè)二二樣品微生物的鑒定及同源性分析樣品微生物的鑒定及同源性分析三三微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)微生物新技術(shù)的應(yīng)用微生物新技術(shù)的應(yīng)用四四微生物污染監(jiān)管方式的思考微生物污染監(jiān)管方式的思考五五背景介紹背景介紹一一企業(yè)自查企業(yè)自查政府監(jiān)管政府監(jiān)管微生物樣本的采集微生物樣本的采集微生物菌株鑒定微生物菌株鑒定企業(yè)環(huán)境控制及污企業(yè)環(huán)境控制及污染溯源能力染溯源能力新

53、型監(jiān)管模式的建立新型監(jiān)管模式的建立構(gòu)建微生物分布圖構(gòu)建微生物分布圖建立菌種信息庫(kù)建立菌種信息庫(kù)A類企業(yè)：分子水平類企業(yè)：分子水平B類企業(yè)：生化水平類企業(yè)：生化水平C類企業(yè)：境檢、類企業(yè)：境檢、API水平水平 企業(yè)微生物鑒定到企業(yè)微生物鑒定到“屬屬 藥檢所鑒定到藥檢所鑒定到“種種 “菌珠菌珠五、上海醫(yī)藥企業(yè)微生物污染的監(jiān)督、管理和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估新模五、上海醫(yī)藥企業(yè)微生物污染的監(jiān)督、管理和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估新模式的建立新的監(jiān)管模式流程圖式的建立新的監(jiān)管模式流程圖 新的監(jiān)管模式流程圖新的監(jiān)管模式流程圖食品藥品監(jiān)督管理局科學(xué)規(guī)劃食品藥品監(jiān)督管理局科學(xué)規(guī)劃企業(yè)內(nèi)部自查企業(yè)內(nèi)部自查局各職能部門外部督察局各職能部門外部督察

54、藥檢所強(qiáng)大的技術(shù)支撐藥檢所強(qiáng)大的技術(shù)支撐 上海醫(yī)藥企業(yè)微生物污染的信息庫(kù)上海醫(yī)藥企業(yè)微生物污染的信息庫(kù)監(jiān)督、管理和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估監(jiān)督、管理和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估完善對(duì)制藥企業(yè)的風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)監(jiān)管完善對(duì)制藥企業(yè)的風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)監(jiān)管建立和健全日常監(jiān)督檢查方法建立和健全日常監(jiān)督檢查方法強(qiáng)化企業(yè)微生物風(fēng)險(xiǎn)管理意識(shí)強(qiáng)化企業(yè)微生物風(fēng)險(xiǎn)管理意識(shí)建立藥品污染源通報(bào)、追蹤平臺(tái)，完善藥品召回機(jī)制建立藥品污染源通報(bào)、追蹤平臺(tái)，完善藥品召回機(jī)制5.15.25.35.4幫助企業(yè)改進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量，打造醫(yī)藥平安公共研發(fā)平臺(tái)幫助企業(yè)改進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量，打造醫(yī)藥平安公共研發(fā)平臺(tái)5.5五、五、上海上海醫(yī)藥企業(yè)微生物污染的監(jiān)督、管理和風(fēng)醫(yī)藥企業(yè)微生物污染的監(jiān)督、管理和風(fēng)

55、險(xiǎn)評(píng)估新模式的建立險(xiǎn)評(píng)估新模式的建立5.1 完善對(duì)制藥企業(yè)的風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)監(jiān)管完善對(duì)制藥企業(yè)的風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)監(jiān)管v 對(duì)制藥企業(yè)分級(jí)管理往往依據(jù)藥品對(duì)制藥企業(yè)分級(jí)管理往往依據(jù)藥品的產(chǎn)量、使用頻次及以往的污染事的產(chǎn)量、使用頻次及以往的污染事件嚴(yán)重性，對(duì)生產(chǎn)工藝和生產(chǎn)環(huán)境件嚴(yán)重性，對(duì)生產(chǎn)工藝和生產(chǎn)環(huán)境缺乏有效的數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)，容易忽略潛缺乏有效的數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)，容易忽略潛在的微生物污染危害在的微生物污染危害v 要是對(duì)文件資料的審查和經(jīng)驗(yàn)性的要是對(duì)文件資料的審查和經(jīng)驗(yàn)性的對(duì)加工條件和過程的評(píng)判，缺乏對(duì)對(duì)加工條件和過程的評(píng)判，缺乏對(duì)微生物污染進(jìn)行監(jiān)控和調(diào)查的手段，微生物污染進(jìn)行監(jiān)控和調(diào)查的手段，僅能對(duì)生產(chǎn)環(huán)境和終產(chǎn)品的細(xì)菌總僅

56、能對(duì)生產(chǎn)環(huán)境和終產(chǎn)品的細(xì)菌總數(shù)和控制菌進(jìn)行檢查，缺乏量化的數(shù)和控制菌進(jìn)行檢查，缺乏量化的評(píng)價(jià)指標(biāo)評(píng)價(jià)指標(biāo)v 檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)微生物檢測(cè)和追蹤識(shí)別檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)微生物檢測(cè)和追蹤識(shí)別能力大幅提高能力大幅提高v 通過采用微生物鑒定和分型技術(shù)對(duì)通過采用微生物鑒定和分型技術(shù)對(duì)藥品加工全過程的監(jiān)控，能對(duì)微生藥品加工全過程的監(jiān)控，能對(duì)微生物污染來源進(jìn)行詳細(xì)的分析，繪制物污染來源進(jìn)行詳細(xì)的分析，繪制工廠微生物分布圖，了解工廠生產(chǎn)工廠微生物分布圖，了解工廠生產(chǎn)過程中的污染重災(zāi)區(qū)和引起污染的過程中的污染重災(zāi)區(qū)和引起污染的工藝步驟工藝步驟v 為建立更全面的藥品質(zhì)量體系和風(fēng)為建立更全面的藥品質(zhì)量體系和風(fēng)險(xiǎn)管理體系提供了有效的分

57、析手段。險(xiǎn)管理體系提供了有效的分析手段。增強(qiáng)了監(jiān)管部門對(duì)制藥企業(yè)的監(jiān)管增強(qiáng)了監(jiān)管部門對(duì)制藥企業(yè)的監(jiān)管力度和檢查能力力度和檢查能力傳統(tǒng)監(jiān)管方法傳統(tǒng)監(jiān)管方法新新監(jiān)管方法監(jiān)管方法v 上海共有制藥企業(yè)約上海共有制藥企業(yè)約200家家v 上海地區(qū)被列為重點(diǎn)監(jiān)控對(duì)象的注射劑、生物制品和特殊藥品上海地區(qū)被列為重點(diǎn)監(jiān)控對(duì)象的注射劑、生物制品和特殊藥品三類高風(fēng)險(xiǎn)品種的三類高風(fēng)險(xiǎn)品種的生產(chǎn)企業(yè)僅有生產(chǎn)企業(yè)僅有58家家將臨時(shí)性的整頓深化為常態(tài)性的管理，可以使監(jiān)管將臨時(shí)性的整頓深化為常態(tài)性的管理，可以使監(jiān)管部門快速應(yīng)對(duì)微生物性污染突發(fā)事件，為有效評(píng)估部門快速應(yīng)對(duì)微生物性污染突發(fā)事件，為有效評(píng)估污染源的危害和范圍提供詳盡

58、的第一手分析資料污染源的危害和范圍提供詳盡的第一手分析資料這些品種涉及范這些品種涉及范圍廣、產(chǎn)品使用圍廣、產(chǎn)品使用頻繁，且容易發(fā)頻繁，且容易發(fā)生微生物性藥品生微生物性藥品污染事件。污染事件。逐步提高上海地逐步提高上海地區(qū)制藥企業(yè)的微區(qū)制藥企業(yè)的微生物性污染的風(fēng)生物性污染的風(fēng)險(xiǎn)管理水平。險(xiǎn)管理水平。上海地區(qū)高危企業(yè)上海地區(qū)高危企業(yè)微生物污染監(jiān)管方式的思考微生物污染監(jiān)管方式的思考 1、 調(diào)研：掌握企業(yè)生產(chǎn)管理水平和微生物風(fēng)險(xiǎn)管理調(diào)研：掌握企業(yè)生產(chǎn)管理水平和微生物風(fēng)險(xiǎn)管理能力能力 企業(yè)根本情況調(diào)查企業(yè)根本情況調(diào)查 微生物污染情況現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查微生物污染情況現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查 企業(yè)微生物風(fēng)險(xiǎn)管理水平等級(jí)劃分企業(yè)微生物

59、風(fēng)險(xiǎn)管理水平等級(jí)劃分 制訂適合處于不同風(fēng)險(xiǎn)理水平制藥企業(yè)管理措施和制訂適合處于不同風(fēng)險(xiǎn)理水平制藥企業(yè)管理措施和改進(jìn)意見改進(jìn)意見 2 、完善藥品微生物污染風(fēng)險(xiǎn)管理體系，制定切實(shí)可、完善藥品微生物污染風(fēng)險(xiǎn)管理體系，制定切實(shí)可行的日常微生物監(jiān)控網(wǎng)和風(fēng)險(xiǎn)防范、預(yù)警機(jī)制。行的日常微生物監(jiān)控網(wǎng)和風(fēng)險(xiǎn)防范、預(yù)警機(jī)制。 對(duì)制藥企業(yè)微生物污染的控制相關(guān)從業(yè)人員進(jìn)行有方對(duì)制藥企業(yè)微生物污染的控制相關(guān)從業(yè)人員進(jìn)行有方案的指導(dǎo)和培訓(xùn)案的指導(dǎo)和培訓(xùn) 為各類企業(yè)設(shè)定微生物風(fēng)險(xiǎn)控制水平目標(biāo)，幫助企業(yè)為各類企業(yè)設(shè)定微生物風(fēng)險(xiǎn)控制水平目標(biāo)，幫助企業(yè)建立微生物自查、預(yù)警和防護(hù)體系建立微生物自查、預(yù)警和防護(hù)體系 建設(shè)微生物污染監(jiān)控

60、數(shù)據(jù)庫(kù)，為藥品監(jiān)管部門提供監(jiān)建設(shè)微生物污染監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)庫(kù)，為藥品監(jiān)管部門提供監(jiān)管依據(jù)，建立藥品平安監(jiān)管長(zhǎng)效機(jī)制管依據(jù)，建立藥品平安監(jiān)管長(zhǎng)效機(jī)制對(duì)有條件的對(duì)有條件的A類企業(yè)：要具備一定的分子生物學(xué)鑒定方法和類企業(yè)：要具備一定的分子生物學(xué)鑒定方法和完備的生化鑒定手段，能對(duì)環(huán)境微生物給出根本準(zhǔn)確度鑒完備的生化鑒定手段，能對(duì)環(huán)境微生物給出根本準(zhǔn)確度鑒定結(jié)果；定結(jié)果；對(duì)對(duì)B類企業(yè)：要具備完善的生化鑒定體系，要能給出可靠的類企業(yè)：要具備完善的生化鑒定體系，要能給出可靠的微生物生化譜；微生物生化譜；對(duì)對(duì)C類企業(yè)：根本要具有類企業(yè)：根本要具有API試劑條鑒定條件和形態(tài)分析能試劑條鑒定條件和形態(tài)分析能力。力。 逐步