IGF基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)實(shí)用教案

1、研究(ynji)背景 肝細(xì)胞癌(HCC)是與慢性(mn xng)病毒感染密切相關(guān) 流行病調(diào)查，我國(guó)目前約9 300萬(wàn)乙肝病毒攜帶者，約4 000萬(wàn)丙型肝炎病毒感染者。 預(yù)后差，5年生存率約11%。第1頁(yè)/共19頁(yè)第一頁(yè)，共20頁(yè)。原癌基因激活(j hu)抑癌基因失活肝癌(n i)第2頁(yè)/共19頁(yè)第二頁(yè)，共20頁(yè)。DNA 甲基化原理(yunl)DNA甲基化主要(zhyo)發(fā)生在CpG二核苷序列的胞嘧啶上第3頁(yè)/共19頁(yè)第三頁(yè)，共20頁(yè)。胰島素樣生長(zhǎng)因子胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF-）uIGF-是一種與腫瘤形成密切相關(guān)的促有絲分裂原，在細(xì)胞增殖、分化、糖代謝調(diào)節(jié)方面有重要作用。u IGF-在胎肝和新生

2、兒肝臟中基因有大量表達(dá),但出生后基因迅速降低直至關(guān)閉(gunb),肝細(xì)胞癌變時(shí)IGF2 呈胚胎性過(guò)量表達(dá),并具有強(qiáng)烈的致有絲分裂劑作用,參與腫瘤細(xì)胞增生及分化。第4頁(yè)/共19頁(yè)第四頁(yè)，共20頁(yè)。第5頁(yè)/共19頁(yè)第五頁(yè)，共20頁(yè)。IGF-基因啟動(dòng)子與基因表達(dá)(biod)的關(guān)系E1 E2 E3E4E5E6 E7 E8E9P1P2P3P4人P2第6頁(yè)/共19頁(yè)第六頁(yè)，共20頁(yè)。IGF-信號(hào)途徑(tjng)與肝癌IGF- IRSSHCPI3KAktRasRafMAPKIGF-RProliferation Survival MetastasisIGF- IGF- 第7頁(yè)/共19頁(yè)第七頁(yè)，共20頁(yè)。 實(shí)驗(yàn)

3、(shyn)目的 本研究動(dòng)態(tài)觀察(gunch)鼠肝細(xì)胞癌變過(guò)程中IGF-基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)改變及其與IGF-基因表達(dá)的關(guān)系； 同時(shí)分析人不同肝組織中IGF-基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)及與臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系，探討IGF-啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)改變?cè)贖CC形成中的作用機(jī)制。 第8頁(yè)/共19頁(yè)第八頁(yè)，共20頁(yè)。材料(cilio)和方法 以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂飼雄性Sprague-Dawley（SD）鼠誘發(fā)肝細(xì)胞癌變，通過(guò)病理組織學(xué)方法（HE染色）觀察肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)動(dòng)態(tài)變化； 以甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（MSP）檢測(cè)鼠IGF-基因P2甲基化狀態(tài)；以酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）定量檢測(cè)鼠外周血和肝組

4、織IGF-基因的蛋白表達(dá)水平； 以MSP檢測(cè)人類(lèi)(rnli)肝細(xì)胞癌、癌旁以及正常肝臟組織IGF-基因P3甲基化狀態(tài)。 第9頁(yè)/共19頁(yè)第九頁(yè)，共20頁(yè)。圖1 誘癌過(guò)程中鼠肝大體標(biāo)本和病理學(xué)變化（HE染色200）A：正常；B：早期；C：中期(zhngq)；D：晚期結(jié)果(ji gu)與討論第10頁(yè)/共19頁(yè)第十頁(yè)，共20頁(yè)。圖2 癌變(i bin)過(guò)程中鼠IGF-P2 CpG島甲基化狀態(tài)電泳分析M：甲基化；U：非甲基化；1：正常肝；2：變性肝；3：癌前肝；4：癌變(i bin)肝；5：部分甲基化第11頁(yè)/共19頁(yè)第十一頁(yè)，共20頁(yè)。表1 誘癌過(guò)程中IGF-P2甲基化狀態(tài)的動(dòng)態(tài)(dngti)觀察

5、第12頁(yè)/共19頁(yè)第十二頁(yè)，共20頁(yè)。表2 誘癌過(guò)程(guchng)中鼠血和肝IGF-表達(dá)水平的定量分析1、Pearson相關(guān)顯示(xinsh)，鼠肝和血IGF-蛋白濃度呈正相關(guān)（r，P）2、Spearman相關(guān)顯示(xinsh)，IGF-P2去甲基化與外周血（rs，P ）和鼠肝蛋白濃度均呈正相關(guān)（rs，P）第13頁(yè)/共19頁(yè)第十三頁(yè)，共20頁(yè)。圖3 人肝癌組織(zzh)IGF-基因P3CpG島甲基化電泳圖譜U: 非甲基化；M：甲基化；T: 癌；NT：癌旁；N: 正常肝；m: marker第14頁(yè)/共19頁(yè)第十四頁(yè)，共20頁(yè)。表3 人肝癌(n i)組織中IGF-基因P3甲基化率比較 第15頁(yè)/

6、共19頁(yè)第十五頁(yè)，共20頁(yè)。表4 癌旁組織(zzh)IGF-P3甲基化的臨床病理學(xué)特征第16頁(yè)/共19頁(yè)第十六頁(yè)，共20頁(yè)。結(jié) 論1. 隨著肝細(xì)胞癌變，IGF-基因啟動(dòng)子的甲基化率逐步降低，甲基化狀態(tài)的改變貫穿肝細(xì)胞癌變過(guò)程，這有助于探討肝癌發(fā)病機(jī)制。2. IGF-基因啟動(dòng)子的去甲基化狀態(tài)改變與蛋白表達(dá)水平呈現(xiàn)顯著正相關(guān)(xinggun)，基因的去甲基化調(diào)控基因表達(dá)上調(diào)而導(dǎo)致蛋白水平增高，參與肝細(xì)胞癌變。3. IGF-II啟動(dòng)子CpG島甲基化程度與HBV感染與否密切相關(guān)(xinggun)，而這對(duì)于HBV相關(guān)(xinggun)肝細(xì)胞癌發(fā)生的監(jiān)測(cè)/預(yù)測(cè)具有潛在的應(yīng)用前景。第17頁(yè)/共19頁(yè)第十七頁(yè)，共20頁(yè)。第18頁(yè)/共19頁(yè)第十八頁(yè)，共20頁(yè)。感謝您的觀看(gunkn)！第19頁(yè)/共19頁(yè)第十九頁(yè)，共20頁(yè)。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)研究背景。第2頁(yè)/共19頁(yè)。胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF-）。IGF-是一種與腫瘤形成密切相關(guān)的促有絲分裂原，在細(xì)胞增殖、分化、糖代謝調(diào)節(jié)方面有重要作用。IGF-在胎肝和新生兒肝臟中基因有大量(dling)表達(dá),但出