顯微鏡的使用

1、普通光學顯微鏡的構(gòu)造和使用普通光學顯微鏡的構(gòu)造和使用一、目的要求一、目的要求1 1、學習并掌握油鏡的原理和使用方法。、學習并掌握油鏡的原理和使用方法。2 2、學習普通臺式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部分的功能、學習普通臺式顯微鏡的結(jié)構(gòu)、各部分的功能和使用方法。和使用方法。二、基本原理二、基本原理 現(xiàn)代普通光學顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)現(xiàn)代普通光學顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來放大成像，故又稱為復式顯微鏡。它們由機械裝置和光學來放大成像，故又稱為復式顯微鏡。它們由機械裝置和光學系統(tǒng)兩大部分組成（圖）。系統(tǒng)兩大部分組成（圖）。1.鏡座；2.載物臺；3.鏡臂；4.棱鏡套；5.鏡筒；6.接目鏡；7.轉(zhuǎn)換

2、器；8.接物鏡；9.聚光器；10.虹彩光圈；11.光圈固定器；12.聚光器升降螺旋；13.反光鏡；14.細調(diào)節(jié)器；15.粗調(diào)節(jié)器；16.標本夾目鏡目鏡 鏡筒鏡筒 鏡臂鏡臂物鏡物鏡聚光器透鏡聚光器透鏡鏡臺鏡臺鏡柱鏡柱粗調(diào)節(jié)器粗調(diào)節(jié)器細調(diào)節(jié)器細調(diào)節(jié)器鏡座鏡座 （普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）鏡頭轉(zhuǎn)換器鏡頭轉(zhuǎn)換器標本移動器標本移動器標本移動器調(diào)節(jié)螺旋標本移動器調(diào)節(jié)螺旋（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）聚光器聚光器虹彩光圈調(diào)節(jié)桿虹彩光圈調(diào)節(jié)桿電源開關(guān)電源開關(guān)聚光器升降調(diào)節(jié)桿聚光器升降調(diào)節(jié)桿光亮調(diào)節(jié)器光亮調(diào)節(jié)器 內(nèi)光源內(nèi)光源（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微

3、鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）旋轉(zhuǎn)鏡頭旋轉(zhuǎn)鏡頭轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換器（使（使低倍鏡鏡頭對低倍鏡鏡頭對準鏡臺孔）準鏡臺孔）打開電源打開電源開關(guān)開關(guān)（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）升高聚光升高聚光器器（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）打開光圈打開光圈（并調(diào)節(jié)光量，（并調(diào)節(jié)光量，使視野內(nèi)的亮使視野內(nèi)的亮度達到明暗適度達到明暗適宜）宜）（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）將玻片標本放將玻片標本放在鏡臺上標本在鏡臺上標本移動器的卡槽移動器的卡槽內(nèi)，有蓋玻片內(nèi)，有蓋玻片的一面朝上，的一面朝上，將玻片固定好，將玻片固定好，旋轉(zhuǎn)標本移動旋轉(zhuǎn)標本移動器調(diào)節(jié)螺旋，器調(diào)節(jié)螺旋，將被檢材料移將被檢

4、材料移至鏡臺孔下的至鏡臺孔下的聚光器透鏡中聚光器透鏡中央央（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）同時移動標本同時移動標本移動器，直到移動器，直到基本看清標本基本看清標本物像物像轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)鏡臺與物調(diào)節(jié)鏡臺與物鏡間的距離，鏡間的距離，約約5毫米為度，毫米為度，然后從目鏡觀然后從目鏡觀察，慢慢轉(zhuǎn)動察，慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器。粗調(diào)節(jié)器。（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）輕輕調(diào)節(jié)細輕輕調(diào)節(jié)細調(diào)節(jié)器，可調(diào)節(jié)器，可見清晰的物見清晰的物像像（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）在低倍鏡下將在低倍鏡下將我們要觀察的我們要觀察的目標移至視野目標移至視野中央，轉(zhuǎn)動鏡中央，轉(zhuǎn)動鏡頭轉(zhuǎn)

5、換器，將頭轉(zhuǎn)換器，將高倍物鏡移至高倍物鏡移至工作位置，適工作位置，適當調(diào)節(jié)光亮，當調(diào)節(jié)光亮，微微調(diào)節(jié)細調(diào)微微調(diào)節(jié)細調(diào)節(jié)器，可見更節(jié)器，可見更清晰的物像。清晰的物像。（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）油鏡觀察：高倍油鏡觀察：高倍鏡下將我們要觀鏡下將我們要觀察的目標移至視察的目標移至視野中央，移開高野中央，移開高倍鏡頭，在玻片倍鏡頭，在玻片標本待觀察區(qū)域標本待觀察區(qū)域上滴一滴香柏油，上滴一滴香柏油，然后慢慢將油鏡然后慢慢將油鏡頭移至工作位置，頭移至工作位置，使鏡頭浸沒于香使鏡頭浸沒于香柏油內(nèi)，調(diào)節(jié)光柏油內(nèi)，調(diào)節(jié)光亮，轉(zhuǎn)動細調(diào)節(jié)亮，轉(zhuǎn)動細調(diào)節(jié)器調(diào)準焦距后進器調(diào)準焦距后進行觀察。行觀察。（普

6、通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）觀察完成后，取觀察完成后，取下玻片，用擦鏡下玻片，用擦鏡紙擦去油鏡頭和紙擦去油鏡頭和玻片上的香柏油，玻片上的香柏油，再用擦鏡紙蘸少再用擦鏡紙蘸少量石油醚擦拭鏡量石油醚擦拭鏡頭和玻片上的油頭和玻片上的油跡，然后再用擦跡，然后再用擦鏡紙擦去鏡頭和鏡紙擦去鏡頭和玻片上殘留的石玻片上殘留的石油醚。油醚。（普通光學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用）顯微鏡的復原：顯微鏡的復原：降下鏡臺至原處，降下鏡臺至原處，轉(zhuǎn)動鏡頭轉(zhuǎn)換器，轉(zhuǎn)動鏡頭轉(zhuǎn)換器，使物鏡鏡頭轉(zhuǎn)離使物鏡鏡頭轉(zhuǎn)離鏡臺孔。關(guān)閉光鏡臺孔。關(guān)閉光圈，下降聚光器圈，下降聚光器至原位，關(guān)閉電至原位，關(guān)閉電源。源。（普通光

7、學顯微鏡使用）（普通光學顯微鏡使用） 在顯微鏡的光學系統(tǒng)中，物鏡的性能最為關(guān)鍵，它在顯微鏡的光學系統(tǒng)中，物鏡的性能最為關(guān)鍵，它直接影響著顯微鏡的分辨率。而在普通光學顯微鏡配置直接影響著顯微鏡的分辨率。而在普通光學顯微鏡配置的幾種物鏡中，油鏡的放大倍數(shù)最大，對微生物學研究的幾種物鏡中，油鏡的放大倍數(shù)最大，對微生物學研究最為重要。與其他物鏡相比，油鏡的使用比較特殊，需最為重要。與其他物鏡相比，油鏡的使用比較特殊，需在載玻片和鏡頭之間加滴鏡油，這主要又有如下兩方面在載玻片和鏡頭之間加滴鏡油，這主要又有如下兩方面的原因：的原因：1、增加照明亮度 油鏡的放大倍數(shù)可達100 ，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很

8、短，直徑很小，但所需要的光照強度卻最大（圖）。 從承載標本的玻片透過來的光線，因介質(zhì)從承載標本的玻片透過來的光線，因介質(zhì)密度不同（從玻片進入空氣，再進入鏡頭），有些光密度不同（從玻片進入空氣，再進入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不能進入鏡頭，致使在使用油線會因折射或全反射，不能進入鏡頭，致使在使用油鏡時會因射入的光線較少，物像鏡時會因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。所以為了不使顯現(xiàn)不清。所以為了不使通過的光線有所損失，在通過的光線有所損失，在使用油鏡時需在油鏡和玻使用油鏡時需在油鏡和玻片之間加入與玻璃的折射片之間加入與玻璃的折射率（率（n =1.55n =1.55）相仿的鏡油）相仿的鏡油（通

9、常使用香柏油，其折（通常使用香柏油，其折射率射率n =1.52n =1.52）。）。2 2、增加顯微鏡的分辨率、增加顯微鏡的分辨率 顯微鏡的分辨率或分辨力（顯微鏡的分辨率或分辨力（resolution or resolving resolution or resolving powerpower）是指顯微鏡能辨別兩點之間的最小距離的能力。從）是指顯微鏡能辨別兩點之間的最小距離的能力。從物理學角度看，光學顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物理學角度看，光學顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，可表示為：物鏡性能的限制，可表示為：NAD2分辨率式中：=光波波長，NA=物鏡的數(shù)值孔徑值。

10、 光學顯微鏡的光源不可能超出可見光的波長范圍光學顯微鏡的光源不可能超出可見光的波長范圍（0.40.40.7 0.7 m m），而數(shù)值孔徑則取決于物鏡的鏡口角和玻），而數(shù)值孔徑則取決于物鏡的鏡口角和玻片與鏡頭間介質(zhì)的折射率，可表示為：片與鏡頭間介質(zhì)的折射率，可表示為：NA=NA=n nsinsin 。 式式中中為光線最大入射角的半數(shù)。它取決于物鏡的直徑和焦距，為光線最大入射角的半數(shù)。它取決于物鏡的直徑和焦距，一般來說在實際應用中最大只能達到一般來說在實際應用中最大只能達到120120，而，而n n為介質(zhì)折射為介質(zhì)折射率。由于香柏油的折射率（率。由于香柏油的折射率（1.521.52）比空氣及水的折

11、射率（分）比空氣及水的折射率（分別為別為1.01.0和和1.331.33）要高，因此以香柏油作為鏡頭與玻片之間）要高，因此以香柏油作為鏡頭與玻片之間介質(zhì)的油鏡所能達到的數(shù)值孔徑（介質(zhì)的油鏡所能達到的數(shù)值孔徑（NANA一般在一般在1.21.21.41.4）要高）要高于低倍鏡、高倍鏡等干鏡（于低倍鏡、高倍鏡等干鏡（NANA都低于都低于1.01.0）。若以可見光的）。若以可見光的平均波長平均波長0.55m0.55m來計算，數(shù)值孔徑通常在來計算，數(shù)值孔徑通常在0.650.65左右的高倍左右的高倍鏡只能分辨距離不小于鏡只能分辨距離不小于0.4m0.4m的物體，而油鏡的分辨率卻可的物體，而油鏡的分辨率卻可

12、達到達到0.2 0.2 m m左右。左右。三、實驗器材三、實驗器材1 1、菌種、菌種 枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和細菌三形染色玻枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和細菌三形染色玻片標本。片標本。2 2、溶液或試劑、溶液或試劑 香柏油、二甲苯。香柏油、二甲苯。3 3、儀器或其他用具、儀器或其他用具 顯微鏡、擦鏡紙。顯微鏡、擦鏡紙。四、實驗步驟四、實驗步驟1 1、觀察前的準備、觀察前的準備（1 1） 顯微鏡的安置顯微鏡的安置 置顯微鏡于平整的實驗臺上，鏡座距實置顯微鏡于平整的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊緣約驗臺邊緣約3 34 4。鏡檢時姿勢要端正。鏡檢時姿勢要端正。 取、放顯微鏡時應一手握住鏡臂，一手托住底座，使取、

13、放顯微鏡時應一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛疲勞，微鏡或雙筒顯微鏡均應雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或記錄。也便于邊觀察邊繪圖或記錄。（2 2） 光源調(diào)節(jié)光源調(diào)節(jié) 安裝在鏡座內(nèi)的光源燈可通過調(diào)節(jié)電壓以獲安裝在鏡座內(nèi)的光源燈可通過調(diào)節(jié)電壓以獲得適當?shù)恼彰髁炼龋褂梅垂忡R采集自然光或燈光作為照明得適當?shù)恼彰髁炼?，而使用反光鏡采集自然光或燈光作為照明光源時，應根據(jù)光源的強度及所用物鏡的放大倍數(shù)選用凹面或光源時，應根據(jù)光源的強

14、度及所用物鏡的放大倍數(shù)選用凹面或凸面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮度適宜。凸面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮度適宜。（3 3） 根據(jù)使用者的個人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡，根據(jù)使用者的個人情況，調(diào)節(jié)雙筒顯微鏡的目鏡，雙筒顯微鏡的目鏡間距可以適當調(diào)節(jié)，而左目鏡上一般還雙筒顯微鏡的目鏡間距可以適當調(diào)節(jié)，而左目鏡上一般還配有曲光度調(diào)節(jié)環(huán)，可以適應眼距不同或兩眼視力有差異配有曲光度調(diào)節(jié)環(huán)，可以適應眼距不同或兩眼視力有差異的不同觀察者。的不同觀察者。（4 4） 聚光器數(shù)值孔徑值的調(diào)節(jié)聚光器數(shù)值孔徑值的調(diào)節(jié) 調(diào)節(jié)聚光器虹彩光圈值調(diào)節(jié)聚光器虹彩光圈值與物鏡的數(shù)值孔徑值相符或略低。有些

15、顯微鏡的聚光器只與物鏡的數(shù)值孔徑值相符或略低。有些顯微鏡的聚光器只標有最大數(shù)值孔徑，而沒有具體的光圈數(shù)刻度。使用這種標有最大數(shù)值孔徑，而沒有具體的光圈數(shù)刻度。使用這種顯微鏡時可在樣品聚焦后取下一目鏡，從鏡筒中一邊看視顯微鏡時可在樣品聚焦后取下一目鏡，從鏡筒中一邊看視野，一邊縮光圈，調(diào)節(jié)光圈的邊緣與物鏡邊緣黑圈相切或野，一邊縮光圈，調(diào)節(jié)光圈的邊緣與物鏡邊緣黑圈相切或略小于其邊緣。因為各物鏡的數(shù)值孔徑值不同，所以每轉(zhuǎn)略小于其邊緣。因為各物鏡的數(shù)值孔徑值不同，所以每轉(zhuǎn)換一次物鏡都應該進行這種調(diào)節(jié)。換一次物鏡都應該進行這種調(diào)節(jié)。 在聚光器的數(shù)值孔徑確定后，若需要改變光照強在聚光器的數(shù)值孔徑確定后，若需

16、要改變光照強度，可通過升降聚光器或改變光源的亮度來實現(xiàn)，原則上度，可通過升降聚光器或改變光源的亮度來實現(xiàn)，原則上不應再通過光圈的調(diào)節(jié)。當然，有關(guān)虹彩光圈、聚光器高不應再通過光圈的調(diào)節(jié)。當然，有關(guān)虹彩光圈、聚光器高度和照明光源強度的使用原則也不是固定不變的，只要能度和照明光源強度的使用原則也不是固定不變的，只要能獲得良好的觀察效果，有時也可根據(jù)不同的具體情況靈活獲得良好的觀察效果，有時也可根據(jù)不同的具體情況靈活運用，不一定拘泥不變。運用，不一定拘泥不變。 2 2、顯微觀察、顯微觀察 在目鏡保持不變的情況下，使用不同放大倍數(shù)的物鏡在目鏡保持不變的情況下，使用不同放大倍數(shù)的物鏡所能達到的分辨率及放大

17、率都是不同的。一般情況下，特所能達到的分辨率及放大率都是不同的。一般情況下，特別是初學者，進行顯微觀察時應遵從由低倍鏡到高倍鏡再別是初學者，進行顯微觀察時應遵從由低倍鏡到高倍鏡再到油鏡的觀察程序，因為低倍數(shù)物鏡視野相對大，易發(fā)現(xiàn)到油鏡的觀察程序，因為低倍數(shù)物鏡視野相對大，易發(fā)現(xiàn)目標及確定檢查的位置。目標及確定檢查的位置。（1 1） 低倍鏡觀察低倍鏡觀察 將染色標本玻片置于載物臺上，用標本夾夾住，移將染色標本玻片置于載物臺上，用標本夾夾住，移動推進器使觀察對象處在物鏡的正下方。下降動推進器使觀察對象處在物鏡的正下方。下降1010 物鏡，物鏡，使其接近標本，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡筒，使標本在視野使其

18、接近標本，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡筒，使標本在視野中初步聚焦，再使用細調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)圖像清晰。通過玻片夾中初步聚焦，再使用細調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)圖像清晰。通過玻片夾推進器慢慢移動玻片，認真觀察標本各部位，找到合適的推進器慢慢移動玻片，認真觀察標本各部位，找到合適的目的物，仔細觀察并記錄觀察到的結(jié)果。目的物，仔細觀察并記錄觀察到的結(jié)果。 在任何時候使用粗調(diào)節(jié)器聚焦物象時，必須養(yǎng)成先從在任何時候使用粗調(diào)節(jié)器聚焦物象時，必須養(yǎng)成先從側(cè)面注視小心調(diào)節(jié)物鏡靠近標本，然后用目鏡觀察，慢慢側(cè)面注視小心調(diào)節(jié)物鏡靠近標本，然后用目鏡觀察，慢慢調(diào)節(jié)物鏡離開標本進行準焦的習慣，以免因一時的誤操作調(diào)節(jié)物鏡離開標本進行準焦的習慣，以免因

19、一時的誤操作而損壞鏡頭及玻片。而損壞鏡頭及玻片。 （2 2） 高倍鏡觀察高倍鏡觀察 在低倍鏡下找到合適的觀察目標并將其至視野中心后，在低倍鏡下找到合適的觀察目標并將其至視野中心后，輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進行適當調(diào)節(jié)后微調(diào)細調(diào)節(jié)器使物像清晰，圈及視野亮度進行適當調(diào)節(jié)后微調(diào)細調(diào)節(jié)器使物像清晰，利用推進器移動標本仔細觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。利用推進器移動標本仔細觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。 在一般情況下，當物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，在一般情況下，當物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工

20、作位置進行觀察時，物轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進行觀察時，物象將保持基本聚焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦象將保持基本聚焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦（parfocalparfocal）。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍）。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用細調(diào)節(jié)鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用細調(diào)節(jié)器即可對物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時可器即可對物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。 （3 3） 油鏡觀察油鏡觀察 在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣

21、品區(qū)域后，用粗調(diào)在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣品區(qū)域后，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升高，然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。在待觀察的樣節(jié)器將鏡筒升高，然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。在待觀察的樣品區(qū)域加滴香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地品區(qū)域加滴香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在油鏡中并幾乎與標本相接。將聚光器升至降下，使油鏡浸在油鏡中并幾乎與標本相接。將聚光器升至最高位置并開足光圈，若所用聚光器的數(shù)值孔徑超過最高位置并開足光圈，若所用聚光器的數(shù)值孔徑超過1.01.0，還應在聚光鏡與載玻片之間加滴香柏油，保證其達到最大的還應在聚光鏡與載玻片之間加滴香柏油，保證其達到最大的效能。調(diào)節(jié)照明

22、使視野的亮度合適，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐效能。調(diào)節(jié)照明使視野的亮度合適，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐上升，直至視野中出現(xiàn)物像并用細調(diào)節(jié)器使其清晰準焦為止。上升，直至視野中出現(xiàn)物像并用細調(diào)節(jié)器使其清晰準焦為止。 有時按上述操作還找不到目的物，則可能由于油鏡頭下有時按上述操作還找不到目的物，則可能由于油鏡頭下降還沒有到位，或因油鏡上升太快，以至眼睛捕捉不到一閃降還沒有到位，或因油鏡上升太快，以至眼睛捕捉不到一閃而過的物像。遇此情況，應重新操作。另外應特別注意不要而過的物像。遇此情況，應重新操作。另外應特別注意不要因在下降鏡頭時用力過猛，或聚焦時誤將粗調(diào)節(jié)器向反方向因在下降鏡頭時用力過猛，或聚焦時誤將粗調(diào)節(jié)器向反方向轉(zhuǎn)動而損壞鏡頭及載玻片。轉(zhuǎn)動而損壞鏡頭及載玻片。 3 3、顯微鏡用畢后的處理、顯微鏡用畢后的處