微生物檢測方法

1、-1992 、FDA 細(xì)菌分析手冊需氧菌平板計數(shù) ，或 15300 個（如 ISO 4833 : 1991 微生物學(xué) 大腸桿菌菌落計數(shù)通用指南最大可能數(shù)技術(shù)）等。菌落計數(shù)前先觀測菌落生長的情況，一般同一稀釋度的平板上的菌落數(shù)應(yīng)相近，不同稀釋度平板上的菌落數(shù)則應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比。蔓延菌落的生長會抑制其他菌株的生長，或者會覆蓋其他的小菌落，所以最好不要選擇有蔓延菌落生長的平板作為計數(shù)平板，但如必須選擇，應(yīng)在記錄中標(biāo)記清楚。如片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘 2 以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時（菌落之間無明顯界限），若只有一條鏈可視為一個菌落，如

2、果有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個菌落計。當(dāng)每個稀釋度制備了兩塊平板時，用所選擇的平板的算術(shù)平均值來計算原始樣品中的微生物的含量。樣品的菌落數(shù)等于每克或每毫升的cfu值除以稀釋度。報告方式：空白對照實驗：2.2大腸菌群大腸菌群或稱總大腸菌群是指一群能在37條件下發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。符合這些條件的腸桿菌科細(xì)菌主要包括4個菌屬：埃希氏菌屬，在此菌屬中與人類生活密切相關(guān)的僅有一個種，即大腸桿菌；其次有檸檬酸桿菌屬，其代表種有弗勞地枸櫞酸桿菌；克雷伯氏菌屬，代表種為肺炎克雷伯氏菌；腸桿菌屬，代表種有陰溝桿菌和產(chǎn)氣桿菌。大腸菌群衛(wèi)生學(xué)意義：大腸菌群主要來源于人

3、、畜糞便。大腸菌群是反映食品中是否存在糞便污染的指示菌，食品中有糞便污染，則可推測該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性，潛伏著食物中毒和流行病的威脅，同時也反映出被測食品對人體健康存在危害。大腸菌群檢測已被廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生工作中。檢驗的標(biāo)準(zhǔn)通常使用GB/T 4789.3-2003、SN 0168-92檢驗中需了解和注意事項：1. 挑選菌落在實際工作中，為了提高大腸菌群的檢出率，應(yīng)當(dāng)熟悉大腸菌群的菌落色澤和形態(tài)。在GB/T 4789.3-2003檢驗方法中規(guī)定伊紅美藍(lán)平板為分離培養(yǎng)基，在該平板上，大腸菌群菌落呈黑紫色有光澤或無光澤，檢出率為最高；紅色、粉色菌落檢出率較低。2. 發(fā)酵管的產(chǎn)氣量在

4、日常工作中，有時在發(fā)酵倒管內(nèi)有極微小的氣泡（有時比小米粒還?。?，有時可遇到在初發(fā)酵時產(chǎn)酸未產(chǎn)氣，但在液面及管壁卻可以看到緩緩上浮的小氣泡。這種情況大腸菌群的陽性檢出率能達(dá)到30%-50%。所以不能忽視產(chǎn)氣量少的，對未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵管如有疑問時，可以用手輕輕打動試管，如有氣泡沿管壁上浮，即應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生，而應(yīng)作進(jìn)一步試驗。3. 抑菌劑大腸菌群檢驗中常用的抑菌劑有膽鹽、十二烷基硫酸鈉、煌綠、龍膽紫、孔雀綠等。抑菌劑可抑制樣品中的些雜菌，特別是G+的生長，而有利于大腸菌群的生長和挑選。GB/T 4789.3-2003中乳糖膽鹽發(fā)酵管利用膽鹽作為抑菌劑，SN 0168-92中LST肉湯利用十二烷

5、基硫酸鈉（月桂基）作為抑菌劑，BGLB肉湯利用煌綠和膽鹽作為抑菌劑。2.3金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、土壤、水、飼料、食品、灰塵及人和動物的排泄物中都可以存在。因此，食品受污染的機會很多，是引起食品污染和細(xì)菌性食物中毒的一種重要細(xì)菌。由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒已成為世界性的衛(wèi)生問題。一. 生物學(xué)特性：1. G+、需氧或兼性厭氧，通常在肉浸液肉湯及肉浸液瓊脂或加入血液的培養(yǎng)基上生長良好。2. 耐鹽性強。10%-15%的氯化鈉培養(yǎng)基中能生長。3. 在血瓊脂上，幾乎所有的葡萄球菌可產(chǎn)生、和溶血素（一種或一種以上）。多數(shù)致病菌株可產(chǎn)生透明溶血環(huán)，菌落呈金黃色，有時也

6、為白色，大而突起、圓形、不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。4. 葡萄球菌是無芽胞菌中抵抗力最強者，耐干燥可達(dá)數(shù)月，加熱 80 30min 才被殺死。 5石炭酸， 0.1%升汞 1015 min死亡。 l : 100000200000 龍膽紫溶液能抑制其生長。對磺胺增效劑、青霉素、紅霉素等較敏感，但耐藥菌株逐年增多。葡萄球菌腸毒素具有耐熱性，加熱 100 30min 不被破壞.要使其完全破壞需煮沸2h，這是葡萄球菌腸毒素的特點二. 毒素和酶金黃色葡萄球菌的致病力決定于細(xì)菌產(chǎn)生的毒素和酶的能力。致病性菌株產(chǎn)生的毒素和酶主要有下列幾種：1血漿凝固酶：此酶由金黃色葡萄球菌產(chǎn)生，能使含抗凝劑的人或兔血漿發(fā)

7、生凝固。血漿凝固酶試驗是鑒定金黃色葡萄球菌的重要標(biāo)志。2溶血毒素：多數(shù)致病性菌株均能產(chǎn)生，包括 、和溶血素，對人致病主要是-溶血素。3殺白細(xì)胞素：能破壞人和家兔的中性粒細(xì)胞，抵抗吞噬細(xì)胞的吞噬 。4. 腸毒素：分 A 、B 、C 、D 、E 和 F 六個型別。耐熱， 100 30min 不被破壞。金黃色葡萄球菌引起的食物中毒以 A 型為多見，其次是 B 、 C 型。5剝脫毒素：由噬菌體 l 群中某些金黃色葡萄球菌菌株產(chǎn)生。對新生兒和免疫功能低下的成年人，可引起葡萄球菌燙傷樣皮膚綜合征。三. 檢驗方法及鑒定金黃色葡萄球菌檢驗方法主要有 GB/T4789.10-2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 金黃色

8、葡萄球菌檢驗和SN0172-1992出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法。3操作步驟3. 1增菌培養(yǎng)法3. 1.1.!檢樣處理:按無菌操作取檢樣25 g(mL)，加入225 mL滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成混懸液。3. 1.2增菌及分離培養(yǎng):吸取5 mL上述混懸液，接種于7.5%氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯50 mL培養(yǎng)基內(nèi)，36士1培養(yǎng)24 h,轉(zhuǎn)種血平板和Baird-Parker平板，36士1培養(yǎng)24 h，挑取血平板上金黃色(有時為白色)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。形態(tài): 本菌為革蘭氏陽性球菌，排列呈葡萄球狀，無芽胞，無莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑約為0.5m-1

9、m3. l. 4在肉湯中呈混濁生長，在胰酪脈大豆肉湯內(nèi)有時液體澄清，菌量多時呈混濁生長，血平板上菌落呈金黃色，有時也為白色，大而突起、圓形、不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。在Bird-Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤、直徑為2 mm- 3 mm ,顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落;但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。血漿凝固酶試驗:吸取1，4新鮮兔血漿0. 5 mL，放入小試管中，再加人培養(yǎng)24 h的金黃色葡萄球菌肉

10、浸液肉湯培養(yǎng)物o. 5 ml.，振蕩搖勻，置36士1溫箱或水浴內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6 h,如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽性結(jié)果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照。3.2直接計數(shù)方法吸取上述1：10 混懸液，進(jìn)行10倍遞次稀釋，根據(jù)樣品污染情況，選擇不同濃度稀釋液1 mL，分別加入三塊Baird-Parker平板，每個平板接種量分別為0. 3 mL,0. 3 mI.,0.4 mL，然后用滅菌L棒涂布整個平板。如水分多不易吸收，可將平板放在36士10C 1 h，等水分蒸發(fā)后反轉(zhuǎn)平皿置36士1培養(yǎng)。在三個平板上點數(shù)周圍有混濁帶的黑色菌落，并從中任選五個菌落，

11、分別接種血平板，36士1 0C 24 h培養(yǎng)后進(jìn)行染色鏡檢、血漿凝固酶試驗，步驟同增菌培養(yǎng)法。菌落計數(shù):將三個平板中疑似金黃色葡萄球菌黑色菌落數(shù)相加，乘以血漿凝固酶陽性數(shù)，除以5，再乘以稀釋倍數(shù)，即可求出每克樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)。四 鑒定試驗（1）血漿凝固酶試驗：本試驗是鑒定金黃色葡萄球菌致病性的重要試驗血漿凝固酶通常以兔血漿為最好，避免使用檸檬酸抗凝的血漿，以 EDTA 抗凝兔血漿為最好。取肉湯培養(yǎng)物0.3 mL同0.5 mL凝固酶試驗免血漿于8 mm X 100 mm試管內(nèi)充分混合，置36士1培養(yǎng)，定時觀察是否有凝塊形成，至少觀察6h。以內(nèi)容物完全凝固，使試管倒置或傾斜時不流動者為陽性。

12、試驗中需同時做已知陽性和陰性對照。SN0172-1992中明確規(guī)定對可疑結(jié)果，應(yīng)進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢和其他輔助試驗如耐熱核酸酶試驗等加以證實。( 2 ）觸酶試驗：挑取菌落置于清潔玻片上，滴加3%H2O2 12滴，1min產(chǎn)生大量氣泡為陽性。( 3 ）甘露醇發(fā)酵試驗：多數(shù)致病性葡萄球菌菌株發(fā)酵甘露醇。 ( 4 ）耐熱核酸酶試驗：方法在SN0172-1992中附錄C。( 5 ) SPA 的檢測： SPA 能與免抗羊紅細(xì)胞血清中的 IgG 的 Fc 段結(jié)合，使致敏羊紅細(xì)胞發(fā)生凝集， A 蛋白的存在是金黃色葡萄球菌的特征。( 6 ）新生霉素敏感試驗：每片含 5g ，抑菌環(huán) 16mm 者為敏感， <

13、; 16mm 者為耐藥。五腸毒素的測定 方法在GB/T4789.10-2003中。當(dāng)食品中檢出金黃色葡萄球菌時，表明食品加工處理衛(wèi)生條件較差，并不一定說明該食品導(dǎo)致了食物中毒。但當(dāng)食品中未分離出金黃色葡萄球菌時，也不能證明食品中不存在葡萄球菌腸毒素。2.4 沙門氏菌沙門菌屬分類屬腸桿菌科，是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬，是一種重要的腸道致病菌，可從人和世界各地所有動物中分離得到，其致病性具有種系特異性，例如人是傷寒、副傷寒 A 、B 、C 沙門菌的天然宿主。有些專對動物致病，也有些對人和動物都能致病。沙門菌可致多種感染。1生物學(xué)性狀形態(tài)染色 革蘭陰性直桿菌，較細(xì)長，多具有周鞭毛，能運動，有時會出現(xiàn)無

14、鞭毛的突變型。無芽胞，無莢膜。1.1培養(yǎng)特性 兼性厭氧，最適生長溫度 35 一 37，最適生長pH 6.8一 7.8,本菌屬對營養(yǎng)的要求不高，在普通營養(yǎng)瓊脂上生長的菌落為圓形、光滑、濕潤、半透明、邊緣整齊的菌落，有時出現(xiàn)粗糙型的菌落。有些能產(chǎn)生硫化氫的菌株，在 SS瓊脂上形成中心黑色的菌落。在亞硫酸鉍瓊脂上，不同沙門氏菌可形成如下三種不同的菌落，在亞硫酸鉍瓊脂上，不同沙門氏菌可形成如下三種不同的菌落：深黑色菌落，大小為2mm，扁平的菌落，并有向周圍擴(kuò)散的灰褐色暈環(huán)，如傷寒沙門氏菌往往形成這樣的菌落；灰黑色至灰褐色的菌落，大小為2mm3mm，圓形、光滑、濕潤、突起，周圍有向外擴(kuò)散的灰褐色暈環(huán)，多

15、數(shù)沙門氏菌屬于此類型；淺灰色菌落，一般較大，直徑為2mm4mm，突起黏液狀，有向周圍擴(kuò)散或無擴(kuò)散的灰色暈環(huán)。 在HE瓊脂上，沙門氏菌培養(yǎng)24h后，可形成兩種不同的菌落。一類菌落大小為2mm3mm，綠色至藍(lán)綠色，中央有黑色沉淀物。另一類菌落大小為2mm，綠色至藍(lán)綠色，無黑心。亞利桑那沙門氏菌，因為發(fā)酵乳糖，可形成橙黃色，帶有黑心的菌落，直徑為2mm。在XLD瓊脂（木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂）上，沙門氏菌培養(yǎng)24h后，大多數(shù)沙門氏菌形成淺粉色，大小為2mm，光滑、濕潤、邊緣整齊。而發(fā)酵乳糖的亞利桑那沙門氏菌形成帶有黑心的黃色菌落。 在DHL-瓊脂（膽硫乳瓊脂）上，沙門氏菌培養(yǎng)24h后，產(chǎn)生硫化氫的沙門

16、氏菌可形成帶有黑心的菌落大小為2mm3mm，圓形、突起、濕潤、邊緣整齊。不產(chǎn)生硫化氫的沙門氏菌，菌落中心無黑色沉淀物。亞利桑那沙門氏菌，因發(fā)酵乳糖和產(chǎn)生硫化氫，形成紅色帶黑心的菌落。1.2生化反應(yīng)不發(fā)酵乳糖、蔗糖，對葡萄糖、麥芽糖和甘露醇發(fā)酵，除傷寒 沙門氏菌不產(chǎn)氣外，其它沙門氏菌均產(chǎn)酸產(chǎn)氣。TSI上典型的沙門氏菌培養(yǎng)物顯示斜面堿性（紅色）或不變色和底部酸性（黃色），伴隨著產(chǎn)氣和（約90%情況下）硫化氫產(chǎn)生（K/A + +）；當(dāng)分離到乳糖陽性的沙門氏菌時，TSI的斜面是黃色的。因此，沙門氏菌培養(yǎng)物的初步確認(rèn)并不能僅僅根據(jù)TSI瓊脂實驗的結(jié)果，還要再接種尿素瓊脂或賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基。尿素瓊脂如果

17、反應(yīng)為陽性，尿素分解釋放氨，其顏色由粉紅變成玫瑰紅，最后變成深櫻紅色。賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基陽性反應(yīng)為紫色，陰性反應(yīng)為黃色。對初步反應(yīng)可疑為沙門氏菌屬的TSI培養(yǎng)物進(jìn)行生化試驗。生化結(jié)果符合沙門氏菌屬特性的進(jìn)行血清學(xué)試驗。2.血清學(xué)特性2.1抗原構(gòu)造 本菌屬的抗原結(jié)構(gòu)主要有 3 種，即菌體（ O ）抗原、鞭毛（ H ）抗原及表面抗原（ Vi 抗原等）。根據(jù)O 抗原、H 抗原雙相抗原及Vi抗原的不同，可將沙門氏菌分為近 3000 種血清型。( l ) O抗原：為多糖一類脂蛋白質(zhì)復(fù)合物，具耐熱性，能耐受 100 2.5 h。O抗原共有 58 種，以阿拉伯?dāng)?shù)字順序排列，現(xiàn)已排至第 67（其中有 9 種被

18、刪除）。每個沙門菌的血清型可含一種或多種O抗原。凡含共同抗原成分的血清型歸為個群，每個群以 0 加上阿拉伯?dāng)?shù)字及括號中大寫的 26 個英文字母（AZ）順序編排，則可將沙門氏菌屬分成AZ 、051063、O65O67 42個群，引起人類疾病的沙門氏菌大多數(shù)在AE群。 0 抗原是分群的依據(jù)。其刺激機體產(chǎn)生的抗體以Ig M 為主,與相應(yīng)的抗血清反應(yīng)時呈顆粒狀凝集。( 2 ) H 抗原為不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)抗原，加熱或用乙醇處理均被破壞。有兩個相，第一相特異性較高稱特異相，用小寫英文字母 a 、 b 、C 表示，沙門菌 H 抗原直至 z , Z 以后 z 加阿拉伯?dāng)?shù)字表示，如 21 、 22 、 23 &#

19、183; · 265 。第二相抗原為沙門菌所共有，稱非特異，直接用 1、2、3 表示。同時有第一相和第二相 H 抗原的細(xì)菌稱雙相菌，僅有一相者用相稱單相菌。 H 抗原是定型的依據(jù)。其刺激機體產(chǎn)生的抗體以 IgG 為主，與相應(yīng)的抗血清呈絮狀反應(yīng)。( 3 ）表面抗原：在沙門菌屬中已被證實的表面抗原有 Vi 抗原、 M 抗原和 S抗原三種：l ) Vi 抗原：是一種不耐熱的酸性多糖聚合物，加熱 6030 分鐘或經(jīng)石炭酸處理即被破壞，經(jīng)人工培養(yǎng)基傳代后也易喪失。新分離的傷寒及副傷寒丙沙門菌常帶有此抗原。 Vi 抗原位于菌體的最表層，有抗吞噬及保護(hù)細(xì)菌免受相應(yīng)抗體和補體的溶菌作用。 Vi 抗原

20、存在時可阻止 0 抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集，故在沙門菌血清學(xué)鑒定時應(yīng)加以注意，需事先加熱破壞 Vi 抗原之后， O抗原才得以與相應(yīng)的 O 抗血清發(fā)生凝集。帶 Vi 抗原的沙門菌亦可用 Vi 噬菌體進(jìn)行分型，有助于流行病學(xué)調(diào)查和追蹤傳染源。2 ) M 抗原：又稱粘液抗原。多種沙門菌均可產(chǎn)生 M 抗原。 M 抗原有免疫原性，但各菌種之間無特異性，不能用于血清學(xué)分型。 M 抗原存在時亦可阻止 O 抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集，同樣可用加熱的方法加以破壞。3 ) S 抗原：過去認(rèn)為 S 抗原是一種 O抗原，與O 抗原的區(qū)別是 S抗原可被 lmol / l的鹽酸所破壞，故與O抗原不同，仍屬表面抗原。2.2抗原變

21、異 沙門菌屬在一定條件下可發(fā)生變異，主要表現(xiàn)為： ( 1 ) S一 R 變異：自臨床標(biāo)本初次分離的菌株一般都是光滑型，經(jīng)人工培養(yǎng)、傳代后可逐漸變成粗糙型菌落。此時菌體表面的特異多糖抗原喪失，在生理鹽水中可出現(xiàn)自凝。（2） H-O變異：是指有鞭毛的沙門菌失去鞭毛的變異。( 3 ）位相變異：具有雙相 H 抗原的沙門菌變成只有其中某一相 H 抗原的單相菌，稱位相變異在沙門菌血清學(xué)分型時，如遇到單相菌，特別是只有第相（非特異相）抗原時，需反復(fù)分離和誘導(dǎo)出第相（特異相）抗原方可作出鑒定。( 4 ) V-W變異：是指沙門菌失去 Vi抗原的變異。初次分離得到的具有 Vi 抗原、O不凝集的沙門菌稱 V 型菌；

22、 Vi 抗原部分喪失，既可與O抗血清發(fā)生凝集又可與 Vi 抗血清凝集者稱 VW 型菌； Vi 抗原完全喪失，與0抗血清發(fā)生凝集而與 Vi 抗血清不凝集者稱 W 型菌。 V-W 變異的過程是 V 型菌經(jīng)人工培養(yǎng)，逐漸喪失部分 Vi抗原而成為 VW 型菌，進(jìn)而喪失全部 Vi抗原而成為 W 型菌。3檢驗方法：按照GB/T4789.4-2003 SN0170-1992進(jìn)行檢驗。2.5 大腸埃希氏菌大腸桿菌是腸道的正常菌群。在一定條件下可引起腸道外感染，一部分血清型的大腸桿菌致病性強，引起腹瀉，與人類疾病有關(guān)的大腸桿菌統(tǒng)稱為致瀉大腸桿菌。包括腸產(chǎn)毒素性大腸桿菌（ETEC）、腸致病性大腸桿菌（EPEC）、

23、腸出血性大腸桿菌（EHEC）、腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）、腸集聚性粘附大腸桿菌（EAggEC）。腸出血性大腸桿菌（EHEC）引起散發(fā)或暴發(fā)性出血性結(jié)腸炎，主要血清型是O157:H7 ，EHEC O157:H7的一個顯著性特征是產(chǎn)生志賀樣毒素（Vero toxin,VT），是EHEC的主要致病因子。EHEC O157:H7不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵山梨醇。在山梨醇麥康凱瓊脂平板上菌落呈無色半透明。絕大多數(shù)O157:H7大腸桿菌不具有葡萄糖醛酸酶，不能水解4-甲基傘形酮-D葡萄糖醛酸苷（MUG），不能產(chǎn)生熒光。腸產(chǎn)毒素性大腸桿菌（ETEC）能產(chǎn)生不耐熱腸毒素（LT）和耐熱腸毒素（ST）。衛(wèi)生學(xué)意義：檢出大

24、腸桿菌，即意味著直接或間接地被糞便污染， 衛(wèi)生學(xué)上被用于飲水、食品等的糞源性污染衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo)；由于大腸桿菌在外界存活時間與一些腸道致病菌相近，它的檢出也可能預(yù)示著某些腸道致病菌（沙門菌、志賀氏菌）的存在，因此該菌是國際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測指示菌。251 形態(tài)與結(jié)構(gòu) 革蘭陰性直短桿狀，多數(shù)有鞭毛，能運動，某些菌株尤其是引起腸外感染的菌株有莢膜（微莢膜）和周身菌毛。252 培養(yǎng)和生化反應(yīng) 兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通營養(yǎng)瓊脂上生長良好，形成較大的圓形、光滑、濕潤、灰白色的菌落,在血瓊脂上某些菌株可產(chǎn)生-溶血，在腸道選擇培養(yǎng)基上可發(fā)酵乳糖，形成有色菌落。大腸桿菌能發(fā)酵乳糖、葡萄糖等多種糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，

25、典型的大腸桿菌的吲哚、甲基紅、V -P 、枸椽酸鹽（I MViC ）的生化試驗結(jié)果為 + + - -，在三糖鐵瓊脂（TSI）上斜面和底層均產(chǎn)酸、產(chǎn)氣， H2 S 陰性（ A/A + -），不分解尿素。大腸桿菌一般不產(chǎn)生硫化氫，但近來發(fā)現(xiàn)產(chǎn)硫化氫的菌株，應(yīng)引起注意。大腸桿菌的血清學(xué)反應(yīng)，往往是對經(jīng)分離、鑒定、確證為大腸桿菌的進(jìn)一步分型。根據(jù)O 抗原、H 抗原及K抗原的不同進(jìn)行大腸桿菌血清學(xué)分型。 表示大腸桿菌血清型的方式按O；K；H 排列。檢驗方法：GB/T4789.6-2003；SN0169-92。志賀菌屬志賀菌屬與沙門菌屬一樣，是主要的腸道病原菌之一，是引起人類細(xì)菌性痢疾的病原體。在伯杰手冊

26、（ 1984 ）中將志賀菌屬分為 4 個血清群（種） : A 群為痢疾志賀菌, B 群為福氏志賀菌, C 群為鮑氏志賀菌, D 群為宋內(nèi)志賀菌）而沿用至今。生物學(xué)性狀 1 形態(tài)結(jié)構(gòu)和染色革蘭陰性桿菌，菌體短小，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，有菌毛。2.培養(yǎng)和生化反應(yīng)發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，僅宋內(nèi)氏菌遲緩發(fā)酵乳糖。不分解尿素，不產(chǎn)生H2S。TSI：(K/A - -)2. 檢驗方法: 按照GB/T4789.5-2003標(biāo)準(zhǔn)檢驗。三.生物安全基本知識3.1生物安全柜的使用（1）生物安全柜必須在運行正常時才能使用。（2） 生物安全柜在使用中不能打開玻璃觀察擋板。（3） 生物安全柜內(nèi)應(yīng)盡量少放置

27、器材或樣品，不能影響后部壓力排風(fēng)系統(tǒng)的氣流循環(huán)。（4） 生物安全柜內(nèi)不能使用酒精燈，否則燃燒產(chǎn)生的熱量會干擾氣流并可能損壞過濾器。允許使用微型電加熱器，但最好使用一次性無菌接種環(huán)。（5） 所有工作必須在工作臺面的中后部進(jìn)行，并能夠通過玻璃觀察擋板看到。（6） 盡量減少操作者身后的人員流動。（7） 操作者不應(yīng)反復(fù)移出和伸進(jìn)手臂以免干擾氣流 。（8） 不要使實驗記錄本、移液管以及其他物品阻擋空氣格柵，因為這將干擾氣體流動，引起物品的潛在污染和操作者的暴露。（9） 工作完成后以及每天下班前，應(yīng)使用適當(dāng)?shù)南緞ι锇踩竦谋砻孢M(jìn)行擦拭。(10)在生物安全柜內(nèi)的工作開始前和結(jié)束后，安全柜的風(fēng)機應(yīng)至少運

28、行15min。(11)在生物安全柜內(nèi)操作時，不能進(jìn)行文字工作。3.2 移液管和移液輔助器的使用1、應(yīng)使用移液輔助器，嚴(yán)禁用口吸取。2、所有移液管應(yīng)帶有棉塞以減少移液器具的污染。3、不能向含有感染性物質(zhì)的溶液中吹入氣體。4、感染性物質(zhì)不能使用移液管反復(fù)吹吸混合。5、不能將液體從移液管內(nèi)用力吹出。6、刻度對應(yīng)（Mark-to-mark）移液管不需要排出最后一滴液體，因此最好使用這種移液管。7、污染的移液管應(yīng)該完全浸泡在盛有適當(dāng)消毒液的防碎容器中。移液管應(yīng)當(dāng)在消毒劑中浸泡適當(dāng)時間后再進(jìn)行處理。8、盛放廢棄移液管的容器不能放在外面，應(yīng)當(dāng)放在生物安全柜內(nèi)。9、有固定皮下注射針頭的注射器不能夠用于移液。10、在打開隔膜封口的瓶子時，應(yīng)使用可以使用移液管的工具，而避免使用皮下注射針頭和注射器。11、為了避免感染性物質(zhì)從移液管