微生物實驗課件：實驗3

1、 實驗三實驗三 主要內(nèi)容主要內(nèi)容（一）細菌的人工培養(yǎng)（一）細菌的人工培養(yǎng)（二）正常人體及環(huán)境中細菌的檢查（二）正常人體及環(huán)境中細菌的檢查（三）理化生物因素對細菌的影響（三）理化生物因素對細菌的影響 細菌的生長條件包括：營養(yǎng)；適宜溫度；細菌的生長條件包括：營養(yǎng)；適宜溫度；一定的酸堿度；適當?shù)臍怏w環(huán)境；滲透壓。一定的酸堿度；適當?shù)臍怏w環(huán)境；滲透壓。 因此，可根據(jù)細菌對營養(yǎng)、因此，可根據(jù)細菌對營養(yǎng)、PH、滲透壓的要、滲透壓的要求制備求制備細菌培養(yǎng)基。細菌培養(yǎng)基。把細菌接種于培養(yǎng)基后，放恒把細菌接種于培養(yǎng)基后，放恒溫溫 （一般為（一般為37）箱內(nèi)培養(yǎng)一定時間（通常）箱內(nèi)培養(yǎng)一定時間（通常1824h），

2、細菌便可大量繁殖，可進一步觀察和研），細菌便可大量繁殖，可進一步觀察和研究其生物學特性。究其生物學特性。細菌的人工培養(yǎng)細菌的人工培養(yǎng) 細菌的人工培養(yǎng)程序為細菌的人工培養(yǎng)程序為 1. 估計標本中細菌種類、數(shù)量及培養(yǎng)目的等，估計標本中細菌種類、數(shù)量及培養(yǎng)目的等，選選用適當?shù)呐囵B(yǎng)基及接種技術(shù)。用適當?shù)呐囵B(yǎng)基及接種技術(shù)。 2. 適宜的氣體環(huán)境，適宜的氣體環(huán)境，37，1824h。 液體液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基斜面斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)基 接種技術(shù)一般分為接種技術(shù)一般分為分離分離培養(yǎng)接種法和培養(yǎng)接種法和純種純種細細菌接種法。菌接種法。 細菌的接種技術(shù)細菌的接種技術(shù) 被檢材料如糞便、痰、膿汁、尿液等?；祀s有被檢材料如糞便、

3、痰、膿汁、尿液等常混雜有多種細菌，平板劃線法可使混雜的細菌在瓊脂平板多種細菌，平板劃線法可使混雜的細菌在瓊脂平板表面表面分散生長，分散生長，各自形成不同的菌落，再根據(jù)菌落各自形成不同的菌落，再根據(jù)菌落的形態(tài)特征，挑選的形態(tài)特征，挑選單個菌落單個菌落繼續(xù)培養(yǎng)，以此分離獲繼續(xù)培養(yǎng)，以此分離獲得純種細菌，用于進一步研究、鑒定或保存。得純種細菌，用于進一步研究、鑒定或保存。 平板劃線的方法根據(jù)待檢標本中細菌的數(shù)量來平板劃線的方法根據(jù)待檢標本中細菌的數(shù)量來選擇，可分為選擇，可分為分段劃線法和連續(xù)劃線法分段劃線法和連續(xù)劃線法兩大類。兩大類。（一）分離培養(yǎng)接種法（一）分離培養(yǎng)接種法-平板劃線法：平板劃線法：

4、第一區(qū)劃線第一區(qū)劃線接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌第二區(qū)劃線第二區(qū)劃線接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌第三區(qū)劃線第三區(qū)劃線接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌1分段劃線法（分區(qū)劃線法）：分段劃線法（分區(qū)劃線法）： 檢查材料中含菌量較多時多用此法，檢查材料中含菌量較多時多用此法，以求以求獲得孤立菌落。獲得孤立菌落。 2. 連續(xù)劃線法：連續(xù)劃線法： 檢查材料中含菌量較少時可用本法。檢查材料中含菌量較少時可用本法。 （二）純種細菌接種法（二）純種細菌接種法 細菌經(jīng)分離培養(yǎng)出單個菌落后，細菌經(jīng)分離培養(yǎng)出單個菌落后，常需再移種常需再移種至其他培養(yǎng)基中，以進一步鑒定或保存菌種。根至其他培養(yǎng)基中，以進一步鑒定或保存菌種。根據(jù)接種培養(yǎng)基之物理性狀

5、，純種細菌接種法可分據(jù)接種培養(yǎng)基之物理性狀，純種細菌接種法可分為斜面培養(yǎng)基接種、液體培養(yǎng)基接種和半固體培為斜面培養(yǎng)基接種、液體培養(yǎng)基接種和半固體培養(yǎng)基穿刺接種法三類。養(yǎng)基穿刺接種法三類。 斜面培養(yǎng)基接種法斜面培養(yǎng)基接種法 一般用于純培養(yǎng)。從平板上挑取單個一般用于純培養(yǎng)。從平板上挑取單個菌落接種至斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后獲得大菌落接種至斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后獲得大量純種細菌量純種細菌（有菌苔生長），（有菌苔生長），可進一步對可進一步對細菌進行鑒定或作為菌種保存。細菌進行鑒定或作為菌種保存。 正常人體及環(huán)境中細菌的檢查（正常人體及環(huán)境中細菌的檢查（4人人/組）組）1. 皮膚細菌的檢查皮膚細菌的檢查右手食

6、指在平板右手食指在平板培養(yǎng)基表面培養(yǎng)基表面相應相應部位輕輕涂抹部位輕輕涂抹普通培養(yǎng)基普通培養(yǎng)基43212.水中細菌檢查水中細菌檢查 無菌空平皿無菌空平皿污水污水1ml 傾注傾注約約50瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基1管管（約（約14ml），搖勻。），搖勻。傾注普通瓊脂培養(yǎng)基時溫度勿太高或太低！傾注普通瓊脂培養(yǎng)基時溫度勿太高或太低！3. 空氣中細菌的檢查空氣中細菌的檢查 打開皿蓋，打開皿蓋，暴露在空氣暴露在空氣中中510分鐘分鐘 普通培養(yǎng)基普通培養(yǎng)基4. 正常人體咽喉部細菌的檢查正常人體咽喉部細菌的檢查 用滅菌棉拭在被檢用滅菌棉拭在被檢查者咽喉部輕輕涂查者咽喉部輕輕涂擦后涂于血瓊脂培擦后涂于血瓊脂培養(yǎng)基一

7、側(cè)，然后改養(yǎng)基一側(cè)，然后改用滅菌接種環(huán)作分用滅菌接種環(huán)作分段劃線接種。段劃線接種。 （做好標記）（做好標記） 血瓊脂培養(yǎng)基血瓊脂培養(yǎng)基4321（1）密集劃線密集劃線法接種細菌：用無菌接種環(huán)取細菌培法接種細菌：用無菌接種環(huán)取細菌培養(yǎng)物少許，先在平板瓊脂表面中央豎劃一條線；垂養(yǎng)物少許，先在平板瓊脂表面中央豎劃一條線；垂直該線作平行密集劃線，劃滿平板；將平板轉(zhuǎn)動直該線作平行密集劃線，劃滿平板；將平板轉(zhuǎn)動90度，再作平行密集劃線，劃滿平板。度，再作平行密集劃線，劃滿平板。理化生物因素對細菌的影響（理化生物因素對細菌的影響（4人人/組）組）1. 紫外線對細菌的影響紫外線對細菌的影響 照射照射理化生物因素對細菌的影響（理化生物因素對細菌的影響（4人人/組）組）1. 紫外線對細菌的影響紫外線對細菌的影響 （2）在紫外線燈下將）在紫外線燈下將平皿蓋拉開一半，另平皿蓋拉開一半，另半面由平皿蓋遮住，半面由平皿蓋遮住，照射照射20分鐘。分鐘。 （做好標記）（做好標記） 照射照射2. 細菌對藥物的敏感性試驗（紙片法）細菌對藥物的敏感性試驗（紙片法）（1）以）以密集劃線密集劃線法接種細菌于整個平板法接種細菌于整個平板（2）用無菌鑷子分別夾取含生理