細(xì)胞生物學(xué)研究方法優(yōu)秀課件

1、醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)（第醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)（第5 5版）版）第三章第三章 細(xì)胞生物學(xué)的研究方法細(xì)胞生物學(xué)的研究方法公司名稱(chēng)2 上次課 第一節(jié) 顯微鏡技術(shù) 第二節(jié) 細(xì)胞的分離培養(yǎng) 第三節(jié) 細(xì)胞組分的分離和培養(yǎng)公司名稱(chēng)3本次課主要內(nèi)容 第四節(jié) 細(xì)胞化學(xué)和細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù) 第五節(jié) 細(xì)胞功能基因組學(xué)研究技術(shù) 第六節(jié) 生物大分子的結(jié)構(gòu)測(cè)定公司名稱(chēng)4第四節(jié) 細(xì)胞化學(xué)和細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù) 細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（cytochemistry technique)一類(lèi)將細(xì)胞形態(tài)觀察與細(xì)胞成分分析結(jié)合起來(lái)，是在保持組織或細(xì)胞原有結(jié)構(gòu)的情況下利用生物大分子、小分子、無(wú)機(jī)離子的物理、化學(xué)特性來(lái)研究他們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的分布、數(shù)量級(jí)動(dòng)態(tài)變化。細(xì)

2、胞化學(xué)技術(shù)不是單一的技術(shù)，而是一整套有關(guān)聯(lián)的技術(shù)，包括酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、放射自顯影技術(shù)、原位雜交技術(shù)等公司名稱(chēng)5 一、酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)一、酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 通過(guò)酶的特異細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)來(lái)顯示酶在細(xì)胞內(nèi)的分布及酶活性強(qiáng)弱的一種技術(shù)。公司名稱(chēng)6光鏡樣品： 固定（酶固定結(jié)構(gòu)固定） 冷凍切片 細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)（酶反應(yīng)捕捉反應(yīng)） 光鏡觀察 電鏡樣品： 固定（酶固定結(jié)構(gòu)固定）切組織片細(xì)胞化學(xué)反應(yīng) （酶反應(yīng)捕捉反應(yīng)）脫水包埋 超薄切片電鏡觀察公司名稱(chēng)7舉例：舉例：過(guò)氧化物酶過(guò)氧化物酶 peroxidase peroxidase ,(,(POXPOX) )1.原理 血細(xì)胞中的POX能分解H2O2而釋放出新

3、生態(tài)氧，后者可使聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)沉淀于細(xì)胞質(zhì)酶活力處。2.正常陽(yáng)性細(xì)胞: . 中性粒細(xì)胞呈均勻顆粒狀藍(lán)黑色陽(yáng)性。 . 嗜酸性粒細(xì)胞呈均勻粗大顆粒狀藍(lán)色陽(yáng)性。 . 單核細(xì)胞呈彌散細(xì)顆粒狀藍(lán)色陽(yáng)性。公司名稱(chēng)8中性粒細(xì)胞呈中性粒細(xì)胞呈粗顆粒強(qiáng)陽(yáng)性粗顆粒強(qiáng)陽(yáng)性單核細(xì)胞呈單核細(xì)胞呈彌散弱陽(yáng)性彌散弱陽(yáng)性公司名稱(chēng)9利用抗原和抗體的結(jié)合具有高敏感性和特異性的特點(diǎn)，用已知的經(jīng)過(guò)標(biāo)記的抗體檢測(cè)組織與細(xì)胞中相應(yīng)抗原的方法。公司名稱(chēng)10宮頸鱗癌細(xì)胞的免疫組化染色 顯示顯示NRDRB1蛋白在宮頸鱗癌組織中有特異表達(dá)，棕色為陽(yáng)性表達(dá)。蛋白在宮頸鱗癌組織中有特異表達(dá)，棕色為陽(yáng)性表達(dá)。公司名稱(chēng)11 三、放射自顯影術(shù)(au

4、toradiography) 放射自顯影技術(shù)是利用放射性同位素的電離輻射對(duì)乳膠（含AgBr或AgCl）的感光作用，對(duì)細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行定性、定位與半定量研究的一種細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用機(jī)理、作用部位等等。 常用的弱放射性同位素35S、14C、3H等及強(qiáng)放射性同位素32P。公司名稱(chēng)12 缺點(diǎn)：觀察固定后的細(xì)胞內(nèi)分子分布情況，與活細(xì)胞中的分布存在一定距離。 活細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù)公司名稱(chēng)13 四、活細(xì)胞內(nèi)分子示蹤技術(shù) （一）離子探針進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)離子的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) 原理：原理：一些染料專(zhuān)一地與某種離子結(jié)合后會(huì)一些染料專(zhuān)一地與某種離子結(jié)合后

5、會(huì)產(chǎn)生產(chǎn)生熒熒 光光或或改變本身熒光的發(fā)射波長(zhǎng)與強(qiáng)度改變本身熒光的發(fā)射波長(zhǎng)與強(qiáng)度，從，從而而 通過(guò)熒光檢測(cè)可以通過(guò)熒光檢測(cè)可以顯示該離子的量顯示該離子的量。 應(yīng)用：應(yīng)用：細(xì)胞內(nèi)離子的實(shí)時(shí)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)離子的實(shí)時(shí)檢測(cè) 。公司名稱(chēng)14(二）綠色熒光蛋白（GFP)應(yīng)用：用于顯示特定蛋白質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)的定位，間接研究蛋白之間的相互作用。原理：構(gòu)建熒光蛋白基因與目的蛋白基因的融合基因表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染特定細(xì)胞，可以在熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察目的蛋白在細(xì)胞內(nèi)的位置及隨時(shí)間變化情況。特點(diǎn)：融合蛋白不影響目的蛋白的真實(shí)定位，熒光蛋白僅僅是一個(gè)和標(biāo)記物。缺點(diǎn)：無(wú)法對(duì)幾種蛋白質(zhì)檢的相互作用提供直接證據(jù)。其他熒光蛋白：黃

6、色熒光蛋白（YGP)、藍(lán)色熒光蛋白（BGP)、青色熒光蛋白（CGP)等公司名稱(chēng)15公司名稱(chēng)16公司名稱(chēng)17 （三) 熒光共振能量轉(zhuǎn)移（fluorescence resonance energy transfer，F(xiàn)RET） 應(yīng)用：用于顯示特定蛋白質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)的定位，間接研究蛋白之間的相互作用。 原理：當(dāng)熒光工體與熒光受體分子彼此接近而供體的發(fā)射光譜與受體的激發(fā)光譜重疊時(shí)就會(huì)通過(guò)偶極子相互作用，實(shí)現(xiàn)了能量向鄰近的受體分子轉(zhuǎn)移，一種非輻射能量躍遷，通過(guò)熒光顯微鏡可以觀察到這種改變。 特點(diǎn)：受、供體的激發(fā)光要足夠分得開(kāi)；供體的發(fā)光光譜與受體的激發(fā)光譜要重疊。 常見(jiàn)的FRET熒光染料Cy3-Cy5；Al

7、exa546-Alexa647；Texas Red-Tetramethylrhodamine等。公司名稱(chēng)18公司名稱(chēng)19（四）單分子示蹤單分子熒光成像優(yōu)勢(shì)：樣品激發(fā)范圍小，光子收集效率高，高量子產(chǎn)能高信噪比熒光基團(tuán)及低成本熒光。應(yīng)用：配體與受體地 結(jié)合、蛋白質(zhì)的集合和解釋?zhuān)鞍?、mRNA等生物大分子的動(dòng)力學(xué)行為及蛋白、病毒的示蹤。原子力顯微鏡優(yōu)勢(shì)：在溶液和室溫下進(jìn)行操作、分辨率高，適合生理?xiàng)l件下顯示生物分子的特異性相互作用。公司名稱(chēng)20第五節(jié) 細(xì)胞功能基因組學(xué)研究技術(shù)一、基因表達(dá)的定量分析一、基因表達(dá)的定量分析二、基因表達(dá)的上調(diào)和下調(diào)技術(shù)二、基因表達(dá)的上調(diào)和下調(diào)技術(shù)三、蛋白質(zhì)相互作用的研究技術(shù)

8、三、蛋白質(zhì)相互作用的研究技術(shù) 四、蛋白質(zhì)與核酸的相互作用研究技術(shù)四、蛋白質(zhì)與核酸的相互作用研究技術(shù) 五、生物芯片技術(shù)五、生物芯片技術(shù)六、蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)六、蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)七、高通量測(cè)序技術(shù)七、高通量測(cè)序技術(shù)八、模式動(dòng)物個(gè)體水平的基因操作技術(shù)八、模式動(dòng)物個(gè)體水平的基因操作技術(shù) 公司名稱(chēng)21 一，基因表達(dá)的定量分析 （一）印跡雜交技術(shù)定量檢測(cè)基因表達(dá)變化的基本方法Northern blotting 檢測(cè)特異性mRNA的技術(shù)，變性處理（甲醛、戊二醛）。Westen Blotting 檢測(cè)蛋白質(zhì)分子，可檢測(cè)同一蛋白質(zhì)不同修飾方法，如磷酸化、甲基化、泛素化，考察蛋白質(zhì)含量、大小、和活性狀態(tài)的重要方法。優(yōu)點(diǎn)

9、：低成本、結(jié)果準(zhǔn)確、少有假象。缺點(diǎn)：低通量的檢測(cè)技術(shù)、步驟繁瑣、花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，公司名稱(chēng)22公司名稱(chēng)23 （二）原位雜交技術(shù)(In situ hybridization，ISH) 基因表達(dá)的時(shí)空信息 基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列，將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì)，結(jié)合成專(zhuān)一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測(cè)手段將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來(lái)。為顯示特定的核酸序列必須具備3個(gè)重要條件：組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物公司名稱(chēng)24公司名稱(chēng)25UUUGGCUAGA

10、AGCGAUCCCGUCCGACGRNA探針待測(cè)mRNA酶標(biāo)抗體酶標(biāo)抗體標(biāo)記物標(biāo)記物原位雜交原理公司名稱(chēng)26 （三）熒光實(shí)時(shí)定量PCR （Real-time PCR）檢測(cè)基因表達(dá)表達(dá)的常規(guī)方法1985年，Kary Mullis在Cetus公司工作期間，發(fā)明了PCR。1993年獲得了諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。Mullis要合成DNA引物來(lái)進(jìn)行測(cè)序工作，卻常為沒(méi)有足夠多的模板DNA而煩惱。1983年4月的一個(gè)星期五晚上，他開(kāi)車(chē)去鄉(xiāng)下別墅的路上,猛然閃現(xiàn)出“多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”的想法。公司名稱(chēng)27聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）：）：是在體外對(duì)是在體外對(duì)特

11、定的特定的DNA序列進(jìn)行的重復(fù)性復(fù)制反應(yīng)（擴(kuò)增）。序列進(jìn)行的重復(fù)性復(fù)制反應(yīng)（擴(kuò)增）。 反應(yīng)體系：反應(yīng)體系：模板模板DNA；耐熱的耐熱的DNA聚合酶；聚合酶；引物；引物；4種脫氧核苷酸（種脫氧核苷酸（dNTP）；）；反應(yīng)緩沖液。反應(yīng)緩沖液。公司名稱(chēng)28實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。 反應(yīng)步驟：反應(yīng)步驟： (1) 95變性：變性：DNA雙鏈解離；雙鏈解離； (2) 55退火：退火：DNA鏈與引物互補(bǔ)結(jié)合；鏈與引物互補(bǔ)結(jié)合； (3) 72延伸：延伸：DNA聚合酶作用下的互補(bǔ)鏈合成。聚合酶

12、作用下的互補(bǔ)鏈合成。 公司名稱(chēng)29二、 基因表達(dá)的上調(diào)和下調(diào)技術(shù)基因克?。褐竎DNA克隆，即將mRNA逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA或通過(guò)體外聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)得到的基因片段，插入到能進(jìn)行自我復(fù)制的載體（通常是質(zhì)粒），實(shí)現(xiàn)在受體細(xì)菌內(nèi)大量擴(kuò)增的過(guò)程。轉(zhuǎn)染（轉(zhuǎn)染（transfection）：將帶有外源性基因的克隆載體或表達(dá)載體導(dǎo)入真核細(xì)胞的過(guò)程。：將帶有外源性基因的克隆載體或表達(dá)載體導(dǎo)入真核細(xì)胞的過(guò)程。在表達(dá)載體啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)下，外源基因?qū)@得過(guò)表達(dá)（在表達(dá)載體啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)下，外源基因?qū)@得過(guò)表達(dá)（over-expression），從而實(shí)現(xiàn)），從而實(shí)現(xiàn)上上調(diào)調(diào)細(xì)胞中的目的基因表達(dá)。細(xì)胞中的目的基因表達(dá)。 公司名

13、稱(chēng)30（一）外源性基因在細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)是上調(diào)基因表達(dá)的主要方式公司名稱(chēng)31 （二）RNA干擾技術(shù)是下調(diào)基因表達(dá)的常用方法 RNA干擾（RNA interference, RNAi）是通過(guò)小干擾RNA ( small interference RNA, siRNA ) 造成目的mRNA特異性降解來(lái)高效、特異的阻斷體來(lái)高效、特異的阻斷體內(nèi)特定基因表達(dá)，誘使細(xì)胞表內(nèi)特定基因表達(dá)，誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型，現(xiàn)出特定基因缺失的表型，從而使基因轉(zhuǎn)錄后沉默的一種現(xiàn)象。公司名稱(chēng)32 三、 蛋白質(zhì)相互作用的研究技術(shù) 研究蛋白質(zhì)相互作用是理解細(xì)胞生命過(guò)程的關(guān)鍵。 （一）免疫沉淀 偶聯(lián)在凝膠顆粒或磁珠上的目

14、的蛋白的抗體將細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合沉淀出來(lái)，在此過(guò)程中能夠與目的蛋白發(fā)生相互作用的蛋白被同時(shí)沉淀下來(lái)，利用SDS-PAGE、免疫印跡或生物質(zhì)譜等技術(shù)隊(duì)沉淀中的蛋白進(jìn)行鑒定。 缺點(diǎn)：無(wú)法動(dòng)態(tài)檢測(cè)，存在假陽(yáng)性。 應(yīng)用：驗(yàn)證蛋白應(yīng)用：驗(yàn)證蛋白-蛋白的相互作用。蛋白的相互作用。 公司名稱(chēng)33公司名稱(chēng)34（二）酵母雙雜交視已知蛋白的cDNA序列為誘餌(bait)，將其與DNA結(jié)合域融合，構(gòu)建成誘餌質(zhì)粒。將待篩選蛋白的cDNA序列與轉(zhuǎn)錄激活域融合，構(gòu)建成文庫(kù)質(zhì)粒。將這兩個(gè)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化于酵母細(xì)胞中。酵母細(xì)胞中誘餌蛋白若能與待篩選的未知蛋白特異性地相互作用，則可激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄；反之，則不能。

15、缺點(diǎn)：只能說(shuō)明兩個(gè)蛋白之間有相互作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，并不標(biāo)示這兩個(gè)蛋白在細(xì)胞內(nèi)一定會(huì)相遇或這種相互作用在活細(xì)胞中確實(shí)存在，需要用免疫共沉淀進(jìn)行驗(yàn)證。公司名稱(chēng)35公司名稱(chēng)36（三）吞噬體展示可篩選存在相互作用的蛋白質(zhì)被篩選蛋白cDNA與噬菌體的衣殼蛋白DNA構(gòu)建成融合基因，使被篩選蛋白在噬菌體的表面進(jìn)行表達(dá)；將目的蛋白固定在平板或小珠上，與展示不同篩選蛋白的噬菌體文庫(kù)進(jìn)行孵育；洗去未結(jié)合噬菌體，分離特異性結(jié)合的噬菌體，噬菌體擴(kuò)增，多次重復(fù)上述分離過(guò)程富集特異性結(jié)合的噬菌體，基因測(cè)序得到基因編碼蛋白。公司名稱(chēng)37 四 蛋白質(zhì)與核酸相互作用的研究技術(shù) 蛋白質(zhì)與核酸（DNA和RNA）的相互作用是基因表達(dá)調(diào)

16、控的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)與基因組DNA相互作用參與基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控、蛋白質(zhì)（RNA結(jié)合蛋白，RBP)與RNA特性結(jié)合完成轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平的RNA加工、修飾、轉(zhuǎn)運(yùn)、定位和降解等過(guò)程。公司名稱(chēng)38（一）染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)研究DNA和蛋白質(zhì)的相互作用 染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation，簡(jiǎn)稱(chēng)ChIP）原理是：在生理狀態(tài)下把細(xì)胞內(nèi)的DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)在一起，通過(guò)超聲或酶處理將染色質(zhì)切為小片段后，利用抗原抗體的特異性識(shí)別反應(yīng)，將與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段沉淀下來(lái)。交聯(lián)反應(yīng)的逆轉(zhuǎn)和DNA的純化，DNA的鑒定。染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)一般包括細(xì)胞固定，染色質(zhì)斷裂，染色質(zhì)免

17、疫沉淀，交聯(lián)反應(yīng)的逆轉(zhuǎn)，DNA的純化，以及DNA的鑒定。公司名稱(chēng)39公司名稱(chēng)40 （二）紫外交聯(lián)免疫沉淀研究RNA與RNA結(jié)合蛋白相互作用應(yīng)有：在全基因組水平揭示RNA和RBP相互作用。原理：用254nm紫外光照射使細(xì)胞中的RNA分子與RNA結(jié)合蛋白發(fā)生共價(jià)結(jié)合，以RBP的特異性抗體將RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體沉淀后，回收其中的RNA片段，經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄后對(duì)RNA分子測(cè)序，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)RNA與RBP之間的相互關(guān)系。應(yīng)有限制性酶切位點(diǎn)和識(shí)別序列的引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，可使CLIP分辨率達(dá)到單個(gè)堿基水平，即iCLIP。缺點(diǎn)：交聯(lián)效率低，難以區(qū)別結(jié)合和非結(jié)合RNA序列，254nm可誘發(fā)細(xì)胞DNA損傷并結(jié)合新的RBP。改

18、進(jìn)技術(shù)：光活化核糖核苷增強(qiáng)的交聯(lián)免疫沉淀技術(shù)（PAR-CLIP),紫外交聯(lián)免疫共沉淀測(cè)序(CLIP seq)即紫外交聯(lián)免疫沉淀結(jié)合高通量測(cè)序.公司名稱(chēng)41 五，生物芯片技術(shù) 應(yīng)用：基因差異表達(dá)分析 ， DNA測(cè)序、基因突變及多態(tài)性?huà)呙瑁蚪MDNA突變及染色體變異檢測(cè) 原理：原理：采用光導(dǎo)原位合成或微量點(diǎn)樣等方法，將大量生物大分子如核酸片段、采用光導(dǎo)原位合成或微量點(diǎn)樣等方法，將大量生物大分子如核酸片段、多肽分子甚至組織切片、細(xì)胞等生物樣品有序地固化于支持物的表面，組成多肽分子甚至組織切片、細(xì)胞等生物樣品有序地固化于支持物的表面，組成密集二維分子排列，然后與已標(biāo)記的待測(cè)生物樣品中的靶分子雜交，通

19、過(guò)特密集二維分子排列，然后與已標(biāo)記的待測(cè)生物樣品中的靶分子雜交，通過(guò)特定的儀器對(duì)雜交信號(hào)的強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、高效地檢測(cè)分析，從而判斷樣定的儀器對(duì)雜交信號(hào)的強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、高效地檢測(cè)分析，從而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。品中靶分子的數(shù)量。按照芯片上固定的生物分子的不同，可分為：基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片及組織芯片。從其功能不同的角度，又可分為：測(cè)序芯片、表達(dá)芯片和比較基因組雜交(CGH)芯片。公司名稱(chēng)42基因芯片（基因芯片（GenechipGenechip） 又稱(chēng)DNA芯片,是根據(jù)核酸雜交的原理，將大量探針?lè)肿庸潭ㄓ谥С治锷希缓笈c標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)的強(qiáng)度及分布來(lái)進(jìn)行分析

20、 。公司名稱(chēng)43公司名稱(chēng)44公司名稱(chēng)45蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)芯片(proteinchip) (proteinchip) 利用抗體與抗原特異性結(jié)合即免疫反應(yīng)的原理，將蛋利用抗體與抗原特異性結(jié)合即免疫反應(yīng)的原理，將蛋白質(zhì)分子（抗原或抗體）結(jié)合到固相支持物上，形成白質(zhì)分子（抗原或抗體）結(jié)合到固相支持物上，形成蛋白質(zhì)微陣列，即蛋白質(zhì)芯片蛋白質(zhì)微陣列，即蛋白質(zhì)芯片 。公司名稱(chēng)46 六 蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)(proteomics) 技術(shù) 蛋白質(zhì)組（蛋白質(zhì)組（proteome）Proteins expressed by a genome（基因組表達(dá)的所有蛋白質(zhì)）,指在特定時(shí)空條件下某種細(xì)胞、組織或

21、器官所有含有的全部蛋白質(zhì)。 蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)(proteomics)以特定時(shí)空條件下某種細(xì)胞、組織或器官所含有的全部蛋白質(zhì)的存在即其活性方式為研究對(duì)象的學(xué)科。公司名稱(chēng)47 雙相電泳技術(shù) 質(zhì)譜法 蛋白質(zhì)鑒定質(zhì)譜：電噴霧電離質(zhì)譜（ESI-MS)、基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS) 蛋白質(zhì)的質(zhì)譜測(cè)序：串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）公司名稱(chēng)48 七、高通量測(cè)序技術(shù) 高通量測(cè)序技術(shù)（High-throughput sequencing）又稱(chēng)深度測(cè)序(deepsequencing)，“下一代”測(cè)序技術(shù)（Next-generation sequencing t

22、echnology），以能一次并行對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定。 高準(zhǔn)確性，高通量，高靈敏度，和低運(yùn)行成本等突出優(yōu)勢(shì)，可以同時(shí)完成傳統(tǒng)基因組學(xué)研究（測(cè)序和注釋?zhuān)┮约肮δ芑蚪M學(xué) （基因表達(dá)及調(diào)控，基因功能，蛋白/核酸相互作用）研究。公司名稱(chēng)49 原理：將DNA固定在芯片上，測(cè)序反應(yīng)以大規(guī)模陳列姓氏排列，邊合成邊測(cè)序，不依賴(lài)于電泳，陳列上的DNA合成石的單個(gè)堿基改變所發(fā)出的熒光信號(hào)被檢測(cè)器捕獲并轉(zhuǎn)化為一個(gè)測(cè)序峰值，從而獲得序列信息。熒光信號(hào)可以由被熒光標(biāo)記的dNTP產(chǎn)生，也可以由DNA合成時(shí)所觸發(fā)的酶催化底物激發(fā)出的熒光形成。 主要有Roche的454焦磷酸測(cè)序技術(shù)、Illumina

23、公司的Solexa聚合酶合成測(cè)序技術(shù)、ABI公司的SOLiD 連接酶測(cè)序技術(shù)。公司名稱(chēng)50公司名稱(chēng)51 與其他技術(shù)結(jié)合：與逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)結(jié)合，可進(jìn)行高通量的RNA測(cè)序，即RNA-seq；與染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）或紫外交聯(lián)免疫沉淀（CLIP）結(jié)合，形成ChIP-seq或CLIP-seq技術(shù)、與基因組甲基化檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，形成Methyl-seq技術(shù)。公司名稱(chēng)52 八、模式動(dòng)物個(gè)體水平的基因操作技術(shù) 基因敲除基因敲除(knockout)是指一種遺傳工程技術(shù)，針對(duì)某個(gè)序列已知但功能未知的序列，改變生物的遺傳基因，令特定的基因功能喪失作用，從而使部分功能被屏障，并可進(jìn)一步對(duì)生物體造成影響，進(jìn)而推測(cè)出

24、該基因的生物學(xué)功能。 基因同源重組基因同源重組是指當(dāng)外源DNA片段大且與宿主基因片段同源性強(qiáng)者并互補(bǔ)結(jié)合時(shí)，結(jié)合區(qū)的任何部分都有與宿主的相應(yīng)片段發(fā)生交換(即重組)的可能 。公司名稱(chēng)53 采用方法 1. 把待研究的基因DNA直接注射到受精卵的細(xì)胞核中。 2.在培養(yǎng)的胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）基因 組中改變或加入一個(gè)基因，隨后把所有基因改變的ES細(xì)胞注入胚泡，使其成為內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的一部分。是基因敲除的常見(jiàn)方法。公司名稱(chēng)54公司名稱(chēng)55第六節(jié) 生物大分子的結(jié)構(gòu)測(cè)定 生物大分子的結(jié)構(gòu)域功能有著密不可分的關(guān)系，特別是對(duì)于種類(lèi)繁多、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的蛋白周三維結(jié)構(gòu)的分析，是掌握生物大分子功能，理解生命現(xiàn)象的重要手段。公司名稱(chēng)56 一，磁共振技術(shù) 核磁共振光譜（Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy, NMR ） 原理：將自旋核放入磁場(chǎng)中，用適宜頻率的電磁波照射，它們會(huì)吸收能量，發(fā)生原子核能級(jí)的躍遷，同時(shí)產(chǎn)生核磁共振信號(hào)，檢測(cè)這種信號(hào)，并以波譜的形式顯示。主要的自旋核為氫原子核。 優(yōu)勢(shì)：不需要蛋白質(zhì)結(jié)晶；在溶液中進(jìn)行檢測(cè)便于檢測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化，如自身折疊或與底物結(jié)合時(shí)的變化；可以測(cè)定RNA分子的三維結(jié)構(gòu)和糖蛋白中的復(fù)雜的糖側(cè)鏈的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。公司名稱(chēng)57二，X-射線(xiàn)衍射技術(shù)X-射線(xiàn)衍射技術(shù)（X-ra