植物檢疫危險性細菌

1、 植物檢疫性病原細菌的檢驗方法 梨火疫病 Fire Blight 玉米細菌性枯萎病 Stewarts bacterial wilt of corn 椰子致死黃化病 Coconut Lethal Yellowing 柑橘黃龍病 Citrus Yellow shoot復(fù)習(xí)思考題第一節(jié)第一節(jié) 植物病原細菌檢疫檢驗技術(shù)植物病原細菌檢疫檢驗技術(shù) 直接檢測：直觀檢驗和生長檢驗 間接檢測 活菌檢測 免疫吸附分離法 噬菌體檢驗 非活菌檢測 血清學(xué)檢測1、活菌檢測 分離培養(yǎng)法：分離培養(yǎng)法：營養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基或鑒別營養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基或鑒別培養(yǎng)基分離純化得到的細菌培養(yǎng)基分離純化得到的細菌 濃縮接種及離體葉檢

2、測：濃縮接種及離體葉檢測：提取液濃縮接種感病提取液濃縮接種感病植物，觀測發(fā)病情況。植物，觀測發(fā)病情況。 例如：浙江大學(xué)等在例如：浙江大學(xué)等在1 1滅菌水瓊脂中加滅菌水瓊脂中加757510106 6的苯并咪唑，做平板，加感病植物葉片，的苯并咪唑，做平板，加感病植物葉片，針刺摩擦接種，培養(yǎng)（光、溫、濕度），短期針刺摩擦接種，培養(yǎng)（光、溫、濕度），短期獲得癥狀。主要應(yīng)用于水稻細菌性條斑病菌和小獲得癥狀。主要應(yīng)用于水稻細菌性條斑病菌和小麥細菌性黑穎病菌的檢測。麥細菌性黑穎病菌的檢測。2.免疫吸附分離法 原理：結(jié)合血清學(xué)與平板分離技術(shù)，利用原理：結(jié)合血清學(xué)與平板分離技術(shù)，利用與抗原高度親和性的抗體，來捕

3、獲目標(biāo)細與抗原高度親和性的抗體，來捕獲目標(biāo)細菌，樣本中其他細菌均被沖洗掉，再將目菌，樣本中其他細菌均被沖洗掉，再將目標(biāo)細菌轉(zhuǎn)移或釋放到培養(yǎng)基上生長。標(biāo)細菌轉(zhuǎn)移或釋放到培養(yǎng)基上生長。 方法：平皿免疫吸附評價測定法和免疫吸方法：平皿免疫吸附評價測定法和免疫吸附稀釋培養(yǎng)法附稀釋培養(yǎng)法常用溶入丙酮的硝酸纖常用溶入丙酮的硝酸纖維素或指甲油作包被維素或指甲油作包被洗滌液使用包被緩沖液洗滌液使用包被緩沖液平皿免疫吸附評價測定法簡略流程如下：平皿免疫吸附評價測定法簡略流程如下：3.噬菌體檢驗 原理：噬菌體侵染細菌，裂解寄主細胞，在液體原理：噬菌體侵染細菌，裂解寄主細胞，在液體培養(yǎng)時，會使渾濁的細菌懸浮液變清，

4、在固體平培養(yǎng)時，會使渾濁的細菌懸浮液變清，在固體平板上培養(yǎng)，則出現(xiàn)許多邊緣整齊、透明光亮的噬板上培養(yǎng)，則出現(xiàn)許多邊緣整齊、透明光亮的噬菌斑。噬菌體具有?；裕么颂攸c，可鑒別菌斑。噬菌體具有專化性，利用此特點，可鑒別細菌的種類。細菌的種類。4.非活菌檢測 非活菌檢測的方法很多，下表是檢測病原細菌常非活菌檢測的方法很多，下表是檢測病原細菌常用的一些方法，前用的一些方法，前9 9種血清學(xué)方法，均屬非活菌檢種血清學(xué)方法，均屬非活菌檢測。它們既能用于病原鑒定，又能直接用于病種測。它們既能用于病原鑒定，又能直接用于病種或病株，甚至是無癥感染組織的檢測?；虿≈?，甚至是無癥感染組織的檢測。5.血清學(xué)檢驗

5、原理：原理： 方法：酶聯(lián)免疫吸附實驗（方法：酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISAELISA）、免疫熒光抗）、免疫熒光抗體法體法 免疫熒光抗體法：將熒光染料（異硫氫酸熒光黃或免疫熒光抗體法：將熒光染料（異硫氫酸熒光黃或羅丹明）與抗體以化學(xué)方法接合，再與抗體反應(yīng)，羅丹明）與抗體以化學(xué)方法接合，再與抗體反應(yīng)，形成有熒光標(biāo)記的抗體形成有熒光標(biāo)記的抗體抗原復(fù)合物，在熒光顯微抗原復(fù)合物，在熒光顯微鏡下，可觀察到黃綠色熒光。鏡下，可觀察到黃綠色熒光。 1878 1878年首先由年首先由burrillburrill描述，在紐約發(fā)生，后描述，在紐約發(fā)生，后由由ErwinErwin命名，是第一個被確定的植物細菌病害。命名

6、，是第一個被確定的植物細菌病害。主要分布于北美洲于西北歐，中歐、地中海、東南主要分布于北美洲于西北歐，中歐、地中海、東南歐及大洋州和亞洲也有分布。大約歐及大洋州和亞洲也有分布。大約4040多個國家。多個國家。第二節(jié) 檢疫性病原原核生物一、梨火疫病一、梨火疫病 Fire blight of pear梨火疫病的地理分布梨火疫病的分布范圍梨火疫病的分布范圍 梨火疫病菌寄主范圍很廣，能為害梨、蘋梨火疫病菌寄主范圍很廣，能為害梨、蘋果、山楂、木旬子、李等多個屬果、山楂、木旬子、李等多個屬220多多種植物，大部分屬薔薇科種植物，大部分屬薔薇科Pomoideae亞科。亞科。 薔薇科仁果類果樹的一種毀滅性病害

7、。一薔薇科仁果類果樹的一種毀滅性病害。一棵多年生的梨和蘋果樹發(fā)病后可在幾星期棵多年生的梨和蘋果樹發(fā)病后可在幾星期內(nèi)死亡內(nèi)死亡紅果、蘋果等侵害花、果實、枝條和葉片。侵害花、果實、枝條和葉片。 1 1）花枯萎（）花枯萎（花花器侵入）器侵入）: :侵染后變深褐色，枯萎。侵染后變深褐色，枯萎。2 2）葉片葉片侵入侵入: :從葉緣沿葉脈擴展，先呈水浸狀后黑褐從葉緣沿葉脈擴展，先呈水浸狀后黑褐色色3 3）嫩稍嫩稍: :先水浸狀，后褐色至黑色，向下彎曲呈魚鉤先水浸狀，后褐色至黑色，向下彎曲呈魚鉤狀狀4)4)果實果實侵入侵入：病部褐色凹陷，擴展到全果，潮濕時?。翰〔亢稚枷?，擴展到全果，潮濕時病 部生粘稠細菌

8、溢，初乳白色，后紅褐色。部生粘稠細菌溢，初乳白色，后紅褐色。Advanced fire blight on fruit - note bacterial ooze on fruit. 5)5)病枝病枝: :葉片凋萎，幼果僵化，但病葉病果不脫落，葉片凋萎，幼果僵化，但病葉病果不脫落， 遠望似火燒狀，故稱火疫病。遠望似火燒狀，故稱火疫病。 A branch of apple infected by fire blight 6)6)傷口：初期水浸狀，后下陷，呈潰瘍斑，病健交傷口：初期水浸狀，后下陷，呈潰瘍斑，病健交界處產(chǎn)生龜裂紋，韌皮部紅褐色，有黏液狀菌膿。界處產(chǎn)生龜裂紋，韌皮部紅褐色，有黏液狀菌膿

9、。Fire blight canker in root stock. Bark cut away showing fire blight in root stock. 嚴(yán)重時，病害從嚴(yán)重時，病害從嫩稍很快擴展到嫩稍很快擴展到枝條、主干，直枝條、主干，直至根部，全株死至根部，全株死亡。亡。 Fireblight in nursery stock u主要鑒定特征：主要鑒定特征： 最典型的癥狀是花、果實和葉片受火疫病菌侵最典型的癥狀是花、果實和葉片受火疫病菌侵害后，很快變黑褐色枯萎，猶如火燒一般，但仍害后，很快變黑褐色枯萎，猶如火燒一般，但仍掛在樹上不落，故此得名。目前國際上將其癥狀掛在樹上不落，故

10、此得名。目前國際上將其癥狀據(jù)受侵害的部位，分成個階段。據(jù)受侵害的部位，分成個階段。 （1 1）花枯萎：侵染開放的花引起花枯萎。一般發(fā)生）花枯萎：侵染開放的花引起花枯萎。一般發(fā)生于早春，病菌直接從花器侵入，初為水漬狀斑，花基于早春，病菌直接從花器侵入，初為水漬狀斑，花基部或花柄暗色，不久萎蔫。病菌可擴展至花梗及花簇部或花柄暗色，不久萎蔫。病菌可擴展至花梗及花簇中其它的花；在溫暖潮濕條件下，花梗上有菌膿滲出。中其它的花；在溫暖潮濕條件下，花梗上有菌膿滲出。隨著枯萎發(fā)展，花梗、花等變褐至黑褐色，條件適宜隨著枯萎發(fā)展，花梗、花等變褐至黑褐色，條件適宜時可繼續(xù)侵染殺死小枝并形成小潰瘍斑。時可繼續(xù)侵染殺死

11、小枝并形成小潰瘍斑。（2 2）潰瘍枯萎：前一季越冬潰瘍邊緣的病菌重新復(fù)活）潰瘍枯萎：前一季越冬潰瘍邊緣的病菌重新復(fù)活的結(jié)果。初癥是在復(fù)活的潰瘍附近的健康樹皮組織上的結(jié)果。初癥是在復(fù)活的潰瘍附近的健康樹皮組織上出現(xiàn)窄的水漬狀區(qū)，幾天后，樹皮內(nèi)部組織出現(xiàn)褐色出現(xiàn)窄的水漬狀區(qū)，幾天后，樹皮內(nèi)部組織出現(xiàn)褐色條斑，隨后病菌侵入附近繁殖枝內(nèi)部并引起萎蔫死亡。條斑，隨后病菌侵入附近繁殖枝內(nèi)部并引起萎蔫死亡。這些枝條特別這些枝條特別是嫩枝與下面是嫩枝與下面談及的枝枯萎談及的枝枯萎有明顯區(qū)別，有明顯區(qū)別，即在萎蔫之前即在萎蔫之前枝尖芽褪色枝尖芽褪色（黃至桔黃（黃至桔黃色）。色）。（3）枝枯萎：細菌直接侵入前）枝

12、枯萎：細菌直接侵入前 13葉的枝尖，然后葉的枝尖，然后殺死整個枝條及支持枝。初癥是枝尖萎蔫，但萎蔫前殺死整個枝條及支持枝。初癥是枝尖萎蔫，但萎蔫前不褪色，象拐杖狀。條件適宜時，幾天內(nèi)可移動不褪色，象拐杖狀。條件適宜時，幾天內(nèi)可移動1530cm，造成整枝死亡，病枝、枝皮、葉通常變黑。，造成整枝死亡，病枝、枝皮、葉通常變黑。潮濕時，枝條上出現(xiàn)菌膿。后期，終芽前出現(xiàn)的枝枯潮濕時，枝條上出現(xiàn)菌膿。后期，終芽前出現(xiàn)的枝枯萎一般不會萎蔫，且僅在枝最上部出現(xiàn)壞死。隨著病萎一般不會萎蔫，且僅在枝最上部出現(xiàn)壞死。隨著病菌不斷深入，并侵染主干，皮層收縮，下陷，形成潰菌不斷深入，并侵染主干，皮層收縮，下陷，形成潰瘍

13、斑。瘍斑。（4）病菌亦可直接從氣孔、水孔等自然孔口或蕾苞，）病菌亦可直接從氣孔、水孔等自然孔口或蕾苞，或由風(fēng)引起的傷口侵入葉片，初葉邊壞死，并向或由風(fēng)引起的傷口侵入葉片，初葉邊壞死，并向中脈、中柄、莖擴展，后變黑，通常有菌膿。中脈、中柄、莖擴展，后變黑，通常有菌膿。（5）損傷枯萎和砧木枯萎：這二種比較特殊，前者）損傷枯萎和砧木枯萎：這二種比較特殊，前者主要是由于晚霜、冰雹或大風(fēng)損傷引起，如果實主要是由于晚霜、冰雹或大風(fēng)損傷引起，如果實 很容易引起果實枯萎。后者僅限于高感品種很容易引起果實枯萎。后者僅限于高感品種EMAL-26、 EMLA-9和和MARK-39砧木。通常是砧木。通常是由感病的接穗

14、在這些砧木上發(fā)病后引起，最終成由感病的接穗在這些砧木上發(fā)病后引起，最終成潰瘍帶而殺死樹體。潰瘍帶而殺死樹體。 學(xué)名：Erwinia amylovora（Burrill）Winslow 異名： Micrococcus amylovorus Burril Bacillus amylovorus (Burrill) Trevisan Bacterium amylovorus (Burrill) Chester 分類地位：原核生物界(Procaryotes),薄壁菌門(Gracilicutes),腸桿菌科(Enterobacteriaceae)歐文氏菌屬(Erwinia)解淀粉歐文氏菌 形態(tài)特征：直桿

15、，有莢膜，周生鞭毛，能運動，大形態(tài)特征：直桿，有莢膜，周生鞭毛，能運動，大小為小為0.9-1.8 0.6-1.5m，多數(shù)單生，有時成雙或短，多數(shù)單生，有時成雙或短時間內(nèi)時間內(nèi)3-4個呈鏈狀。革蘭氏染色陰性。在蔗糖培養(yǎng)個呈鏈狀。革蘭氏染色陰性。在蔗糖培養(yǎng)基上基上27下培養(yǎng)下培養(yǎng)3d，菌落直徑，菌落直徑34mm，白色至奶，白色至奶油色，半球形隆起，有黏性，表面光滑，邊緣整齊，油色，半球形隆起，有黏性，表面光滑，邊緣整齊，中心絨環(huán)狀。中心絨環(huán)狀。 兼性厭氧，過氧化物酶陽性，氧化兼性厭氧，過氧化物酶陽性，氧化酶陰性，好氣條件下利用葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，厭酶陰性，好氣條件下利用葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，厭氧條件產(chǎn)酸

16、緩慢。明膠碟形液化緩慢。不產(chǎn)生硫氧條件產(chǎn)酸緩慢。明膠碟形液化緩慢。不產(chǎn)生硫化氫，不利用丙二酸鹽。葡萄糖酸鹽氧化和七葉化氫，不利用丙二酸鹽。葡萄糖酸鹽氧化和七葉苷水解不穩(wěn)定。氯化鈉濃度高于苷水解不穩(wěn)定。氯化鈉濃度高于2以上時生長延以上時生長延緩，至緩，至67%時則完全抑制。時則完全抑制。 抗青霉素，對氯抗青霉素，對氯霉素、鏈霉素和土霉素敏感。霉素、鏈霉素和土霉素敏感。 細菌生長的溫度范圍細菌生長的溫度范圍637 ，最適溫度，最適溫度2527.5，致死溫度，致死溫度4550，10 min，最適酸堿度，最適酸堿度為為PH6.0。 梨火疫病菌以簡單的細胞分裂繁殖，一個細胞梨火疫病菌以簡單的細胞分裂繁殖

17、，一個細胞在條件適宜時，天內(nèi)在寄主植物組織中能達到在條件適宜時，天內(nèi)在寄主植物組織中能達到109細胞。細胞。 除蛋白酶外，病菌不產(chǎn)任何有助于侵入寄主的除蛋白酶外，病菌不產(chǎn)任何有助于侵入寄主的酶，主要通過胞間組織侵入薄壁組織的病菌產(chǎn)生酶，主要通過胞間組織侵入薄壁組織的病菌產(chǎn)生胞外多糖。胞外多糖在病害發(fā)展過程中起重要的胞外多糖。胞外多糖在病害發(fā)展過程中起重要的作用，是菌膿的重要成份。作用，是菌膿的重要成份。 菌膿的理化性質(zhì)隨濕度變化而變化，干時皺、菌膿的理化性質(zhì)隨濕度變化而變化，干時皺、硬，大時膨脹易被雨水?dāng)U散，中等濕度的菌膿易硬，大時膨脹易被雨水?dāng)U散，中等濕度的菌膿易被昆蟲、風(fēng)傳播。被昆蟲、風(fēng)傳

18、播。u發(fā)病規(guī)律：發(fā)病規(guī)律： 病菌在病株病疤邊緣組織處越冬，掛在樹上病菌在病株病疤邊緣組織處越冬，掛在樹上的病果也是越冬場所，如果冬季溫和，病菌還能的病果也是越冬場所，如果冬季溫和，病菌還能在病株樹皮上度過，來年早春病菌在上年的潰瘍在病株樹皮上度過，來年早春病菌在上年的潰瘍處迅速繁殖，遇到潮濕、溫和的天氣，從病部滲處迅速繁殖，遇到潮濕、溫和的天氣，從病部滲出大量乳白色粘稠狀的細菌分泌物，即為當(dāng)年的出大量乳白色粘稠狀的細菌分泌物，即為當(dāng)年的初侵染源。初侵染源。 u發(fā)病規(guī)律：發(fā)病規(guī)律： 通過昆蟲、雨滴、風(fēng)、鳥類以及人的田間操通過昆蟲、雨滴、風(fēng)、鳥類以及人的田間操作將病菌傳給健株。作將病菌傳給健株。

19、病菌亦通過傷口、自然孔口（氣孔、蜜腺、病菌亦通過傷口、自然孔口（氣孔、蜜腺、水孔）、花侵入寄主組織，有一定損傷的花、葉、水孔）、花侵入寄主組織，有一定損傷的花、葉、幼果和茂盛的嫩枝最易感病。幼果和茂盛的嫩枝最易感病。適生性：適生性：胡白石、許志剛. 梨火疫病的進境風(fēng)險分析，植物保護學(xué)報，2001 28（4），303-308 近距離傳播：雨水是果園短距離傳播的主要因近距離傳播：雨水是果園短距離傳播的主要因子，其次風(fēng)亦是中短距離傳播的重要因子，往子，其次風(fēng)亦是中短距離傳播的重要因子，往往在沿著盛行風(fēng)的方向，病原菌以單個菌體或往在沿著盛行風(fēng)的方向，病原菌以單個菌體或菌膿被風(fēng)攜帶到較遠距離。除次之外，

20、昆蟲對菌膿被風(fēng)攜帶到較遠距離。除次之外，昆蟲對病菌的傳播擴散起一定的作用。傳病昆蟲包括病菌的傳播擴散起一定的作用。傳病昆蟲包括蜜蜂在內(nèi)有蜜蜂在內(nèi)有77個屬的個屬的100多種昆蟲，其中密蜂的多種昆蟲，其中密蜂的傳病距離約為傳病距離約為200 400 m 。 遠距離傳播：主要是感病寄主繁殖材料，包括遠距離傳播：主要是感病寄主繁殖材料，包括種苗、接穗、砧木、水果、被污染的運輸工具、種苗、接穗、砧木、水果、被污染的運輸工具、候鳥等。候鳥等。梨火疫病的遠距離傳播梨火疫病的遠距離傳播發(fā)生條件：發(fā)生條件： 受傷的花朵、幼果和嫩稍最易受病菌侵受傷的花朵、幼果和嫩稍最易受病菌侵染。經(jīng)冰雹襲擊，病害蔓延更加迅速。

21、染。經(jīng)冰雹襲擊，病害蔓延更加迅速。 較高氣溫（較高氣溫（1824） 較高濕度（較高濕度（70以上）利于病菌侵染。以上）利于病菌侵染。u檢驗方法：檢驗方法： 1.產(chǎn)地檢驗：產(chǎn)地檢驗：2.癥狀觀察：梨火疫病的癥狀很典型，是鑒定的重癥狀觀察：梨火疫病的癥狀很典型，是鑒定的重要方法，但必須與其他癥狀相似的梨梢枯病區(qū)分要方法，但必須與其他癥狀相似的梨梢枯病區(qū)分開。開。 梨梢枯病僅限于危害花器、葉片和嫩梢，不梨梢枯病僅限于危害花器、葉片和嫩梢，不危害枝條和莖干，病部無細菌溢膿，葉片上最初危害枝條和莖干，病部無細菌溢膿，葉片上最初為深褐色斑點，周圍有紅色暈圈，枯死的病葉不為深褐色斑點，周圍有紅色暈圈，枯死的

22、病葉不會長期掛在樹上會長期掛在樹上3.可采用選擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基?？刹捎眠x擇性培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。 MS培養(yǎng)基菌落為紅橙色，背景為蘭綠色。配培養(yǎng)基菌落為紅橙色，背景為蘭綠色。配方：瓊脂方：瓊脂20g，甘露醇，甘露醇10g， L-天門冬酰胺天門冬酰胺3g，牛膽，牛膽酸鈉酸鈉2.5g，磷酸氫二鉀，磷酸氫二鉀2.0g，煙酸，煙酸0.5g，MgSO47H2O0.2g，次氮基三乙酸，次氮基三乙酸0.2g，硫酸十七烷，硫酸十七烷基鈉基鈉0.1ml，0.5%溴麝香草酚蘭水溶液溴麝香草酚蘭水溶液9ml，0.5%中中性紅性紅2.5ml，蒸餾水，蒸餾水970ml，pH7.3滅菌后加滅菌后加1%放線菌放線菌酮酮

23、5ml，1%硝酸銫水溶液硝酸銫水溶液1.75ml。 CG培養(yǎng)基培養(yǎng)基29培養(yǎng)培養(yǎng)48h后形成火山口狀菌落。后形成火山口狀菌落。配方：水配方：水380ml，蔗糖，蔗糖160g，營養(yǎng)瓊脂，營養(yǎng)瓊脂12g，結(jié)晶紫，結(jié)晶紫0.8ml（1%乙醇溶液），乙醇溶液），0.1%放線菌酮放線菌酮20ml。梨火疫病菌致病性試驗可用梨片或梨梨火疫病菌致病性試驗可用梨片或梨嫩枝測定，亦可用煙草過敏反應(yīng)檢查。嫩枝測定，亦可用煙草過敏反應(yīng)檢查。NA上培養(yǎng)上培養(yǎng)48小時的細菌配成小時的細菌配成108 cells /ml的懸液，注入煙草葉的懸液，注入煙草葉片或接種于片或接種于1cm厚梨片、或針刺接種于丈長的嫩厚梨片、或針刺接

24、種于丈長的嫩枝條，枝條，28下培養(yǎng)。一般下培養(yǎng)。一般1012h后，煙草注射區(qū)后，煙草注射區(qū)出現(xiàn)白色壞死斑。出現(xiàn)白色壞死斑。13天后，梨片或枝條上出現(xiàn)白天后，梨片或枝條上出現(xiàn)白色高度隆起菌膿，則可確診。色高度隆起菌膿，則可確診。免疫熒光、免疫熒光、ELISA、ODD和凝集試和凝集試驗驗 等常規(guī)方法和近年發(fā)展起來的免疫分離法。等常規(guī)方法和近年發(fā)展起來的免疫分離法。6.分子生物學(xué)方法：核酸探針和分子生物學(xué)方法：核酸探針和PCR技術(shù)技術(shù)檢疫和防治檢疫和防治 1.嚴(yán)格檢疫，禁止從疫區(qū)引入薔薇科仁果類樹苗。嚴(yán)格檢疫，禁止從疫區(qū)引入薔薇科仁果類樹苗。 2.剪除病梢、病枝。剪除病梢、病枝。 3.藥劑防治：藥劑

25、防治：120mg/kg鏈霉素噴霧，或花期用鏈霉素噴霧，或花期用波爾多液噴霧防治，效果很好。波爾多液噴霧防治，效果很好。 4.種植抗病品種。種植抗病品種。 5.避免在低洼易澇地定植。芽前刮除發(fā)病樹皮，避免在低洼易澇地定植。芽前刮除發(fā)病樹皮，在生長季節(jié)每隔在生長季節(jié)每隔7天檢查天檢查1次各種發(fā)病新梢和組織，次各種發(fā)病新梢和組織，發(fā)現(xiàn)后及時剪除。對因各種農(nóng)事操作造成的傷口都發(fā)現(xiàn)后及時剪除。對因各種農(nóng)事操作造成的傷口都要進行涂藥保護等。要進行涂藥保護等。 Stewarts bacterial wilt of corn：1889年紐約首先報道，現(xiàn)已年紐約首先報道，現(xiàn)已20多個多個國家。分布于美國、加拿大

26、、墨西哥、越國家。分布于美國、加拿大、墨西哥、越南、泰國、馬來西亞、前蘇聯(lián)、波蘭、瑞南、泰國、馬來西亞、前蘇聯(lián)、波蘭、瑞士、意大利、前南斯拉夫、羅馬尼亞、希士、意大利、前南斯拉夫、羅馬尼亞、希臘、哥斯達黎加、波多黎各、圭亞那、臘、哥斯達黎加、波多黎各、圭亞那、秘魯、巴西。秘魯、巴西。 主要是甜玉米，也侵染馬齒玉米、粉質(zhì)玉主要是甜玉米，也侵染馬齒玉米、粉質(zhì)玉米、硬粒玉米和爆裂玉米。米、硬粒玉米和爆裂玉米。： 維管束病害、毀滅性病害。維管束病害、毀滅性病害。：整個生育期可危害，以開花期癥狀最明顯。早期：植株矮化，萎蔫，雄穗退色早枯，葉片上形成不規(guī)則的或波狀邊緣的條斑，初期水浸狀，黃色，與葉脈平行，

27、貫穿全葉，寬110mm，嚴(yán)重時病葉萎蔫死亡。： 后期：葉片產(chǎn)生許多小病斑，結(jié)合成大塊，火燒后期：葉片產(chǎn)生許多小病斑，結(jié)合成大塊，火燒狀干枯死亡。髓部有空腔，導(dǎo)管被黃色黏液阻塞，狀干枯死亡。髓部有空腔，導(dǎo)管被黃色黏液阻塞，萎蔫植株的下部切口有黃色細菌溢膿。萎蔫植株的下部切口有黃色細菌溢膿。： 果穗：菌膿可通過內(nèi)層包葉的氣孔滲出，籽粒表果穗：菌膿可通過內(nèi)層包葉的氣孔滲出，籽粒表面沾滿細菌菌膿，病籽粒變形、皺縮和變色。面沾滿細菌菌膿，病籽粒變形、皺縮和變色。細菌溢細菌溢：玉米細菌性枯萎病菌：玉米細菌性枯萎病菌 學(xué)名學(xué)名 Pantoeastewartii(Smith) Mertaert et al.

28、異名異名 Erwiniastewartii(Smith) Dye；Pseudomonasstewartii Smith; Apalnobacterstewartii (Smith) McCulloch; Bacillusstewartii(Smith) Holland; Bacteriumstewartii( Smith) Smith; Phytomonasstewartii (Smith) Bergye et al; Pseudobacteriumstewartii(Smith) Hrasilnikov,1949; Xanthomomasstewartii(Smith) Dowson英文名英

29、文名 Stewarts bacterial wilt of corn 分類地位分類地位 原核生物界原核生物界(Procaryoces)，薄壁菌門，薄壁菌門(Gracilicutes)，腸桿菌科，腸桿菌科(Enterobacteri-aceae)，泛，泛菌屬菌屬(Pantoea)u 形態(tài)特征：好氣性短桿菌，兩形態(tài)特征：好氣性短桿菌，兩端鈍圓，無鞭毛，有莢膜，端鈍圓，無鞭毛，有莢膜，G，單生或雙生，單生或雙生，0.40.80.92.2。在牛肉膏。在牛肉膏培養(yǎng)基上形成黃色圓形菌落，培養(yǎng)基上形成黃色圓形菌落，全緣，全緣，u 細菌生長溫度最低溫度細菌生長溫度最低溫度89，最適溫度最適溫度30，最高溫度，

30、最高溫度39，致死溫度致死溫度53 10min，適宜，適宜PH4.58.5，最適，最適6.08.0。：u初侵染來源初侵染來源帶菌的種子和昆蟲。土壤和病原帶菌的種子和昆蟲。土壤和病原殘體不能越冬，昆蟲是病原細菌的傳播介體和重殘體不能越冬，昆蟲是病原細菌的傳播介體和重要的越冬場所。最重要的傳病昆蟲是玉米葉甲，要的越冬場所。最重要的傳病昆蟲是玉米葉甲，它以成蟲帶菌越冬，細菌存在于消化道中。越冬它以成蟲帶菌越冬，細菌存在于消化道中。越冬后現(xiàn)在早播玉米苗上取食，引起初侵染，并產(chǎn)卵后現(xiàn)在早播玉米苗上取食，引起初侵染，并產(chǎn)卵發(fā)育成新一代成蟲，繼續(xù)向其它植株傳病。發(fā)育成新一代成蟲，繼續(xù)向其它植株傳病。Corn

31、 flea beetle (Chatocnema pulicaria) vector of the Stewarts wilt bacterium (Pantoea stewartii). ：發(fā)病與流行主要：發(fā)病與流行主要決定于冬季氣溫決定于冬季氣溫（12、1、2月）的高低，若平均氣溫總和在月）的高低，若平均氣溫總和在37以上以上，有利蟲媒越冬，帶菌昆蟲成活率高，有利蟲媒越冬，帶菌昆蟲成活率高，有可能引起發(fā)病。有可能引起發(fā)病。低于低于32則很少流行則很少流行。此外，。此外，有利于發(fā)病的條件包括土壤氮肥水平偏高，鉀有利于發(fā)病的條件包括土壤氮肥水平偏高，鉀肥水平偏低，高溫高濕等。肥水平偏低，高溫高

32、濕等。：1.產(chǎn)地檢驗：產(chǎn)地檢驗：2.種植檢驗：種子長出的植株有明顯的癥狀。種植檢驗：種子長出的植株有明顯的癥狀。3.分離培養(yǎng)：采用伊凡諾夫選擇培養(yǎng)基，其成分：分離培養(yǎng)：采用伊凡諾夫選擇培養(yǎng)基，其成分：甘油甘油30ml 檸檬酸鐵銨檸檬酸鐵銨10g 磷酸氫二鉀磷酸氫二鉀2 . 5g, 氯化氯化鈉鈉15g 硫酸鎂硫酸鎂0.1g, 瓊脂瓊脂17g 氯化鈣氯化鈣0.1g, 蒸餾水蒸餾水1000ml,PH7.0 還可采用選擇性黑色素培養(yǎng)基。還可采用選擇性黑色素培養(yǎng)基。 30下培養(yǎng)下培養(yǎng)7d，對光觀察，菌落中心呈黑色，邊緣，對光觀察，菌落中心呈黑色，邊緣透明，菌落圓形，表面光滑，呈粘狀。透明，菌落圓形，表面

33、光滑，呈粘狀。 將分離的細菌接種在玉米苗上，驗證是否發(fā)病。將分離的細菌接種在玉米苗上，驗證是否發(fā)病。選擇性黑色素培養(yǎng)基選擇性黑色素培養(yǎng)基,其成分如下其成分如下:酵母浸膏酵母浸膏 1g 甘油甘油 30ml 制霉菌素制霉菌素 200mg/ml牛膽酸鈉牛膽酸鈉 3g 氯化鈉氯化鈉 15g 1%水溶性黑色素水溶性黑色素20ml瓊脂瓊脂 17g 蒸餾水蒸餾水 1000ml PH6.74.噬菌體檢驗法：噬菌體檢驗法： 用?；允删w，如用?；允删w，如ZP6、ZP82等檢驗。等檢驗。5 .血清學(xué)檢驗：血清學(xué)檢驗： 用酶聯(lián)免疫法、瓊脂雙擴散等檢驗。用酶聯(lián)免疫法、瓊脂雙擴散等檢驗。1.禁止從國外疫區(qū)進口玉米

34、種子禁止從國外疫區(qū)進口玉米種子2.種子處理：種子處理：（1）微波爐）微波爐70處理處理10min，效果很好。，效果很好。（2）環(huán)氧乙烷熏蒸：）環(huán)氧乙烷熏蒸：（3）恒溫處理：）恒溫處理：50下處理下處理4d，消滅種子內(nèi)部細菌效果顯，消滅種子內(nèi)部細菌效果顯著，不影響發(fā)芽。著，不影響發(fā)芽。（4）抗菌素溫浸法：）抗菌素溫浸法：3.防治傳播媒介昆蟲：防治傳播媒介昆蟲：4.種植抗病品種：種植抗病品種：三、椰子致死黃化病三、椰子致死黃化病 Coconut Lethal Yellowing分布分布 在加勒比地區(qū)發(fā)現(xiàn)椰子致死性黃化病至今已有在加勒比地區(qū)發(fā)現(xiàn)椰子致死性黃化病至今已有一個多世紀(jì)。在牙買加、開曼群島、

35、古巴、海地、一個多世紀(jì)。在牙買加、開曼群島、古巴、海地、多米尼加共和國、巴哈馬群島和佛羅里達、有幾百多米尼加共和國、巴哈馬群島和佛羅里達、有幾百萬株椰子受此病為害致死。在東非、西非的一些地萬株椰子受此病為害致死。在東非、西非的一些地區(qū)和美國得克薩斯州，也發(fā)現(xiàn)了致死性黃化病。此區(qū)和美國得克薩斯州，也發(fā)現(xiàn)了致死性黃化病。此病不僅地理分布廣，而且蔓延很快。目前，它分布病不僅地理分布廣，而且蔓延很快。目前，它分布在拉丁美洲、非洲和西印度群島，亞洲的印度尼西在拉丁美洲、非洲和西印度群島，亞洲的印度尼西亞、印度、馬來西亞等地。亞、印度、馬來西亞等地。寄主范圍：寄主范圍：除為害椰子除為害椰子 (Cocosn

36、ucifera L.)外，還可為害油棕、外，還可為害油棕、棗椰子、扇棕、馬尼拉棕、海棕等棗椰子、扇棕、馬尼拉棕、海棕等30多種棕櫚科多種棕櫚科植物。大部分椰子品種抗病性差，在棕櫚科的植物。大部分椰子品種抗病性差，在棕櫚科的15個主要類群中，至少有個主要類群中，至少有7個是感病的。感病寄主屬個是感病的。感病寄主屬包括：桄榔屬包括：桄榔屬 ，魚尾屬魚尾屬，散尾屬散尾屬，椰子屬椰子屬，薄葵薄葵屬屬，刺葵屬刺葵屬，棕櫚屬棕櫚屬。 癥狀：各齡椰子樹均可感病。癥狀：各齡椰子樹均可感病。早期典型癥狀早期典型癥狀:花序干枯。開始時頂部復(fù)葉有褐色枯花序干枯。開始時頂部復(fù)葉有褐色枯死斑，可深入到裹在里邊的羽狀葉，

37、再向深處擴展，死斑，可深入到裹在里邊的羽狀葉，再向深處擴展，最后致死生長點，未成熟的果實脫落。開花的花序軸最后致死生長點，未成熟的果實脫落。開花的花序軸從頂端開始壞死、變黑，佛焰苞未成熟就提前開放，從頂端開始壞死、變黑，佛焰苞未成熟就提前開放，然后凋萎、落花、落果。然后凋萎、落花、落果。以后葉片開始黃化，下層的葉片迅速發(fā)展到主株葉以后葉片開始黃化，下層的葉片迅速發(fā)展到主株葉片，直至脫落。芽片感染后表現(xiàn)有不規(guī)則的褐色水浸片，直至脫落。芽片感染后表現(xiàn)有不規(guī)則的褐色水浸狀條斑，逐漸發(fā)展到芽腐，并有惡臭味。此時新葉很狀條斑，逐漸發(fā)展到芽腐，并有惡臭味。此時新葉很容易被剝離掉。容易被剝離掉。在葉部呈現(xiàn)黃

38、化癥狀時，根系出現(xiàn)壞死，不久腐爛，在葉部呈現(xiàn)黃化癥狀時，根系出現(xiàn)壞死，不久腐爛，根系受害死亡。根系受害死亡。 總之總之,葉片黃化癥狀是植原體侵入根系后導(dǎo)致生理葉片黃化癥狀是植原體侵入根系后導(dǎo)致生理學(xué)、生物化學(xué)變化的結(jié)果。一般椰子黃化植原體學(xué)、生物化學(xué)變化的結(jié)果。一般椰子黃化植原體病癥狀發(fā)展過程如下病癥狀發(fā)展過程如下： 大多數(shù)感病植株在果實成熟前提前落果大多數(shù)感病植株在果實成熟前提前落果 新開的花序黑化新開的花序黑化 從下部葉片到上部葉片逐漸黃化從下部葉片到上部葉片逐漸黃化 針形葉死亡和脫落，可能僅保留少量綠葉針形葉死亡和脫落，可能僅保留少量綠葉 整個樹冠脫落，僅留赤裸的呈線桿狀枝干整個樹冠脫落

39、，僅留赤裸的呈線桿狀枝干 病原：椰子致死黃化植原體病原：椰子致死黃化植原體 學(xué)名學(xué)名Coconut lethal yellowing Phytoplasma英文名英文名 Coconut lethal yellowing 分類地位分類地位 原核生物界，無壁菌門，軟球菌原核生物界，無壁菌門，軟球菌綱，植原體屬（綱，植原體屬（MLO）形態(tài)特征形態(tài)特征 電鏡下，典型的植原體顆粒存在于病株的篩管中。電鏡下，典型的植原體顆粒存在于病株的篩管中。顆粒是卵形、橢圓形、及絲狀，由三層結(jié)構(gòu)組成顆粒是卵形、橢圓形、及絲狀，由三層結(jié)構(gòu)組成即：兩層電子密集層，中間隔一層透明層。在感即：兩層電子密集層，中間隔一層透明層。

40、在感病椰子樹韌皮部篩管細胞內(nèi)可見植原體的存在，病椰子樹韌皮部篩管細胞內(nèi)可見植原體的存在，形狀包括絲狀、念珠狀及近球狀，大小為形狀包括絲狀、念珠狀及近球狀，大小為400-2000 nm。在新近成熟的韌皮部篩管細胞中常見。在新近成熟的韌皮部篩管細胞中常見有植原體，而在薄壁組織中未見植原體存在。有植原體，而在薄壁組織中未見植原體存在。 傳播途徑傳播途徑在自然條件下，椰子致死黃化病的介體為麥蠟蟬在自然條件下，椰子致死黃化病的介體為麥蠟蟬（Mynduscrudus）。葉蟬（）。葉蟬（Gypona sp）也有可）也有可能是潛在介體。葉蟬介體在美洲的地理分布與病能是潛在介體。葉蟬介體在美洲的地理分布與病害植

41、原體的分布相吻合。在非洲西部，葉蟬害植原體的分布相吻合。在非洲西部，葉蟬Myndusadiopodoumeensis被懷疑也是一種傳播介被懷疑也是一種傳播介體。有報道表明化學(xué)防治昆蟲介體可明顯降低病體。有報道表明化學(xué)防治昆蟲介體可明顯降低病害的傳播速度。在國際貿(mào)易中帶病的植物材料，害的傳播速度。在國際貿(mào)易中帶病的植物材料，包括觀賞樹種，能傳帶病菌。包括觀賞樹種，能傳帶病菌。 檢驗與檢測檢驗與檢測 1產(chǎn)地檢疫產(chǎn)地檢疫 根據(jù)植物受侵染后的癥狀鑒定。根據(jù)植物受侵染后的癥狀鑒定。2生物學(xué)方法生物學(xué)方法 利用介體昆蟲麥蠟蟬在可疑的植物利用介體昆蟲麥蠟蟬在可疑的植物上取食后，接種到長春花上，誘發(fā)長春花產(chǎn)生

42、典型上取食后，接種到長春花上，誘發(fā)長春花產(chǎn)生典型癥狀，但潛伏期較長。癥狀，但潛伏期較長。3電鏡觀察電鏡觀察 用電鏡觀察植物韌皮部中是否有植原用電鏡觀察植物韌皮部中是否有植原體存在。體存在。4 核酸雜交和核酸雜交和PCR檢測技術(shù)檢測技術(shù) Harrison等等1992年報年報道用道用5種種DNA探針可用于椰子和其他棕櫚科植物上探針可用于椰子和其他棕櫚科植物上的椰子致死黃化植原體的檢測；的椰子致死黃化植原體的檢測；Rohde 等等1993年報年報道應(yīng)用道應(yīng)用PCR技術(shù)成功的檢測椰子致死黃化植原體。技術(shù)成功的檢測椰子致死黃化植原體。檢疫措施檢疫措施1、 嚴(yán)禁從疫區(qū)進口椰子果和苗木。嚴(yán)禁從疫區(qū)進口椰子果

43、和苗木。2、 嚴(yán)格把關(guān)，加強檢疫。嚴(yán)格把關(guān)，加強檢疫。3、 科研單位特殊需要進口，應(yīng)由檢疫機關(guān)科研單位特殊需要進口，應(yīng)由檢疫機關(guān)審批隔離試種一年以上，證明種苗是健康的，審批隔離試種一年以上，證明種苗是健康的，方能進口。方能進口。防治方法防治方法1、 種植抗病品種。種植抗病品種。2、 防治昆蟲介體。防治昆蟲介體。3、 注射抗生素：可注射四環(huán)素注射抗生素：可注射四環(huán)素(500ppm)，每株最，每株最大劑量為大劑量為8克，加水克，加水1000毫升。每株病樹進行保護性毫升。每株病樹進行保護性注射抗生素注射抗生素13克可降低病害蔓延速度克可降低病害蔓延速度35倍。也倍。也有報道用土霉素鹽酸注射液對病株的

44、樹干進行注射有報道用土霉素鹽酸注射液對病株的樹干進行注射處理，能抑制癥狀，處理過的植株又能重新健康生長，處理，能抑制癥狀，處理過的植株又能重新健康生長，每每4個月處理個月處理1次能保持植株不表現(xiàn)癥狀。次能保持植株不表現(xiàn)癥狀。4、衛(wèi)生措施：及早清除病枝、病枝，重病樹應(yīng)砍伐、衛(wèi)生措施：及早清除病枝、病枝，重病樹應(yīng)砍伐燒毀燒毀 分布：分布：1939年在中國廣東發(fā)現(xiàn)該病，現(xiàn)已擴展到亞年在中國廣東發(fā)現(xiàn)該病，現(xiàn)已擴展到亞洲和非洲洲和非洲37個國家和地區(qū)，中國主要發(fā)生在廣東、個國家和地區(qū)，中國主要發(fā)生在廣東、廣西、福建、臺灣、海南、云南、貴州、四川、浙廣西、福建、臺灣、海南、云南、貴州、四川、浙江、湖南、江

45、西等省。江、湖南、江西等省。 寄主：主要是柑橘屬、金柑屬和枳屬。草本植物有寄主：主要是柑橘屬、金柑屬和枳屬。草本植物有長春花長春花 。 危害：是柑橘的毀滅性病害，感病的柑桔品種得病危害：是柑橘的毀滅性病害，感病的柑桔品種得病后可在后可在35年內(nèi)喪失結(jié)果能力，甚至枯死。年內(nèi)喪失結(jié)果能力，甚至枯死。四、柑橘黃龍病四、柑橘黃龍病 Citrus Yellow shootCitrus Yellow shoot 癥狀：癥狀： 典型癥狀：在濃綠的樹冠中出現(xiàn)典型癥狀：在濃綠的樹冠中出現(xiàn)12條或多條或多條的發(fā)黃枝梢，有兩種類型：一種是整張葉片條的發(fā)黃枝梢，有兩種類型：一種是整張葉片均勻黃化均勻黃化 ，另一種是葉片呈黃綠相間的斑駁，另一種是葉片呈黃綠相間的斑駁狀狀 。 共同特點：葉質(zhì)硬化、無光澤，但在黃梢下共同特點：葉質(zhì)硬化、無光澤，但在黃梢下部的老葉仍呈正常綠色。病果小，果皮光滑，部的老葉仍呈正常綠色。病果小，果皮光滑，畸形，無光澤，味酸，果皮著色時黃綠不均勻畸形，無光澤，味酸，果皮著色時黃綠不均勻或在果蒂附近變橙紅色，而其余部份仍為青綠或在果蒂附近變橙紅色，而其余部份仍為青綠色的青果色的青果 病原病原Liberob