非發(fā)酵菌2010

1、非發(fā)酵菌及檢驗(yàn) 非發(fā)酵菌(nonfermenters)是指一群不利用或僅以氧化形式利用糖類的革蘭陰性無芽胞桿菌, 需氧或兼性厭氧. 基本特點(diǎn): 1. 大多數(shù)為機(jī)會致病菌; 2. 存在于自然環(huán)境; 3. 多為正常菌群的一部分; 4. 對很多抗生素有天然的抗藥性。一. 概論 近幾年，從臨床標(biāo)本中分離的非發(fā)酵菌的比例逐年上升，目前已經(jīng)約占分離的陰性菌的40%。 非發(fā)酵菌的耐藥性一般情況下都比腸桿菌科細(xì)菌明顯，常常表現(xiàn)為多重耐藥性，并且耐藥性發(fā)展很快。非發(fā)酵菌菌病原學(xué)分類 假單胞菌屬：代表菌為銅綠假單胞菌； 不動(dòng)桿菌屬：代表菌為鮑曼不動(dòng)桿菌； 窄食單胞菌屬：嗜麥芽窄食單胞菌； 伯克霍爾德菌屬：洋蔥伯克

2、霍爾德菌； 產(chǎn)堿桿菌屬：木榶氧化 其他菌屬等非發(fā)酵菌與其他細(xì)菌的區(qū)別 1. 與其他陰性桿菌的區(qū)別: 腸桿菌，弧菌科等 2. 與易脫色的革蘭陽性菌區(qū)別.辨認(rèn)非發(fā)酵菌的基本方法 1. 在克氏鐵瓊脂（KIA)上為K/K； 2. 大多數(shù)氧化酶陽性； 3. 細(xì)菌多不能在麥康凱平板上生長或生長不良.非發(fā)酵菌的初步分群 1. 葡萄糖的利用; 2. 麥康凱平板上生長能力; 3. 氧化酶; 4. 動(dòng)力.非發(fā)酵菌各菌屬間的鑒別 非發(fā)酵菌嗜麥芽窄食單胞菌葡萄糖產(chǎn)酸無色桿菌屬土壤桿菌屬假單胞菌屬動(dòng)力+OXOX不動(dòng)桿菌屬+葡萄糖產(chǎn)酸黃色素摩拉氏菌屬黃桿菌屬+端鞭毛+產(chǎn)堿桿菌屬尿素+常見不發(fā)酵菌的鑒定雙岐索引 第 一節(jié)

3、假單胞菌屬 (Pseudomonas) 一、 概述1. 分類2. 臨床意義3. 微生物特性 4.微生物檢驗(yàn) (1)檢驗(yàn)程序 (2)鑒定 (3)藥物敏感性試驗(yàn)(Antibacterial Susceptibility Test) 1.分類 假單菌屬按rRNA同源性分為5群及未確定rRNA同源群有關(guān)的種 一群需氧、不發(fā)酵葡萄糖 無芽胞，有鞭毛 氧化酶陽性的革蘭陰性桿菌 多為條件致病菌2.臨床意義假單胞菌屬分布廣泛，人類不發(fā)酵菌感染中，假單胞菌超過50，其中主要為銅綠假單胞菌.3.微生物特性 革蘭陰性、無芽胞、專性需氧 有端鞭毛或叢鞭毛 生長溫度范圍廣，最適生長溫度為35 產(chǎn)生各種水溶性色素：綠膿素

4、、膿玉紅素、熒光素、膿褐素 對理化因素耐受性較強(qiáng)，對多種抗生素耐藥 二. 銅綠假單胞菌 生物學(xué)特征： 1：形態(tài)和染色;革蘭陰性，長短不一單鞭毛生長溫度2542 菌落形態(tài)： 常見有5種菌落形態(tài)： 典型菌落：菌落呈灰綠色，扁平濕潤，邊緣不規(guī)則，表面?？梢娊饘俟鉂桑?大腸菌樣型：圓形凸起，灰白色半透明； 粘液型：菌落光滑呈粘液狀 侏儒型：細(xì)小，無光澤的半透明狀菌落； 粗糙型：中央凸起，邊緣扁平，表面粗糙。 有生姜味 可產(chǎn)生多種色素： 熒光素與綠膿素（1 ）分離培養(yǎng)與鑒定： 標(biāo)本可接種于血瓊脂平板培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基 鑒定根據(jù)鏡下特征、菌落形態(tài)、生化反應(yīng)等3.微生物檢驗(yàn)OF試驗(yàn)：O氧化酶：+精氨酸水解

5、：+葡萄糖酸氧化：+氮?dú)猓? 標(biāo)本分離培養(yǎng)基涂片檢查肉湯培養(yǎng)基血瓊脂平板SS、麥康凱瓊脂平板挑選可疑菌落（37 培養(yǎng)1824h觀察有無色素產(chǎn)生，色素鑒別接種金氏A、B培養(yǎng)基）無色素菌株42 +綠膿素+綠膿菌熒光素銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌的鑒定程序-銅綠假單胞菌的最低鑒定特征（2）抗原檢測：血清學(xué)分型、噬菌體分型（3）核酸檢測：質(zhì)粒指紋圖分析、脈沖場凝膠電泳分析（PFGE pulsed field gel electrophoresis）、基因芯片、PCR技術(shù)、16SrDNA分型鑒定技術(shù)銅綠假單胞菌的耐藥性耐藥機(jī)制：產(chǎn)酶：金屬酶，OXA酶外膜蛋白的改變（Outer membrane prote

6、ins，OMP）主動(dòng)泵出機(jī)制：對喹諾酮類，MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-Oprj整合子：1類，3類 其他假單胞菌 1.熒光假單胞菌： 特點(diǎn)：4生長 2.惡臭假單胞菌： 特點(diǎn)：產(chǎn)熒光素，4和42不生長， 不產(chǎn)綠膿素 3.斯氏假單胞： 特點(diǎn)：42生長，精氨酸雙水解酶陰性 不動(dòng)桿菌屬 共同特征: 氧化酶陰性, 不發(fā)酵糖類, 無動(dòng)力，硝酸鹽試驗(yàn)陰性。 生物學(xué)性狀: 1. 形態(tài): 革蘭陰性桿菌，多為球桿狀，常見成對排列無芽胞，無鞭毛。 2. 培養(yǎng)特性: 專性需氧菌, 最適生長溫度為35，營養(yǎng)要求不高，麥康凱、血平板均生長。 不動(dòng)桿菌屬主要菌種系列生化特征鮑曼不動(dòng)桿菌 臨床意義： 鮑曼

7、不動(dòng)桿菌分布廣泛，特別是在醫(yī)院環(huán)境中廣泛存在，極易引起醫(yī)院感染的發(fā)生，最近幾年，在國內(nèi)很多大型醫(yī)院ICU病房，鮑曼不動(dòng)桿菌的分離率已經(jīng)占到第一位。 抵抗力強(qiáng)，耐藥性強(qiáng) 容易引起院內(nèi)傳播：消毒隔離、洗手 感染危險(xiǎn)因素：1. 長期住院，入住ICU2. 高齡，伴基礎(chǔ)疾病3. 移植、免疫抑制4. 插管、人工通氣5. 事先用過抗生素 生物學(xué)性狀: 1. 形態(tài): 革蘭陰性桿菌，球桿狀，無鞭毛。 2. 培養(yǎng)特性: 專性需氧菌, 最適生長溫度為35，42 能生長，營養(yǎng)要求不高，麥康凱、血平板均生長。 3. 血平板：菌落圓形、灰白色、光滑、邊緣整齊、直徑23mm。耐藥特性 對全部氨基青霉素、一代二代頭孢菌素、氨

8、曲南天然耐藥。 獲得性耐藥：1：產(chǎn)生內(nèi)酰胺酶 OMP通透性 外排泵 整合子、基因盒臨床對策增加藥敏試驗(yàn)藥物 Tigecycline 多粘菌素B/粘菌素聯(lián)合藥敏試驗(yàn)嗜麥芽窄食單胞菌 生物學(xué)性狀: 1. 形態(tài)：革蘭陰性桿菌，有端鞭毛，無芽胞，無莢膜。 2. 培養(yǎng)特征：營養(yǎng)要求不高，最適溫度35，4不生長， 在血平板上24h可形成中等偏小的濕潤菌落, 48h形成中等大小，不溶血的帶黃色色素的菌落。 嗜麥芽窄食單胞菌 鑒定： 氧化酶 動(dòng)力 + 明膠 + 42C +/- 七葉苷 + 賴氨酸 + 麥芽糖 O耐藥性 對亞胺培南天然耐藥，主要是產(chǎn)金屬酶； 經(jīng)驗(yàn)用藥首選磺胺類，但目前磺胺類抗生素的耐藥率已經(jīng)開始

9、上升。 K-B法可選用的藥物有SXT、LEV和MNO。洋蔥伯克霍爾德菌 一般不引起人致病，但易從纖維囊腫病人中分離，在一些免疫力低下的患者中也可能分離到。 生物學(xué)特性：氧化酶90%陽性，賴氨酸陽性，多鞭毛。洋蔥伯克霍爾德菌鑒定要點(diǎn) 葡萄糖O/F： O 賴氨酸： + 枸櫞酸： + 硝酸鹽還原： + 精氨酸水解： - 甘露醇： +（依此可以與Pma鑒別）軍團(tuán)菌 生物學(xué)性狀： 1.形態(tài)與染色：革蘭陰性桿菌，不易著色，端生或側(cè)生鞭毛。 2.培養(yǎng)特征： 需氧菌，在2.55%的 CO2環(huán)境下生長良好，營養(yǎng)要求苛刻，生長緩慢，生長需要L-半胱氨酸和鐵離子。最適的培養(yǎng)基為活性炭酵母浸出液瓊脂（BCYE）培養(yǎng)基

10、。 3生化反應(yīng)：OX弱陽性或陰性，H2O2陽性，能水解明膠，不發(fā)酵糖。 4抗原結(jié)構(gòu)：有O抗原和H抗原，O抗原有特異性。 5.抵抗力：抵抗力強(qiáng)，在水中可存活數(shù)月。對化學(xué)消毒劑敏感。致病性 可引起肺炎型（重癥類型）、流感樣型（輕癥類型）和肺外感染三種類型； 肺炎型死亡率高 感染后對該菌有一定的抵抗力。微生物學(xué)檢驗(yàn) 臨床標(biāo)本：痰、氣管分泌物、胸水和血液為主。 病理組織標(biāo)本：必須制成懸液，再進(jìn)行涂片和分離培養(yǎng)。 環(huán)境污染標(biāo)本：應(yīng)先濃縮再接種。分離培養(yǎng)： 初次分離必須采用(BCYE) 35天可形成12mm直徑的光澤菌落 核酸檢測：是快速特異的方法，采用DNA探針及PCR擴(kuò)增rRNA的方法均可用于軍團(tuán)菌的

11、快速診斷 抗體檢測：是檢測軍團(tuán)菌感染臨床常用手段，常采用方法：IFA、MAA、TAT、ELISA法等軍 團(tuán) 菌 感 染 診 斷 試 驗(yàn) 非發(fā)酵菌(nonfermenters)是指一群不利用或僅以氧化形式利用糖類的革蘭陰性無芽胞桿菌, 需氧或兼性厭氧. 基本特點(diǎn): 1. 大多數(shù)為機(jī)會致病菌; 2. 存在于自然環(huán)境; 3. 多為正常菌群的一部分; 4. 對很多抗生素有天然的抗藥性。一. 概論辨認(rèn)非發(fā)酵菌的基本方法 1. 在克氏鐵瓊脂（KIA)上為K/K； 2. 大多數(shù)氧化酶陽性； 3. 細(xì)菌多不能在麥康凱平板上生長或生長不良.二. 銅綠假單胞菌 生物學(xué)特征： 1：形態(tài)和染色;革蘭陰性，長短不一單鞭毛生長溫度2542（2）抗原檢測：血清學(xué)分型、噬菌體分型（3）核酸檢測：質(zhì)粒指紋圖分析、脈沖場凝膠電泳分析（PFGE pulsed field gel electrophoresis）、基因芯片、PCR技術(shù)、16SrDNA分型鑒定技術(shù)不動(dòng)桿菌屬 共同特征: 氧化酶陰性, 不發(fā)酵糖類, 無動(dòng)力，硝酸鹽試驗(yàn)陰性。 生物學(xué)性狀: 1. 形態(tài): 革蘭陰性桿菌，多為球桿狀，常見成對排列無芽胞，無鞭毛。 2. 培養(yǎng)特性: 專性需氧菌, 最適