血清ALT活性測(cè)定ppt課件

1、血清ALT活性測(cè)定吳占波、陳旻賚、劉仲春、陳軍武 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膙生理作用v單位意義v測(cè)定方法v臨床意義卡門原理v ALTv丙氨酸+a-酮戊二酸 丙酮酸+谷氨酸v NADH+H 乳酸脫氫酶 v v NAD +乳酸 v1ml血清 340nm波長(zhǎng) 1.0cm比色 25 C 1min 光密度下降0.001 實(shí)驗(yàn)原理v ALTv丙氨酸+a-酮戊二酸 丙酮酸+谷氨酸v OHv丙酮酸+2,4二硝基苯肼 丙酮酸2,4二硝基苯腙+H2Ov反響30min 在520nm試劑vALT底物液vPH=7.4磷酸緩沖液v丙酮酸規(guī)范液v2，4-二硝基苯肼溶液v0.4mol/LNaOH實(shí)驗(yàn)操作v1.繪制規(guī)范曲線v2.酶活性測(cè)定混勻

2、，放置混勻，放置10分鐘，以蒸餾水調(diào)零，用分鐘，以蒸餾水調(diào)零，用520nm波長(zhǎng)比色，讀取各觀密波長(zhǎng)比色，讀取各觀密度。各管的光密度度。各管的光密度An減去減去0管管A0，以光密度差值，以光密度差值A(chǔ)n-A0為縱為縱坐標(biāo)，活性單位為橫坐標(biāo)。坐標(biāo)，活性單位為橫坐標(biāo)。01234丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液（mlml）0 00.050.050.10.10.150.150.20.2ALTALT底物試劑（底物試劑（mlml）0.50.50.450.450.40.40.350.350.30.30.1M0.1M磷酸緩沖溶液磷酸緩沖溶液PH=7.4(ml)PH=7.4(ml)0.10.10.10.10.10.10

3、.10.10.10.1 混勻，置混勻，置37C37C水浴預(yù)溫水浴預(yù)溫5 5分鐘分鐘2,4-2,4-二硝基苯肼液（二硝基苯肼液（mlml）0.50.50.50.50.50.50.50.50.50.5 混勻，置混勻，置37C37C水浴水浴2020分鐘分鐘 0.4mol/LNaOH(ml)0.4mol/LNaOH(ml)5 55 55 55 55 5相當(dāng)于相當(dāng)于ALTALT活性（卡門氏單位）活性（卡門氏單位）0 0282857579797150150酶活性測(cè)定：去兩只闡明測(cè)定管T及對(duì)看管C,測(cè)定前將底物液在37 C水浴中預(yù)溫5minv混勻，放置10min，用520nm波長(zhǎng)比色，讀數(shù)，用AT-AC差規(guī)

4、范曲線，及待測(cè)血清中ALT的酶活性 v參考值 525卡 測(cè)定管測(cè)定管 對(duì)照管對(duì)照管血清（血清（mlml）0.10.1 ALTALT底物液（底物液（mlml）0.50.50.50.5 混勻，置混勻，置37C37C水浴中保溫水浴中保溫30min30min2,4-2,4-二硝基苯肼液（二硝基苯肼液（mlml）0.50.50.50.5 混勻，置混勻，置37C37C水浴中保溫水浴中保溫20min20min血清（血清（mlml） 0.10.10.4mol/LNaOH0.4mol/LNaOH（mlml）5 55 5臨床意義v在肝臟疾病時(shí)，ALT的濃度會(huì)升高，機(jī)體各組織都有，肝臟中丙氨酸代謝最旺盛，含量最多發(fā)

5、病時(shí)活性和含量均升高 葡萄糖葡萄糖6-6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖甘油甘油磷酸二羥丙酮磷酸二羥丙酮磷酸戊磷酸戊糖途徑糖途徑脂肪脂肪磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸3-3-磷酸甘油醛磷酸甘油醛脂肪酸脂肪酸丙酮酸丙酮酸非必須氨基酸非必須氨基酸非必需氨基酸非必需氨基酸乙酰輔酶乙酰輔酶A A酮體酮體草酰乙酸草酰乙酸檸檬酸檸檬酸CO2CO2延胡索酸延胡索酸a-a-酮戊二酸酮戊二酸谷氨酸谷氨酸琥珀酸琥珀酸CO2CO2本卷須知v賴氏法規(guī)范曲線只到97卡門氏單位，啟活性與吸光度有良好的線性關(guān)系，超越時(shí)，應(yīng)將血清稀釋測(cè)定vA-酮戊二酸也能與2,4-二硝基苯肼產(chǎn)生苯腙，兩種吸光度在520nm出吸光度差別大，空白管的吸光度應(yīng)不超越0.015思索題v1終止法v2賴氏與卡門的聯(lián)絡(luò)與區(qū)別v3規(guī)范對(duì)照法v4影響準(zhǔn)確性較大的試劑規(guī)范對(duì)照法測(cè)定管測(cè)定管T T對(duì)照管對(duì)照管C C標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管S S空白管空白管S S標(biāo)準(zhǔn)液（標(biāo)準(zhǔn)液（mlml）0.10.1血清（血清（mlml）0.10.1ALTALT底物液（底物液（mlml）0.40.40.40.40.40.40.50.5PBS(ml)PBS(ml)0.10.10.10.10.10.10.10.1混勻，混勻，37 37 C,30minC,30min苯肼（苯肼（mlml）0.50.50.50