生物化學合工大蛋白質化學2

1、會計學1生物化學合工大蛋白質化學生物化學合工大蛋白質化學2肽鏈的主鏈可看成是由被肽鏈的主鏈可看成是由被Ca a隔開的許多平面組成的。隔開的許多平面組成的。N端C端事實上，一個天然蛋白質多態(tài)鏈在一定條件下只有一種或很事實上，一個天然蛋白質多態(tài)鏈在一定條件下只有一種或很少幾種構象，而且相當穩(wěn)定。少幾種構象，而且相當穩(wěn)定。離子鍵離子鍵氫鍵氫鍵范德華力范德華力疏水相互作用力疏水相互作用力主要的化學鍵主要的化學鍵： 氫鍵氫鍵 1. a a-螺旋螺旋(a a-helix) 2. b b-折疊折疊 (b b-pleated sheet) 3. b b-轉角轉角 (b b-turn) 4. 無規(guī)卷曲無規(guī)卷曲

2、(nonregular coil)（二）二級結構單元的種類1 1）絕大多數(shù)天然蛋白質絕大多數(shù)天然蛋白質都是都是右手螺旋。右手螺旋。2）每隔）每隔3.6個氨基酸殘基個氨基酸殘基螺旋上升一圈；每圈間螺旋上升一圈；每圈間距距0.54nm，即每個氨基，即每個氨基酸殘基沿螺旋中心軸上酸殘基沿螺旋中心軸上升升0.15nm，旋轉，旋轉100。-螺旋結構的主要特點：螺旋結構的主要特點：1.-1.-螺旋螺旋(-helix)(-helix)3 3）每個氨基酸殘基的）每個氨基酸殘基的N-HN-H都與前面（都與前面（C C端）端）第四個殘基第四個殘基C=OC=O形成形成氫氫鍵鍵。 4)4)螺旋體中所有氨基酸殘螺旋體中

3、所有氨基酸殘基側鏈都伸向外側；鏈中基側鏈都伸向外側；鏈中的全部的全部C=OC=O和和N-HN-H幾乎都平幾乎都平行于螺旋軸行于螺旋軸, ,氫鍵幾乎平行氫鍵幾乎平行于中心軸于中心軸; ; * * R為為Gly時，由于時，由于Ca上有上有2個氫，使個氫，使Ca-C、Ca-N的轉動的轉動的自由度很大，即剛性很小，所以使螺旋的穩(wěn)定性大的自由度很大，即剛性很小，所以使螺旋的穩(wěn)定性大大降低。大降低。R基大基大(如如Ile)也不易形成也不易形成-螺旋。螺旋。* * - -螺旋遇到螺旋遇到Pro就會被中斷而拐彎，因為脯氨酸是亞就會被中斷而拐彎，因為脯氨酸是亞氨基酸且有剛性的環(huán)狀結構。氨基酸且有剛性的環(huán)狀結構。

4、 * * 帶相同電荷的氨基酸殘基連續(xù)出現(xiàn)在肽鏈上時，螺旋帶相同電荷的氨基酸殘基連續(xù)出現(xiàn)在肽鏈上時，螺旋的穩(wěn)定性降低。的穩(wěn)定性降低。側鏈在側鏈在a a-螺旋結構的影響：螺旋結構的影響：* * R R基較小基較小, ,且不帶電荷的氨基酸利于且不帶電荷的氨基酸利于-螺旋的形成螺旋的形成, ,如如多聚丙氨酸在多聚丙氨酸在pH7pH7的水溶液中自發(fā)卷曲成的水溶液中自發(fā)卷曲成-螺旋。螺旋。2.-2.-折疊折疊(-pleated sheet) -折疊折疊是由兩條或多條伸展的多肽鏈靠氫鍵聯(lián)結是由兩條或多條伸展的多肽鏈靠氫鍵聯(lián)結而成的鋸齒狀片狀結構。而成的鋸齒狀片狀結構。在在b b- -折疊中，折疊中，a a-

5、 -碳原子總是處于折疊的角上，氨基碳原子總是處于折疊的角上，氨基酸的酸的R R基團處于折疊的棱角上并與棱角垂直，兩個氨基基團處于折疊的棱角上并與棱角垂直，兩個氨基酸之間的軸心距為酸之間的軸心距為0.350.35nm nm 。0.7nm b b-折疊結構的氫鍵主要是由兩條肽鏈之間形成的；也可折疊結構的氫鍵主要是由兩條肽鏈之間形成的；也可以在同一肽鏈的不同部分之間形成。幾乎所有肽鍵都參與以在同一肽鏈的不同部分之間形成。幾乎所有肽鍵都參與鏈內(nèi)氫鍵的交聯(lián)，氫鍵與鏈的長軸接近垂直。鏈內(nèi)氫鍵的交聯(lián)，氫鍵與鏈的長軸接近垂直。b b-折疊有兩種類型。一種為平行式，即所有肽鏈的折疊有兩種類型。一種為平行式，即所

6、有肽鏈的N-端都在同一邊。另一種為反平行式，即相鄰兩條肽端都在同一邊。另一種為反平行式，即相鄰兩條肽鏈的方向相反。后者更為穩(wěn)定。鏈的方向相反。后者更為穩(wěn)定。3.-轉角（轉角（-turn） 也稱也稱-回折，存在于球狀蛋白中。其特點是肽鏈回回折，存在于球狀蛋白中。其特點是肽鏈回折折180180，使得氨基酸殘基的，使得氨基酸殘基的C=OC=O與第四個殘基的與第四個殘基的N-HN-H形成形成氫鍵。第二個氨基酸通常是氫鍵。第二個氨基酸通常是propro。 -轉角都在蛋白轉角都在蛋白質分子的表面，多數(shù)質分子的表面，多數(shù)為親水氨基酸組成。為親水氨基酸組成。4.無規(guī)則卷曲（無規(guī)則卷曲（non-regular

7、coil） 又稱自由卷曲，是指沒有一定規(guī)律的松散肽又稱自由卷曲，是指沒有一定規(guī)律的松散肽鏈結構，但是其結構是明確而穩(wěn)定的，常常構成鏈結構，但是其結構是明確而穩(wěn)定的，常常構成酶的功能部位。酶的功能部位。 無規(guī)卷曲常出現(xiàn)在無規(guī)卷曲常出現(xiàn)在a-a-螺旋與螺旋與a-a-螺旋、螺旋、a-a-螺旋與螺旋與- -折疊、折疊、 - -折疊與折疊與- -折疊之間。折疊之間。它是形成蛋白質三級結構所必需的。它是形成蛋白質三級結構所必需的。（二）超二級結構的基本形式1 2 3 4 5 指多肽鏈在二級結構或超二級結構的基礎上指多肽鏈在二級結構或超二級結構的基礎上形成三級結構的局部折疊區(qū)，它是相對獨立的緊形成三級結構的

8、局部折疊區(qū)，它是相對獨立的緊密球狀實體，稱為結構域（密球狀實體，稱為結構域（domain）。）。 酵母己糖激酶的三級結構結構域之間有一段柔性的肽鏈結構域之間有一段柔性的肽鏈相連相連鉸鏈區(qū)，使結構域之間鉸鏈區(qū)，使結構域之間可以發(fā)生相對移動；結構域承可以發(fā)生相對移動；結構域承擔一定的生物學功能，幾個結擔一定的生物學功能，幾個結構域協(xié)同作用可體現(xiàn)出蛋白質構域協(xié)同作用可體現(xiàn)出蛋白質的總體功能；結構域間的裂縫的總體功能；結構域間的裂縫常為酶的活性部位，也是反應常為酶的活性部位，也是反應物的出入口。物的出入口。三、蛋白質的結構域三、蛋白質的結構域+結構域結構域乳酸脫氫酶結構域乳酸脫氫酶結構域1丙酮酸激酶結

9、構域丙酮酸激酶結構域43-P-甘油醛脫氫酶結構域甘油醛脫氫酶結構域2木瓜蛋白酶結構域木瓜蛋白酶結構域1木瓜蛋白酶結構域木瓜蛋白酶結構域2無規(guī)則卷曲無規(guī)則卷曲+ -螺旋結構域螺旋結構域無規(guī)則卷曲無規(guī)則卷曲+-回折結構域回折結構域 三級結構（三級結構（tertiary structure）：指的是：指的是多肽鏈在二級結構、超二級結構和結構域的多肽鏈在二級結構、超二級結構和結構域的基礎上，主鏈構象和側鏈構象相互作用，進基礎上，主鏈構象和側鏈構象相互作用，進一步盤曲折疊形成一步盤曲折疊形成球狀分子結構球狀分子結構。四、蛋白質的三級結構四、蛋白質的三級結構（一）三級結構的概念（一）三級結構的概念（二）球

10、狀蛋白的三級的結構特征（二）球狀蛋白的三級的結構特征含有多種二級結構單元。含有多種二級結構單元。分子表面往往有一個內(nèi)陷的空隙，它常常是蛋分子表面往往有一個內(nèi)陷的空隙，它常常是蛋白質的活性中心。白質的活性中心。 大多數(shù)非極性側鏈埋在分子內(nèi)部，形成大多數(shù)非極性側鏈埋在分子內(nèi)部，形成疏水核疏水核；而極性側鏈在分子表面，形成而極性側鏈在分子表面，形成親水面親水面。 蛋白質的三級結構具有明顯的折疊層次。蛋白質的三級結構具有明顯的折疊層次。 分子呈現(xiàn)球狀或橢圓狀。分子呈現(xiàn)球狀或橢圓狀。（三）維持三級結構的作用力（三）維持三級結構的作用力二硫鍵二硫鍵 共價鍵共價鍵 疏水作用疏水作用非共價鍵（次級鍵）非共價鍵

11、（次級鍵）氫鍵氫鍵 離子鍵離子鍵范德華力范德華力 四級結構（四級結構（quaternary quaternary structurestructure）：由兩條或兩：由兩條或兩條以上具有三級結構的多肽條以上具有三級結構的多肽鏈聚合而成、有特定三維結鏈聚合而成、有特定三維結構的蛋白質構象。每條多肽構的蛋白質構象。每條多肽鏈又稱為鏈又稱為亞基亞基(subunit)(subunit) 。五、蛋白質的四級結構五、蛋白質的四級結構例如，例如，血紅蛋血紅蛋白的四白的四級結構級結構（一）四級結構的概念（一）四級結構的概念（二）蛋白質四級結構的特點v 1 1）有多個亞基）有多個亞基v 2 2）穩(wěn)定性主要靠亞基

12、間的）穩(wěn)定性主要靠亞基間的疏水作用疏水作用維持維持v 3 3）亞基單獨存在時無生物活性或活性很小，）亞基單獨存在時無生物活性或活性很小， 只有通過亞基相互聚合成四級結構后，蛋只有通過亞基相互聚合成四級結構后，蛋 白質才具有完整的生物活性。白質才具有完整的生物活性。 v 4 4）亞基見具有）亞基見具有協(xié)同性協(xié)同性和和別構效應別構效應。 二級結構二級結構超二級結構超二級結構結構域結構域三級結構三級結構四級結構四級結構（一）肌紅蛋白與血紅蛋白的結構（一）肌紅蛋白與血紅蛋白的結構 肌紅蛋白肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線的氧解離曲線O2血紅素與氧結血紅素與氧結合后，鐵原子半徑合

13、后，鐵原子半徑變小，就能進入卟變小，就能進入卟啉環(huán)的小孔中，繼啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的而引起肽鏈位置的變動。變動。生理意義：波爾效應使血紅蛋白運輸生理意義：波爾效應使血紅蛋白運輸O2的效率提高。的效率提高。（三）蛋白質構象改變與疾?。ㄈ┑鞍踪|構象改變與疾病 蛋白質構象疾病蛋白質構象疾?。喝舻鞍踪|的折疊發(fā)生：若蛋白質的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一級結構不變，但蛋白質的構錯誤，盡管其一級結構不變，但蛋白質的構象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導致疾病發(fā)生。致疾病發(fā)生。蛋白質構象改變導致疾病的機理蛋白質構象改變導致疾病的機理：有些蛋：有些蛋白質錯誤折疊后相

14、互聚集，常形成抗蛋白水解白質錯誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質淀粉樣纖維沉淀的病理改變。為蛋白質淀粉樣纖維沉淀的病理改變。這類疾病包括這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。瘋牛病中的蛋白質構象改變瘋牛病中的蛋白質構象改變瘋牛病是由朊病毒蛋白瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。正常的正常的PrP富含富含-螺旋，稱為螺旋，稱為Pr

15、Pc。PrPc在某種未知蛋白質的作用下可轉變成全在某種未知蛋白質的作用下可轉變成全為為-折疊的折疊的PrPsc，從而致病。，從而致病。PrPc-螺旋螺旋PrPsc-折疊折疊正常正常瘋牛病瘋牛病蛋白質的等離子點等離子點（特征常數(shù)）：指在純水中（即沒有其它鹽類存在）蛋白質的正離子數(shù)等于負離子數(shù)的pH值。因蛋白質的等電點不是一成不變的，它隨溶劑性質、離子強變等因素而改變。二、蛋白質的膠體性質二、蛋白質的膠體性質 由于蛋白質分子量很大，在水溶液中形成由于蛋白質分子量很大，在水溶液中形成1-100nm的顆的顆粒，因而具有膠體溶液的特征（粒，因而具有膠體溶液的特征（布郎運動、丁道爾現(xiàn)象、不布郎運動、丁道爾

16、現(xiàn)象、不能透過半透膜）。能透過半透膜）。1. 1.蛋白質膠體穩(wěn)定的因素蛋白質膠體穩(wěn)定的因素可溶性蛋白質分子表面分布著大量極性氨基酸殘基，對水有很可溶性蛋白質分子表面分布著大量極性氨基酸殘基，對水有很高的親和性，通過水合作用在蛋白質顆粒表面形成高的親和性，通過水合作用在蛋白質顆粒表面形成水化層，水化層，其可其可防止分子互碰而聚集防止分子互碰而聚集 ；蛋白質在非等電點狀態(tài)時帶同種電荷，在蛋白質在非等電點狀態(tài)時帶同種電荷，在顆粒表面形成顆粒表面形成電荷層，電荷層，同性電荷互斥，使分子不能聚集。同性電荷互斥，使分子不能聚集。+帶正電荷的蛋白質帶正電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質在等電點的蛋

17、白質在等電點的蛋白質水化層水化層+帶正電荷的蛋白質帶正電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質不穩(wěn)定的蛋白質顆粒不穩(wěn)定的蛋白質顆粒酸酸堿堿酸酸堿堿酸酸堿堿脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用 蛋白質的聚沉蛋白質的聚沉蛋蛋白白質質膠膠體體溶溶液液沉沉淀淀作作用用示示意意圖圖 2.2.蛋白質的沉淀作用蛋白質的沉淀作用 如果加入適當?shù)脑噭┦沟鞍踪|分子處于等電點狀態(tài)或如果加入適當?shù)脑噭┦沟鞍踪|分子處于等電點狀態(tài)或失去水化層（失去水化層（消除相同電荷，除去水膜消除相同電荷，除去水膜），蛋白質膠體溶），蛋白質膠體溶液就不再穩(wěn)定并將產(chǎn)生沉淀。液就不再穩(wěn)定并將產(chǎn)生沉淀。 沉淀方法類別沉淀方法類

18、別: : 高濃度中性鹽（鹽析）高濃度中性鹽（鹽析） 等電點沉淀等電點沉淀 有機溶劑沉淀有機溶劑沉淀 重金屬鹽類沉淀重金屬鹽類沉淀 生物堿試劑和某些酸類沉淀生物堿試劑和某些酸類沉淀 加熱變性沉淀加熱變性沉淀* 蛋白質的凝固作用蛋白質的凝固作用(protein coagulation) 蛋白質變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固蛋白質變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。 （三）蛋白質的變性與復性（三）蛋白質的變性與復性蛋白質在某些物理和化學因素作用下，其蛋白質在某些物理和化學因素作用下，其特定的空間構象被破壞，也即有序的空間結構特

19、定的空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無序的空間結構，從而導致其理化性質改變成無序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生物活性的喪失。變和生物活性的喪失。1. 1.蛋白質變性的概念蛋白質變性的概念2. 2.變性的本質變性的本質 破壞非共價鍵，不改變蛋白質的一級結構。破壞非共價鍵，不改變蛋白質的一級結構。 應用舉例應用舉例臨床醫(yī)學上，變性因素常被應用來消毒及臨床醫(yī)學上，變性因素常被應用來消毒及滅菌。滅菌。此外此外, , 防止蛋白質變性也是有效保存蛋白質防止蛋白質變性也是有效保存蛋白質制劑（如疫苗等）的必要條件。制劑（如疫苗等）的必要條件。 可逆變性作用可逆變性作用 蛋白質復性蛋白質復性（尿素

20、、（尿素、-巰基乙醇）巰基乙醇）（去除尿素、去除尿素、-巰基乙醇）巰基乙醇）非折疊狀態(tài)，無活性非折疊狀態(tài)，無活性天然狀態(tài)，天然狀態(tài)，有催化活性有催化活性（四）蛋白質的分子大?。ㄋ模┑鞍踪|的分子大小蛋白質是分子量很大的生物分子，相對分子質量大于6000，最高可達40000000（煙草花葉病毒）。目前常用的方法包括：擴散系數(shù)、沉降超離心、凝擴散系數(shù)、沉降超離心、凝膠過濾、滲透壓、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。膠過濾、滲透壓、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。轉頭轉頭轉頭腔轉頭腔沉降樣品沉降樣品驅動馬達驅動馬達真空真空冷凍冷凍s = v2x v =沉降速度（沉降速度（dx/dt）=離心機轉子角速度（弧度離心機轉子角速度

21、（弧度/s） x =蛋白質界面中點與轉子中心的距離（蛋白質界面中點與轉子中心的距離（cm）一般程序：一般程序：1、從組織細胞中溶解放出蛋白質，并保持天然狀態(tài)，、從組織細胞中溶解放出蛋白質，并保持天然狀態(tài)，常用低溫冰凍、化學試劑及溶菌酶破壁、破膜，再用常用低溫冰凍、化學試劑及溶菌酶破壁、破膜，再用溶劑提取。溶劑提取。 2、分離所需要蛋白質與其他蛋白質、分離所需要蛋白質與其他蛋白質 a 等電點沉淀等電點沉淀 b 鹽析和有機溶劑分級分離鹽析和有機溶劑分級分離 純化：純化：a 離子交換層析離子交換層析 b 凝膠過濾層析凝膠過濾層析 c 親和層親和層 析析 d 電泳方法電泳方法 3、結晶提純、結晶提純

22、a 多次結晶，除雜蛋白和變性蛋白多次結晶，除雜蛋白和變性蛋白 b 結晶的最佳條件：略過飽和溶液結晶的最佳條件：略過飽和溶液 各步驟要求條件溫和，并加少量殺菌劑。各步驟要求條件溫和，并加少量殺菌劑。 防止蛋白質變性、蛋白質酶作用及微生物污染。防止蛋白質變性、蛋白質酶作用及微生物污染。（一）（一） 根據(jù)分子大小不同的分離方法根據(jù)分子大小不同的分離方法 1. 透析和超過濾透析和超過濾 透析：根據(jù)的是蛋白質不能通過半透膜的性質，透析：根據(jù)的是蛋白質不能通過半透膜的性質，而而 水和無機鹽等小分子自由通過，此方法只水和無機鹽等小分子自由通過，此方法只能能 將蛋白質和小分子物質分開，不能將不同將蛋白質和小分

23、子物質分開，不能將不同蛋蛋 白質分開。白質分開。 超過濾：是利用外加壓或離心使水和其他分通過半超過濾：是利用外加壓或離心使水和其他分通過半 透膜，蛋白質留在膜上。透膜，蛋白質留在膜上。透析與超過濾簡易裝置透析與超過濾簡易裝置2. 密度梯度離心密度梯度離心a.蛋白質顆粒沉降不僅決定于它的大小也取決于它的密度。b.顆粒沉降到與自身密度相等的介質梯度時，即停止不前。c.在離心力的作用下，各種蛋白質在不同密度介質中形成獨立的區(qū)帶。（二）利用溶解度差別的分離方法（二）利用溶解度差別的分離方法1. 等電點沉淀等電點沉淀 利用各種蛋白質在等電點時，溶解度最利用各種蛋白質在等電點時，溶解度最小小 這一性質，可

24、以通過調節(jié)蛋白質溶液的這一性質，可以通過調節(jié)蛋白質溶液的PH 值值 ，將不同的蛋白質分開。，將不同的蛋白質分開。2. 鹽溶和鹽析鹽溶和鹽析鹽溶：低濃度的中性鹽在蛋白質分子表面形成雙電層，使蛋白質溶解度增加；鹽析：高濃度的中性鹽破壞蛋白質分子表面的水化層，使蛋白質溶解度降低，發(fā)生沉淀析出。分段鹽析：不同蛋白質鹽析所需的鹽濃度不同，蛋白質溶液中，逐漸增大鹽濃度，不同蛋白質先后析出，稱分段鹽析。3.有機溶劑沉淀法有機溶劑沉淀法a有機溶劑（與水相溶）爭取蛋白質顆粒上的水膜，使之沉淀。b有機溶劑：乙醇、丙酮c低溫操作，邊加入邊攪拌，防止局部過熱，引起變性，盡量縮短處理時間。（三）根據(jù)電荷不同的分離方法（

25、三）根據(jù)電荷不同的分離方法 1 . 電泳電泳 原理與原理與AA的電泳相同的電泳相同 電泳：帶電顆粒在電場中移動的現(xiàn)象。電泳：帶電顆粒在電場中移動的現(xiàn)象。分子大小不同分子大小不同的的蛋白質所帶蛋白質所帶凈電荷密度不同凈電荷密度不同，遷移率不同，在電泳時可以，遷移率不同，在電泳時可以分開。分開。 a. 自由界面電泳：蛋白質溶于緩沖液中進行電泳。自由界面電泳：蛋白質溶于緩沖液中進行電泳。 b. 區(qū)帶電泳：將蛋白質溶液點在浸了緩沖液的支持物上進區(qū)帶電泳：將蛋白質溶液點在浸了緩沖液的支持物上進 行電泳，不同組分形成帶狀區(qū)域。行電泳，不同組分形成帶狀區(qū)域。 1）紙電泳：用濾紙作支持物。）紙電泳：用濾紙作支

26、持物。 2）凝膠電泳：用凝膠（淀粉、瓊脂糖、聚丙烯酰胺）作）凝膠電泳：用凝膠（淀粉、瓊脂糖、聚丙烯酰胺）作 支持物。支持物。 1）圓盤電泳：玻璃管中進行的凝膠電泳。）圓盤電泳：玻璃管中進行的凝膠電泳。2）平板電泳：鋪有凝膠的平板上進行的電泳。）平板電泳：鋪有凝膠的平板上進行的電泳。+-+PAGE垂直平板電泳示意圖垂直平板電泳示意圖低低濃度濃度濃縮濃縮膠膠高高濃度濃度分離分離膠膠聚丙烯酰胺凝膠電泳具有三種物理效應：聚丙烯酰胺凝膠電泳具有三種物理效應： 濃縮效應濃縮效應 分子篩效應分子篩效應 電荷效應電荷效應等電聚焦電泳等電聚焦電泳：當?shù)鞍踪|在其等電點時，：當?shù)鞍踪|在其等電點時，凈電荷為零，在電場中不再移動。凈電荷為零，在電場中不再移動。+5.06.07.0穩(wěn)定穩(wěn)定pH梯度梯度5.06.07.0穩(wěn)定穩(wěn)定pH梯度梯度通電通電+離子交換層析法離子交換層析法 （四）（四） 蛋白質的選擇吸附分離蛋白質的選擇吸附分離1極性的硅膠和氧氣鋁以及非極性的活性碳等具有吸附能力2吸咐層析法是利用物質與不同蛋白質的吸附能力的強弱不同達到分離目的。3蛋白質提純中，最廣泛和最有效的是結晶磷酸鈣即羥基磷灰石。（五）根據(jù)配體特異性的分離（五）根據(jù)配體特異性的分離親和層析親和層析1.是一種極