第四章中藥制劑的含量測定2014

1、pyh2006 第四章第四章中藥制劑的含量測定中藥制劑的含量測定pyh2006 含量測定的目的與意義n目的：目的： 研究某種成分的含量高低是否符合規(guī)研究某種成分的含量高低是否符合規(guī)定，來判定藥物的優(yōu)劣定，來判定藥物的優(yōu)劣，確保臨床用藥，確保臨床用藥的安全、有效。的安全、有效。n意義：意義： 對于藥品生產(chǎn)、研究、優(yōu)化生產(chǎn)工對于藥品生產(chǎn)、研究、優(yōu)化生產(chǎn)工藝、控制藥品質(zhì)量起著重要作用；確保藝、控制藥品質(zhì)量起著重要作用；確保藥物的安全有效；藥物的安全有效；pyh2006第一節(jié) 含量測定樣品的處理處理目的：處理目的：n被測成分從樣品中釋放出來n除雜純化，提高分析方法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度n富集濃縮或衍生化，便

2、于測定低成分的含量n使試樣的形式及所用溶劑符合分析測定的要求。pyh2006第二節(jié) 含量測定樣品的處理一、樣品的粉碎一、樣品的粉碎目的：目的：1.樣品均勻有代表性樣品均勻有代表性，提高測提高測定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度2.快速完全地提取待測成分快速完全地提取待測成分注意：注意： 粉末不要過細(xì)防損失防止污染pyh2006 設(shè)備：設(shè)備：粉碎機(jī)、銅沖、研缽粉碎機(jī)、銅沖、研缽 勻漿機(jī)、玻璃勻漿器勻漿機(jī)、玻璃勻漿器pyh2006第二節(jié) 含量測定樣品的處理二、樣品的提取二、樣品的提取1. 過過 程：程： 精密稱定樣品粉末 溶劑提取 分離殘渣 pyh2006第二節(jié) 含量測定樣品的處理2.

3、提取方法：提取方法：萃取法萃取法浸漬法浸漬法回流提取法回流提取法連續(xù)回流提取法連續(xù)回流提取法超聲提取法超聲提取法水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法超臨界流體提取法（超臨界流體提取法（SFE）（一）（一） 萃取法萃取法 利用溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中分利用溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)不同，使物質(zhì)從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一配系數(shù)不同，使物質(zhì)從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，經(jīng)過多次萃取，將待測組分提取種溶劑中，經(jīng)過多次萃取，將待測組分提取出來的方法。出來的方法。（適宜于液體制劑）（適宜于液體制劑）正丁醇正丁醇 用于皂苷類用于皂苷類乙酸乙酯乙酸乙酯 用于黃酮類用于黃酮類氯仿氯仿 用于生物堿類用于生物堿類乙醚、石油

4、醚乙醚、石油醚 用于揮發(fā)油用于揮發(fā)油（1 1）萃取溶劑的選擇）萃取溶劑的選擇（2 2）水相）水相pHpH的選擇（使弱酸性或弱堿的選擇（使弱酸性或弱堿性成分主要以非離子化的游離酸或游離性成分主要以非離子化的游離酸或游離堿的形式存在）堿的形式存在）弱酸性成分弱酸性成分 比其比其pKapKa低低1212個個pHpH單位單位弱堿性成分弱堿性成分 比其比其pKapKa高高1212個個pHpH單位單位（3 3）儀器和提取次數(shù)）儀器和提取次數(shù)（4 4）酒劑和酊劑）酒劑和酊劑先揮去乙醇先揮去乙醇（5 5）防止和消除乳化）防止和消除乳化分液漏斗分液漏斗鑒別鑒別11次次含量測定含量測定 3 4 3 4次次樣品置溶

5、劑里，室溫下浸泡一段時間的提取方法樣品置溶劑里，室溫下浸泡一段時間的提取方法操作簡單操作簡單適宜遇熱不穩(wěn)定的樣品適宜遇熱不穩(wěn)定的樣品提取雜質(zhì)少提取雜質(zhì)少缺點缺點優(yōu)點優(yōu)點費溶劑（溶劑用量為樣品重量的費溶劑（溶劑用量為樣品重量的1010倍倍5050倍）倍）費時（費時（12 2412 24小時）小時）1 1、 冷浸法冷浸法（二）（二） 浸漬法浸漬法2 2、 溫浸法溫浸法（室溫（室溫1525 ）（室溫（室溫4060 ） 樣品置有機(jī)溶劑中加熱回流的提取方法樣品置有機(jī)溶劑中加熱回流的提取方法加快溶出速度，省時（加快溶出速度，省時（0.50.52h2h）適宜受熱穩(wěn)定的藥物適宜受熱穩(wěn)定的藥物適宜較難溶出的組分

6、適宜較難溶出的組分特點特點儀器儀器普通回流裝置普通回流裝置（三）（三） 回流提取法回流提取法樣品置有機(jī)溶劑中加熱，蒸發(fā)的溶劑樣品置有機(jī)溶劑中加熱，蒸發(fā)的溶劑經(jīng)冷凝流回樣品管的提取方法經(jīng)冷凝流回樣品管的提取方法節(jié)省溶劑，提高提取效率節(jié)省溶劑，提高提取效率適宜受熱穩(wěn)定的藥物適宜受熱穩(wěn)定的藥物費時（費時（5 510h10h）特點特點儀器儀器索氏提取器索氏提取器（四）（四） 連續(xù)回流提取法連續(xù)回流提取法A A普通普通回流回流裝置裝置B B索氏索氏回流回流裝置裝置（1 1）原理：）原理：超聲波在液體中以疏密相間超聲波在液體中以疏密相間的形式向物體輻射，出現(xiàn)的形式向物體輻射，出現(xiàn)“空化空化”現(xiàn)象現(xiàn)象（氣泡

7、的形成、產(chǎn)生及破裂現(xiàn)象），形（氣泡的形成、產(chǎn)生及破裂現(xiàn)象），形成超過成超過10001000個大氣壓的沖擊力，具有強(qiáng)個大氣壓的沖擊力，具有強(qiáng)烈的振動和擊碎作用，可以把物體打成烈的振動和擊碎作用，可以把物體打成極為細(xì)小的微粒，起到助溶的作用，因極為細(xì)小的微粒，起到助溶的作用，因此可以用于樣品中測定組分的提取。此可以用于樣品中測定組分的提取。（五）（五） 超聲提取法超聲提取法（2 2）超聲提取的優(yōu)點）超聲提取的優(yōu)點 無需高溫。無需高溫。在在40405050水溫下超聲波強(qiáng)化水溫下超聲波強(qiáng)化萃取，無水煮高溫，不破壞中藥材萃取，無水煮高溫，不破壞中藥材中某些具有熱不穩(wěn)定，易水解或氧中某些具有熱不穩(wěn)定，易水

8、解或氧化特性的藥效成份?；匦缘乃幮С煞?。 常壓萃取，安全性好，操作簡單常壓萃取，安全性好，操作簡單易行，維護(hù)保養(yǎng)方便。易行，維護(hù)保養(yǎng)方便。 萃取效率高。萃取效率高。超聲波強(qiáng)化萃取超聲波強(qiáng)化萃取20204040分鐘即可分鐘即可獲最佳提取率。獲最佳提取率。 具有廣譜性。具有廣譜性。適用性廣，絕大多數(shù)的中藥材各類適用性廣，絕大多數(shù)的中藥材各類成份均可超聲萃取。成份均可超聲萃取。 超聲波萃取對溶劑和目標(biāo)萃取物超聲波萃取對溶劑和目標(biāo)萃取物的性質(zhì)（如極性）關(guān)系不大。的性質(zhì)（如極性）關(guān)系不大。因此，可供選擇的萃取溶劑種類多、因此，可供選擇的萃取溶劑種類多、目標(biāo)萃取物范圍廣泛。目標(biāo)萃取物范圍廣泛。適用于具揮

9、發(fā)性的可隨水蒸氣蒸出的組適用于具揮發(fā)性的可隨水蒸氣蒸出的組分的測定分的測定麻黃堿、檳榔堿、丹皮酚、揮發(fā)油麻黃堿、檳榔堿、丹皮酚、揮發(fā)油（六）（六） 水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法 （Microwave assisted extraction, MAEMicrowave assisted extraction, MAE） 是指在樣品的提取過程中（或提取的是指在樣品的提取過程中（或提取的前處理）加入微波場，利用微波場的特點前處理）加入微波場，利用微波場的特點來強(qiáng)化有效成分浸出的新型提取技術(shù)。來強(qiáng)化有效成分浸出的新型提取技術(shù)。 （七）（七） 微波輔助萃取法微波輔助萃取法 步驟：步驟：（1 1）挑選物料，然

10、后進(jìn)行預(yù)處理：清）挑選物料，然后進(jìn)行預(yù)處理：清洗、切片或混合，以便充分的吸收微洗、切片或混合，以便充分的吸收微波能；波能；（2 2）將物料和合適的萃取劑混合，）將物料和合適的萃取劑混合，放置于微波設(shè)備中，接受微波輻射；放置于微波設(shè)備中，接受微波輻射；（3 3）從萃取相中分離濾去殘渣；）從萃取相中分離濾去殘渣；（4 4）獲得目標(biāo)產(chǎn)物。）獲得目標(biāo)產(chǎn)物。 1 1、萃取時間短，效率高、萃取時間短，效率高2 2、溶劑用量少，污染小、溶劑用量少，污染小3 3、可通過選擇不同的溶劑，控制、可通過選擇不同的溶劑，控制樣品與溶劑間的熱交換樣品與溶劑間的熱交換4 4、可實現(xiàn)多個樣品的同時萃取、可實現(xiàn)多個樣品的同時

11、萃取特點特點（一）沉淀法（一）沉淀法基于某些試劑與被測成分或雜質(zhì)生成沉基于某些試劑與被測成分或雜質(zhì)生成沉淀，分離沉淀或保留溶液以得到精制的淀，分離沉淀或保留溶液以得到精制的方法。方法。三、樣品的分離純化三、樣品的分離純化如含益母草制劑總水蘇堿的測定，可用如含益母草制劑總水蘇堿的測定，可用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）在酸性介質(zhì)中可雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）在酸性介質(zhì)中可與生物堿生成難溶于水的復(fù)合物，將此與生物堿生成難溶于水的復(fù)合物，將此沉淀過濾而與其他雜質(zhì)分離。沉淀過濾而與其他雜質(zhì)分離。利用某些被測成分具有揮發(fā)性，可采用蒸利用某些被測成分具有揮發(fā)性，可采用蒸餾法，收集餾出液進(jìn)行含量測定，或某些餾法，收集餾出液

12、進(jìn)行含量測定，或某些成分經(jīng)蒸餾分解生成揮發(fā)性成分，利用分成分經(jīng)蒸餾分解生成揮發(fā)性成分，利用分解產(chǎn)物（要求結(jié)構(gòu)明確）進(jìn)行測定。解產(chǎn)物（要求結(jié)構(gòu)明確）進(jìn)行測定。如水蒸氣蒸餾法測定丹皮酚：如水蒸氣蒸餾法測定丹皮酚：蒸餾時，在樣品的水溶液中加入氯化鈉，蒸餾時，在樣品的水溶液中加入氯化鈉，使丹皮酚提取完全。使丹皮酚提取完全。（二）蒸餾法（二）蒸餾法1 1、直接萃取法、直接萃取法 利用試樣中被測成分與干擾成分在有利用試樣中被測成分與干擾成分在有機(jī)溶劑（萃取劑）中的溶解度不同，通過機(jī)溶劑（萃取劑）中的溶解度不同，通過多次萃取達(dá)到分離凈化的目的。多次萃取達(dá)到分離凈化的目的。2 2、離子對萃取法、離子對萃取法原

13、理：原理：BHBH+ +( (水相水相) )+In+In- -( (水相水相) ) BHBH+.+.InIn- - ( (水相水相) ) BHBH+.+.InIn- - ( (有機(jī)相有機(jī)相) ) （三）液（三）液- -液萃取法（液萃取法（LLELLE）pyh2006離子對萃取法離子對萃取法有機(jī)相(BH+ In-)水相(BH+ In-)+HIn H+ In-+B H+ BH+在適當(dāng)?shù)膒H介質(zhì)中柱色譜、薄層色譜、紙色譜、經(jīng)典微柱色譜等。柱色譜、薄層色譜、紙色譜、經(jīng)典微柱色譜等。（1 1）保留測定組分在柱上，洗去雜質(zhì)，）保留測定組分在柱上，洗去雜質(zhì)，再用適當(dāng)溶劑洗下組分再用適當(dāng)溶劑洗下組分（2 2）

14、保留雜質(zhì)于柱上）保留雜質(zhì)于柱上常用固定相常用固定相硅膠、氧化鋁硅膠、氧化鋁鍵合相硅膠鍵合相硅膠大孔樹脂大孔樹脂聚酰胺聚酰胺硅藻土、纖維素硅藻土、纖維素離子交換樹脂離子交換樹脂（四）色譜法（四）色譜法該方法采用的是一個類似于氣相色譜微該方法采用的是一個類似于氣相色譜微量進(jìn)樣器的萃取裝置，由一根涂布多聚量進(jìn)樣器的萃取裝置，由一根涂布多聚物固定相的熔融石英纖維從液物固定相的熔融石英纖維從液/ /氣態(tài)基質(zhì)氣態(tài)基質(zhì)中萃取待測物，并直接與中萃取待測物，并直接與HPLCHPLC或或GCGC儀儀聯(lián)用，在進(jìn)樣口（氣相色譜即為氣化室）聯(lián)用，在進(jìn)樣口（氣相色譜即為氣化室）將萃取的組分解吸附后進(jìn)行色譜分離檢將萃取的組

15、分解吸附后進(jìn)行色譜分離檢查。查。（五）固相微萃取技術(shù)（五）固相微萃取技術(shù)固相微萃取裝固相微萃取裝置置1 1、濕法消化、濕法消化（1 1）硝酸）硝酸- -高氯酸法高氯酸法（2 2）硝酸）硝酸- -硫酸法硫酸法（3 3）硫酸）硫酸- -硫酸鹽法硫酸鹽法2 2、干法消化、干法消化（不適用于含易揮發(fā)性金屬有（不適用于含易揮發(fā)性金屬有機(jī)樣品的破壞）機(jī)樣品的破壞）注意：注意：（1 1）加熱灼燒溫度控制在）加熱灼燒溫度控制在420420以下，以下，以免某些被測金屬化合物揮發(fā)。以免某些被測金屬化合物揮發(fā)。（2 2）灰化完全與否，直接影響測定結(jié)果的準(zhǔn)）灰化完全與否，直接影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確度。確度。（3 3）經(jīng)本

16、法破壞后，所得灰分往往不易溶解，）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但切勿棄去。但切勿棄去。（六）消化法（六）消化法（需要測定無機(jī)元素）（需要測定無機(jī)元素）pyh2006（五）范圍（五）范圍 指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測試方法適用的高低限濃度的條件下，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間?；蛄康膮^(qū)間。pyh2006（六）六） 耐用性耐用性 指測定條件稍有變動指測定條件稍有變動時，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)時，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗提供依據(jù)。是衡量實驗室和工作人檢驗提供依據(jù)。是衡量實驗室和工作人員之間在正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)性的員之間在

17、正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。尺度。 pyh2006第三節(jié) 常用定量分析方法n一 化學(xué)分析法 重量分析法 揮發(fā)法 萃取法 沉淀法 滴定分析法 酸堿 沉淀 配位 氧化還原 缺點:操作繁瑣 專屬性不高 微量成分準(zhǔn)確度不夠pyh2006硼砂的含量測定n取供試品取供試品1.5000g，加水，加水50ml溶解后，加甲溶解后，加甲基紅指示液基紅指示液3滴，用滴，用0.5002mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由黃色轉(zhuǎn)變?yōu)槌壬?，消耗鹽酸標(biāo)液滴定至溶液由黃色轉(zhuǎn)變?yōu)槌壬?，消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)溶液14.40ml，每，每1ml的的0.5mol/L鹽酸標(biāo)鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液相當(dāng)于準(zhǔn)液相當(dāng)于95.34mg的硼砂，求硼砂的

18、含量。的硼砂，求硼砂的含量。%9 . 19%1001.595340 . 0040 . 140. 41%硼砂0004. 15 . 05002. 0F式中：pyh2006二 可見紫外分光光度法n常用于測定生物堿，丹皮酚常用于測定生物堿，丹皮酚,盧丁盧丁,總黃酮等總黃酮等(一一) 單波長光度法單波長光度法n吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法n對照品法對照品法n標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法(二二) 計算分光光度法計算分光光度法1. 等吸收點法等吸收點法 2. 系數(shù)倍率法系數(shù)倍率法 3. 三波長法三波長法 4. 導(dǎo)數(shù)光譜法導(dǎo)數(shù)光譜法(三三) 對儀器和溶劑要求對儀器和溶劑要求ClEA%1cm1pyh2006硫酸阿托品注射液的含

19、量測定硫酸阿托品注射液的含量測定n精密量取硫酸阿托品注射液精密量取硫酸阿托品注射液2.50ml置置50ml量瓶量瓶中，加水至刻度，搖勻，得供試液；取供試液中，加水至刻度，搖勻，得供試液；取供試液2.0ml、硫酸阿托品對照液（、硫酸阿托品對照液（49.8g/ml）2.0ml，按規(guī)定的酸性染料提取法提取后，以氯，按規(guī)定的酸性染料提取法提取后，以氯仿液為空白，在仿液為空白，在420nm處測得對照管和供試管處測得對照管和供試管吸光度分別為吸光度分別為0.446和和0.444，試計算本品含硫，試計算本品含硫酸阿托品的量？酸阿托品的量？ mlmgWnAAc/99.0%1005.250446.0444.01

20、08.49%100%3對供對硫酸阿托品pyh2006 n取咖啡酸，在取咖啡酸，在165165干燥至恒重，精密稱取干燥至恒重，精密稱取10.00mg10.00mg，加少量乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至加少量乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至200mL200mL容量瓶中，加水至容量瓶中，加水至刻度線，取此溶液刻度線，取此溶液5.00mL5.00mL，置于，置于50mL50mL容量瓶中，加容量瓶中，加6mol/L6mol/L的的HCL 4mLHCL 4mL，加水至刻度線。取此溶液于，加水至刻度線。取此溶液于1cm1cm比色池中，在比色池中，在323nm323nm處測定吸光度為處測定吸光度為0.4630.463，已知該，已知該波長處

21、的波長處的 ，求咖啡酸百分含量，求咖啡酸百分含量. .9 .927%11cmE%8 .99%1009 .92711001000.102000463. 0100%3%11cmxElWDA咖啡酸pyh2006 三 薄層掃描描法一定波長的光掃描在薄層板上，薄層色譜一定波長的光掃描在薄層板上，薄層色譜有吸收紫外光或可見光的斑點或經(jīng)激發(fā)后有吸收紫外光或可見光的斑點或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點進(jìn)行掃描能發(fā)射出熒光的斑點進(jìn)行掃描薄層吸收薄層吸收掃描描法薄層熒光薄層熒光掃描描法pyh2006 測定方式測定方式 （1 1）吸收法）吸收法 適用于有紫外（可見）吸收的成分，較常用。該法又可采適用于有紫外（可見）吸收

22、的成分，較常用。該法又可采用反射法或透射法測定。實際工作中常用反射法，因為紫外用反射法或透射法測定。實際工作中常用反射法，因為紫外光不能通過玻板。光不能通過玻板。 （2 2）熒光法）熒光法 適用于有熒光性質(zhì)的成分，例如小檗堿等。該法僅采用反適用于有熒光性質(zhì)的成分，例如小檗堿等。該法僅采用反射法測定，其靈敏度比吸收法高。射法測定，其靈敏度比吸收法高。pyh2006n定量方法定量方法外標(biāo)法一點法外標(biāo)法一點法兩點法兩點法pyh2006氣相色譜的一般流程圖pyh2006 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗系統(tǒng)適應(yīng)性試驗：n色譜柱的理論塔板數(shù)n分離度n重復(fù)性n拖尾因子pyh2006n塔板理論高度（塔板理論高度（H）和理論塔

23、板數(shù)（）和理論塔板數(shù)（n）都是柱效指標(biāo)，建立方法時必測。都是柱效指標(biāo)，建立方法時必測。n = 16（tR/W）2或或 n = （tR/）2 或或 n = 5.54（tR/W1/2）2pyh2006分離方程式 n分離度（R）：是用于衡量分離效果的參數(shù)，其定義式如下：nR=1 4分離 95.4%nR=1.5 6分離 99.7%21122112)(22)(WWttWWttRRRRRtR2tR11ww1pyh2006重復(fù)性：重復(fù)性：n取各品種項下的對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。pyh2006拖尾因子：拖尾因子：n為保證測量精度，特別當(dāng)采用峰高法測量

24、時，應(yīng)檢查待測峰的拖尾因子（T）是否符合各品種項下的規(guī)定，或不同濃度進(jìn)樣的校正因子誤差是否符合要求 pyh2006實驗條件的選擇實驗條件的選擇固定相溫度 汽化室柱溫檢測室載氣檢測器ECD FID TCD NPDpyh2006（三）定量方法 npyh2006定量校正因子n定義：定義：n絕對定量校正因子：單位峰面積所代表的物質(zhì)的絕對定量校正因子：單位峰面積所代表的物質(zhì)的量。量。n相對校正因子：某物質(zhì)相對校正因子：某物質(zhì)i與所選定的基準(zhǔn)物質(zhì)與所選定的基準(zhǔn)物質(zhì)S的的絕對定量校正因子之比。絕對定量校正因子之比。iiiAWf siisiiiiwswiwiWAWAAWAWfffpyh2006定量方法n內(nèi)標(biāo)法

25、內(nèi)標(biāo)法 選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對照物選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對照物質(zhì)加入待測樣品中，以待測組分和對照物質(zhì)質(zhì)加入待測樣品中，以待測組分和對照物質(zhì)的響應(yīng)信號對比，測定待測組分的含量。的響應(yīng)信號對比，測定待測組分的含量。n內(nèi)標(biāo)的要求：內(nèi)標(biāo)的要求：n樣品中不含有；樣品中不含有；n保留時間與待測組分接近但完全分離；保留時間與待測組分接近但完全分離；n純度合乎要求。純度合乎要求。ssiisifAfAWW%100%WWfAfACsssiiipyh2006 n內(nèi)標(biāo)對比法標(biāo)準(zhǔn)樣品標(biāo)準(zhǔn)樣品）（）（）（）（Ci%Ci%Ai/AsAi/As標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣品樣品）（）（）（）（Ci%Ai/AsAi/AsCi%py

26、h2006定量方法n外標(biāo)法外標(biāo)法 用待測物質(zhì)的純品作對照物質(zhì)。以對照用待測物質(zhì)的純品作對照物質(zhì)。以對照物質(zhì)和樣品中待測組分的響應(yīng)信號相比較進(jìn)行物質(zhì)和樣品中待測組分的響應(yīng)信號相比較進(jìn)行定量。定量。n工作曲線法；外標(biāo)一點法工作曲線法；外標(biāo)一點法n不需重量校正因子，樣品中其它峰或成分不不需重量校正因子，樣品中其它峰或成分不需出盡。需出盡。isisiiAWAW pyh2006定量方法n分為歸一化法分為歸一化法n使用條件：所有組分都能產(chǎn)生信號；使用條件：所有組分都能產(chǎn)生信號； 組分的量與其峰面積成正比。組分的量與其峰面積成正比。%100%100%2211iiiinniiifAfAfAfAfAfAC%10

27、0%321niiAAAAACpyh2006 n標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法：標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法：Ais/Ax=(Cx+Cs)/Cxpyh2006高效液相色高效液相色譜譜法法n（1）反相鍵合相色譜法：）反相鍵合相色譜法：n典型的反相鍵合色譜法是用非極性固定相和典型的反相鍵合色譜法是用非極性固定相和極性流動相組成的色譜體系。極性流動相組成的色譜體系。n固定相：常用十八烷基（固定相：常用十八烷基（octadecylsily，縮寫，縮寫ODS或或C18）鍵合相；）鍵合相；n流動相：常用甲醇流動相：常用甲醇-水或乙腈水或乙腈-水。水。n非典型反相色譜系統(tǒng)，用弱極性或中等極性非典型反相色譜系統(tǒng)，用弱極性或中等極性的鍵合相和

28、極性大于固定相的流動相組成的鍵合相和極性大于固定相的流動相組成 。pyh2006（2）正相鍵合相色譜法 n固定相固定相氰基與氨基化學(xué)鍵合相氰基與氨基化學(xué)鍵合相n氰基化學(xué)鍵合相的分離選擇性與硅膠相似，但氰基化學(xué)鍵合相的分離選擇性與硅膠相似，但極性小于硅膠，即用相同的流動相及其它條件極性小于硅膠，即用相同的流動相及其它條件相同時，同一組分的保留時間將小于硅膠。相同時，同一組分的保留時間將小于硅膠。n氨基鍵合相與硅膠的性質(zhì)有較大差異，前者為氨基鍵合相與硅膠的性質(zhì)有較大差異，前者為堿性；后者為酸性。氨基鍵合相色譜柱是分析堿性；后者為酸性。氨基鍵合相色譜柱是分析糖類糖類最重要的色譜柱也稱為碳水化合物柱。

29、最重要的色譜柱也稱為碳水化合物柱。n流動相為非極性或弱極性溶劑。流動相為非極性或弱極性溶劑。pyh2006 (3)離子對色譜法：直接將離子對實際加入到離子對色譜法：直接將離子對實際加入到流動相中，用以分離離子型或可離子化化合流動相中，用以分離離子型或可離子化化合物的方法稱為離子對色譜法（物的方法稱為離子對色譜法（PIC或或IPC）該該法可分為正相離子對色譜法和反相離子對色譜法法可分為正相離子對色譜法和反相離子對色譜法（4）離子抑制色譜法）離子抑制色譜法2、膠束色譜法、膠束色譜法3、手性色譜法、手性色譜法pyh2006pyh2006n pyh2006定量法：內(nèi)標(biāo)法 外標(biāo)法 同GCpyh2006熒

30、光分析法激發(fā)光譜發(fā)射光譜（熒光光譜）nm熒光強(qiáng)度pyh2006影響熒光強(qiáng)度的外部因素影響熒光強(qiáng)度的外部因素1、溫度溫度升高，熒光效率和熒光強(qiáng)度降低。2、溶劑極性增大，波長長移，強(qiáng)度增強(qiáng)；粘度減小，強(qiáng)度減小。3、pH值NH2NH3+NHOHOHH+H+pH13 pyh2006定量方法 標(biāo)準(zhǔn)曲線 比例法 F-F0 = KC 原子吸收分光光度法 A = KC pyh2006含量測定方法的驗證pyh2006 （一）（一） 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度（accuracyaccuracy） 準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，用百分回真實值或參考值接近的程度，用百分回收率

31、表示。收率表示。 測定回收率測定回收率R R（recoveryrecovery）的具體的具體方法可采用加樣回收試驗法。方法可采用加樣回收試驗法。 pyh2006 加樣回收試驗加樣回收試驗 已準(zhǔn)確測定藥物含量已準(zhǔn)確測定藥物含量P P的真實樣品的真實樣品+ +已知量已知量A A的對照品（或的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M M%100APMRpyh2006 數(shù)據(jù)要求數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，規(guī)定的范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用用6 6次次測定結(jié)果進(jìn)行評價；或至少如制備三測定結(jié)果進(jìn)行評價；或至少如制備三個不同濃度樣品各測三次，個不同濃度樣品各測三次，用用9

32、9次測定結(jié)果次測定結(jié)果評價，。評價，。pyh2006 中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回中藥分析的準(zhǔn)確度一般用加樣回收試驗衡量。中藥回收率一般要求在收試驗衡量。中藥回收率一般要求在95-105%95-105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時，可要求在繁多時，可要求在90-110%90-110%范圍內(nèi)。范圍內(nèi)。RSDRSD一般在一般在3%3%以內(nèi)。以內(nèi)。 pyh2006 （二）精密度（二）精密度（precisionprecision） 精密度精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。多次取樣測定所得結(jié)果之間的

33、接近程度。用偏差（用偏差（d d）、）、標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差( (SDSD) )、相對標(biāo)準(zhǔn)偏相對標(biāo)準(zhǔn)偏差差( (RSDRSD) )（變異系數(shù)，變異系數(shù)，CVCV）表示。表示。 pyh2006偏差（d）：測量值與平均值之差xxdi標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD或S）12nxxSipyh2006相對標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（相對標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSDRSD），也稱變也稱變異系數(shù)（異系數(shù)（CVCV）%100 xSRSDpyh2006 1. 1. 重復(fù)性重復(fù)性 規(guī)定的范圍內(nèi)，規(guī)定的范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用取同一濃度的供試品，用6次次測定測定結(jié)果進(jìn)行評價；或至少如制備三個結(jié)果進(jìn)行評價；或至少如制備三個不同濃度樣品各測三次，不同

34、濃度樣品各測三次，用用9次測次測定結(jié)果評價。定結(jié)果評價。pyh2006 2. 中間精密度中間精密度 同一實驗室，不同同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。考察隨機(jī)變動因素的影響。果的精密度?？疾祀S機(jī)變動因素的影響。變動因素為不同日期、不同分析人員、變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備不同設(shè)備pyh2006 3. 重現(xiàn)性重現(xiàn)性 不同實驗室，不同分析人不同實驗室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法員測定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗。如建定標(biāo)準(zhǔn)采用時，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗。如建立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均性結(jié)果，協(xié)同檢驗的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。應(yīng)記載在起草說明中。 pyh2006 （三）專屬性（三）專屬性（specificityspecificity） 指指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測定