細(xì)胞化學(xué)染色

1、整理ppt細(xì)胞化學(xué)染色細(xì)胞化學(xué)染色滄州醫(yī)專醫(yī)學(xué)技術(shù)系滄州醫(yī)專醫(yī)學(xué)技術(shù)系 侯振江侯振江整理ppt 細(xì)胞化學(xué)染色細(xì)胞化學(xué)染色，是一種以，是一種以形態(tài)形態(tài)為基礎(chǔ)，結(jié)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用合運(yùn)用化學(xué)化學(xué)或或生物化學(xué)生物化學(xué)技術(shù)對(duì)血細(xì)胞內(nèi)各技術(shù)對(duì)血細(xì)胞內(nèi)各種化學(xué)成分作種化學(xué)成分作定位定位、定性定性及及半定量半定量分析的分析的方法。方法。 用于研究用于研究血細(xì)胞生理血細(xì)胞生理、病理病理和化學(xué)結(jié)構(gòu)；和化學(xué)結(jié)構(gòu)； 臨床上為某些血液病的診斷、鑒別診斷、臨床上為某些血液病的診斷、鑒別診斷、療效觀察、預(yù)后監(jiān)測和發(fā)病機(jī)制的探討，療效觀察、預(yù)后監(jiān)測和發(fā)病機(jī)制的探討，提供重要依據(jù)。提供重要依據(jù)。整理ppt 血細(xì)胞化學(xué)染色的基本

2、要求是在血細(xì)胞化學(xué)染色的基本要求是在原位原位顯示細(xì)胞成分和結(jié)構(gòu)，反應(yīng)產(chǎn)物應(yīng)是顯示細(xì)胞成分和結(jié)構(gòu)，反應(yīng)產(chǎn)物應(yīng)是有色沉淀物有色沉淀物，具有一定的，具有一定的穩(wěn)定穩(wěn)定性。性。 血細(xì)胞化學(xué)染色可顯示血細(xì)胞化學(xué)染色可顯示糖原糖原、脂類脂類、酶酶、蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)等。等。整理ppt （一）（一）固定固定 固定有固定有物理法物理法與與化學(xué)法化學(xué)法， 物理法物理法為干燥和火焰固定，為干燥和火焰固定， 化學(xué)法化學(xué)法最常用的是甲醛、乙醇、最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。丙酮和醋酸等。血細(xì)胞化學(xué)染色流程血細(xì)胞化學(xué)染色流程整理ppt（二）（二）顯示顯示 1、偶氮偶聯(lián)法偶氮偶聯(lián)法：利用人工合成的酶底物，：利用人工合成的

3、酶底物，在酶作用下，產(chǎn)生分解產(chǎn)物，再與重氮鹽在酶作用下，產(chǎn)生分解產(chǎn)物，再與重氮鹽結(jié)合引起偶氮偶聯(lián)，使其形成不溶性的偶結(jié)合引起偶氮偶聯(lián)，使其形成不溶性的偶氮色素，以此證明酶的存在。氮色素，以此證明酶的存在。 2、聯(lián)苯胺法聯(lián)苯胺法：粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中的過氧：粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中的過氧化物酶作用于過氧化氫，釋放新生態(tài)氧，化物酶作用于過氧化氫，釋放新生態(tài)氧，使無色的聯(lián)苯胺形成藍(lán)色沉淀。使無色的聯(lián)苯胺形成藍(lán)色沉淀。整理ppt 3 3、普魯士藍(lán)法普魯士藍(lán)法：細(xì)胞內(nèi)、外鐵與酸性亞鐵：細(xì)胞內(nèi)、外鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用，形成藍(lán)色亞鐵氰化鐵沉淀。氰化鉀作用，形成藍(lán)色亞鐵氰化鐵沉淀。 4 4、雪夫反應(yīng)雪夫反應(yīng)：過碘酸

4、氧化細(xì)胞內(nèi)糖類中乙：過碘酸氧化細(xì)胞內(nèi)糖類中乙二醇基形成乙醛基，醛基與雪夫試劑作用，二醇基形成乙醛基，醛基與雪夫試劑作用，使無色品紅形成紅色沉淀。使無色品紅形成紅色沉淀。 5 5、金屬沉著法金屬沉著法 其他尚有物理學(xué)方法，如脂溶性染料染色其他尚有物理學(xué)方法，如脂溶性染料染色（顯示脂質(zhì)）、熒光顯示、放射自顯影以（顯示脂質(zhì)）、熒光顯示、放射自顯影以及體外活體染色亦常用于臨床血液細(xì)胞學(xué)及體外活體染色亦常用于臨床血液細(xì)胞學(xué)診斷。診斷。整理ppt （三）（三）細(xì)胞化學(xué)定量細(xì)胞化學(xué)定量 粗略估量粗略估量，以染色反應(yīng)的強(qiáng)弱，受色的深淺，以染色反應(yīng)的強(qiáng)弱，受色的深淺，人為地區(qū)別為陰性和各種程度的陽性。人為地區(qū)別

5、為陰性和各種程度的陽性。 百分法百分法，只能反映細(xì)胞陽性率，不能反映受，只能反映細(xì)胞陽性率，不能反映受色強(qiáng)弱。色強(qiáng)弱。 積分法積分法，是常用的半定量法，將等級(jí)估量與，是常用的半定量法，將等級(jí)估量與百分率相結(jié)合它既反映了細(xì)胞陽性率的高低，百分率相結(jié)合它既反映了細(xì)胞陽性率的高低，又反映了細(xì)胞受色的強(qiáng)弱。又反映了細(xì)胞受色的強(qiáng)弱。整理ppt 下面介紹幾種常用的細(xì)胞化學(xué)染色方下面介紹幾種常用的細(xì)胞化學(xué)染色方法法 這些方法學(xué)在白血病的鑒別診斷上具這些方法學(xué)在白血病的鑒別診斷上具有重要意義。有重要意義。整理ppt一、過氧化物酶染色（一、過氧化物酶染色（POX） （一）（一）四甲基聯(lián)苯胺法四甲基聯(lián)苯胺法 【原

6、理原理】 粒細(xì)胞粒細(xì)胞和和單核細(xì)胞單核細(xì)胞的胞漿內(nèi)的的胞漿內(nèi)的髓髓過氧化物酶過氧化物酶（POX orMPO）分解）分解過氧過氧化氫化氫，釋放，釋放新生態(tài)氧新生態(tài)氧，使，使無色無色聯(lián)苯胺氧化聯(lián)苯胺氧化成成藍(lán)色藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者進(jìn)一步變成聯(lián)苯胺，后者進(jìn)一步變成棕色棕色化合化合物沉著于物沉著于細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。內(nèi)。整理ppt【試劑試劑】 1%TMB 亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液 1%過氧化氫溶液過氧化氫溶液 稀過氧化氫溶液稀過氧化氫溶液 瑞氏染色液瑞氏染色液整理ppt 【操作操作】 1. 取取0.1%TMB乙醇溶液乙醇溶液lml，加亞硝基鐵氰加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液化鈉飽和溶液10ml，

7、溶液呈淡溶液呈淡棕黃色棕黃色。 2. 在新鮮干燥的血片上，加混合溶液在新鮮干燥的血片上，加混合溶液0.5ml, 放置放置lmin后，再加稀過氧化氫溶液后，再加稀過氧化氫溶液0.7ml，染色染色6min 。 3. 瑞氏染液復(fù)染瑞氏染液復(fù)染1520min 。 4. 油鏡鏡檢。油鏡鏡檢。整理ppt 【結(jié)果結(jié)果】 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒藍(lán)黑色顆粒者為陽性。者為陽性。（）（） 無顆粒沉著；無顆粒沉著；（） 顆粒細(xì)小顆粒細(xì)小 ，分布稀疏；，分布稀疏；（+） 顆粒較粗，局灶分布；顆粒較粗，局灶分布； （+） 顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì)顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì) 1/22/3；（+） 顆粒粗大，呈團(tuán)塊

8、分布；顆粒粗大，呈團(tuán)塊分布；（+） 全部胞質(zhì)均部滿顆粒，可覆蓋胞核。全部胞質(zhì)均部滿顆粒，可覆蓋胞核。整理ppt 【臨床意義臨床意義】 （1）粒系粒系： POX主要分布在主要分布在粒細(xì)胞粒細(xì)胞和和單核細(xì)胞單核細(xì)胞內(nèi)，隨內(nèi)，隨著粒細(xì)胞著粒細(xì)胞成熟成熟的程度而逐漸增強(qiáng)，中性分的程度而逐漸增強(qiáng)，中性分葉核粒細(xì)胞為葉核粒細(xì)胞為強(qiáng)強(qiáng)陽性陽性。 嗜酸嗜酸性粒細(xì)胞陽性程度性粒細(xì)胞陽性程度最強(qiáng)最強(qiáng)，其陽性顆粒，其陽性顆粒比中性粒細(xì)胞粗大，有折光。比中性粒細(xì)胞粗大，有折光。 堿性堿性粒細(xì)胞為粒細(xì)胞為陰性陰性。整理ppt（2）單核細(xì)胞單核細(xì)胞： 原始單原始單核細(xì)胞為核細(xì)胞為陰性陰性反應(yīng)，反應(yīng)， 幼稚單幼稚單核細(xì)胞和

9、核細(xì)胞和成熟單成熟單核細(xì)胞呈核細(xì)胞呈弱陽性弱陽性反應(yīng)，顆粒細(xì)小，彌散分布。反應(yīng)，顆粒細(xì)小，彌散分布。整理ppt（3）其他細(xì)胞其他細(xì)胞淋巴淋巴細(xì)胞、細(xì)胞、漿漿細(xì)胞、細(xì)胞、幼紅幼紅細(xì)胞、細(xì)胞、組織組織細(xì)細(xì) 胞、胞、巨核巨核細(xì)胞均呈細(xì)胞均呈陰性陰性反應(yīng)。反應(yīng)。（4）血小板過氧化物酶血小板過氧化物酶主要定位于主要定位于幼稚型幼稚型巨核細(xì)胞的核膜上，可巨核細(xì)胞的核膜上，可作為原巨核細(xì)胞的一種標(biāo)志物，有助于作為原巨核細(xì)胞的一種標(biāo)志物，有助于FAB M7的識(shí)別。的識(shí)別。整理ppt （5）過氧化物酶染色過氧化物酶染色 主要用于主要用于鑒別急性白血病類型鑒別急性白血病類型， 急性髓細(xì)胞白血病多呈急性髓細(xì)胞白血病

10、多呈陽性陽性反應(yīng)，以反應(yīng)，以M3和和M2型反應(yīng)最型反應(yīng)最強(qiáng)強(qiáng)，MI和和M5型反應(yīng)較型反應(yīng)較弱弱， 故有助于區(qū)別故有助于區(qū)別M3和和M5型。型。 急性淋巴細(xì)胞白血病急性淋巴細(xì)胞白血病呈呈POX陰性陰性反應(yīng)，故反應(yīng)，故為為急性髓細(xì)胞急性髓細(xì)胞和和淋巴細(xì)胞白血病鑒別淋巴細(xì)胞白血病鑒別的重的重要指標(biāo)。要指標(biāo)。整理pptAML-M1整理ppt整理pptM1 - POX(+)整理ppt整理ppt二、蘇丹黑二、蘇丹黑B染色染色【原理原理】 蘇丹黑蘇丹黑B (sudan black B , SB )是一種能是一種能溶解于脂肪溶解于脂肪中的中的色素色素染料，可使細(xì)胞內(nèi)的染料，可使細(xì)胞內(nèi)的中性脂肪中性脂肪、磷脂磷

11、脂和和類固醇類固醇著色，即使細(xì)胞著色，即使細(xì)胞內(nèi)微細(xì)結(jié)構(gòu)的脂類物質(zhì)也能顯示出來。內(nèi)微細(xì)結(jié)構(gòu)的脂類物質(zhì)也能顯示出來。整理ppt 【試劑試劑】 1. 10%甲醛液。甲醛液。 2. 蘇丹黑蘇丹黑B乙醇溶液乙醇溶液整理ppt 【操作操作】 1干燥血片或骨髓片在甲醛蒸氣中固定。干燥血片或骨髓片在甲醛蒸氣中固定。 2自來水沖洗。自來水沖洗。 3放人染色液中，放人染色液中，37 染色染色3060min。 4用用70%乙醇脫色乙醇脫色12min，水洗水洗lmin。. 5瑞氏染液復(fù)染瑞氏染液復(fù)染2030min。整理ppt 【結(jié)果結(jié)果】 脂類呈黑色或脂類呈黑色或棕黑色棕黑色顆粒，定位于細(xì)胞漿中顆粒，定位于細(xì)胞漿中

12、（+） 顆粒很小，細(xì)小、稀疏，或胞質(zhì)局部面積的顆粒很小，細(xì)小、稀疏，或胞質(zhì)局部面積的1/4有致密的顆粒。有致密的顆粒。（+）顆粒較少，或胞質(zhì)面積的）顆粒較少，或胞質(zhì)面積的1/2出現(xiàn)黑色顆粒。出現(xiàn)黑色顆粒。（+）顆粒較密，或胞質(zhì)面積的）顆粒較密，或胞質(zhì)面積的3/4出現(xiàn)黑色顆粒。出現(xiàn)黑色顆粒。（+） 顆粒極密，顆粒間顆粒極密，顆粒間無間隙無間隙。整理ppt 【臨床意義臨床意義】 1. 粒細(xì)胞系粒細(xì)胞系 早幼粒早幼粒及以下階段隨著細(xì)胞成熟，及以下階段隨著細(xì)胞成熟，陽性顆粒陽性顆粒逐漸增加逐漸增加。 早期原粒早期原粒細(xì)胞一般為細(xì)胞一般為陰性陰性，少數(shù)細(xì)小點(diǎn)狀顆，少數(shù)細(xì)小點(diǎn)狀顆粒代表線粒體被染色粒代表線

13、粒體被染色 晚期原粒晚期原粒細(xì)胞可出現(xiàn)細(xì)胞可出現(xiàn)陽性顆粒陽性顆粒，其顆粒限于，其顆粒限于胞漿的某一區(qū)域。胞漿的某一區(qū)域。整理ppt2. 單核細(xì)胞系單核細(xì)胞系陽性，陽性，顆粒細(xì)小，分布彌散，形狀不規(guī)則。顆粒細(xì)小，分布彌散，形狀不規(guī)則。原單核原單核細(xì)胞細(xì)胞為陰性為陰性。3紅細(xì)胞系紅細(xì)胞系、淋巴細(xì)胞系淋巴細(xì)胞系均呈均呈陰性陰性反應(yīng)反應(yīng)4尼曼一匹克細(xì)胞尼曼一匹克細(xì)胞和和戈謝細(xì)胞戈謝細(xì)胞均為均為陽性陽性反應(yīng)。反應(yīng)。整理ppt 5蘇丹黑蘇丹黑B和過氧化物酶染色臨床意義相和過氧化物酶染色臨床意義相似，主要用于似，主要用于急性白血病類型的鑒別急性白血病類型的鑒別。 蘇丹黑蘇丹黑B染色較過氧化物酶染色更染色較過

14、氧化物酶染色更敏感敏感，但，但特異性不如過氧化物酶染色（極少數(shù)急性特異性不如過氧化物酶染色（極少數(shù)急性淋巴細(xì)胞白血病可為陽性）。淋巴細(xì)胞白血病可為陽性）。整理pptM1-SBB(+)整理pptM2-SBB(+)整理ppt三、過碘酸一雪夫（三、過碘酸一雪夫（PAS)染色染色 【原理原理】 胞漿內(nèi)存在胞漿內(nèi)存在糖原糖原或或多糖類多糖類物質(zhì)（如粘多糖、物質(zhì)（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基乙二醇基（CHOH-CHOH）經(jīng)過經(jīng)過碘酸碘酸（periodic acid）氧化，轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸D(zhuǎn)變?yōu)槎┗┗–HO-CHO），），與與雪夫雪夫(Schiff )試劑中

15、的試劑中的無色品紅無色品紅結(jié)合，形結(jié)合，形成成紫紅色染料紫紅色染料而沉積于而沉積于胞漿胞漿中。該反應(yīng)稱中。該反應(yīng)稱為過碘酸一雪夫?yàn)檫^碘酸一雪夫(PAS)陽性反應(yīng)。陽性反應(yīng)。整理ppt 【結(jié)果結(jié)果】 （1）粒細(xì)胞系：）粒細(xì)胞系： 原粒原粒細(xì)胞多呈細(xì)胞多呈陰性陰性反應(yīng)，也可反應(yīng)，也可弱陽性弱陽性。 自自早幼粒早幼粒細(xì)胞以后隨著細(xì)胞的成熟程度，細(xì)胞以后隨著細(xì)胞的成熟程度，陽性反應(yīng)陽性反應(yīng)逐漸增強(qiáng)逐漸增強(qiáng)。 嗜酸粒嗜酸粒細(xì)胞顆粒本身不著色，但顆粒間的細(xì)胞顆粒本身不著色，但顆粒間的胞質(zhì)胞質(zhì)呈彌漫性呈彌漫性陽性陽性反應(yīng)；反應(yīng)； 嗜堿粒嗜堿粒細(xì)胞為細(xì)胞為陽性陽性反應(yīng)，顆粒紫紅色，大反應(yīng)，顆粒紫紅色，大小不一

16、。小不一。整理ppt 中性粒細(xì)胞糖原含量參考標(biāo)準(zhǔn)中性粒細(xì)胞糖原含量參考標(biāo)準(zhǔn)（-） 胞質(zhì)胞質(zhì)無顆粒無顆粒（+） 胞質(zhì)呈胞質(zhì)呈淡紅色淡紅色，無顆粒無顆粒（+） 胞質(zhì)呈胞質(zhì)呈紅色紅色，有，有少量少量顆粒顆粒（+） 胞質(zhì)呈胞質(zhì)呈暗紅色暗紅色 ，顆粒，顆粒較密較密（+）胞質(zhì)呈）胞質(zhì)呈紫紅色紫紅色，顆粒，顆粒極密極密整理ppt過碘酸過碘酸-Schiff反應(yīng)反應(yīng)(PAS)整理ppt（2）淋巴細(xì)胞系：）淋巴細(xì)胞系： 大多數(shù)淋大多數(shù)淋巴細(xì)胞呈巴細(xì)胞呈陰陰 性性反應(yīng)，反應(yīng)， 少數(shù)少數(shù)為（為（+）的）的陽性陽性反應(yīng)。反應(yīng)。 淋巴細(xì)胞糖原含量程度參考標(biāo)準(zhǔn)淋巴細(xì)胞糖原含量程度參考標(biāo)準(zhǔn) （-） 胞質(zhì)內(nèi)胞質(zhì)內(nèi)無顆粒無顆粒

17、（+） 胞質(zhì)內(nèi)胞質(zhì)內(nèi)有顆粒有顆粒 （+） 有有較粗較粗紅色顆粒紅色顆粒 （+） 有有粗大粗大紅色顆粒紅色顆粒 （+） 顆粒顆粒粗大粗大并有并有紅色塊狀紅色塊狀整理ppt （3）紅細(xì)胞系：）紅細(xì)胞系： 幼紅幼紅細(xì)胞和細(xì)胞和紅紅細(xì)胞呈細(xì)胞呈陰性陰性反應(yīng)反應(yīng) 紅細(xì)胞系列糖原含量程度參考標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞系列糖原含量程度參考標(biāo)準(zhǔn) （-） 胞質(zhì)無顆粒胞質(zhì)無顆粒 （+） 有少數(shù)紅色顆粒有少數(shù)紅色顆粒 （+） 有較粗紅色顆?；驈浡t色有較粗紅色顆?；驈浡t色 （+） 有粗大紅色顆?；蛏罴t色有粗大紅色顆?；蛏罴t色 （+）有粗大紅色塊狀或紫紅色）有粗大紅色塊狀或紫紅色整理ppt （4）巨核細(xì)胞：）巨核細(xì)胞： 巨核巨核細(xì)

18、胞和細(xì)胞和血小板血小板染色反應(yīng)均為染色反應(yīng)均為陽性陽性 巨核細(xì)胞糖原含量程度參考標(biāo)準(zhǔn)巨核細(xì)胞糖原含量程度參考標(biāo)準(zhǔn) （-） 胞質(zhì)無顆粒胞質(zhì)無顆粒 （+） 少量糖原包涵體少量糖原包涵體 （+） 中等量糖原包涵體，定位于核膜中等量糖原包涵體，定位于核膜 出或分散胞質(zhì)中，占胞質(zhì)出或分散胞質(zhì)中，占胞質(zhì)1/3 （+）大量糖原包涵體分散于胞質(zhì)的）大量糖原包涵體分散于胞質(zhì)的1/2 （+）糖原包涵體充滿整個(gè)胞質(zhì)）糖原包涵體充滿整個(gè)胞質(zhì) 整理pptPAS 巨核細(xì)胞巨核細(xì)胞巨核細(xì)胞包涵體整理ppt （5）單核細(xì)胞單核細(xì)胞呈呈陰性陰性或或陽性陽性，顆粒細(xì)小，往，顆粒細(xì)小，往往位于胞質(zhì)往位于胞質(zhì)邊緣邊緣； 漿細(xì)胞漿細(xì)胞

19、大多呈大多呈陰性陰性，少數(shù)為紅色顆粒陽性；，少數(shù)為紅色顆粒陽性； 組織細(xì)胞組織細(xì)胞為為陰性陰性反應(yīng)；反應(yīng)； 巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞可呈可呈陽性陽性，為紅色顆粒反應(yīng)。，為紅色顆粒反應(yīng)。整理ppt 【臨床意義臨床意義】（1）M6與巨幼貧的鑒別與巨幼貧的鑒別 M6的幼紅細(xì)胞的幼紅細(xì)胞PAS可呈可呈強(qiáng)陽性強(qiáng)陽性，積分明，積分明顯增高，顯增高，巨貧巨貧、再障、溶貧時(shí)、再障、溶貧時(shí)PAS反應(yīng)為反應(yīng)為陰陰性性。（2）急性白血病的類型鑒別）急性白血病的類型鑒別 ALL，PAS呈大塊狀陽性，也可是陰性，呈大塊狀陽性，也可是陰性，AML為為陰性陰性，急性單核細(xì)胞白血病時(shí)，急性單核細(xì)胞白血病時(shí)原單原單核細(xì)胞及核細(xì)胞及幼單

20、幼單核細(xì)胞核細(xì)胞PAS陽性陽性，積分增高，積分增高，陽性顆粒小而多，呈彌散分布。陽性顆粒小而多，呈彌散分布。整理pptALL-L1整理pptL1 PAS(+)整理pptAML-M5整理pptM5 PAS(+)整理pptAML-M6整理pptAML-M6 PAS(+)整理pptAML-M7整理pptM7 PAS(+)整理ppt（3）巨核細(xì)胞和）巨核細(xì)胞和Sternberg細(xì)胞鑒別細(xì)胞鑒別 巨核巨核細(xì)胞細(xì)胞PAS強(qiáng)陽性強(qiáng)陽性，Sternberg細(xì)胞為陰細(xì)胞為陰性或弱陽性。性或弱陽性。（4）戈謝氏細(xì)胞強(qiáng)陽性戈謝氏細(xì)胞強(qiáng)陽性，尼曼尼曼-皮克皮克細(xì)胞細(xì)胞陰陰性或弱陽性性或弱陽性。（5）淋巴肉瘤、霍奇金病

21、等，淋巴細(xì)胞的糖）淋巴肉瘤、霍奇金病等，淋巴細(xì)胞的糖原積分增高；一般的病毒感染，糖原積分原積分增高；一般的病毒感染，糖原積分在正常范圍內(nèi)。在正常范圍內(nèi)。整理ppt四、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色四、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色 偶氮偶聯(lián)法（偶氮偶聯(lián)法（Kaplow法）法） 【原理原理】中性粒細(xì)胞胞漿中的中性粒細(xì)胞胞漿中的堿性磷酸酶堿性磷酸酶在在pH 9.29.8緩沖液中，能水解磷酸萘酚緩沖液中，能水解磷酸萘酚鈉，并釋放出鈉，并釋放出磷酸磷酸與與萘酚萘酚。再以。再以重氮鹽重氮鹽與與萘酚萘酚偶聯(lián)成不溶性有色偶聯(lián)成不溶性有色偶氮染料偶氮染料沉淀于沉淀于胞胞漿漿中。中。整理ppt 【結(jié)果結(jié)果】 堅(jiān)牢藍(lán)堅(jiān)牢藍(lán)R

22、R陽性為陽性為紫黑色紫黑色顆粒，顆粒， 堅(jiān)牢紫醬堅(jiān)牢紫醬GBC陽性為陽性為棕紅色棕紅色沉淀。沉淀。 “一一”陰性反應(yīng)，胞漿中陰性反應(yīng)，胞漿中無無陽性染色顆粒。陽性染色顆粒。 “”胞漿中含有胞漿中含有少量少量顆?；虺蕪浬\紅色（或顆粒或呈彌散淺紅色（或彌散紫色）。彌散紫色）。 “2”胞漿中含有胞漿中含有中等量中等量顆?；驈浬⑹苌?。顆?；驈浬⑹苌?。 “3”胞漿中有胞漿中有豐富的豐富的顆?；驈浬⑸钌祟w?；驈浬⑸钌饲逦?。清晰。 “4”有有極豐富極豐富的粗大顆粒，充滿胞漿，或彌的粗大顆粒，充滿胞漿，或彌散深色，胞核不清晰。散深色，胞核不清晰。整理ppt中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶

23、(NAP)偶氮偶聯(lián)法整理ppt NAP積分法積分法 計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞，按其反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)，各個(gè)成熟中性粒細(xì)胞，按其反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)，各級(jí)百分率與其級(jí)數(shù)乘積的總和，即為積分。級(jí)百分率與其級(jí)數(shù)乘積的總和，即為積分。 例如：例如： NAP反應(yīng)結(jié)果（反應(yīng)結(jié)果（%） （-） （+） （+） （+） （+） 20 40 20 15 5 積分積分=（020）+（220）+（315）+（45）=145 參考值：正常人血細(xì)胞堿性磷酸酶除成熟中性粒細(xì)胞（桿參考值：正常人血細(xì)胞堿性磷酸酶除成熟中性粒細(xì)胞（桿狀核及分葉核）可見陽性外，其他血細(xì)胞均為陰性。狀核及分葉核）可見陽性外，其他血細(xì)胞均為陰性。 中性粒細(xì)

24、胞中性粒細(xì)胞NAP活性積分值一般為活性積分值一般為1050分，但有時(shí)可高分，但有時(shí)可高達(dá)達(dá)162分分。 整理ppt 【臨床意義臨床意義】 （1）生理變化：）生理變化： 新生兒新生兒NAP增高，成人較兒童減低，老增高，成人較兒童減低，老人更低；人更低；激烈運(yùn)動(dòng)激烈運(yùn)動(dòng)增高；增高； 月經(jīng)期月經(jīng)期經(jīng)前增高，行經(jīng)后降低，經(jīng)后期經(jīng)前增高，行經(jīng)后降低，經(jīng)后期恢復(fù)正常；恢復(fù)正常； 妊娠期妊娠期2-3月輕度增高，以后逐漸增高，月輕度增高，以后逐漸增高，分娩分娩時(shí)達(dá)到高峰，產(chǎn)后恢復(fù)正常。時(shí)達(dá)到高峰，產(chǎn)后恢復(fù)正常。整理ppt（2）、病理變化）、病理變化 增高增高：嚴(yán)重：嚴(yán)重化膿性感染化膿性感染、類白血病反應(yīng)、類白

25、血病反應(yīng)、AA、CML加速期、加速期、ALL、CLL、惡性淋巴、惡性淋巴瘤、癌轉(zhuǎn)移、瘤、癌轉(zhuǎn)移、MM、真紅、骨髓纖維化等。、真紅、骨髓纖維化等。 減低減低：PNH、CML、惡性組織細(xì)胞病、惡性組織細(xì)胞病、MDS。整理ppt （3）疾病鑒別診斷）疾病鑒別診斷 慢粒與類白的鑒別：慢粒與類白的鑒別：CML減低減低，類白增高類白增高。 急性白血病的鑒別：急性白血病的鑒別：AML減低減低，ALL增高增高。 PNH與與AA鑒別：鑒別：PNH減低減低，AA增高增高。 病原微生物的鑒別：病原微生物的鑒別：病毒感染減低病毒感染減低，細(xì)菌感細(xì)菌感染增高染增高。整理ppt整理pptNAP (+)CML-NAP(-)

26、整理ppt五、骨髓鐵染色五、骨髓鐵染色 【原理】【原理】正常人骨髓中的貯存鐵主要存在于正常人骨髓中的貯存鐵主要存在于骨髓骨髓小粒小粒和和幼紅細(xì)胞幼紅細(xì)胞中，骨髓中的鐵在中，骨髓中的鐵在酸性酸性環(huán)境下與環(huán)境下與亞亞鐵氰化鉀鐵氰化鉀作用，形成作用，形成普魯士藍(lán)普魯士藍(lán)反應(yīng)，形成反應(yīng)，形成藍(lán)色藍(lán)色的的亞亞鐵氰化鐵鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位，沉淀，定位于含鐵的部位，從而反映骨髓從而反映骨髓中鐵的儲(chǔ)存量?；瘜W(xué)反應(yīng)過程為：中鐵的儲(chǔ)存量?；瘜W(xué)反應(yīng)過程為： 4 Fe3+ 3 K4Fe（CN）6 Fe4Fe（CN）6312 K+（含鐵物質(zhì)）含鐵物質(zhì)） （亞鐵氰化鉀）（亞鐵氰化鉀） （亞鐵氰化鐵）（亞鐵氰化鐵

27、） 整理ppt【結(jié)果】【結(jié)果】 （1）細(xì)胞外鐵的觀察細(xì)胞外鐵的觀察 ： 細(xì)胞外鐵細(xì)胞外鐵呈呈藍(lán)色藍(lán)色的顆粒狀、小株?duì)罨驁F(tuán)塊狀。的顆粒狀、小株?duì)罨驁F(tuán)塊狀。 以油鏡觀察定級(jí)標(biāo)準(zhǔn)以油鏡觀察定級(jí)標(biāo)準(zhǔn) （-） 無鐵?？梢姟o鐵?？梢姟?（+） 少數(shù)鐵?；蜩F小珠。少數(shù)鐵?；蜩F小珠。 （+） 較多鐵粒和鐵小珠。較多鐵粒和鐵小珠。 （+） 很多鐵粒、鐵小珠和少數(shù)小塊。很多鐵粒、鐵小珠和少數(shù)小塊。 （+）極多鐵粒、鐵小珠并有很多小塊，密）極多鐵粒、鐵小珠并有很多小塊，密集成堆。集成堆。 正常范圍：正常范圍：+，“+”占占2/3，“+”占占1/3。整理ppt細(xì)胞外鐵細(xì)胞外鐵整理ppt（2）細(xì)胞內(nèi)鐵觀察：）細(xì)胞內(nèi)鐵觀察： 細(xì)胞內(nèi)鐵細(xì)胞內(nèi)鐵指指有核紅細(xì)胞有核紅細(xì)胞胞質(zhì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)色藍(lán)色顆顆粒，以油鏡計(jì)粒，以油鏡計(jì)100個(gè)中、晚幼紅細(xì)胞，記錄個(gè)中、晚幼紅細(xì)胞，記錄胞質(zhì)中含有藍(lán)色小顆粒（即胞質(zhì)中含有藍(lán)色小顆粒（即鐵粒紅細(xì)胞鐵粒紅細(xì)胞）的比值。并根據(jù)細(xì)胞鐵顆粒的數(shù)目、大小、的比值。并根據(jù)細(xì)胞鐵顆粒的數(shù)目、大小、染色深淺和顆粒分布情況，將鐵粒幼紅細(xì)染色深淺和顆粒分布情況，將鐵粒幼紅細(xì)胞分為如下四型：胞分為如下四型：整理ppt 型：僅含型：僅含1-2個(gè)鐵顆粒。個(gè)鐵顆粒。 型：含型：含3-4個(gè)鐵顆粒。個(gè)鐵顆粒。 型：含型：含