微生物檢驗規(guī)范

1、v1.0可編輯可修改微生物檢驗規(guī)范1 .目的明確微生物檢驗方法和監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范微生物檢驗的各項操作，通過對原料、產(chǎn)品及生產(chǎn)線各要求環(huán)節(jié)進(jìn)行微生物測試，從檢測結(jié)果來判定原料、產(chǎn)品及生產(chǎn)線微檢監(jiān)控點(diǎn)的微生物情況是否符合公司和國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，確保產(chǎn)品品質(zhì)。2 .適用范圍公司所有需要作微生物檢驗的原料、每批產(chǎn)品及微檢監(jiān)控點(diǎn)。3 .職責(zé)品保微生物檢驗員負(fù)責(zé)微生物檢驗實驗器材和無菌室的準(zhǔn)備工作。品保微生物檢驗員負(fù)責(zé)原料和生產(chǎn)線微檢監(jiān)控點(diǎn)的微檢樣品抽樣、保存、登記和微生物檢測工作。成品制程人員負(fù)責(zé)成品微檢樣品的抽樣工作，品保微生物檢驗員負(fù)責(zé)成品微檢樣品的保存、登記和微生物檢測工作。品保微生物檢驗員負(fù)責(zé)出具檢

2、測報告并作出符合性判定。品?？崎L負(fù)責(zé)微生物檢測報告的審核。4 .作業(yè)程序?qū)嶒炂鞑?.1.1實驗器材、培養(yǎng)基和試劑1,超凈工作臺2.恒溫培養(yǎng)箱36±1C3.低溫培養(yǎng)箱25-28C4,恒溫水浴鍋46±1Cv1.0可編輯可修改5.電子/托盤天平（精確到0.1g）6.高壓蒸汽殺菌鍋7.烘箱8.酒精燈9.記號筆10.打火機(jī)11.銀子12.藥匙13.生物濾膜14.9cm/6cm15.錐形瓶300ml/500ml+硅橡膠塞16.試管17.小發(fā)酵管18.試管架19.接種環(huán)20.顯微鏡21.塑料籃子22.移液管1ml、5ml、10ml23.膜過濾設(shè)備24.醫(yī)用/、銹鋼剪刀培養(yǎng)基和試劑1.總菌

3、數(shù)培養(yǎng)基平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基2.大腸菌群培養(yǎng)基結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂yVRBA、煌綠乳糖膽鹽（BGLB3.霉菌、醉母菌培養(yǎng)基虎紅培養(yǎng)基4.氯化鈉6.乙醇7.二氧化氯粉劑8.過氧乙酸微生物檢驗的前準(zhǔn)備v1.0可編輯可修改檢驗所需器具的滅菌4.2.1.1 培養(yǎng)皿及移液管的干熱滅菌潔凈干燥的培養(yǎng)皿，倒放于專用培養(yǎng)皿鐵筒內(nèi)，潔凈干燥的移液管，尖端朝下，置于移液管專用的鐵筒內(nèi)，把鐵筒放在烘箱中，于120c干熱滅菌120分鐘后，調(diào)至160-180C干熱滅菌120分鐘后，關(guān)掉烘箱，自然冷卻至60c以下，方可打開烘箱門取出置無菌室冷卻備用。錐形瓶及移液管的濕熱滅菌潔凈的錐形瓶，塞上硅橡膠塞并用牛皮紙包扎好瓶口，潔

4、凈的移液管，用牛皮紙包扎完善后，置于蒸汽滅菌鍋中，于121c濕熱滅菌20分鐘即可。銀子、接種環(huán)等的火焰滅菌接種環(huán)、銀子要在酒精燈上須灼燒過方可使用；稀釋操作時試管口應(yīng)在火焰上方；培養(yǎng)基容器口邊在火焰上方?；瘜W(xué)滅菌（75%酉精、100X10-6ClO2）無菌超凈臺，手部及不能加熱滅菌的PE或塑膠制品，桌子等需用化學(xué)滅菌法；操作臺、桌子、凳子、地面在使用完后均用100X10-6C1O2擦洗滅菌。培養(yǎng)基及其緩沖稀釋液的配制和濕熱滅菌%生理鹽水的配制稱取2.25g氯化鈉，溶于250ml蒸儲水中，經(jīng)濕熱滅菌即可。4.2.2.2 75%酒精的配制取375ml無水酒精，則需加水375/=125m14.2.2

5、.3 培養(yǎng)基的配制和滅菌條件v1.0可編輯可修改測定項目培喬基名稱培養(yǎng)基量/1000ml烝儲水殺菌條件菌落總數(shù)平板計數(shù)培養(yǎng)基121CX15分鐘大腸菌群結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂煮沸滅菌2分鐘大腸菌群煌綠乳糖膽鹽40g121CX15分鐘霉菌醉母虎紅培養(yǎng)埴35g121cx20分鐘滅菌完全后的培養(yǎng)基置于46±1C的水浴鍋中，待培養(yǎng)基的溫度降至46±1C方可用.濕熱滅菌的步驟：(1)檢查蒸壓釜中有否足夠的水。(2)檢查所有載有液體瓶子的螺旋蓋(或塞)是否有松動。(3)檢查各待滅菌物品是否已用牛皮紙包裹完善。(4)小心地關(guān)好殺菌釜的蓋/門。除非每個鎖都已徹底鎖緊，否則不得加壓。(5)檢查排

6、氣道或排氣閥是否打開。(6)加熱，使所有空氣從排氣道中隨著蒸汽自動排出。蒸汽要猛烈排放2-3min,以保證蒸壓釜內(nèi)冷空氣全部排出。關(guān)閉通風(fēng)閥或排氣閥。(7)繼續(xù)加熱，至達(dá)到預(yù)定壓力及溫度。設(shè)備和培養(yǎng)基將在121c下維持20min,以進(jìn)行滅菌。所需壓力要連續(xù)維持一定時間。(8)所需加熱時間一過，停止加熱。在排氣閥不打開的情況下讓壓力自動下降到零。否則不要打開蒸壓釜。當(dāng)壓力為零時，小心打開排氣閥，待蒸氣排盡后，打開蒸壓釜蓋，讓它敞開幾分鐘以泄去多余的熱蒸汽，并將釜內(nèi)原載有的物品充分冷卻。v1.0可編輯可修改(9)取出釜內(nèi)原載有培養(yǎng)基或生理鹽水的瓶子，將這些瓶子存放在無菌室的傳遞箱中待之冷卻備用。滅

7、菌完成后的培養(yǎng)基，溫度降至46±1C方可使用。所有滅菌完成后的物品，在使用前都必須保持包裹完善無破損的狀態(tài)。4.2.3無菌室及超凈臺的滅菌4.2.3.1 每天實驗前、后把無菌室地面及超凈臺打掃干凈，每天用100X10-6C1O2消毒桌面、地面。每月用2%±氧乙酸熏蒸。4.2.3.2 實驗結(jié)束后打開紫外燈對無菌室空間和表面進(jìn)行殺菌1小時。4.2.3.3 實驗前，提前1小時打開超凈臺紫外燈及無菌室紫外燈。關(guān)掉紫外燈后，打開無菌室和超凈臺通風(fēng)裝置，30分鐘后，即可進(jìn)行實驗操作。.樣品的抽樣和判定標(biāo)準(zhǔn)4.3.1實驗前應(yīng)登記樣品，給樣品編號，記錄檢驗時間、品項、規(guī)格、生產(chǎn)日期、批號、

8、檢測項目等，并根據(jù)樣品數(shù)來配制培養(yǎng)基。樣品的抽樣和判定標(biāo)準(zhǔn)天然水的產(chǎn)品名，抽樣量、檢測項目、頻率、方法、標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品品項抽樣頻率檢胎項目檢驗方法檢驗標(biāo)準(zhǔn)檢驗時間正常：1瓶/2小時/線幺喃總數(shù)濾膜法W50個/100ml550m1/1.25L天然水大腸菌群霉菌酵母濾膜法濾膜法不得檢出W20個/100ml恒溫室放置天后隔駁開(關(guān))機(jī)：2瓶/線細(xì)菌百胸GB-4789<20個/ml霉菌酵母_GB-4789<5個/ml備注：按抽樣頻率，檢驗方法一半米用GB-4789,，半采用濾膜法。生產(chǎn)線微檢監(jiān)控點(diǎn)的樣品的抽樣和判定標(biāo)準(zhǔn)各監(jiān)控點(diǎn)名，抽樣量、檢測項目、頻率、方法、標(biāo)準(zhǔn)線別監(jiān)控點(diǎn)檢驗項檢驗方標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定檢

9、驗頻率5v1.0可編輯可修改目法水處理源水菌落總數(shù)取合適的稀釋倍數(shù)做濾膜法監(jiān)控項目1次/周大腸菌群毒菌醛母砂濾出水，碳罐出水菌落總數(shù)取合適的稀釋倍數(shù)做濾膜法監(jiān)控項目1次/維護(hù)后大腸菌群毒菌醛母精濾出水菌落總數(shù)取合適的稀釋倍數(shù)做濾膜法監(jiān)控項目1次/天大腸菌群霉菌酵母RO摸系統(tǒng)出水菌落總數(shù)濾膜法<10cfu/100ml1次/維護(hù)后大腸菌0cfu/100ml6v1.0可編輯可修改群毒菌醛母<5cfu/100ml精濾UV后出水菌落總數(shù)濾膜法<50cfu/100ml1次/天大腸菌群0cfu/100ml霉菌酵母<50cfu/100ml膜出水、膜產(chǎn)水儲罐、兌制水儲罐、兌制水UV后、菌

10、落總數(shù)濾膜法<10cfu/100ml1次/天大腸菌群0cfu/100ml霉菌酵母<5cfu/100ml氧化塔出水、洗瓶水菌落總數(shù)濾膜法<3cfu/100ml1次/天大腸菌群0cfu/100ml霉菌酵母0cfu/100ml灌裝頭（開機(jī)前）菌落總擦拭法<2個/每灌裝頭1次/周7v1.0可編輯可修改水線灌裝頭數(shù)霉菌酵母<5個/每灌裝頭洗瓶頭（開機(jī)前）<2個/每洗瓶頭洗瓶頭<5個/每灌裝頭封蓋頭<5個/10cm2蓋滑槽<5個/10cm2撥蓋星輪<5個/10cm2蓋貯存槽<5個/10cm2蓋斗<5個/10cm2蓋輸送帶<5個/

11、10cm2洗瓶夾<5個/10cm2門內(nèi)壁<20個/10cm2充填槽外壁或頂部<20個/10cm2風(fēng)送軌道<20個/10cm2輸送帶（接近灌裝機(jī)）<20個/10cm2沖洗后空瓶平均02個/瓶蠱卜滑道中蓋平均02個/蓋操作人員手部<50個/雙手操作人員衣服2<50個/10cmv1.0可編輯可修改微生物檢測方法4.4.1 濾膜法：適用于進(jìn)行濾膜法檢測的各種微檢樣品。4.4.1.1 儀器：冰箱：04C；恒溫培養(yǎng)箱：36±1C/25-28C；恒溫水浴鍋：46±1C；電子天平：精確至；滅菌平皿：直徑60mnl£90mm膜過濾設(shè)備；濾杯

12、；pm濾膜；超凈工作臺；真空泵；高壓滅菌鍋；滅菌的剪子、銀子、玻璃瓶及其它物品。4.4.1.2 試劑與培養(yǎng)基平板計數(shù)培養(yǎng)基、虎紅培養(yǎng)基、煌綠乳糖膽鹽培養(yǎng)基，冰理鹽水，121c滅菌20min；結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂煮沸滅菌2min；75%L酉I;100Ppm二氧化氯。4.4.1.3 操作步驟：(1)將樣品搖勻，取100ml倒入膜過濾裝置中，打開抽濾泵，開始抽濾，抽干濾液后關(guān)上抽濾泵。(2)將銀子在火焰上滅菌，膜用滅菌過的銀子取下，在火焰旁正面貼于預(yù)先制備的培養(yǎng)基平皿中，平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基用于培養(yǎng)菌落總數(shù)，虎紅瓊脂培養(yǎng)基用于培養(yǎng)霉菌和酵母菌，VRBA培養(yǎng)基用于培養(yǎng)大腸菌群，膜下避免出現(xiàn)氣泡。(3)培

13、養(yǎng)a.菌落總數(shù)：倒置于36±1C的恒溫箱中，培養(yǎng)48h土2h。菌落總數(shù)以實際菌數(shù)報告之，單位為cfu/100ml或cfu/ml。b.霉菌和酵母菌：倒置于25-28C恒溫箱中，3d后開始觀察，共培養(yǎng)觀察5d。菌落總數(shù)以實際菌數(shù)報告之，單位為cfu/100ml或cfu/ml。v1.0可編輯可修改c.大腸菌群倒置于36±1C的恒溫箱中，培養(yǎng)18h-24ho取出平板，分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為或更大。從VRBAF板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于BGLB肉湯管內(nèi)，36±1C培養(yǎng)24h

14、48h,觀察產(chǎn)氣情況。凡BGL的湯管產(chǎn)氣，即可報告為大腸菌群陽性。大腸菌群平板計數(shù)的報告：經(jīng)最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以中計數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每100ml樣品中大腸菌群數(shù)。例：在VRBAF板上有100個典型和可疑菌落，挑取其中10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為：100X6/10/100ml=60cfu/100ml。4.4.2 國標(biāo)法：適用于不能用濾膜法檢測的各種微檢樣品以及規(guī)定用國標(biāo)法檢測的樣品。4.4.2.1 菌落總數(shù)4.4.2.設(shè)備與材料：冰箱：04C；恒溫培養(yǎng)箱：36±1C；恒溫水浴鍋：46±1C；電子天平：精

15、確至；滅菌吸管；滅菌平皿：直徑90mm£60mm超凈工作臺；高壓滅菌鍋及其它物品。4.4.2.培養(yǎng)基與試劑：平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，林理鹽水，121c滅菌20min；75%JI;100X10-6ClO?溶液。4.4.2.操作步驟：10v1.0可編輯可修改(1)樣品稀釋及培養(yǎng)a.以無菌操作取樣品。b.取樣品25(g)ml加入到225ml滅菌生理鹽水中，經(jīng)充分混勻制成1:10的樣品勻液。c.用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,沿管壁徐徐注入盛有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液液面)，振搖試管，混合均勻，做成1:100的稀釋液。d.另取1ml滅菌吸管，按上述操

16、作方法，制備10倍系列遞增稀釋樣品勻液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1ml滅菌吸管。e.根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)υ嚇游廴厩闆r估計，選擇2個-3個適宜稀釋度(液體樣品可包括原液)，對于菌數(shù)較少的樣品，采用原倍。在進(jìn)行10倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取1ml樣品勻液加入兩個無菌平皿內(nèi)，同時分別取1ml稀釋液加入無菌平皿中彳空白對照。及時將6-7ml或15-20ml冷卻至46c的培養(yǎng)基傾注入平皿。采用原倍培養(yǎng)的，直接將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿中作為空白。f.待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36C±1。叵溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2h。(2)菌落計數(shù)可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器。記錄稀

17、釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以菌落形成單位(CFU表示。a.選取菌落數(shù)在30-300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。b.其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長11v1.0可編輯可修改的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數(shù)。c.當(dāng)平板上出現(xiàn)菌藻間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。（3）菌落總數(shù)的計算方法a.若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)

18、在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每克（或毫升）中菌落總數(shù)結(jié)果。b.若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按下式計算：N=EC/（ni+）d式中：N樣品中菌落數(shù)；EC-平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；ni第一個適宜稀釋度平板上的菌落數(shù)；n2第二個適宜稀釋度平板上的菌落數(shù)；d稀釋因子（第一稀釋度）。c.若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300,則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。d.若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。e.若所有稀

19、釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。12v1.0可編輯可修改f.若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30-300之間，其中一部分小于30或大于300時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。(4)菌落總數(shù)的報告a.菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。b.大于或等于100時，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約，取前兩位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。c.若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。d.若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。e.稱重

20、取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/m西單位報告。酵母和霉菌設(shè)備與材料：冰箱：0-4C；恒溫培養(yǎng)箱：25-28C；恒溫水浴箱：46±1C；電子天平：精確至0.1g;滅菌具塞錐形瓶：500ml；滅菌平皿:直徑90mnm£60mm滅菌試管及其它滅菌設(shè)備；4.4.2.培養(yǎng)基與試劑：虎紅培養(yǎng)基，林理鹽水，121c滅菌20min,75%JI,100X10-6ClO2溶液。4.4.2.操作步驟(1)樣品稀釋及培養(yǎng)a.以無菌操作取樣品13v1.0可編輯可修改b.取樣品25(g)ml加入到225ml滅菌生理鹽水中，經(jīng)充分混勻制成1:10的樣品勻液。c.用1ml滅菌吸管吸取1:10

21、稀釋液1ml,沿管壁徐徐注入盛有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液液面)，振搖試管，混合均勻，做成1:100的稀釋液。d.另取1ml滅菌吸管，按上述操作方法，制備10倍系列遞增稀釋樣品勻液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1ml滅菌吸管。e.根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)υ嚇游廴厩闆r估計，選擇2個-3個適宜稀釋度(液體樣品可包括原液)，對于菌數(shù)較少的樣品，采用原倍。在進(jìn)行10倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取1ml樣品勻液加入兩個無菌平皿內(nèi)，同時分別取1ml稀釋液加入無菌平皿中彳空白對照。及時將6-7ml或15-20ml冷卻至46c的培養(yǎng)基傾注入平皿。采用原倍培養(yǎng)的，直接將

22、培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿中作為空白。f.待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置于25-28C霉酵培養(yǎng)箱中。3d后開始觀察，共培養(yǎng)觀察5d。(2)計算方法：通常選擇菌落數(shù)在10-150之間的平皿進(jìn)行計數(shù)，同稀釋度的兩個平皿的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每克(或毫升)檢樣中含霉菌和酵母數(shù)，稀釋度選擇及菌落報告方式可參考菌落總數(shù)的計數(shù)方法。(3)報告：每克(或毫升)樣品中所含的霉菌和酵母菌數(shù)以cfu/g(ml)表示。4.4.2.3大腸菌群4.4.2.設(shè)備與材料：冰箱：04C；恒溫培養(yǎng)箱：36±1C；恒溫水浴鍋：46±1C；電子天平：精確至；滅菌吸管；滅菌平皿：直徑90mm£60mm超凈工作

23、臺；高壓滅菌鍋及其它14v1.0可編輯可修改物品。4.4.2. 培養(yǎng)基與試劑：煌綠乳糖膽鹽(BGLB,%生理鹽水，121c滅菌20min；結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA,煮沸滅菌2分鐘；75叱酉I;100X10-6C1O2溶液。4.4.3. 操作步驟(1)樣品稀釋a.以無菌操作取樣品。b.取樣品25(g)ml加入到225ml滅菌生理鹽水中，經(jīng)充分混勻制成1:10的樣品勻液。c.用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,沿管壁徐徐注入盛有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液液面)，振搖試管，混合均勻，做成1:100的稀釋液。d.另取1ml滅菌吸管，按上述操作方法，制備10

24、倍系列遞增稀釋樣品勻液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1ml滅菌吸管。e.根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)υ嚇游廴厩闆r估計，選擇2個-3個適宜稀釋度(液體樣品可包括原液)，對于菌數(shù)較少的樣品，采用原倍。在進(jìn)行10倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取1ml樣品勻液加入兩個無菌平皿內(nèi)，同時分別取1ml稀釋液加入無菌平皿中彳空白對照。及時將6-7ml或15-20ml冷卻至46c的培養(yǎng)基傾注入平皿。采用原倍培養(yǎng)的，直接將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿中作為空白。(2)平板計數(shù)a.選取2個一3個適宜的連續(xù)稀釋度，每個稀釋度接種兩個無菌平皿，每皿1mL同時分別取1mL生理鹽水加入兩個無菌平皿作空白對照。15v1.0可編輯可修改

25、b.及時將6-7ml或15-20ml冷至46c的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA傾注于每個平皿中，小心旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3mL4mLVRBA蓋平板表層，翻轉(zhuǎn)平板，置于36C±1C培養(yǎng)18h24h。(3)平板菌落的選擇選取菌落數(shù)在30150之間的平板，分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為或更大。(4)證實試驗從VRBAF板上挑去10個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種與BGLB肉湯管內(nèi)，36c±1C培養(yǎng)18h24h,觀察產(chǎn)氣情況，凡BGLB肉湯管產(chǎn)氣，即可報告為大腸菌群陽性。(5)

26、大腸菌群平板計數(shù)的報告經(jīng)最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以(3)中計數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每克(每毫升)樣品中大腸菌群數(shù)。例：104樣品稀釋液1mL在VRBAP板上有100個典型和可疑菌落，挑取其中10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為：46_100X6/10X10/g(mL)=X10(CFU/g)CFU/mL附：大腸菌群檢驗程序檢樣詵擇2個3個話官稀釋序的樣品均液，將種VRBAW16v1.0可編輯可修改36c±1C18h-24h計數(shù)典型和可疑菌落BGLB肉湯或復(fù)發(fā)酵試驗36C土l|c18h-24h報告4.4.3 空氣落菌檢驗4.4.3.1

27、 設(shè)備與材料：恒溫培養(yǎng)箱：36±1C；霉酵培養(yǎng)箱：25C-28C；電子天平：精確至0.1g;滅菌平皿:直徑90mm高壓滅菌鍋及其它物品。4.4.3.2 培養(yǎng)基與試劑：虎紅培養(yǎng)基，平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，121c滅菌20min。4.4.3.3 操作步驟(1)在已經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)皿中分別傾注已經(jīng)過滅菌后的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基和虎紅培養(yǎng)基，靜置使其自然凝固。(2)將已凝固的培養(yǎng)基正向放置于需檢測空氣落菌的地點(diǎn)，將培養(yǎng)皿的蓋取下，蓋口朝下，輕輕搭放在培養(yǎng)皿的邊緣。(3)將培養(yǎng)皿放置30分鐘后，蓋好培養(yǎng)皿蓋取回，菌落總數(shù)平板倒放于36±1C恒溫箱中培養(yǎng)48h±2h,霉酵平板倒放于2

28、5-28C低溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天。(4)計數(shù)：可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。4.4.4 空氣浮游菌檢驗17v1.0可編輯可修改4.4.4.1 設(shè)備與材料：浮游空氣塵菌采樣器；恒溫培養(yǎng)箱：36±1C；霉酵培養(yǎng)箱：25-28C,電子天平：精確至0.1g;滅菌平皿:直徑90mm高壓滅菌鍋及其它物品。4.4.4.2 培養(yǎng)基與試劑：虎紅培養(yǎng)基，平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，121c滅菌20min。操作步驟(1)在已經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)皿中分別傾注已經(jīng)過滅菌后的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基或虎紅培養(yǎng)基，靜置使其自然凝固。(2)將浮游空氣塵菌采樣器置于被測區(qū)域，打開采樣蓋，對采樣蓋進(jìn)行擦拭消毒，將預(yù)先制備的平皿

29、開口置于采樣器上，蓋上采樣蓋。設(shè)置采樣的流量為50L。(3)采樣結(jié)束后，打開采樣蓋取出平皿蓋好。菌落總數(shù)平板倒放于36±1C恒溫箱中培養(yǎng)48h±2h,霉酵平板倒放于25-28C低溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天。(4)計數(shù)：可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。4.4.5 棉簽擦拭試驗-表面微生物評估4.4.5.1 儀器擦拭用棉簽，理鹽水，121c滅菌20min；酒精燈；75%酉精；記號筆；其它同菌落總數(shù)的檢測方法。4.4.5.2 培養(yǎng)基與試劑平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基、虎紅培養(yǎng)基4.4.5.3 操作步驟18v1.0可編輯可修改(1)將棉簽和生理鹽水121c滅菌20min.(2)手經(jīng)75%H精消毒后，或戴用酒精浸泡過的手套持棉簽的后端部擦拭；(3)擦拭：a.設(shè)備及其它平整的表面：用無菌棉簽擦拭10cm面積的設(shè)備或其它平整的表面，往返涂擦兩遍，每擦拭一遍，將棉簽轉(zhuǎn)動一次。如檢測表面狹長，可使其總面積達(dá)到10CR2,如所檢測表面面積較小，可適當(dāng)減少擦拭面積。b.灌裝頭或其它不規(guī)則表面：用無菌棉簽擦拭灌裝頭表面，盡量擦拭整個灌裝頭，往返涂擦兩遍，每擦拭一遍，將棉簽轉(zhuǎn)動一次。c.手部：讓受試者張開手指，用無菌棉簽擦拭手指縫，然后，手指并攏，用棉簽擦拭在五指屈面指尖至指根，以及手掌，往返涂擦兩遍，每擦拭一遍，將棉簽轉(zhuǎn)動一次。嚴(yán)格遵守上述拭擦順序。(4)用75