實(shí)驗(yàn)七微生物板直接計(jì)數(shù)法和測(cè)微技術(shù)

1、1 1明確顯微鏡計(jì)數(shù)的原理并學(xué)習(xí)使用血球計(jì)明確顯微鏡計(jì)數(shù)的原理并學(xué)習(xí)使用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。數(shù)板進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)的方法。2 2學(xué)習(xí)并掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物大小的方學(xué)習(xí)并掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物大小的方法，增強(qiáng)對(duì)微生物細(xì)胞大小的感性認(rèn)識(shí)。法，增強(qiáng)對(duì)微生物細(xì)胞大小的感性認(rèn)識(shí)。 一一. .實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)七實(shí)驗(yàn)七 微生物直接計(jì)數(shù)法微生物直接計(jì)數(shù)法 和測(cè)微技術(shù)和測(cè)微技術(shù) 二、基本原理二、基本原理 1 1血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)原理血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)原理 血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，由四條槽構(gòu)成三個(gè)平載玻片，由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)，中間較寬的又被一短的橫臺(tái)，中間較寬的又被一短的橫槽隔

2、成兩半，每邊平臺(tái)上刻有槽隔成兩半，每邊平臺(tái)上刻有一個(gè)一個(gè)方格網(wǎng)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分，每個(gè)方格網(wǎng)共分九個(gè)大方格，九個(gè)大方格，中間的大方格即中間的大方格即為計(jì)數(shù)室為計(jì)數(shù)室。 每個(gè)大方格邊長(zhǎng)為每個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1 1mmmm，蓋上蓋玻片后，蓋玻蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為片與載玻片之間的高度為0 0.1mm.1mm，所以計(jì)數(shù)室的容所以計(jì)數(shù)室的容積為積為0.10.1mmmm3 3（1 11010-4-4mlml）。）。 每個(gè)大方格由每個(gè)大方格由2525個(gè)中方格或個(gè)中方格或1616個(gè)中方格組個(gè)中方格組成。計(jì)數(shù)時(shí)通常統(tǒng)計(jì)成。計(jì)數(shù)時(shí)通常統(tǒng)計(jì)5 5個(gè)（個(gè)（或或4 4個(gè)個(gè)）中方格的細(xì)）中方格的細(xì)菌數(shù)

3、，再換算成菌數(shù)，再換算成1 1mlml樣品中的細(xì)菌數(shù)。樣品中的細(xì)菌數(shù)。1ml1ml樣品中的總菌數(shù)樣品中的總菌數(shù)= =A/5A/5(4)(4)2525(16)(16)10104 4B B A A：5 5個(gè)（個(gè)（或或4 4個(gè)個(gè)）中方格中的總菌數(shù)）中方格中的總菌數(shù) B B：菌液稀釋倍數(shù)（：菌液稀釋倍數(shù)（本實(shí)驗(yàn)為本實(shí)驗(yàn)為100100倍倍）2 2測(cè)微尺的使用原理測(cè)微尺的使用原理 目鏡測(cè)微尺是一塊可放目鏡測(cè)微尺是一塊可放入入接目鏡接目鏡內(nèi)的圓形小玻片，內(nèi)的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度，其中央有精確的等分刻度，分分5050和和100100兩種，通過(guò)鏡臺(tái)兩種，通過(guò)鏡臺(tái)測(cè)微尺校正后，可測(cè)微尺校正后，可用于

4、測(cè)量用于測(cè)量細(xì)菌的大小細(xì)菌的大小。測(cè)微尺包括目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺測(cè)微尺包括目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。 鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有精確等分線(xiàn)的載鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有精確等分線(xiàn)的載玻片，一般是將玻片，一般是將1 1mmmm分為分為100100格，每格格，每格0.010.01mmmm（即即1010mm），），用于校正目鏡測(cè)微尺每格的相對(duì)長(zhǎng)度用于校正目鏡測(cè)微尺每格的相對(duì)長(zhǎng)度。目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度(m)=（鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)10 m ）/目鏡測(cè)微尺格數(shù)，如：目鏡測(cè)微尺格數(shù)，如：(1010 m /60)三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料1 1菌種菌種 啤酒酵母、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿

5、菌。啤酒酵母、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌。2 2儀器或其它用具儀器或其它用具 血球計(jì)數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、載玻片、目鏡血球計(jì)數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、載玻片、目鏡 測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、無(wú)菌毛細(xì)滴管等。測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、無(wú)菌毛細(xì)滴管等。1. 1. 啤酒酵母菌顯微計(jì)數(shù)啤酒酵母菌顯微計(jì)數(shù) 取清潔無(wú)油的血球計(jì)數(shù)板，在計(jì)數(shù)室上面加蓋取清潔無(wú)油的血球計(jì)數(shù)板，在計(jì)數(shù)室上面加蓋血蓋血蓋片片。（血球計(jì)數(shù)板不可刷洗也不可擦水）。（血球計(jì)數(shù)板不可刷洗也不可擦水）。 取酵母菌液，搖勻。用滴管取酵母菌液，搖勻。用滴管在蓋玻片邊緣在蓋玻片邊緣滴一小滴，滴一小滴，使菌液自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。使菌液自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)

6、不得有氣泡。 用用1010鏡觀(guān)察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。鏡觀(guān)察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。 在在1010或或4040鏡下計(jì)數(shù)鏡下計(jì)數(shù)5 5 個(gè)（或個(gè)（或4 4個(gè)）中格的菌數(shù)。個(gè)）中格的菌數(shù)。 然后求得然后求得5 5 個(gè)（或個(gè)（或4 4個(gè)）中格的總菌數(shù)，再按公式個(gè)）中格的總菌數(shù)，再按公式計(jì)算求得每計(jì)算求得每mlml菌液中的含菌數(shù)。菌液中的含菌數(shù)。 注意事項(xiàng)：計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右。出芽注意事項(xiàng)：計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右。出芽計(jì)半計(jì)半。四、操作步驟四、操作步驟 目鏡測(cè)微尺的校正目鏡測(cè)微尺的校正 校正并計(jì)算校正并計(jì)算1010、4040、100100鏡目鏡測(cè)微尺每鏡目鏡測(cè)微尺每小格的實(shí)際長(zhǎng)度。小格的實(shí)際長(zhǎng)度

7、。 酵母菌體大小的測(cè)定酵母菌體大小的測(cè)定 用于計(jì)數(shù)的啤酒酵母菌的制片用于計(jì)數(shù)的啤酒酵母菌的制片（可用計(jì)數(shù)的血球（可用計(jì)數(shù)的血球計(jì)數(shù)板）計(jì)數(shù)板）置于載物臺(tái)上，在置于載物臺(tái)上，在4040鏡鏡下用目鏡測(cè)微下用目鏡測(cè)微尺測(cè)量并計(jì)算菌體的長(zhǎng)和寬。尺測(cè)量并計(jì)算菌體的長(zhǎng)和寬。 金黃色葡萄球菌和枯草桿菌大小的測(cè)定金黃色葡萄球菌和枯草桿菌大小的測(cè)定 將金黃色葡萄球菌和枯草桿菌分別進(jìn)行簡(jiǎn)單染色將金黃色葡萄球菌和枯草桿菌分別進(jìn)行簡(jiǎn)單染色后，選取后，選取5 5個(gè)菌體在個(gè)菌體在100100鏡鏡下分別測(cè)定下分別測(cè)定單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞直徑和長(zhǎng)度、寬度，分別計(jì)算其平均大小。直徑和長(zhǎng)度、寬度，分別計(jì)算其平均大小。2. 2. 微生

8、物大小的測(cè)定微生物大小的測(cè)定五、預(yù)期結(jié)果五、預(yù)期結(jié)果1. 1. 目鏡測(cè)微尺標(biāo)定結(jié)果目鏡測(cè)微尺標(biāo)定結(jié)果 10 10鏡下目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是鏡下目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是 1010 mm。 40 40鏡下目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是鏡下目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是 2.52.5mm。 100 100鏡下目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是鏡下目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是 1 1 mm。 注意：保留小數(shù)點(diǎn)后二位。注意：保留小數(shù)點(diǎn)后二位。2. 2. 微生物大小測(cè)定結(jié)果微生物大小測(cè)定結(jié)果序序號(hào)號(hào)酵母菌酵母菌金黃色葡萄球金黃色葡萄球菌菌枯草桿菌枯草桿菌目鏡尺格目鏡尺格數(shù)數(shù)實(shí)際大小實(shí)際大小目鏡目鏡尺格尺格數(shù)數(shù)實(shí)際實(shí)際直徑直徑/m m目鏡尺格數(shù)目鏡尺格數(shù)

9、實(shí)際大小實(shí)際大小短軸短軸長(zhǎng)長(zhǎng)軸軸短軸短軸/m/m長(zhǎng)長(zhǎng)軸軸/m/m寬寬長(zhǎng)長(zhǎng) 寬寬/m m長(zhǎng)長(zhǎng)/m m1 12 23 34 45 5均值均值467100.8-0.8-1 11-.1.524計(jì)數(shù)室計(jì)數(shù)室5 5個(gè)中格的菌數(shù)個(gè)中格的菌數(shù)A A二室平均值二室平均值 每毫升酵母菌液的總菌每毫升酵母菌液的總菌數(shù)（個(gè)數(shù)（個(gè)/mL)第一室第一室第二室第二室3. 顯微計(jì)數(shù)結(jié)果顯微計(jì)數(shù)結(jié)果 記錄于下表中。記錄于下表中。A A表示五個(gè)中方格中的總表示五個(gè)中方格中的總菌數(shù)。菌數(shù)。 每毫升酵母菌液中的總菌數(shù)（個(gè)）每毫升酵母菌液中的總菌數(shù)（個(gè)） =(/5) =(/5)252510104 4100100下次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容下次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

10、 微生物的接種技術(shù)及分離純化微生物的接種技術(shù)及分離純化問(wèn)題與討論問(wèn)題與討論 1 1、為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡、為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行效正？進(jìn)行效正？P48,(1)P48,(1) 2 2、某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌、某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)存活率，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)1-21-2中可行的檢測(cè)方法。中可行的檢測(cè)方法。P92,(2)P92,(2)上次試驗(yàn)習(xí)題解答上次試驗(yàn)習(xí)題解答 1 1、你主要根據(jù)哪些形態(tài)特征來(lái)區(qū)分上述、你主要根據(jù)哪些形態(tài)特征來(lái)區(qū)分上述四種霉菌？四種霉菌？P46,P46

11、,（1 1） 四種霉菌的異同如下：曲霉，外生孢子（分四種霉菌的異同如下：曲霉，外生孢子（分生孢子），有足細(xì)胞，菌絲有隔；青霉：外生孢生孢子），有足細(xì)胞，菌絲有隔；青霉：外生孢子（分生孢子），為掃帚狀，菌絲有隔，相對(duì)較子（分生孢子），為掃帚狀，菌絲有隔，相對(duì)較細(xì)；根霉：內(nèi)生孢子（孢囊孢子），菌絲無(wú)隔，細(xì)；根霉：內(nèi)生孢子（孢囊孢子），菌絲無(wú)隔，有匍匐枝和假根；毛霉：內(nèi)生孢子（孢囊孢子），有匍匐枝和假根；毛霉：內(nèi)生孢子（孢囊孢子），菌絲無(wú)隔。菌絲無(wú)隔。 2 2、你認(rèn)為在顯微鏡下，細(xì)菌，放線(xiàn)菌，酵、你認(rèn)為在顯微鏡下，細(xì)菌，放線(xiàn)菌，酵母菌和霉菌的主要區(qū)別是什么？母菌和霉菌的主要區(qū)別是什么？P46,P46,（2 2） 細(xì)菌較小，一般球狀、桿狀等，需要使用油細(xì)菌較小，一般球狀、桿狀等，需要使用油鏡進(jìn)行觀(guān)