PCR實驗室常用設(shè)備、試劑和耗材使用管理

1、PCRPCR實驗室常用設(shè)備、試劑和耗材實驗室常用設(shè)備、試劑和耗材使用管理使用管理廣西臨床檢驗中心廣西臨床檢驗中心 周微雅周微雅2012.05.15n試劑準備區(qū)n加樣器加樣器n潔凈工作臺潔凈工作臺n低溫冰箱低溫冰箱n標本制備區(qū)n生物安全柜生物安全柜n高速高速( 冷凍冷凍)離心機離心機n漩渦振蕩混旋器漩渦振蕩混旋器n恒溫水浴箱（金屬浴）恒溫水浴箱（金屬?。﹏加樣器加樣器n冰箱冰箱n擴增區(qū)（產(chǎn)物擴增及分析區(qū)）nPCR熱循環(huán)儀（熱循環(huán)儀（DNA擴增儀）擴增儀）精密電子分析天平放置地點： 試劑準備區(qū) 標本制備區(qū) 標識： 所在區(qū)域 校準狀態(tài)型號型號容量容量 準確度（標準誤差）準確度（標準誤差） 精度（重復

2、性）精度（重復性）2 (L) 絕對誤差絕對誤差(L) 相對誤差相對誤差(%) 標準誤差標準誤差(L） 相對離差相對離差(%)P2 最小最小 0.2 0.024 12 0.012 6 0.5 0.025 5 0.012 2.50 最大最大 2 0.030 1.5 0.014 0.70P10 最小最小 1 0.025 2.5 0.012 1.25 5 0.075 1.5 0.030 0.60 最大最大 10 0.10 1 0.040 0.40P20 最小最小 2 0.1 5.0 0.03 1.50 5 0.1 2.0 0.04 0.80 10 0.1 1.0 0.05 0.50 最大最大 20 0

3、.2 1.0 0.06 0.30P100 最小最小 20 0.35 1.8 0.10 0.5 50 0.4 0.8 0.12 0.24 最大最大 100 0.8 0.8 0.15 0.15 設(shè)定容量 容量計讀數(shù)由三位撥號數(shù)字組成（顯示所轉(zhuǎn)移液體容量） ，從上（最大有效數(shù)字）到下（最小有效數(shù)字）讀取。利用底部刻度可將容量調(diào)節(jié)到更精確的分度。根據(jù)型號不同，數(shù)字可能是黑色或紅色的。 P2 P10 P20 P100 P200 1 0 1 0 1 2 7 2 7 2 5 5 5 5 5 1.25l7.5l 12.5l 75l 125l離心分類離心分類 轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（rpm） 微速離心微速離心 15

4、 ,00 0 低低/高速離心高速離心 2,00020,000 超速離心超速離心 120 ,000 離心分類離心分類 轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（rpm） 微速離心微速離心 15 ,00 0 低低/高速離心高速離心 2,00020,000 超速離心超速離心 120 ,000 離心分類離心分類 轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（rpm） 微速離心微速離心 15 ,00 0 低低/高速離心高速離心 2,00020,000 超速離心超速離心 120 ,000 對于高致病性病原微生物，必須要高度警惕離心過程中產(chǎn)生的氣溶膠風險。大型離心機上應加裝負壓罩，以及時吸出離心機排出的氣體，并排至實驗室的過濾通風系統(tǒng)，在BSL-3及以上

5、級別實驗室尤其要注意。所有的離心管必須帶蓋密封，其開啟應在安全柜內(nèi)進行。微型離心機則可放在安全柜內(nèi)離心，但要注意其對安全柜氣流的影響。如果不能在安全柜內(nèi)離心也無負壓罩，則必須將密封的轉(zhuǎn)頭在安全柜內(nèi)打開。1. 所有離心機應處于正常工作狀態(tài)/合格機械性能，根據(jù)廠家說明書進行操作。2. 離心機位于適宜位置和高度，工作人員能看見離心桶，便于進行各項操作。3. 離心管和標本容器根據(jù)廠家要求選用，最好使用塑料制品，使用前應檢查有無破損。必須在安全柜內(nèi)打開蓋子必須在安全柜內(nèi)打開蓋子。4. 使用轉(zhuǎn)頭時應注意轉(zhuǎn)頭蓋與轉(zhuǎn)頭型號是否匹配。離心桶的裝載、平衡、密封和打開必須在生物安全柜內(nèi)進行?？针x心桶配平時應該用蒸餾

6、水或空離心桶配平時應該用蒸餾水或7070乙醇、異丙醇乙醇、異丙醇，不應使用鹽水和次氯酸鹽溶液。離心管內(nèi)液面水平距管口應留出一定空隙，以確保離心過程中液體不會溢出，尤其是使用角轉(zhuǎn)頭時更要注意。（密封的離心桶/安全杯）5. 應該每天檢查在特定的轉(zhuǎn)速下，離心杯的內(nèi)表面有無污物。離心轉(zhuǎn)頭和離心桶應每天檢查有無腐蝕點以及極細的裂縫，以確保安全。離心桶、轉(zhuǎn)頭和離心機腔每次用后都應該消毒。每次用后，應該把離心桶倒放，以排凈離心配平的液體。不同型號生物安全柜（不同型號生物安全柜（BSCBSC）特征比較）特征比較1.1.安裝上要求有一特殊管道通到室外、有一道活性炭過濾器、防爆的發(fā)動機及其它電路安裝上要求有一特殊

7、管道通到室外、有一道活性炭過濾器、防爆的發(fā)動機及其它電路組成。組成。級柜如果操作揮發(fā)性化學物，則不能將廢氣排到室內(nèi)。級柜如果操作揮發(fā)性化學物，則不能將廢氣排到室內(nèi)。2.化學濃度不能超過最低爆炸濃度?；瘜W濃度不能超過最低爆炸濃度。7070循環(huán)循環(huán)，3030外外排，操作排，操作口氣流速口氣流速度度 75ft/m75ft/minin。二級二級A2A2型型( (原原B3B3型型) )生物安全柜氣流模式生物安全柜氣流模式7070循環(huán)，循環(huán)，3030外排，操作口氣外排，操作口氣流速度流速度100ft/min100ft/min，可管道排氣。，可管道排氣。二級二級B1B1型生物安全柜氣流模式型生物安全柜氣流模

8、式3030循環(huán)，循環(huán)，7070外排，操作外排，操作口氣流速度口氣流速度100ft/min100ft/min，可管道排氣?？晒艿琅艢狻o循環(huán)，無循環(huán)，100100外排，操作口外排，操作口氣流速度氣流速度100ft/min100ft/min，外接管道。外接管道。1 1、有充分清潔與維護空間、有充分清潔與維護空間2 2、最佳安全柜擺設(shè)地點取決于安全柜所受到的、最佳安全柜擺設(shè)地點取決于安全柜所受到的外在氣流干擾減到最小外在氣流干擾減到最小3 3、避免高人流量通道、避免高人流量通道4 4、遠離空調(diào)排氣口，排氣扇、遠離空調(diào)排氣口，排氣扇 根據(jù)根據(jù) ANSI/NSF49:2002 ANSI/NSF49:20

9、02 和英國標準和英國標準BS5726:1992BS5726:1992推薦推薦安裝指南安裝指南( (安全柜的安裝需要由經(jīng)過培訓的專業(yè)安全柜的安裝需要由經(jīng)過培訓的專業(yè)人員進行人員進行) )安安 裝裝 地地 點點地點地點1 1：遠離周：遠離周圍圍的氣流的氣流擾動因素擾動因素，是推薦的最佳安裝地點。，是推薦的最佳安裝地點。地點地點2 2：太靠近門：太靠近門、走道以及空調(diào)、走道以及空調(diào)出風口出風口，影響安全柜的氣流。，影響安全柜的氣流。地點地點3 3：空調(diào)出風空調(diào)出風口會影響安全柜口會影響安全柜的氣流。的氣流。地點地點4 4：太靠近門：太靠近門，側(cè)面太靠近墻，側(cè)面太靠近墻壁。壁。地點地點5 5：如果：

10、如果相相鄰鄰的回風口的回風口氣流不氣流不影響安全柜的氣流。那影響安全柜的氣流。那5 5的位置的位置也也適合安裝安全柜。適合安裝安全柜。比安全柜頂部至比安全柜頂部至少高出少高出100mm100mm生物安全柜的使用規(guī)范生物安全柜的使用規(guī)范1. 每次使用前檢查2. 不打開觀察窗3. 列出工作所需物品的清單，以減少雙臂進入破壞氣流4. 打開風機5-10min5. 窗式報警器、氣流報警器任何造成安全柜內(nèi)氣流紊亂的不良操作都會危及操作者任何造成安全柜內(nèi)氣流紊亂的不良操作都會危及操作者的安全的安全 操作準備操作準備 物品擺放與防污染措施物品擺放與防污染措施1. 盡量少放少放儀器和物品2. 不要阻塞阻塞氣口的

11、空氣流通3. 廢物容器/袋置安全柜內(nèi) 密封 消毒4. 安全柜內(nèi)潔凈物品/污染物品分開放置分開放置（消毒巾的墊置）（消毒巾的墊置）5. 操作盡量工作臺中央，注意動作對定向氣流的影響6. 工作用紙不允許放在生物安全柜內(nèi)7. 盡量減少操作者背后人員的走動、快速開關(guān)實驗室的門減少操作者背后人員的走動、快速開關(guān)實驗室的門（進入時，敲門提醒正在操作的人員） 在每次使用前清除生物安全柜內(nèi)表面的污染，工作臺面和內(nèi)壁要用消毒劑進行擦拭（殺滅任何微生物），但不包括送風濾器的擴散板； 在實驗結(jié)束時，包括儀器在內(nèi)的生物安全柜里的所有物品應清除表面污染后，才能移出安全柜； 在實驗結(jié)束后，應擦拭生物安全柜的工作臺面、四周

12、以及玻璃的內(nèi)外側(cè)等部位以清除表面的污染。 在對目標生物體有效時，可以采用漂白劑溶液或70%酒精來消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無菌水再次進行擦拭。標本溢漏或潑灑后，立即清除污染物及污染的表面。在生物安全柜維護、更換過濾器、以及性能測試或重新安置之前，必須消毒。最普通的氣體消毒方法：甲醛熏蒸推薦將安全柜一直維持運行狀態(tài)。如果要關(guān)閉的話，則應在關(guān)機前運行5min以凈化內(nèi)部的氣體。 Mg2+Mn2+dCTPdGTPdUTPdATPTaq DNA 多 聚 酶rTth DNA 多 聚 酶AmpErase 生 物 素 標 記 的 引 物 和和 或或 和和血 清 盤 結(jié) 果血 清 盤 結(jié) 果合 計待檢試劑盒結(jié)果aba + b待 檢 試 劑 盒結(jié) 果 cdc + d合 計a + cb + da+b+c+d血清盤結(jié)果血清盤結(jié)果合 計待檢試劑盒結(jié)果aba + b待檢試劑盒結(jié)果cdc + d合 計a + cb + da+b+c+dn密封性密封性：n制備一個含1%-2%甘油及色素的水溶液（甲基橙、紅墨水、藍墨水），如最大體積為100ul，則將加樣器吸取體積調(diào)到110-120ul后，套上吸頭吸取上述有色液體。如吸頭質(zhì)量好，有色液體不應出現(xiàn)在濾芯之上，否則說明濾芯不嚴。nPCR抑制物抑制物：n從新購的離心管中，抽取6-10支，采用已知的高、中、低3 個濃度的H