臨床血液學(xué)和血液學(xué)檢驗知識點(diǎn)

1、臨床血液學(xué)和血液學(xué)檢驗知識點(diǎn)(一)粒細(xì)胞系統(tǒng)1 .原始粒細(xì)胞(myeloblast):1018區(qū)m,胞體圓或類圓形，核占細(xì)胞的2/3以上，居中或略偏位，核染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀排列均勻，核仁25個、較小、清楚；胞漿量少，染天藍(lán)色，有透明感，無顆粒。2 .早幼粒細(xì)胞(promyelocyte):1220區(qū)m,較原粒細(xì)胞大，核染色質(zhì)較原粒細(xì)胞粗糙，染色質(zhì)顆粒開始有聚集，核仁可見或消失；胞漿染淡藍(lán)色、藍(lán)色或深藍(lán)色，含大小不等、形態(tài)不一的紫紅色顆粒(即非特異性顆粒)。3 .中幼粒細(xì)胞(myelocyte)中性中幼粒(neutrophilicmyelocyte):1018區(qū)m,胞核橢圓形或一側(cè)開始扁平，可有凹

2、陷，其凹陷處約占細(xì)胞的2/31/2，核染色質(zhì)聚集呈索塊狀，核仁隱約可見或消失；胞漿量多，染淡紅或少數(shù)區(qū)域略偏藍(lán)，含大小一致的紅色顆粒、即特異性顆粒(致少有一個區(qū)域)。嗜酸性中幼粒(eosinophilic):1520區(qū)m核與中性中幼粒相似；胞漿內(nèi)充滿粗大而均勻、排列緊密的橘紅色特異性嗜酸性顆粒。嗜堿性中幼粒(basphilic):1015區(qū)m,核圓形或橢圓形、但常常輪廓不清，核染色質(zhì)較模糊；胞漿內(nèi)及核上含有排列零亂、大小不等數(shù)量不多的紫黑色嗜堿性顆粒。4 、晚幼粒細(xì)胞(metamyelocyte)中性晚幼粒(neutropilicmetamyelocyte):1016區(qū)m,核明顯凹陷呈腎形，馬

3、蹄形，半月形，但其核凹陷程度不超過假設(shè)直徑的一半，核染色質(zhì)粗糙，排列更緊密，無核仁；胞漿量多，淺紅色，充滿中性特異性顆粒。嗜酸性晚幼粒(eosinophilicmetamyelocyte):1016區(qū)m,核形及結(jié)構(gòu)與中性晚幼粒相似；胞漿內(nèi)充滿橘紅色的、大小一致的嗜酸性特異性顆粒。嗜堿性晚幼粒(basophilicmetamyelocyte):1014區(qū)m,核固縮呈腎形，輪廓模糊；胞漿內(nèi)及核上分布有少量嗜堿性非特異顆粒。5 .桿狀核粒細(xì)胞(stabgranulocyte)中性桿狀核粒細(xì)胞(neutrophilicstabgranulocyte):1015區(qū)m核凹陷程度超過假設(shè)直徑的一半，核徑最窄

4、處大于最寬處1/3以上，呈帶狀彎曲，核染色質(zhì)粗糙呈塊狀；胞漿充滿中性顆粒。嗜酸性桿狀核粒細(xì)胞(eosinophilicstabgranulocyte):1116區(qū)m核與中性桿狀相似；漿內(nèi)充滿嗜酸性顆粒。嗜堿性桿狀核粒細(xì)胞(basophilicstabgranulocyte):1012區(qū)mi核呈模糊桿狀；胞漿內(nèi)及核上分布有少量嗜堿性顆粒。6 .分葉核粒細(xì)胞(segmentedgranulocyte) 中性分葉核粒細(xì)胞(neutrophilicsegmentedgranulocyte):1014區(qū)m,核呈分葉狀，葉與葉之間有細(xì)絲相連或全斷開，常分25葉，核染色質(zhì)已濃集呈粗的小塊狀，染深紫紅色；胞漿

5、豐富，內(nèi)含淡紅色均勻細(xì)小顆粒。 嗜酸性分葉核粒細(xì)胞(eosinophilicsegmentedgranulocyte):1116區(qū)mn,核多分2葉，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)與中性分葉核相似；胞漿內(nèi)充滿粗大均勻一致的橘紅色嗜酸性顆粒。嗜堿性分葉核粒細(xì)胞(basophilicsegmentedgranulocyte):1012區(qū)m,核可分34葉或分葉不明顯；胞漿分布有少量大小不等的紫黑色嗜堿性顆粒。(二)紅細(xì)胞系統(tǒng)原始紅細(xì)胞(pronormoblast)：1520區(qū)m,呈圓形或橢圓形，邊緣常呈鈍角狀或瘤狀突起，核呈圓形，居中或偏位，約占細(xì)胞體的4/5左右，核染色質(zhì)呈顆粒狀較原粒細(xì)胞粗而密集，核仁13個不等，且

6、大小不一，形狀不規(guī)則，呈淺藍(lán)色或暗藍(lán)色；胞漿量少，染深藍(lán)色、不透明，有油畫藍(lán)感，無顆粒。早幼紅細(xì)胞(earlynormoblast):1018區(qū)m,核圓形或橢圓形，約占細(xì)胞的2/3以上，核染色質(zhì)顆粒有濃集現(xiàn)象，較原紅細(xì)胞粗糙，核仁模糊或消失；胞漿量增多，染不透明藍(lán)色或深藍(lán)色，邊緣可見瘤狀突起。中幼紅細(xì)胞(polychromaticnormoblast)：815區(qū)m核圓形，約占細(xì)胞的1/2，核染色質(zhì)凝聚呈條索狀或塊狀，中間有明顯空隙，如壓碎餅干樣或打碎墨硯感，無核仁；胞漿量相對較多，漿內(nèi)由于已合成不等量的血紅蛋白，可染呈不同程度的嗜多色性。晚幼紅細(xì)胞(orthochromaticnormobla

7、st):710m,核圓形居中或偏位，占細(xì)胞的1/2以下，核染色質(zhì)致密聚集成結(jié)構(gòu)不清的紫黑色團(tuán)塊狀，無核仁；胞漿量較多，因已合成大量血紅蛋白，常染淺灰紅色或淺紅色。網(wǎng)織紅細(xì)胞(reticulocyte):7.27.5區(qū)m,為晚幼紅細(xì)胞剛脫核而成，是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，瑞氏染色為多嗜性紅細(xì)胞,用煌焦油藍(lán)活體染色后在細(xì)胞內(nèi)可見藍(lán)色細(xì)顆?；虺示€狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。紅細(xì)胞(erythrocyte):正常紅細(xì)胞平均為7.2止m,呈雙面微凹之圓盤狀，中央較薄，染色淺，邊緣較厚，染色深，呈粉紅色，無核。(三)單核細(xì)胞系統(tǒng)原始單核細(xì)胞(monoblast):1520小胞體圓形或橢圓形，核較大圓形或類圓形，核染色質(zhì)纖

8、細(xì)，呈疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，核仁13個；胞漿量較其它原始細(xì)胞豐富，灰藍(lán)色，不透明，邊緣不規(guī)則或有偽足狀突起。幼稚單核細(xì)胞(promonocyte):1525區(qū)m,核圓形或不規(guī)則形，易見扭曲、凹陷、切跡等改變，核染色質(zhì)較原始單核細(xì)胞粗糙疏松，核仁可有可無；胞漿淺灰藍(lán)色，不透明，可見細(xì)小顆粒。單核細(xì)胞(monocyte):1220區(qū)m,核形態(tài)常不規(guī)則，有腎形，馬蹄形，"S'形，分葉狀，筆架形等，核染色質(zhì)疏松呈絲網(wǎng)狀或條紋狀結(jié)構(gòu)，無核仁；胞漿量較多，染不透明的灰藍(lán)色，可見細(xì)小紅色顆粒。(四)淋巴細(xì)胞系統(tǒng)1 .原始淋巴細(xì)胞(lymphoblast):1018區(qū)陰胞體圓形或橢圓形，核呈圓形或橢

9、圓形，核染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀，核仁12個；胞漿量少，呈淡藍(lán)色，透明，無顆粒。2 .幼稚淋巴細(xì)胞(prolymphocyte):1016區(qū)簿核圓形或橢圓形，核染色質(zhì)仍較細(xì)致，核仁可有可無；胞漿量較少，淡藍(lán)色，偶見有少許紅色顆粒。3 淋巴細(xì)胞(lymphocyte)大淋巴細(xì)胞：1215m,核圓形稍偏于一側(cè)，核染色質(zhì)排列緊密均勻，深紫紅色；胞漿量相對較多，染透明淡藍(lán)色，可有少量大小不等的紅色嗜天青顆粒。小淋巴細(xì)胞：69區(qū)mi核相對較小，呈圓形，核染色質(zhì)緊密呈大塊狀，結(jié)構(gòu)不清楚，染深紫紅色；胞漿極少，似裸核樣，如可見則呈淡藍(lán)色，一般無顆粒。(五)漿細(xì)胞系統(tǒng)1 .原始漿細(xì)胞(plasmablast):141

10、8區(qū)m,胞體圓形或橢圓形，核圓形，占細(xì)胞的2/3以上，居中或偏位，核染色質(zhì)呈粗顆粒網(wǎng)狀，染紫紅色，核仁25個；胞漿量多，染深藍(lán)色，不透明，無顆粒。2 .幼稚漿細(xì)胞(proplasmacyte):1216xm,胞體多呈橢圓形，核圓形或橢圓形，占細(xì)胞的1/2，居中或偏位，核染色質(zhì)較原漿細(xì)胞粗糙緊密，開始聚集，染深紫紅色，核仁模糊或消失；胞漿量多，深藍(lán)色或紫藍(lán)色或呈藍(lán)色火焰狀，不透明，有時可有空泡及少數(shù)嗜天青顆粒。3 .漿細(xì)胞(plasmacyte):815xm,核明顯縮小，圓形，占細(xì)胞的1/3以下，偏于一側(cè)，核染色質(zhì)濃集成塊狀，常排列呈車輪狀，無核仁；胞漿量豐富，染藍(lán)色或紫藍(lán)色，不透明，有時有泡沫

11、感，漿內(nèi)可含有小空泡及/或少量嗜天青顆粒，偶見胞漿中有較大的紅色或淡藍(lán)色透明的球狀物，稱Russell小體，是球蛋白聚集而成。(六)巨核細(xì)胞系統(tǒng)1 .原始巨核細(xì)胞(megakaryoblast):1530區(qū)m,胞體圓形或不規(guī)則形，核大，呈圓形或不規(guī)則形，核染色質(zhì)較其他原始細(xì)胞粗，呈粗網(wǎng)狀或細(xì)條索狀結(jié)構(gòu)，染深紫紅色，核仁23個，淡藍(lán)色，不清晰，不規(guī)則；胞漿量較少，不均勻，不規(guī)則，染深藍(lán)色，無顆粒。2 .幼稚巨核細(xì)胞(promegkaryocyte):3050用外形不規(guī)則，核亦不規(guī)則，有重疊，可扭轉(zhuǎn)呈腎形或分葉狀，核染色質(zhì)呈粗顆?；虼志W(wǎng)狀或局部濃集呈小塊狀，排列緊密，核仁可有可無；胞漿量增多，常有

12、偽足狀突出，染藍(lán)色或淺藍(lán)色，在近核處出現(xiàn)或多或少的很細(xì)小紅色嗜天青顆粒。3 巨核細(xì)胞(megakarycyte)顆粒型巨核細(xì)胞：4070mi可達(dá)100區(qū)mi外形不規(guī)則，核較大，形態(tài)不規(guī)則，多呈分葉狀，核染色質(zhì)較粗糙，排列緊密呈團(tuán)塊狀，紫紅色，無核仁；胞漿量豐富，染粉紅色，夾雜有藍(lán)色，內(nèi)含大量細(xì)小紅色顆粒，常聚集呈簇，但無血小板形成。產(chǎn)板型巨核細(xì)胞：4070ml可達(dá)100區(qū)ml形態(tài)大致與顆粒型巨核細(xì)胞相似，唯有不同的一點(diǎn)是胞漿內(nèi)充滿細(xì)小的紅色顆粒及數(shù)量不等的血小板。裸核型巨核細(xì)胞：是產(chǎn)板型巨核細(xì)胞的胞漿解體后，釋放出大量血小板，僅剩一個細(xì)胞核，稱之為裸核。4 .血小板(platelet):胞體很

13、小，24區(qū)m呈圓形、橢圓形，逗點(diǎn)狀，不規(guī)則形，中心部位有細(xì)小紫紅色顆粒，無細(xì)胞核，涂片上血小板常三五成群堆集出現(xiàn)。(七)其他細(xì)胞1 組織嗜細(xì)胞(tissuebasophiliccell)：又稱肥大細(xì)胞(mastcell),1220小成呈圓形，橢圓形，梭形，三角形等，核小，呈圓形或橢圓形，居中或偏位，核染色質(zhì)模糊，結(jié)構(gòu)不清；胞漿充滿圓形、大小一致的深紫色嗜堿性顆粒。2 .內(nèi)皮細(xì)胞(endothelialcell):822區(qū)mi形態(tài)極不規(guī)則，多呈梭形，核呈圓形或橢圓形，核染色質(zhì)呈網(wǎng)狀，多無核仁；胞漿量少，染淡藍(lán)色，邊緣常模糊不清，常沿核長軸的兩側(cè)或一端呈尾狀伸出，可有細(xì)小紫紅色顆粒。3 纖維細(xì)胞(

14、fibrocyte)：胞體較大，不規(guī)則，多為長尾形，核圓形或橢圓形(1數(shù)個)，核染色質(zhì)呈或細(xì)或粗的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，核仁12個，不清晰,成熟者無核仁；胞漿豐富，多在細(xì)胞兩端，染淡藍(lán)色，邊界模糊，內(nèi)含纖維網(wǎng)狀物及少許嗜天青顆粒。4 .成骨細(xì)胞(osteoblast):胞體較大，2040m,長橢圓形或不規(guī)則形，單個或多個成群分布，核圓形或橢圓形，常偏于細(xì)胞一側(cè)，核染色質(zhì)排列呈粗網(wǎng)狀，染深紫紅色，核仁可有13個；胞漿豐富，染深藍(lán)色或灰藍(lán)色，邊緣常呈模糊云霧狀。5 .破骨細(xì)胞(osteoclast):胞體巨大，60100m形態(tài)不規(guī)則，頗象巨核細(xì)胞，核小、數(shù)量較多，3100個不等，圓形或橢圓形，大小大致相等，邊

15、緣清晰，彼此獨(dú)立，無核絲相連，隨意排列，核染色質(zhì)呈粗網(wǎng)狀，幾乎每個核都有一個藍(lán)色核仁；胞漿豐富，染淡藍(lán)色或淺紅色，含大小不等的紫紅細(xì)小顆粒。6 .脂肪細(xì)胞(fattycell):3050區(qū)m胞體圓形或橢圓形，核較小，形狀不規(guī)則，常被擠壓在一邊，核染色質(zhì)呈細(xì)致密網(wǎng)狀，無核仁；胞漿內(nèi)充滿大量空泡。7 .組織細(xì)胞(histiocyte):胞體較大，2050區(qū)m形態(tài)多樣，一般呈圓形或橢圓形及不規(guī)則形，核可有圓形，橢圓形，腎形，核染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，核仁24個不等；胞漿多少不一，染色也常不一致，有深藍(lán)，淡藍(lán)，灰藍(lán)色等，邊緣多不規(guī)則或不清楚，無顆?；蚝猩倭炕蚣?xì)或粗或粗細(xì)不一的嗜天青顆粒，可有空泡或含異

16、物等。8 吞噬細(xì)胞(phagocyte)：不是一種獨(dú)立的細(xì)胞，而是胞漿內(nèi)含有吞噬物質(zhì)的一組細(xì)胞的總稱。具有吞噬功能的細(xì)胞有單核細(xì)胞、組織細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，纖維細(xì)胞等。吞噬細(xì)胞的形態(tài)極不一致，由吞噬物的類型及吞噬物的多少而定。其胞核圓形、橢圓形或不規(guī)則形，常一個核，有時為雙核，核常被擠壓至一側(cè)，核染色質(zhì)較疏松，核仁可有可無。胞漿多少不一，淡藍(lán)色或淡紅色，常有空泡，并有數(shù)量不等的吞噬物，吞噬物有空泡、色素、顆粒、有核細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、碳核、細(xì)菌等。有時吞噬細(xì)胞成堆存在。第二節(jié)異常血細(xì)胞形態(tài)學(xué)(4學(xué)時)了解：初步認(rèn)識各種異常血細(xì)胞形態(tài)，并畫出每一臺顯微鏡下的細(xì)胞圖像。血細(xì)胞形態(tài)在病理情況下，可

17、在胞體、胞核、胞漿等方面發(fā)生異常改變。(一)粒細(xì)胞系統(tǒng)形態(tài)異常1白血病時粒細(xì)胞改變胞體：大小不等、畸形。胞漿：Auer小體，顆粒粗大、增多。Auer小體：是在細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)均勻一致的紅色細(xì)棒狀小體。產(chǎn)生原因是嗜天青顆粒融合而成。常見于急性非淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞漿內(nèi)。胞核：畸形、切跡、折疊、凹陷、扭曲、分葉等。如急淋時核易破碎，核分裂象增多。核漿比：增大、發(fā)育不平衡(M23。核仁：大、數(shù)量增多、亦可不清楚。2巨大粒細(xì)胞：可見于中、晚、桿、分階段。常見巨晚幼、巨桿狀。形態(tài)特征：與同期相比，胞體大、核大、核染色質(zhì)較同階段細(xì)胞細(xì)致。形成原因：核酸代謝障礙。常見疾?。壕抻棕?、M6MDSM2b抗葉酸類藥

18、物治療后。3中性粒細(xì)胞分葉過多：分5葉以上，常見于巨幼貧、嚴(yán)重感染恢復(fù)期。4粒細(xì)胞中毒變性改變中毒顆粒：胞漿顆粒大小不等、分布不均、染紫黑色或深紫紅色。見于嚴(yán)重感染、大面積燒傷等?？张荩簼{或核內(nèi)空泡。見于嚴(yán)重感染。杜勒小體（Dohle）：藍(lán)斑，在細(xì)胞漿內(nèi)直徑約12m的藍(lán)色區(qū)域。見于嚴(yán)重感染，肝硬化等。核變性：核固縮、核腫脹、核碎裂、核溶解。見于嚴(yán)重感染。（二）紅細(xì)胞系形態(tài)異常1 巨幼紅細(xì)胞形態(tài)特征：與同期細(xì)胞相比，胞體大、核大、核染色質(zhì)細(xì)致、排列疏松“幼核老漿”。產(chǎn)生原因：核酸代謝障礙。常見疾?。壕抻棕殹6MDS抗葉酸治療后等。2 低色素性紅細(xì)胞形態(tài)特征：與同期細(xì)胞相比，漿量少、嗜堿性、著色

19、偏藍(lán)，核染色質(zhì)無明顯異常改變“幼漿老核”。成熟紅細(xì)胞中心淡染區(qū)明顯擴(kuò)大。產(chǎn)生原因：Hb合成障礙（不能說缺鐵）。常見疾?。篒DA、Hb病、慢性感染性貧血等。3 紅細(xì)胞大小不等、形態(tài)不整：見于各種增生性貧血。4 .球形紅細(xì)胞：6.4中心淡染區(qū)明顯縮小或消失。見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥。5 .橢圓形紅細(xì)胞：橫徑/長徑0.78。見于遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥。6 靶形紅細(xì)胞：見于低色素性貧血、地貧等。7 嗜多色性紅細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞染灰藍(lán)色或淺灰色。多表示骨髓造血功能活躍，多見于溶貧、失血性貧血等。8 嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞：瑞氏染色后在紅細(xì)胞漿中有藍(lán)黑色細(xì)小顆粒存在。表示骨髓再生加速。鉛中毒時多見。9 裂紅細(xì)

20、胞：即紅細(xì)胞碎片?？梢娪谖⒀懿⌒匀茇?、DIC及損傷性。10紅細(xì)胞中出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)豪-周小體（Howoll-Jolly，s）：屬核殘余物?？梢娪诰抻棕?、溶貧、脾切除后、鉛中毒等?？úōh(huán)（Cabot,sring）:可見于鉛中毒、巨幼貧等。（三）淋巴細(xì)胞形態(tài)異常1 異型淋巴細(xì)胞：分漿細(xì)胞型、單核細(xì)胞、幼稚型?？梢娪诔鲅獰?、傳單及其它病毒感染。2 原、幼淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞白血病、淋巴瘤等。（四）單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)形態(tài)異常1 惡組：多形性、多核異組。2 急單、類單核細(xì)胞白血病反應(yīng)等。3 戈謝細(xì)胞（Gaucher）：戈謝病。4尼曼-皮克細(xì)胞（Niemann-pick）：尼曼-皮克病。（五）巨核細(xì)胞系統(tǒng)形態(tài)

21、異常1 幼巨產(chǎn)板：ITP。2 小巨核：大小與成熟淋巴細(xì)胞相似，形態(tài)不規(guī)則，有偽足突起，核染色質(zhì)濃集，無明核仁。可見于白血病、MD潴。3 巨大血小板：見于巨大血小板綜合癥。第二章檢驗的基本方法第一節(jié)制片方法（1學(xué)時）掌握：制片及染色的基本方法。了解：染液及緩沖液的配制方法。一、骨髓制片1 第一次骨髓穿刺患者，骨髓涂片8張以上或?qū)⑺楣撬枰喝客客?，同時涂外周血片4張。2 復(fù)查病人，骨髓涂片4張，同時涂外周血片2張。二、脫落細(xì)胞制片1 一般包塊穿刺，涂片12張。2 胸腹水及尿液標(biāo)本，取50ml以上離心（3000r/分）10分鐘，取沉淀物涂片2張。3 腦脊液標(biāo)本，將全部送檢物離心（3000r/分）沉

22、淀，取沉淀物涂片1張。4 痰液標(biāo)本，取可疑部分涂片35張。第二節(jié)血細(xì)胞及脫落細(xì)胞瑞氏-姬姆薩染色（1學(xué)時）一、試劑1 .瑞氏染色液：稱1克瑞氏染粉，加入1瓶甲醇（分析純，約500ml）中混勻，室溫放置3個月后應(yīng)用或每天混勻1次，放置室溫連續(xù)7天后應(yīng)用。2 .姬姆薩染色液：稱0.5克姬姆薩（吉氏）染粉，加入33ml丙三醇（甘油，分析純）中混勻，放56水浴箱中3小時以上，中間混勻35次，取出冷確至室溫，再加入33ml甲醇（分析純）中，混勻即可應(yīng)用。3 .磷酸鹽緩沖液（PH=6.46.8）:磷酸二氫鉀（無水，分析純）5克磷酸氫二鈉（含12.H2O,分析純）5克蒸餾水10000ml溶解混勻備用4 .姬

23、姆薩染色液一磷酸鹽緩沖液混合比例：姬姆薩染色液約23ml,加磷酸鹽緩沖液約3040ml混勻即可應(yīng)用。每天上下午各新鮮配制1次。二、染色方法1 .血或骨髓涂片在瑞氏染色液中固定58秒鐘。2 .放入姬姆薩染色液一磷酸鹽緩沖液混合液中染色1520分鐘，慢性粒細(xì)胞白血病患者涂片染色30分鐘，取出涼干或用濾紙吸干即作鏡下觀察。第三、四節(jié)血象及骨髓象檢驗分析步驟（2學(xué)時）掌握：血象檢驗結(jié)果及骨髓象檢驗結(jié)果的正常值，正常骨髓象的正常形態(tài)特征。熟悉：常見血液病的臨床表現(xiàn)及血象、骨髓象的形態(tài)學(xué)改變特征。了解：其他系細(xì)胞的正常形態(tài)及異常形態(tài)。（一）血象檢驗1在做骨髓穿刺的同時須做血象檢驗BRCRCWBCPLT計數(shù)

24、。涂片染色觀察。紅細(xì)胞形態(tài)有無異常。白細(xì)胞形態(tài)有無異常。血小板形態(tài)及數(shù)量有無異常。有無寄生蟲及其他異常細(xì)胞。2、作用提供思路一系減少：HbJ、WB吸PLT正常一單純貧血。WBC；、Hb及PLT正常一粒細(xì)胞減少或缺乏。PLT；Hb及WBCE常fITP。二系減少：Hb及PLTJWBCE常ITP、急白、MDS巨幼貧。三系減少：HbPLT及WB嶼J一AA急白、巨幼貧。提供診斷依據(jù)骨髓象相似，血象有區(qū)別如：球形RBCJ冷骨髓紅系T、血象有核紅T、球形RB。IDA骨髓紅系T、血象無有核紅、RBC心淡染區(qū)擴(kuò)大。血象相似，骨髓象不同如：AA>血象三系（、骨髓巨核細(xì)胞（及無白血病細(xì)胞。非白血病性白皿病血象

25、三系（、骨髓有白血病細(xì)胞。MA血象三系；,骨髓粒系、紅系、巨核系均有巨幼變。血象有明顯變化、骨髓無變化如：傳單血象淋巴細(xì)胞3異淋T（>10%、骨髓無變化。傳淋血象淋巴細(xì)胞3異淋（、骨髓無變化。骨髓有變化、血象無明顯變化如：戈謝病骨髓有戈謝細(xì)胞、血象無明顯變化。尼曼-皮克病骨髓有尼曼-皮克細(xì)胞、血象無明顯變化。（二）骨髓象檢查凡疑有血液系統(tǒng)或并發(fā)血液系統(tǒng)疾病均應(yīng)作骨髓穿刺檢查1、適應(yīng)癥檢查血常規(guī)有問題：血象增高、減少。臨床體征有不明原因貧血、出血、發(fā)熱、骨痛、肝脾淋巴結(jié)腫大。2、禁忌癥由于凝血因子缺陷引起的出血性疾病，如血友病。晚期妊娠作骨穿檢查要慎重。小兒及不合作患者不宜作胸骨穿刺術(shù)。3

26、、標(biāo)本采集：一般由臨床醫(yī)生作。采集部位：胸骨、脊突、骼骨、脛骨粗?。?歲以下小兒）。采集質(zhì)量保證無菌、嚴(yán)防感染。死亡病例應(yīng)在30分鐘內(nèi)完成。量不能多，一般不超過0.2ml,否則導(dǎo)致血?。ɑ煅绊懪卸ㄔ\斷。對某些疾病采取多部位穿刺可提高診斷率。如轉(zhuǎn)移癌、骨髓瘤等在病變或骨痛部位穿刺其陽性率較高；如AA多部位穿刺有利確診。涂片質(zhì)量保證推片時角度太大、太快都使涂片厚，反之則薄。先涂血片、后涂骨髓片。骨髓抽太多，制片人應(yīng)將剩骨髓液的玻片斜立，用棉花在斜面的底部吸去部分血液，再行涂片，底片不能丟。作好標(biāo)識：姓名、血片（B）、骨髓（附。涂片中前3張涂片，對估計PLT量較好。判定骨髓取材滿意的幾項指標(biāo)抽

27、吸骨髓時病人有特殊的痛感。骨髓液及涂片均可見骨髓小粒（骨髓渣）和脂肪滴。顯微鏡觀察涂片可發(fā)現(xiàn)骨髓特有細(xì)胞。含有大量幼粒幼紅細(xì)胞，粒細(xì)胞桿狀核與分葉核的比值大于血片中的比值。干抽的概念：是指非技術(shù)錯誤或穿刺位置不當(dāng)而抽不出骨髓液或只得到少量血液。其常見疾病有：原發(fā)性或繼發(fā)性骨髓纖維化。骨髓增生極度活躍，細(xì)胞過于濃集。如：白血病、真紅。骨髓增生減低：AA。腫瘤骨髓浸潤：惡淋、MM轉(zhuǎn)移癌等。4、檢驗的方法及步驟（1）低倍鏡觀察取材、涂片、染色情況：采用“良好”、“尚可”、“欠佳”等標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價。判定骨髓有核細(xì)胞增生程度：有核細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞之比，分五級：增生極度活躍：平均約1：1增生明顯活躍：平均約

28、1：10增生活躍：平均約1：20增生減低：平均約1：50增生極度減低：平均約1：200觀察涂片尾部及邊緣有無大的或成群（團(tuán)）的異常細(xì)胞，同時計數(shù)全片巨核細(xì)胞。（2）油鏡觀察選擇部位：在涂片體、尾交界處，選擇細(xì)胞分布比較均勻處。有核細(xì)胞分類計數(shù)：可根據(jù)增生程度確定分類總數(shù)增生減低及極度減低：分100或200個細(xì)胞。增生活躍：分200或500個細(xì)胞。增生明顯活躍及極度活躍：分500個細(xì)胞。觀察細(xì)胞形態(tài)粒系：中毒顆粒、空泡、有無巨幼變粒細(xì)胞、Aure小體等。紅系：幼紅細(xì)胞及成熟紅細(xì)胞有無異常變化。巨核系：小巨核、幼巨產(chǎn)板、巨大血小板、估計血小板量。注意有無寄生蟲。判定低倍鏡下觀察到的異常細(xì)胞性質(zhì)。（

29、3）計算結(jié)果根據(jù)分類結(jié)果計算出各系統(tǒng)及各階段細(xì)胞的百分率。計算粒紅比值：粒細(xì)胞系總和/紅細(xì)胞系總和。（4）填寫報告根據(jù)骨髓象分類結(jié)果，按報告單要求逐項進(jìn)行填寫。做好骨髓象所見的形態(tài)特征描述。（5）骨髓報告分析及意見取材、涂片、染色情況：良好、尚可、欠佳。骨髓增生程度，粒：紅=?:?。粒系：紅系：淋巴系或單核系：全片巨核細(xì)胞數(shù)，根據(jù)血小板分布估計其量是多、正常、少。有無寄生蟲。血片分類及所見進(jìn)行描述。寫出診斷意見：根據(jù)血象、骨髓象和細(xì)胞化學(xué)染色所見，結(jié)合臨床資料，提出具體診斷意見或供參考的意見。診斷意見分為以下幾種：肯定性診斷：骨髓有特異性變化，臨床表現(xiàn)又典型者，如各種白血病、MAMM轉(zhuǎn)移癌、戈

30、謝病、尼曼-皮克病等。支持性診斷：血象、骨髓象有形態(tài)改變，可解釋臨床表現(xiàn)，如IDA、AA溶貧等。可疑性診斷：骨髓象有部分變化或出現(xiàn)少量異常細(xì)胞，臨床表現(xiàn)又不典型，可能為某種疾病的早期或前期或不典型病例者，如難治性貧血等，要結(jié)合臨床、作相應(yīng)的檢查，并動態(tài)觀察其變化。排除性診斷：如臨床上懷疑ITP的患者，其骨髓中血小板易見（不少），巨核細(xì)胞無成熟障礙，即可排除ITP的可能性。形態(tài)學(xué)描寫：骨髓有些改變，但提不出上述性質(zhì)診斷意見，可簡述其形態(tài)學(xué)變化的主要特點(diǎn)，并建議作動態(tài)觀察，盡可能提出進(jìn)一步檢查的建議。填寫報告日期并簽名。5、骨髓象檢查的注意事項由于細(xì)胞形態(tài)變化多種多樣，故觀察細(xì)胞時不能根據(jù)某一、二

31、個特點(diǎn)就輕易作出肯定性診斷或否定性診斷，要全面觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，結(jié)合臨床綜合分析作出判斷。同一病人的骨髓涂片，可因制作涂片不佳（太厚、太?。?、染色不好、選擇分類或觀察的部位不當(dāng)均易導(dǎo)致判斷錯誤。觀察細(xì)胞形態(tài)要認(rèn)識到血細(xì)胞的發(fā)育是一個連續(xù)不斷的過程，對各系細(xì)胞劃分為若干階段是人為劃分的，在實(shí)際觀察中常會遇到一些細(xì)胞既有上一階段的某些特征，又有下一階段的某些特點(diǎn)，由于血細(xì)胞是向成熟方向發(fā)育，故一般遇此情況歸入下一階段。對于個別介于兩系統(tǒng)之間的細(xì)胞難以判斷時，可采用大數(shù)歸類法（即將此類難以判斷的細(xì)胞歸入細(xì)胞多的細(xì)胞系）。如在紅系較多的骨髓片中，將介于漿細(xì)胞與幼紅細(xì)胞之間的細(xì)胞歸入紅系細(xì)胞；介于原粒

32、細(xì)胞與原淋巴細(xì)胞之間的細(xì)胞，一般情況原粒細(xì)胞較原淋巴細(xì)胞易見，故應(yīng)歸入原粒；如為急性淋巴細(xì)胞白血病的病人，應(yīng)歸入原淋巴細(xì)胞。切忌在急性白血病骨髓象中分出多種原始細(xì)胞（如原粒、原單、原淋都有）的現(xiàn)象。急性白血病時，各系統(tǒng)原始細(xì)胞在理論上雖各有特征，但有時及為相似，很難鑒別，這時應(yīng)注意觀察伴隨出現(xiàn)的幼稚細(xì)胞、成熟細(xì)胞，并與其比較，同時要結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色、血象細(xì)胞形態(tài)等綜合考慮，推測原始細(xì)胞的歸屬。有時可見到難以識別的細(xì)胞，可參考涂片上其他細(xì)胞后作出判斷，如仍不能確定可歸入“分類不明細(xì)胞”，但不宜太多，若有一定數(shù)量，則應(yīng)通過細(xì)胞化學(xué)染色、集體閱片或會診等方法弄清類別。骨髓涂中巨核細(xì)胞減少或血小板減，

33、而外周血象中血小板數(shù)正常時，則往往是由穿刺凝固或涂片凝固所致。作骨髓細(xì)胞學(xué)檢查時，應(yīng)同時作血象細(xì)胞學(xué)檢查，這有助于疾病的診斷及化療后療效判斷。（三）判定骨髓計數(shù)值的高低根據(jù)骨髓各系統(tǒng)各階段細(xì)胞的計數(shù)值與其相應(yīng)的X±SD的離散程度進(jìn)行判斷。計數(shù)值：在X士1SD以內(nèi)視為正常在X1SD以下視為減低在X+1SD2S戈間視為增高在X2SD以上為明顯增高從第五節(jié)起以下的實(shí)驗課均讓學(xué)生自已動手做，教師輔導(dǎo)。第五節(jié)大致正常骨髓象（4學(xué)時）掌握：血象檢驗結(jié)果及骨髓象檢驗結(jié)果的正常值，骨髓各系統(tǒng)各階段細(xì)胞的正常形態(tài)特征，正常骨髓象報告的書寫方法。熟悉：其他系細(xì)胞的正常形態(tài)。一般符合列情況者，可視為大致正

34、常骨髓象。1 骨髓有核細(xì)胞增生活躍。2 粒紅比值：24：1。3 各系統(tǒng)各階段細(xì)胞比值在正常范圍，形態(tài)無明顯異常。粒系：約占4060%其中原粒2%早幼粒5%中性中幼粒8%12%，中性晚幼粒10%15%，中性桿狀核15%20%，中性分葉核12%20%且桿狀分葉，嗜酸5%嗜堿1%紅系：約占20%25%原紅1%早幼紅5%,以中、晚幼紅細(xì)胞為主、各約占10%，形態(tài)無異常。淋巴細(xì)胞系：約占1525%均為成熟淋巴細(xì)胞，原幼淋巴細(xì)胞小兒偶見。單核及漿細(xì)胞系：各4%無原幼單及原幼漿細(xì)胞。巨核系：通常在1.5x3cm的涂片膜上，可見735個巨核細(xì)胞。其中原巨0或罕見，幼巨05%，顆粒巨1027%，產(chǎn)板巨44%60

35、%，裸核030%。血小板易見，呈堆存在。其它細(xì)胞：可見少量非造血細(xì)胞，如組織細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肥大細(xì)胞、破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等。核分裂象少。無異常細(xì)胞及寄生蟲。各系細(xì)胞形態(tài)正常。第六節(jié)臨床血液生化和血細(xì)胞化學(xué)一、細(xì)胞化學(xué)染色（4學(xué)時）掌握：NAP染色、鐵粒染色、PO難色方法、結(jié)果判定、正常值及臨床意義。熟悉：NA磔色、鐵粒染色、PO磔色方法的試劑配制。了解：NA磔色、鐵粒染色、PO磔色方法的。（一）堿性磷酸酶染色（NAP）鈣鈷法1. 原理細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶在PH9.29.8時，將底物（3-甘油磷酸鈉水解，產(chǎn)生磷酸根，后者與其質(zhì)液中的鈣離子作用形成磷酸鈣，再與硝酸鈷起反應(yīng)，形成磷酸鈷，最后

36、與硫化銨作用形成硫化鈷黑色沉淀定位于胞漿中。2. 試劑（1）備用試劑：95濃醇2%CaC2l2%；肖酸鉆1臉化鏤B-甘油磷酸鈉Tris-HCl緩沖液（PH9.5）:Tris6g溶于400ml水中,加0.1MHCl80ml,調(diào)PH9.5,加水至500ml（2）孵育液（每次必須新鮮配制）：Tris緩沖液20ml，2%CaC2l20ml,B甘油磷酸鈉200mg3. 方法（1）新鮮血片用95%乙醇固定10min,取出，自然干燥。（2）將孵育液放入45水浴箱中先預(yù)溫5min后，再放入涂片孵育30min,取出涂片（不沖洗）立即放入2%硝酸鈷中5min，取出用自來水充分沖洗干凈。（3）放入1%流化鏤溶液（每

37、次必'須新鮮配制）中2min,用自來水沖洗干凈，用核固紅復(fù)染30min。4. 結(jié)果陽性：中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)有棕黑色沉淀。陰性：中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)無棕黑色沉淀。5. 正常參考值成人：積分80分左右。兒童：因年齡而異。6. 臨床意義（1）細(xì)菌：積分球菌TT>GN桿菌，病毒減低或無變化。但NAP積分正常/；,不能除外細(xì)菌感染。（2）慢粒JJ,類白TT"（3） ALLT,ANLLJ。（4） AATT,PNHE常/J。（5）惡組JJ,反應(yīng)性組織細(xì)胞增多TTT。（6）增性紅細(xì)胞增多癥T,繼發(fā)性紅細(xì)胞增多正常。（7）激素治療后NAPT。（8）妊娠期NAPT。7. 質(zhì)量保證（1）孵育液、1

38、%硫化銨每次實(shí)驗必須新鮮配制。（2） Tris-HCl緩沖液的PH應(yīng)控制在9.29.8之間。（3）溫度應(yīng)嚴(yán)格控制在45左右（上下不超過1）。（4）涂片在孵育液中準(zhǔn)確溫育30分鐘。（5）涂片從孵育液中取出時不能沖洗，應(yīng)直接放入硝酸鈷，否則實(shí)驗失敗。（6）涂片從硝酸鈷中取出時應(yīng)用自來水沖洗3分鐘，否則涂片太臟，結(jié)果不好觀察。（7）每次染色必須作對照。（二）鐵染色1. 原理骨髓小粒中的含鐵血黃素稱細(xì)胞外鐵，其中的三價鐵與分子中的蛋白質(zhì)結(jié)合不牢固，經(jīng)稀鹽酸處理后而游離，并能在酸性亞鐵氰化鉀溶液中產(chǎn)生普魯士藍(lán)反應(yīng)。細(xì)胞內(nèi)鐵也可用此法顯示。根據(jù)反應(yīng)的強(qiáng)弱了解骨髓中鐵的含量。2. 試劑（1）酸性亞鐵氰化鉀溶

39、液200g/L亞鐵氰化鉀溶液5份濃鹽酸1份取200g/L亞鐵氰化鉀溶液置于試管中，緩緩滴加濃鹽酸，邊滴邊搖勻，至出現(xiàn)白色沉淀，再滴加200g/L亞鐵氰化鉀溶液，亦邊滴邊搖勻，至白色沉淀消失為止，備用。（2）2g/L核固紅硫酸鋁溶液取硫酸鋁2g溶于100ml蒸餾水中，再加入核固紅0.2g，置37水浴中1小時，并隨時振搖，使溶解，過濾后使用。3. 方法（1）選髓粒豐富的骨髓片，用甲醇固定10分鐘。（2）髓片上滴滿酸性亞鐵氰化鉀溶液，染色30分鐘。（3）用蒸餾水沖洗后，用核固紅復(fù)染20分鐘。4. 結(jié)果判斷幼紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)綠色顆粒為陽性。5. 正常參考值正常：細(xì)胞內(nèi)鐵>20%，細(xì)胞外鐵+。IDA

40、：細(xì)胞內(nèi)鐵<15%，細(xì)胞外鐵陰性。6. 質(zhì)量保證（1）需觀察外鐵時玻片最好作去鐵處理，取材涂片后應(yīng)盡量減少污染鐵，最好立即進(jìn)行染色。（2）亞鐵氰化鉀溶液少量配制，如與鹽酸混合后出現(xiàn)藍(lán)色必須重配。（3）酸性亞鐵氰化鉀溶液必須新鮮配制。（4）選擇髓粒豐富的骨髓涂片。（5）胞外鐵較規(guī)則，呈圓或橢圓，與細(xì)胞存在于同一平面，污染鐵與細(xì)胞不在同一平面。（6）瑞氏染色后的骨髓片，用甲醇脫色后仍可作鐵染色。（7）作陽性對照。7. 臨床意義（1）細(xì)胞內(nèi)、外鐵“廠、吞噬細(xì)胞內(nèi)無貯存鐵，可診斷為IDA。（2）細(xì)胞內(nèi)鐵"廠、外鐵"T”、吞噬細(xì)胞內(nèi)有貯存鐵，可診斷為ACD。（3）細(xì)胞內(nèi)鐵、外鐵

41、“T/N”、紅細(xì)胞形態(tài)小、低色素，提示可能為Hb病。（4）細(xì)胞內(nèi)鐵、外鐵“T/N”、環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞15%可考慮為環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞性貧血（RAS）。（5） MDSAA:細(xì)胞內(nèi)、外鐵均。（三）過氧化物酶染色法（POX）1. 原理細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶（peroxidase）能將底物的過氧化氫分解，產(chǎn)生新生態(tài)氧。后者將試劑中的聯(lián)苯胺氧化為聯(lián)苯胺藍(lán)，它是一種不穩(wěn)定的中間產(chǎn)物，無需酶的作用進(jìn)而變成棕色化合物沉淀于酶的所在部位。2試劑（1）第一液聯(lián)苯胺0.3g360g/L亞硝基鐵氧化鈉飽和液1ml95%乙醇加至100ml貯存于棕色瓶中，可保存一年。小瓶分裝備用。（2）第二液（稀過氧化氫液，新鮮配制）3%過氧化

42、氫0.3ml蒸餾水25ml3方法（1）于新鮮干燥血涂片或骨髓涂片上,滴加第一液58滴,使蓋滿整個血膜，作用12分鐘。（2）滴加等量的第二液，混勻，染48分鐘。（3）勿傾去染液，直接用水沖洗。（4）干燥后再用瑞氏染液復(fù)染。4結(jié)果陰性：無藍(lán)色或藍(lán)棕色顆粒。弱陽性：藍(lán)色或藍(lán)棕色顆粒小，分布較稀疏。陽性：藍(lán)色或藍(lán)棕色顆粒略粗，分布較密集。強(qiáng)陽性：藍(lán)色或藍(lán)棕色顆粒粗大。5. 質(zhì)量保證（1）聯(lián)苯胺配制在85%88%的乙醇溶液中染色效果較好，勿用90%95%的乙醇，否則細(xì)胞表面蛋白質(zhì)很快凝固，妨礙試劑向內(nèi)滲入而作用減弱。（2）過氧化氫需新鮮配制，其濃度與加入量勿隨意更改。6. 臨床意義（1）白血病類型：原始

43、及幼稚細(xì)胞尸陽性強(qiáng)：AML陽性率A3%東NLL弱陽性：AMOL陽性率3%ALL(2)成熟中性粒細(xì)胞過氧化物酶變化(3)活性T:ALL、CLL感染、AA等?；钚訨:AMLAMOL(4) 惡組細(xì)胞：()二、血液生化試驗(選做4學(xué)時)掌握：CoombS式驗、蔗糖7§血試驗、Hb電泳及HbF等試驗的操作方法，結(jié)果判定，正常值及臨床意義。熟悉：CoombS式驗、蔗糖7§血試驗、Hb電泳及HbF等試驗的原理。了解：CoombS式驗、蔗糖7§血試驗、Hb電泳等試驗的試劑配制方法。(一)抗人球蛋白試驗(CoombS式驗，直接法)1 .原理抗人球蛋白試驗(Coombs試驗)是用于檢

44、驗不完全抗體的試驗。用正常人血清、血漿或血漿球蛋白注射免疫家兔，使兔體內(nèi)產(chǎn)生抗人球蛋白抗體(溫反應(yīng)抗體)。其方法有直接試驗和間接試驗兩種。直接試驗的目的是檢查病人紅細(xì)胞表面的不完全抗體、即經(jīng)鹽水洗滌后的致敏紅細(xì)胞懸液中加入抗人球蛋白血清，觀察是否發(fā)生凝集，發(fā)生凝集者為Coombst接試驗陽性。2 .試齊I抗人球蛋白血清，生理鹽水。3 .方法(1)取受檢者脫纖維紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌3次。然后配成20%!細(xì)胞生理鹽水懸液。(2)將抗人球蛋白血清按1:2、1:4、1:8、1:16的比例稀釋。(3)取一塊白瓷板，將上述各稀釋度抗血清各1滴，然后分別加20%!細(xì)胞1滴，混勻，5分鐘后觀查結(jié)果。4 .結(jié)果

45、不凝集為陰性，凝集為陽性。按效價報告。5 .正常參考值正常紅細(xì)胞CoombS式驗直接反應(yīng)呈陰性。6 .質(zhì)量保證(1)標(biāo)本應(yīng)新鮮。當(dāng)天進(jìn)行試驗，否則反應(yīng)減弱甚至呈陰性。(2)紅細(xì)胞應(yīng)充分冼滌，除去吸附的血漿球蛋白，以免中和抗人球蛋白而出現(xiàn)假陰性。(3)冷凝集素很高的血標(biāo)本，試驗前應(yīng)保持在37C,并用溫?zé)猁}水冼滌。(4)抗凝劑對強(qiáng)抗體無明顯影響，但可能對弱抗體或補(bǔ)體有影響。因此以脫纖維蛋白血為好。7 .臨床意義(1)自身免疫性溶血性貧血時Coomb遁接試驗常為陽性。(2)部分慢性淋巴細(xì)胞白血病、淋巴瘤、傳染性單核增多癥、巨球蛋白血癥、-重鏈病、SLEEvan綜合征(ITP伴自免溶貧)可出現(xiàn)Coom

46、bst接試驗陽性。(二)糖水試驗1 .原理低離子濃度的庶糖溶液在37c溫育條件下，可促進(jìn)補(bǔ)體成分與紅細(xì)胞膜的結(jié)合，使補(bǔ)體敏感的紅細(xì)胞形成小孔，庶糖水溶液進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)引起紅細(xì)胞膜破裂，發(fā)生溶血現(xiàn)象。2 .試劑100g/L蔗糖溶液，38g/L枸椽酸鈉溶液。3 .方法(1)取患者枸椽酸鈉抗凝血0.5ml,放于4.5ml100g/L蔗糖溶液中。(2)混合后置37c水浴中30分鐘。(3)低速離心，觀察上清液有無溶血。4 .結(jié)果陰性：無溶血；陽性：有溶血。5 .質(zhì)量保證器皿必須清潔干燥，以免溶血。每次實(shí)驗時作正常對照。6 .臨床意義(1) PNH患者常呈陽性，AA-PN陶合征患者亦可陽性。(2)部分自身免

47、疫性溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥患者可呈陽性。(3)健康人呈陰性反應(yīng)。(三)酸溶血試驗(Hams試驗)1 .原理陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH病人的紅細(xì)胞由于膜有缺陷，對補(bǔ)體溶血效應(yīng)的敏感性增加，在酸化的正常血清中(PH6.66.8),經(jīng)37c孵育，易破壞溶血。2 .試劑(1) 25moiHCl溶液。(2) 8.5g/LnaCl溶液。(3) 法(1)取患者血4ml于有小玻璃珠的三角燒瓶內(nèi)，輕搖使脫纖維，將此去纖維血用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，配成50%：細(xì)胞懸液。(2)取患者血4ml(不抗凝)，待凝固后分離血清。(3)按(1)、(2)方法取與患者同型或AB型正常對照的血制

48、備紅細(xì)胞懸液和血清。(4)取2支小試管，按下表操作。實(shí)驗操作步驟反應(yīng)物待測管對照管健康人血清(ml)0.505患者50%RB懸液(ml)0.025健康人50%RB懸液(ml)0.0250.25molHCl(ml)0.5(5)兩管均加塞，置37c水浴中1小時。(6)直接觀察或低速離心后觀察兩管有無溶血現(xiàn)象。4 .結(jié)果判斷待測管溶血、對照管無溶血為陽性；兩管均無溶血即為陰性。5 .質(zhì)量保證(1)本試驗不用抗凝血，因抗凝劑會阻礙溶血，降低靈敏度。一般用脫纖維蛋白血或抽血后立即注入生理鹽水中洗滌。(2) 一切用具要干燥，針頭要粗，紅細(xì)胞懸液要直接滴入液體，不要沿管壁流下，以免溶血。(3)正常血清要新鮮

49、，以免補(bǔ)體失活，造成假陰性。(4)血清酸化后試管用塞蓋好，避免因二氧化碳逸出降低了血清的酸度，以致溶血程度降低。6 .臨床意義結(jié)果陽性主要見于PNH(四)高鐵血紅蛋白還原試驗(MHb-RT1 .原理高鐵血紅蛋白還原試驗(methemogobinreductiontest,MHb-RT)是用亞硝酸鈉使血液中的亞鐵血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，當(dāng)紅細(xì)胞內(nèi)的G6P的量正常時,由磷酸戊糖代謝途徑生成的NADPWI作為血液中高鐵血紅蛋白還原酶的輔酶，在遞氫體美藍(lán)的參與下，使高鐵血紅蛋白還原為亞鐵血紅蛋白。如G6P國量不足或缺乏時，則高鐵血紅蛋白還原速度減慢，甚至不能還原。通過測定高鐵血紅蛋白的還原速度來間

50、接反應(yīng)G6PD舌性。2 .試劑：(1) 12.5g/L亞硝酸鈉一葡萄糖溶液：亞硝酸鈉1.25g,葡萄糖5g,加水至100ml,棕色瓶4c可保存一個月。(2) 0.0004mol/L美藍(lán)溶液：美藍(lán)15mg放乳缽中，加少量蒸儲水研磨后過濾，再加水至100ml,室溫可保存12個月。(3) 0.02M磷酸鹽緩沖液(PBS,pH7.4):NaHPO229.5mg,KHPQ52.2mg,加水至100ml。3 .方法(1) 取靜脈血3ml,加入已有0.3ml38g/L枸椽酸鈉和30mg葡萄糖的抗凝管內(nèi)。(2)離心，使紅細(xì)胞與血漿之比為1:1(去掉多余的血漿)。(3)搖勻，取1.0ml全血，加亞硝酸鈉葡萄糖液

51、和美藍(lán)溶液各50ul,顛倒混勻12次，使與空氣中的氧充分接觸。加塞，37c水中浴孵育3小時。剩余血未加試劑亦同時放入37c水浴中孵育3小時。(4)取出孵育后搖勻的全血0.1ml加入含10ml0.02MPBS容液的試管中，2min后于721分光光度計635nm處比色，水調(diào)零，測其光密度為A。(5)另取未加試劑的全血0.1ml,同(4)操作，測其光密度為B。再于此液中加亞硝酸鈉-葡萄糖液1滴，搖勻，放置5min后比色，測其光密度為So4 .計算高鐵血紅蛋白還原率=(1-&至)x100%SB5 .正常參考值高鐵血紅蛋白還原率75哂正常，74%31%中間缺乏者(雜合子)，30哂顯著缺陷(半合子

52、或純合子)。6 .質(zhì)量保證(1)紅細(xì)胞比積對結(jié)果有一定影響，比積30%寸，高鐵血紅蛋白還原率可明顯降低。故血漿與紅細(xì)胞之比應(yīng)嚴(yán)格控制在1:1(相當(dāng)于紅細(xì)胞比積35%45%(2)抗凝劑以38g/L的枸椽酸鈉或ACD夜為好。草酸鹽不適于本法。(3)血液保溫后必須充分混勻，再吸取，否則結(jié)果可能稍大于100%(4)如果溶血液顯示混濁，則不能直接比色，可能有不穩(wěn)定血紅蛋白存在，也可能因患者有珠蛋白生成障礙性貧血以致紅細(xì)胞脆性降低。前者可離心后用上清液比色，后者可加入0.1%的皂素1滴，放置1015min,待紅細(xì)胞溶解后再比色。7 .臨床意義G6PD缺乏時，高鐵血紅蛋白還原率下降。蠶豆病和伯氨唾咻型藥物溶

53、血性貧血等患者，均可出現(xiàn)下降結(jié)果。G6PD中間缺乏值(雜合子)還原率為31%74%臍血為41%76%G6P嚴(yán)重缺乏值(純合子)還原率小于或等于30%臍血小于40%(五)Hb電泳(HbA2定量)1 .原理血紅蛋白電泳(hemoglobinelectrophresis)的目的是檢出和確認(rèn)正常和異常血紅蛋白。由于不同血紅蛋白所帶的電荷的差別，可將其分離和鑒別。正常人血紅蛋白A、F、A2,在PH8.6緩沖液中電泳，它們均由負(fù)極端移向正極端。其移行速度以HbA最快、HbF次之、HbA速度最慢。以醋酸纖維素薄膜作支持物作血紅蛋白電泳具有簡便、快速的優(yōu)點(diǎn)。2 .試齊I(1)電泳緩沖液(巴比妥緩沖液，離子強(qiáng)度

54、0.06,PH8.6)巴比妥鈉6.38g(分子量206.18)巴比妥0.83g(分子量184.19)水加到500ml(2)浸膜緩沖液(TEB緩沖液，PH9.0,0.12M)Tris20.2gEDTANa2-2H2O2g硼酸1.5g加蒸儲水至1000ml(3)染色液：氨基黑10B0.5g甲醇50ml冰醋酸25ml水40ml(4)漂洗液：無水乙醇45ml,冰醋酸5ml,水50ml。(5)浸出液：0.4MNaOH3 .方法(1)制備Hb液：新鮮抗凝血(枸椽酸鈉抗凝)離心去血漿，用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，然后加入與紅細(xì)胞等體積的蒸儲水，劇烈震蕩，使紅細(xì)胞徹底溶解，加1/2體積的四氯化碳，震蕩，用4000r/min離心20min,吸取上層血紅蛋白液備用(此血紅蛋白液濃度為100g/L)。(2)點(diǎn)樣：取出醋纖膜(已用浸膜液浸泡至少20min)用濾紙吸去多余液體，在粗糙面距陰極端1cm處點(diǎn)上血紅蛋白液。同時平行點(diǎn)上正常血紅蛋白液作對照。點(diǎn)樣要求均勻、直、細(xì)。將膜置于電泳梢支持板的濾紙橋上(點(diǎn)樣面向下)。(3)電泳：110V,40min。(4)染色、漂洗：取出電泳后的醋纖膜放于氨基黑10B染液中染色5min,然后用漂洗液漂洗數(shù)次至無