醫(yī)學微生物學 實驗 膿汁和糞便標本中病原菌的檢測-6 ppt課件

1、醫(yī)學微生物學實驗綜合性實驗三v空氣的細菌學檢查結(jié)果分析v手指皮膚的細菌學檢查結(jié)果分析空氣的細菌學檢查空氣的細菌學檢查組號時間地點菌落形成單位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 50,000NAT 86N(直徑7cm平板）N：平板上的菌落數(shù) A：平板面積(38.5cm2)T：采樣時間(15分鐘) CFU：colony forming unit WHO推薦的醫(yī)院各部門空氣細菌標準級別cfu/m3適用范圍級區(qū)10器官移植、心血管、矯形等外科手術(shù)室，保護性隔離室，灌注或配制注射液實驗室級區(qū)200無菌室、手術(shù)室、供應室、嬰兒室、中心滅菌單位、術(shù)后恢復室

2、、早產(chǎn)兒及產(chǎn)房、重癥監(jiān)護病房級區(qū)200500一般病房、治療室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手術(shù)室浴室我國公共場所空氣衛(wèi)生細菌學標準（GB96639673-2019，GB16153-2019,平皿直徑9cm）撞擊法cfu/m3沉降法個/皿適用范圍1000 1035星級賓館、飯店1500 202星級以下賓館和非星級帶空調(diào)賓館、飯店2500 30普通飯店、招待所、酒吧、茶座、咖啡廳、圖書館、博物館、美術(shù)館、飛機客艙4000 40音樂廳、影劇院、錄像廳（室）、游藝廳、舞廳、理發(fā)店、美容院（店）、游泳館、體育館、醫(yī)院候診室、候機室、旅客列車車廂、輪船客艙、飯館（餐廳）7000 75展覽館、商場（店）

3、、書店、候車室、候船室液體或固體標本菌落總數(shù)測定v可將標本作十倍、百倍、千倍、萬倍稀釋。v分別取1ml注入直徑9cm的滅菌平皿內(nèi)。v傾注46營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基大約15ml，混合均勻。瓊脂完全凝固以后，37培養(yǎng)48小時。v選擇菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準。v將計數(shù)得到的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出cfu/g(ml)。 1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮膚的細菌學檢查第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對照。 2人1塊平板上:甲、丙常規(guī)洗手下:乙、丁標準洗手甲丙）乙丁）丙丁手指皮膚細菌學檢查結(jié)果分析第1格為洗手前：+ 第2格為洗手后 常規(guī)(甲、丙)洗手方法：?

4、標準(乙、丁)洗手方法：?第3格為消毒后：？第4格空白對照：-醫(yī)學微生物學實驗綜合性實驗一v膿汁和糞便標本中病原菌的檢測三）v菌落特征觀察P11v細菌純培養(yǎng)P10v膿汁和糞便標本檢驗錄像）v油鏡使用方法講解）細菌在固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象v菌落定義：指單個細菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形成單一肉眼可見的細菌集團。v菌落特征：大小、外形、邊緣、顏色、外表、透明度、濕潤度、黏度、溶血性。v菌落類型：光滑型S）、粗糙型R）、黏液型M）。v菌苔：指多個菌落融合在一起形成的細菌堆積物。菌落特征P11大小：大(直徑約3mm以上)，中(直徑約13mm)，小(直徑約1mm以下)。外形：圓形，卵圓形、假根形、絲狀、

5、不規(guī)則等。邊緣：整齊，鋸齒狀，波浪狀，羽毛狀。外表：隆起、平坦、中心凸起、臍形凹陷；光滑或粗糙、濕潤或干燥。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周圍呈草綠色、不透明)，溶血(菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán))。色素：一般為無色或灰白色，特殊色素有兩類：脂溶性色素(菌落本身著色，培養(yǎng)基不著色)和水溶性色素(菌落及培養(yǎng)基均著色)。 細菌的溶血現(xiàn)象v根據(jù)細菌對血平板中紅細胞的溶解能力可分為以下三種溶血類型甲型溶血甲型溶血: :產(chǎn)生溶血素，不完全產(chǎn)生溶血素，不完全性溶血，在血平板上菌落周圍有性溶血，在血平板上菌落周圍有1 12mm2mm半透明的草綠色溶血環(huán)。半透明的草綠色溶血環(huán)。乙型溶血乙型溶血: : 呈完全性溶血，在

6、血呈完全性溶血，在血平板上菌落周圍有平板上菌落周圍有2 24mm4mm寬，界限分明，寬，界限分明，無色透明的溶血環(huán)。無色透明的溶血環(huán)。丙型溶血丙型溶血: :不產(chǎn)生溶血素，在血不產(chǎn)生溶血素，在血平板上的菌落周圍無溶血環(huán)。平板上的菌落周圍無溶血環(huán)。細菌的純培養(yǎng)v挑選單菌落:v膿汁標本在普通平板上有黃色、白色兩種菌落，菌落的色素是脂溶性的，是細菌本身的顏色。菌落直徑2mm左右、圓形、隆起、表面光滑、潮濕、邊緣整齊、不透明。v糞便標本在伊紅美藍平板上，有紫黑色、淡粉紅色兩種菌落，菌落顏色是水溶性的，不是細菌本身的顏色，顏色的產(chǎn)生是因為大腸埃希菌分解乳糖產(chǎn)酸，酸使伊紅與美藍結(jié)合，形成紫黑色具有金屬光澤、

7、大而隆起、不透明的菌落；菌落直徑23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊紅的顏色，很淡的粉紅色，半透明，直徑12mm。v選擇平板上相同的菌落數(shù)多的、典型的、容易挑取的單菌落，進行接種。37培養(yǎng)24小時 37培養(yǎng)24小時 紫黑色紫黑色v通常描述的菌落直徑和顏色是特指培養(yǎng)1824小時，菌落分布比較稀少的區(qū)域、典型的菌落。v若培養(yǎng)物放置時間過長，或者平板上某個部位細菌比較多、菌落比較密集，大腸桿菌菌落顏色可能會發(fā)生改變。因為大腸桿菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分解大多產(chǎn)生堿性物質(zhì)，中和了乳糖分解時產(chǎn)生的酸。大腸桿菌菌落可能會由原來的紫黑色變成粉紅色，和致病菌顏色一樣。v不要在菌落密集的區(qū)域挑選

8、菌落，它可能是菌落形成單位CFU），不是單菌落，很容易選錯。37培養(yǎng)36小時 由紫黑色由紫黑色變成粉紅色變成粉紅色v斜面接種法P10 （1組4支）v甲普通平板黃色菌落1支斜面v乙普通平板白色菌落1支斜面v丙伊紅美藍紫黑菌落1支斜面v丁伊紅美藍粉紅菌落1支斜面v斜面標記：組號、黃色、白色、紫黑、粉紅。v在平皿底部玻璃上，畫個大圈選菌落，同組同學認可，才能挑取。v培養(yǎng)時間不得超過18小時。斜面接種法P10甲黃色,乙白色。丙紫黑,丁粉紅。標志：組號，顏色安全警告v接種環(huán)接種斜面一次，可產(chǎn)生幾十個微生物氣溶膠顆粒。v氣溶膠粒徑100um沉降很快,50um在0.4s內(nèi)擴散開,5um通過呼吸道直接到達肺泡

9、。vPike博士對實驗室感染統(tǒng)計分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴散引起的。v實驗時應坐著，在酒精燈半徑20厘米范圍內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說話、少走動，以免感染病原菌。奧林巴斯奧林巴斯 CX21CX21型型 生物顯微鏡生物顯微鏡（實驗柜內(nèi)，每人一臺）（實驗柜內(nèi)，每人一臺）留意：只能橫放，不得豎放。留意：只能橫放，不得豎放。奧林巴斯 CX21型 生物顯微鏡使用須知v顯微鏡是精密光學儀器，請不要讓其受到撞擊，請小心操作。v在搬運顯微鏡時，請按右圖所示，以雙手抓住鏡臂孔的兩側(cè)，小心搬運。v如果拿住載物臺和鏡筒等部位搬運的話，有可能會造成損壞。顯微鏡各部件名稱開關(guān)

10、與調(diào)整光強v開或關(guān)之前，必須將亮度調(diào)整旋鈕按箭頭相反方向轉(zhuǎn)動到最小位置，以免損壞燈泡。v電源開關(guān)撥到 側(cè)為開，撥到側(cè)為關(guān)閉。v按箭頭方向轉(zhuǎn)動亮度調(diào)整旋鈕變亮，相反方向轉(zhuǎn)動則變暗。放置標本v按箭頭方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)旋鈕降下載物臺。v按箭頭方向拉開載物臺標本夾 ，自前向后將標本片放入平臺，標本夾 輕輕放回原位。v轉(zhuǎn)動上側(cè)垂直移動桿和下側(cè)水平移動桿，移動標本至光路中間。載物臺位置刻度v載物臺上的刻度方便確定標本位置，標本移動后可以快速回到原位。v水平刻度的標識位置以機械載物臺的位置來讀取。v垂直刻度的標識線以的位置來讀取。聚焦v從顯微鏡的側(cè)面觀察，按箭頭方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)旋鈕，使物鏡盡可能接近標本。一邊看目鏡，

11、一邊慢慢逆箭頭方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)旋鈕， 使載物臺下降。v看到標本以后，用微調(diào)旋鈕來正確對焦。10倍物鏡的工作距離WD，從物鏡到標本的 間隔為10.5mm。v 油鏡的WD為0.13mm。調(diào)整瞳距v調(diào)整瞳距是調(diào)整雙目間的距離，使兩眼同時看到一個顯微鏡像，能防止觀察時的疲勞。v方法：一邊看目鏡，一邊移動雙目鏡筒，讓左右的視野一致。v標識的位置表示瞳距。請記住自己的瞳距值，以便下次觀察時調(diào)整。調(diào)整屈光度數(shù)v調(diào)整觀察者左右視力。v以右眼看右側(cè)的目鏡，旋轉(zhuǎn)粗微調(diào)旋轉(zhuǎn)盤，對好焦距。v以左眼看左側(cè)的目鏡，旋轉(zhuǎn)屈光度調(diào)整環(huán)，對好焦距。調(diào)整聚光鏡位置和孔徑光闌v用聚光鏡上下移動旋鈕，將聚光鏡轉(zhuǎn)到最上面。v在孔徑光闌環(huán)上

12、刻有物鏡倍率10倍，100倍等），觀察時將與使用物鏡相對應的倍率放到正面。轉(zhuǎn)換物鏡v旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，將希望使用的物鏡10倍、100倍轉(zhuǎn)到標本的上方。100倍浸油物鏡使用方法v油鏡放入光路之前，一定要在標本的觀察部位上加一滴浸油。v旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡進入光路，用微調(diào)旋鈕對好焦距。v如果浸油內(nèi)有氣泡，會影響觀察，可稍微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡來回通過12次浸油，排除油內(nèi)氣泡。顯微鏡油鏡的使用P13v10物鏡標本位置滴加香柏油100油鏡浸泡油中,幾乎與標本接觸工作距離0.13mm）細調(diào)節(jié)調(diào)焦，觀察物像記錄結(jié)果關(guān)閉電源。v油鏡處理：擦鏡紙拭去香柏油 擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚7:3混合液擦拭擦鏡紙擦拭油鏡。v

13、顯微鏡罩上防塵罩 橫放在實驗柜內(nèi)。v(順德校區(qū)實驗臺兩側(cè)的電源插座，只能插入一個插頭，請選擇離你最近的電源插座。v（校本部實驗臺中間，三個位的插座，中間那位插孔沒有電，不能使用，只能用兩側(cè)的插座。 細菌的顯微鏡檢查法v顯微鏡：光學顯微鏡v目鏡：10倍v物鏡：油鏡頭90或100倍）v放大倍數(shù)：1090或100900或1000v鏡油：香柏油或石蠟油v香柏油折射率n1.515），玻片折射率n1.52），石蠟油n1.46），空氣n1.00）。v油鏡使用完畢必須擦拭油鏡頭。油透鏡光線載玻片思考題v在微生物學實驗中,怎樣才能避免雜菌的污染?v空氣的衛(wèi)生標準規(guī)定如何?v你的實驗結(jié)果說明了什么問題?v怎樣從醫(yī)務人員手指上分離和鑒定金黃色葡萄球菌?v菌落特征主要描述哪幾方面問題？任何挑選單菌落？ 醫(yī)學微生物學實驗綜合性實驗三、一v空氣、手指皮膚的細菌學檢查結(jié)果分析v膿汁和糞便標本中病原菌的檢測v菌落特征觀察P11v細菌純培養(yǎng)P10純培養(yǎng)不得超過18小時）v油鏡使用方法講解）v膿汁標本檢驗 （錄像）v腸道致