實驗6 酵母RNA的分離及組分鑒定

1、實驗6酵母酵母RNARNA的分離及鑒定的分離及鑒定 RNA的來源和種類很多，提取制備方法各異，一般有的來源和種類很多，提取制備方法各異，一般有苯酚法、去污劑法和鹽酸胍法。苯酚法是實驗室最常用的。苯酚法、去污劑法和鹽酸胍法。苯酚法是實驗室最常用的。組織勻漿用苯酚處理并離心后，組織勻漿用苯酚處理并離心后，RNA即溶于上層被酚飽和的即溶于上層被酚飽和的水相中，水相中，DNA和蛋白質(zhì)則留在酚層中，向水層加入乙醇后，和蛋白質(zhì)則留在酚層中，向水層加入乙醇后，RNA以白色絮狀沉淀析出。該法提取的以白色絮狀沉淀析出。該法提取的RNA具有生物活性。具有生物活性。工業(yè)上常用稀堿法和濃鹽法提取工業(yè)上常用稀堿法和濃鹽

2、法提取RNA，所提取的核酸均為變，所提取的核酸均為變性的性的RNA，主要用作制備核苷酸的原料，其工藝比較簡單。，主要用作制備核苷酸的原料，其工藝比較簡單。濃鹽法是用濃鹽法是用10%左右氯化鈉溶液，左右氯化鈉溶液，90提取提取34h，迅速冷，迅速冷卻，提取液經(jīng)離心后，上清液用乙醇沉淀卻，提取液經(jīng)離心后，上清液用乙醇沉淀RNA。 稀堿法使用用稀堿法使用用0.2%NaOH溶液使酵母細(xì)胞裂解，然后溶液使酵母細(xì)胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白質(zhì)和菌體后的上清液用酸中和，除去蛋白質(zhì)和菌體后的上清液,用乙醇沉淀用乙醇沉淀RNA或調(diào)或調(diào)pH2.5利用等電點沉淀。提取的利用等電點沉淀。提取的RNA有不同程度的降解

3、。有不同程度的降解。 1、器材：、器材：干酵母粉，天平，抽濾瓶、布氏漏斗、離心機干酵母粉，天平，抽濾瓶、布氏漏斗、離心機2、試劑：、試劑： 0.04 mol/L氫氧化鈉氫氧化鈉酸性乙醇酸性乙醇無水乙醚（無水乙醚（C P）氨水（氨水（C P） 1.5mol/L硫酸硫酸 5%硝酸銀硝酸銀苔黑酚苔黑酚三氯化鐵試劑三氯化鐵試劑定磷試劑定磷試劑三、實驗器材與試劑三、實驗器材與試劑取酵母粉取酵母粉7.5g 于于100ml錐形瓶錐形瓶中中 沉淀沉淀 上清液上清液 上清液上清液 沉淀沉淀95%乙醇洗滌2次(每次5 ml)乙醚洗滌1次(10 ml)乙醚轉(zhuǎn)移沉淀至布氏漏斗中抽濾沉淀在空氣中自然干燥 RNA粗制品粗制品取200mg，加1.5mol/L硫酸溶液10mL沸水浴加熱5 min，得到水解液. 組分鑒定組分鑒定加入0.04 mol/L NaOH 溶液 45 ml 搖勻沸水浴加熱30min（時常攪拌），冷卻離心（3000r/min）15 min傾入25ml酸性（乙酸）乙醇溶液中（邊攪拌邊緩緩傾入）Ph5-6，靜置，核糖核酸完全沉淀離心（3000r/min）