臨床微生物實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌鑒定指南

1、臨床微生物實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌鑒定指南 （續(xù)）溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷中心潘欽石.細(xì)菌的鑒定步驟1 .鑒定的概念：將一個(gè)未知的菌株按其生物學(xué)特性，經(jīng)過(guò)與所有已知菌種進(jìn) 行比較后劃歸到一個(gè)已知菌種的分析過(guò)程。2 .對(duì)待鑒定的菌種要明確已經(jīng)獲得純化培養(yǎng)或者該菌種在血平板上生長(zhǎng)良 好，有單個(gè)菌落可以進(jìn)行生化試驗(yàn)。（我們這里一般都是預(yù)先純化培養(yǎng)）3 .對(duì)待鑒定的菌種進(jìn)行革蘭染色，觀察形態(tài)（G+c, G b, G c, G+b）,做觸 酶，氧化酶實(shí)驗(yàn)，然后按科，屬，種逐步鑒定。要注意對(duì)待鑒定的菌種選 擇一個(gè)合適的鑒定系統(tǒng)，臨床常見(jiàn)細(xì)菌的快速簡(jiǎn)單的鑒定系統(tǒng)我們都已經(jīng)設(shè)計(jì)好，參考鑒定質(zhì)控單。4 .按鑒定質(zhì)控單的

2、要求填寫好病人姓名， 年齡，性別；標(biāo)本類型，標(biāo)本編號(hào)， 送檢日期等。另外最重要的是要填寫好該菌種的菌落形態(tài)以及有無(wú)溶血。5 .復(fù)習(xí)革蘭染色，觸酶實(shí)驗(yàn)，氧化酶實(shí)驗(yàn)。（1） .革蘭染色：是細(xì)菌鑒定過(guò)程中最常用最基本最重要的染色方法。首先要將待鑒定的細(xì)菌涂片，固定（目的：殺死細(xì)菌，改變細(xì)菌對(duì)染 料的通透性）。第一步：以結(jié)晶紫初染（染色液I ）第二步：以盧戈氏碘液媒染（染色液H）第三步：用95%乙醇脫色（染色液田）第四步：最后用稀釋復(fù)紅復(fù)染（染色液IV）.觸酶實(shí)驗(yàn)（H2O2實(shí)驗(yàn)）:a原理：具有過(guò)氧化氫酶的細(xì)菌能催化雙氧水生成水和初生態(tài)氧，繼 而形成氧分子出現(xiàn)氣泡。b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在

3、潔凈的玻片上涂開(kāi)，滴加 3% 過(guò)氧化氫數(shù)滴，觀察結(jié)果（立即有大量氣泡產(chǎn)生者為陽(yáng)性，不產(chǎn)生氣泡者 為陰性）。要注意不能在血平板上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這樣易出現(xiàn)假陽(yáng)性；另外陳 舊菌落要是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；還有不能在接種針或環(huán)上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。c.陽(yáng)性對(duì)照用金黃色葡萄球菌，陰性對(duì)照用鏈球菌；試劑要避光置4c 冰箱保存。d.應(yīng)用：絕大多數(shù)含細(xì)胞色素的需氧和兼性厭氧細(xì)菌觸酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性， 鏈球菌屬陰性。臨床常見(jiàn)細(xì)菌鑒定實(shí)驗(yàn)中我們一般用于區(qū)別葡萄球菌屬（十）,微球菌屬（+）,鏈球菌屬（-）.氧化酶實(shí)驗(yàn)（Kovac實(shí)驗(yàn)）：a.原理：氧化酶又稱細(xì)胞色素酶，是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸 酶。酶并不直接與試劑（1%鹽酸

4、四甲基對(duì)苯二胺）起反應(yīng)，而是 首先使細(xì)胞色素c氧化，然后氧化型細(xì)胞色素 c使對(duì)苯二胺氧化， 出現(xiàn)深蘭色反應(yīng)。b.方法（濾紙法，菌落法，試劑紙片法）：一般我們采用濾紙法，取白色潔凈濾紙條，沾取菌落少許，加試劑 一滴，陽(yáng)性者立即呈粉紅色，繼而出現(xiàn)深蘭色。結(jié)果讀取在10秒鐘時(shí)為最佳，60秒內(nèi)讀取可靠。本實(shí)驗(yàn)避免接觸含鐵物質(zhì)（假陽(yáng) 性），也不能在含糖培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（假陰性）。c.陽(yáng)性對(duì)照用銅綠假單胞菌，陰性對(duì)照用大腸埃希菌。d.應(yīng)用：奈瑟氏屬的菌種均陽(yáng)性，也用于區(qū)別假單胞菌屬和腸桿菌， 前者陽(yáng)性，后者陰性。.葡萄球菌屬的鑒定葡萄球菌屬主要的種有金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，腐生葡萄球菌。1

5、 .形態(tài)與染色：葡萄球菌直徑0.51.5小卬菌體圓形，呈單個(gè)，成雙以及不 規(guī)簇狀排列。染色呈紫色，為革蘭陽(yáng)性球菌。2 .與鏈球菌的區(qū)別：觸酶實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性，而鏈球菌陰性；菌體形態(tài)鏈球菌小于 葡萄球菌，呈成雙和鏈狀排列的卵圓形的革蘭陽(yáng)性球菌。3 .與微球菌的區(qū)別：觸酶實(shí)驗(yàn)同為陽(yáng)性，但微球菌的菌體呈四聯(lián)狀，要大于 葡萄球菌，微球菌葡萄糖氧化發(fā)酵實(shí)驗(yàn)（操作方法同甘露醇 OF試驗(yàn)）為 氧化型；而葡萄球菌為發(fā)酵型。另外吠喃唾酮（即痢特靈 50仙/）敏感實(shí) 驗(yàn)微球菌為耐藥，而金黃色葡萄球菌為敏感。4 .葡萄球菌屬的種間鑒定：（1） .菌落色素與溶血毒素：金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃色，檸檬色 或者淡黃色，而

6、其他葡萄球菌則在血平板上菌落大多數(shù)為白色，也有 部分為檸檬色或深黃色。.溶血毒素：金黃色葡萄球菌有 a、0、丫、6溶血毒素，各毒素的區(qū)別 是對(duì)動(dòng)物紅細(xì)胞的溶血范圍、抗原性及溶血時(shí)的溫度等。其中以a溶血毒素為主。而其他葡萄球菌大多數(shù)不產(chǎn)生溶血毒素，只有表葡有極 少能產(chǎn)生溶血毒素。.血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)：用與區(qū)別金黃色葡萄球菌（陽(yáng)性），表皮葡萄球菌 （陰性），腐生葡萄球菌（陰性）。血漿凝固酶是金葡菌所產(chǎn)生的， 有結(jié)合凝固酶和游離凝固酶兩種。血漿凝固酶檢測(cè)有兩種方法，為玻 片法和試管法，我們一般采用玻片法。a.操作方法：挑取少許金黃色葡萄球菌菌落在玻片上與血漿乳化，結(jié) 合凝固酶能作用于血漿中的纖維蛋白原，

7、從而在金黃色葡萄球菌表面 發(fā)生凝集，所以我們?nèi)庋勰芸匆?jiàn)凝集顆粒。玻片法主要由結(jié)合凝固酶 作用產(chǎn)生；游離凝固酶是金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的胞外酶，能與血漿中的血漿凝固反應(yīng)因子（類似凝血酶的一種物質(zhì)）作用，形成復(fù)合物再 使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白而發(fā)生凝集。試管法主要由游離凝固酶 作用產(chǎn)生。b.注意事項(xiàng)：菌落不能太多，否則會(huì)影響結(jié)果觀察；凝固酶陽(yáng)性要做自凝陰性對(duì)照（用生理鹽水代替血漿），只有在陰性對(duì)照也不凝集才能認(rèn)為是真正的陽(yáng)性，有一部分葡萄球菌有自凝現(xiàn)象。.新生霉素敏感實(shí)驗(yàn)：金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌對(duì)新生霉素紙片（5pg片）敏感;而腐生葡萄球菌，微或菌則對(duì)之耐藥。抑菌環(huán)直徑 > 16mm即為

8、新生霉素敏感。.甘露醇氧化發(fā)酵實(shí)驗(yàn)：a.操作方法：取兩支甘露醇微量生化管，在微量管內(nèi)接種待檢細(xì)菌，然后一支加兩滴石臘密封，另外一支則不加，放37c孵多!內(nèi)1824h后觀察結(jié)果。b.結(jié)果觀察：微量生化管變黃色為陽(yáng)性，也就是能利用甘露醇。若兩 管都變黃色則說(shuō)明是發(fā)酵型；其中加石蠟管不變色，沒(méi)加石蠟管變黃 色則為氧化型；如果兩管都不變色則說(shuō)明該細(xì)菌是不利用甘露醇（產(chǎn) 堿型）。c.應(yīng)用：金黃色葡萄球菌在需氧和厭氧的條件下都能利用甘露醇（即兩管都變黃色）；表皮葡萄球菌需氧部分產(chǎn)酸，厭氧條件下不利用甘露醇（即沒(méi)加石蠟管有部分會(huì)變黃色，加石蠟管不變黃色）；腐生葡萄球菌與表皮葡萄球菌類似。三.微球菌屬的種間鑒

9、定微球菌屬主要的種有易變微球菌，藤黃微球菌，玫瑰微球菌。鑒定生化見(jiàn)下表微球菌屬的種間鑒定易變微球菌藤黃微球菌玫瑰微球菌色素產(chǎn)生黃色黃色粉紅色需氧葡萄糖產(chǎn)酸十十一硝酸鹽還原十月尿素酶d d 十氧化酶一十一/十（弱）新生霉素敏感 S/R S Rd:不定S:敏感R:耐藥四.鏈球菌屬1 .形態(tài)和染色：鏈球菌的直徑為 0.51.0仙可呈成雙和鏈狀排列的卵圓形革蘭陽(yáng)性球菌，菌體小于葡萄球菌，無(wú)鞭毛，沒(méi)有芽胞，但有些菌株會(huì)形成莢膜。肺炎鏈球菌呈矛頭狀，寬端相對(duì)，尖端向外。2 .根據(jù)鏈球菌在血平板上溶血現(xiàn)象的不同分為三種：甲型（0-）溶血，即菌落周圍出現(xiàn)較窄的草綠色溶血環(huán)；乙型（,）溶血，即菌落周圍出現(xiàn)較寬的

10、透明溶血環(huán)；丙型（丫）溶血，即菌落周圍無(wú)溶血環(huán)。3 .根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)（C多糖抗原）的不同可分為 A、B、C、D、E、F、G、 H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T等18個(gè)群，對(duì)人類有致病者 9 0%屬于A群，偶見(jiàn)其他群鏈球菌致病。4 .鏈球菌屬的種間鑒定 （1）,乙型溶血鏈球菌的鑒定：a.對(duì)桿菌肽（0.04U/片）（抑菌圈直徑10mm）敏感：A群鏈球 菌（主要為化膿性鏈球菌）。b.對(duì)桿菌肽不敏感，膽汁七葉甘實(shí)驗(yàn)陰性，但馬尿酸鈉水解實(shí)驗(yàn) 、CAMP實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性：B群鏈球菌（主要為無(wú)乳鏈球菌）。c.對(duì)桿菌肽不敏感，膽汁七葉甘實(shí)驗(yàn)陰性，馬尿酸鈉水解實(shí)驗(yàn)陰 性，CAMP實(shí)驗(yàn)陰性：主要為馬鏈球菌、類馬鏈

11、球菌、獸疫鏈球 菌；對(duì)三者的區(qū)別實(shí)驗(yàn)要加做海藻糖和山梨醇實(shí)驗(yàn)。d. CAMP實(shí)驗(yàn)：將能產(chǎn)生，溶血的金黃色葡萄球菌在血平板上劃 一橫線接種，再將待鑒定菌于金黃色葡萄球菌3mm處垂直種一短線，若在有CO2條件下培養(yǎng)56小時(shí)，或無(wú)CO2條件下培養(yǎng) 1824小時(shí)，在兩細(xì)菌連接處出現(xiàn)一個(gè)半月型的加強(qiáng)溶血區(qū)即為 CAMP實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。.甲型溶血鏈球菌的鑒定：a.草綠色鏈球菌：對(duì)桿菌肽敏感，對(duì)奧普托欣（Optochin）不敏感， 膽汁溶菌實(shí)驗(yàn)陰性，膽汁七葉甘實(shí)驗(yàn)陰性，在高鹽中不生長(zhǎng)。主 要有變異鏈球菌，輕型鏈球菌，血鏈球菌，唾液鏈球菌等。b.肺炎鏈球菌：菌體呈矛頭狀，成雙排列，鈍端相對(duì)，尖端相背， 較葡萄球菌，

12、其他鏈球菌略大；在血平板上菌落細(xì)小、圓形、表 面光滑、灰白色、半透明，開(kāi)始時(shí)菌落呈扁平狀，以后中心塌陷， 呈臍窩狀。與草綠色鏈球菌的主要區(qū)別是膽汁溶菌實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，對(duì) 奧普托欣（Optochin）敏感。奧普托欣（Optochin）含量為5pg/ 片，抑菌環(huán)18mm為敏感，15mm為不敏感，1518mm應(yīng)重 復(fù)實(shí)驗(yàn)。.腸球菌（D群鏈球菌）的鑒定：溶血不定，主要是a-、丫溶血；對(duì)桿菌肽不敏感，但其特異性實(shí)驗(yàn)是膽汁七葉甘實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性；若能在6.5%NaCl的心浸液肉湯中生長(zhǎng)即為D群腸球菌，不能生長(zhǎng)為D群非腸球菌。.鏈球菌屬鑒定的系統(tǒng)生化結(jié)果判斷a. 1%美蘭牛乳b.膽汁七葉甘實(shí)驗(yàn)：變黑為陽(yáng)性。c. PH9.

13、6肉湯實(shí)驗(yàn)：變渾濁為能在堿性環(huán)境中生長(zhǎng)（陽(yáng)性）。d. 6.5%NaCl心浸液肉湯：由紫變黃為能在高鹽環(huán)境中生長(zhǎng)（陽(yáng)性）e.精氨酸雙水解酶實(shí)驗(yàn)：變紅色（對(duì)照不變色，仍為黃色）為陽(yáng)性。五.奈瑟氏菌屬和布蘭漢菌屬奈瑟氏菌屬主要有腦膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌；布蘭漢氏菌屬只有卡他布蘭漢氏菌。兩者系需氧革蘭陰性球菌。 奈瑟氏菌的生物學(xué)特性：革蘭陰性球菌，需氧，卵圓形或腎形，無(wú)動(dòng)力,b.c.氧化酶及觸酶均陽(yáng)性。培養(yǎng)時(shí)對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高，能在巧克力平板或有豐富營(yíng)養(yǎng)的血平板上，在 510%CO2環(huán)境中生長(zhǎng)。.鑒定過(guò)程：a. DNA酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性為布蘭漢氏菌，陰性則為奈瑟氏菌。能在普通血平板上生長(zhǎng)的為其他奈瑟氏菌，在巧克

14、力平板上生長(zhǎng) 的主要為腦膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌。能使麥芽糖氧化分解產(chǎn)酸的是腦膜炎奈瑟氏菌，不利用麥芽糖的是淋病奈瑟氏菌。.幾種主要細(xì)菌對(duì)葡萄糖、麥芽糖、蔗糖的氧化分解產(chǎn)酸結(jié)果如下: 氧化分解產(chǎn)酸菌種葡萄糖麥芽糖蔗糖 淋病奈瑟氏菌十 腦膜炎奈瑟氏困 + + 粘液奈瑟氏困 + + + 卡他布蘭漢菌DNA酶實(shí)驗(yàn):a.方法：將待鑒定細(xì)菌點(diǎn)種于含 0.2%DNA的DNA瓊脂平板上，培 養(yǎng)后用1mmol/LHCl覆蓋平板，菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)者為陽(yáng)性。b.原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生DNA酶，可使DNA長(zhǎng)鏈水解成由幾個(gè)單 核甘酸組成的寡核甘酸鏈；長(zhǎng)鏈 DNA可被酸沉淀，而水解后形成 后的寡核甘酸鏈則可溶于酸，故

15、在 DNA瓊脂平板加鹽酸，可在菌 落周圍形成透明的溶血環(huán)。（腸桿菌科中只有沙雷氏菌和變形桿菌可產(chǎn)生DNA酶，陽(yáng)性球菌中只有金葡菌能產(chǎn)生 DNA酶。） 六.腸桿菌科腸桿菌科是一大群生物學(xué)性狀相似的革蘭陰性桿菌，其中對(duì)人致病性較強(qiáng)的鼠疫耶爾森菌（現(xiàn)已基本沒(méi)有流行）和傷寒沙門菌； 4類常引起腹瀉和腸道感 染的細(xì)菌（埃希氏菌、志賀氏菌、沙門氏菌、耶爾森氏菌） 和8種常導(dǎo)致院內(nèi)感 染的細(xì)菌（枸檬酸桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬、多源菌屬、沙雷菌屬、變形桿菌屬、普羅威登菌屬和摩根菌屬）0另外還有很多細(xì)菌是腸道的正常菌群，但在一定條件下也可致?。l件致病菌）。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)于革蘭陰性桿菌首先要做氧化酶實(shí)驗(yàn)，陰性

16、為腸桿菌科細(xì)菌；陽(yáng)性的為非發(fā)酵菌（我們實(shí)驗(yàn)室還沒(méi)有簡(jiǎn)單的系統(tǒng)鑒定方法， 一般要儀器上卡檢 測(cè)）或弧菌科細(xì)菌。1 .腸桿菌科的系統(tǒng)生化（1） . KIA試驗(yàn)（克氏雙糖鐵）組成：乳糖/葡萄糖=10/1 （斜面/高層，其長(zhǎng)度最好是都是 2c M）結(jié)果判斷：斜面或高層變黃色：陽(yáng)性；不變色（紅色）：陰性 高層中出現(xiàn)裂隙：產(chǎn)氣陽(yáng)性高層中出現(xiàn)黑色（FeS）:產(chǎn)H2s陽(yáng)性 .苯丙氨酸脫竣酶試驗(yàn)細(xì)菌產(chǎn)生的苯丙氨酸脫竣酶使苯丙氨酸氧化脫竣后生成苯丙酮酸，再與10%的FeCl3試劑產(chǎn)成深綠色反應(yīng)。（變形桿菌屬、普羅威登 菌屬和摩根菌屬為陽(yáng)性，其他為陰性）枸檬酸鹽試驗(yàn)（碳源利用實(shí)驗(yàn)）在枸檬酸鹽培養(yǎng)基中細(xì)菌能利用的碳源

17、只有枸檬酸鹽，分解后生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性，pH指示劑澳麝香草酚藍(lán)由淡綠色變?yōu)?深蘭色，即為枸檬酸鹽試驗(yàn)陽(yáng)性。（埃希氏菌屬，志賀氏菌屬，愛(ài) 德華菌屬為陰性，其他為陽(yáng)性）注意：接種時(shí)不能被糖，蛋白陳污染，要單獨(dú)接種）.甲基紅（MR）試驗(yàn)細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步分解為甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸等，使培養(yǎng)基的pH下降至4.5以下時(shí)，加入甲基紅指 示劑由桔黃色變桔紅色為弱陽(yáng)性；變紅色為陽(yáng)性。培養(yǎng)基成分：葡萄糖蛋白陳水試劑：甲基紅0.1g,酒精300ml,水200ml主要用于大腸埃希菌（十 ）和產(chǎn)氣腸桿菌（）的鑒別；常與 V-P 實(shí)驗(yàn)聯(lián)合使用，一般情況下兩者結(jié)果正好相反，但也有例外如奇變

18、 兩者同為陽(yáng)性。.MIU （動(dòng)力靛基質(zhì)尿素）試驗(yàn) .動(dòng)力：在半固體培養(yǎng)基中穿刺接種細(xì)菌培養(yǎng)后，若穿刺線周圍 有細(xì)菌擴(kuò)散生長(zhǎng)，則為動(dòng)力（+ ）;清晰則為動(dòng)力（一）。 .靛基質(zhì)試驗(yàn)（呷咪試驗(yàn)）：某些細(xì)菌有色氨酸酶，能分解培養(yǎng) 基中的色氨酸生成呷咪。呷咪再與試劑對(duì)位二氨基苯甲醛作用形成玫瑰呷珠而呈紅色。 .尿素試驗(yàn)：某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，使培養(yǎng)基變堿，再使培養(yǎng)基中的指示劑（0.4%酚紅）變紅色即 為陽(yáng)性。.硝酸鹽還原試驗(yàn)NO3 NO2 -（大腸）NO3 NH4+NO3 N2 （沙雷氏菌屬） 試劑甲：對(duì)氨基苯磺酸 試劑乙：0-蔡胺觀察結(jié)果時(shí)甲液和乙液要等量加入， 立即或10min

19、內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽(yáng) 性。若不變色，則要加入鋅粉：變紅色，說(shuō)明硝還試驗(yàn)為真陰性 仍不變色，說(shuō)明硝還試驗(yàn)真陽(yáng)性，但原先還原產(chǎn)物不是NO2 o陰性結(jié)果出現(xiàn)時(shí)有三種可能：細(xì)菌不能還原硝酸鹽亞硝酸鹽繼 續(xù)分解生成氨或氮培養(yǎng)基不適合細(xì)菌生長(zhǎng) 腸桿菌科細(xì)菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。.氨基酸脫竣試驗(yàn)細(xì)菌產(chǎn)生脫竣酶分解氨基酸使其脫竣生成胺和 CO2,雖然各種細(xì)菌所產(chǎn)生的脫竣 酶不一定相同，但最后都能生成胺（賴氨酸一尸胺，鳥(niǎo)氨酸一腐胺， 精氨酸一精胺）和CO2。然后胺能使培養(yǎng)基變堿性，通過(guò)指示劑（澳 甲酚紫）由黃變紫即為陽(yáng)性。對(duì)照管（無(wú)氨基酸）為黃色。注意：微量管接種好后要加石蠟，使培養(yǎng)基造成厭氧環(huán)境。（生成的胺更穩(wěn)

20、定， 還能誘導(dǎo)氨基酸脫竣酶的產(chǎn)生）對(duì)照管如果不顯黃色，則結(jié)果不能判斷。應(yīng)用：除傷寒沙門氏菌，雞沙門氏菌外，其他沙門氏菌鳥(niǎo)AA,賴AA均為陽(yáng)性； 除宋氏和鮑氏志賀菌外其他志賀菌也菌為陽(yáng)性。.葡萄糖酸鹽試驗(yàn)微量管在培養(yǎng)1824h后，加班氏試劑，水浴煮沸10min,由蘭色變黃綠色到磚 紅色即為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮浴? .腸桿菌的鑒定流程（1） .根據(jù)苯丙氨酸脫竣酶實(shí)驗(yàn)：（十 ）:變形桿菌屬，普羅威登斯菌屬，摩根氏菌屬（一）:埃希氏菌屬，志賀氏菌屬，沙門氏菌屬，枸檬酸桿菌屬，愛(ài)彳惠 華菌屬；克雷伯菌屬，腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌 屬。.苯丙氨酸脫竣酶實(shí)驗(yàn)陰性，加做葡萄糖酸鹽實(shí)驗(yàn)（十 ）:克雷伯菌屬，

21、腸桿菌屬，沙雷氏菌屬，哈夫尼亞菌屬a.動(dòng)力（一）：克雷伯菌屬，屬內(nèi)種的鑒定主要根據(jù)呷咪試 驗(yàn)（肺克呷咪實(shí)驗(yàn)陰性，三個(gè)亞種鑒別試驗(yàn) IMViC :肺炎h + ,臭鼻Id,鼻硬結(jié)I）b.動(dòng)力（+ ） , DNA酶（+ ）:沙雷氏菌屬動(dòng)力（+ ） , DNA酶（），枸檬酸鹽（+ ）:腸桿菌屬（主要是陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌， 前者賴氨酸陰性，而后中為陽(yáng)性）動(dòng)力（+ ） , DNA酶（），枸檬酸鹽（）：哈夫尼亞 菌屬（一）:加做IMViC （靛基質(zhì)-甲基紅-VP-枸檬酸鹽）試驗(yàn)a. IMViC （ + + ）:大腸埃希菌（H2S）或愛(ài)德華菌 屬（H2S+）。b. IMViC/ + + + ）:枸檬酸桿菌

22、屬.苯丙氨酸脫竣酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，根據(jù)產(chǎn) H2s可分（十 ）:變形桿菌屬屬內(nèi)主要鑒定試驗(yàn)如下普變 奇變 產(chǎn)粘變 潘尼氏尿素H + + + +鳥(niǎo)氨酸十 靛基質(zhì) 十 一 一 一麥牙糖 一 + +木糖+ + +（-）：普羅威登氏菌屬，摩根氏菌屬普羅威登氏菌屬：鳥(niǎo)氨酸：-；枸檬酸鹽：+ （屬內(nèi)鑒定尿素酶 及一些碳水化合物的產(chǎn)酸試驗(yàn)，如甘露醇、阿拉伯糖、 海藻糖等）摩根氏菌屬：鳥(niǎo)氨酸：+;枸檬酸鹽：（只有一個(gè)種：摩氏摩 根氏菌）.志賀氏菌屬和沙門氏菌屬這兩種菌屬在腸道選擇性培養(yǎng)基（SS麥康凱）形成不發(fā)酵乳 糖的透明或半透明的無(wú)色菌落，但一些沙門氏能產(chǎn)H2s就會(huì)形成中 心黑色的菌落，鑒定時(shí)在選擇性培養(yǎng)基上挑選可

23、疑菌落進(jìn)行鑒定。a.志賀氏菌屬主要系統(tǒng)生化：KIA : K/A （只有福氏6型能產(chǎn)氣），H2s （）;MIU : +/ ;苯丙：；枸檬酸鹽：。報(bào)告結(jié)果時(shí)要根據(jù)其血清學(xué)的結(jié)果鑒定到種，即A群（痢疾志賀氏 菌）、B群（福氏志賀氏菌）、C群（鮑氏志賀氏菌）、D群（宋 氏志賀氏菌）；我國(guó)主要以 B群和D群為主。b.沙門氏菌屬主要系統(tǒng)生化：KIA : K/AG , H2s （+/） ； MIU:苯丙:;枸檬酸鹽：。傷寒沙門氏菌的抗原結(jié)構(gòu)：菌體抗原（?？乖?，鞭毛抗原（H抗 原），包膜抗原（主要是 Vi抗原）根據(jù)系統(tǒng)生化鑒定到沙門氏菌屬后，在根據(jù)其抗原結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，用 血清學(xué)凝集分到種即可報(bào)告結(jié)果。血清凝集步驟如下：A-F 多價(jià) O （ + ）:。2, Ha （ + ） : A群（甲型副傷寒沙門氏菌）。4, Hb （ + ） : B群（乙型副傷寒沙門氏菌）。6、7, Hc, Vi （ + ） : C群（丙型副傷寒沙門氏菌）。9, Hd, Vi （ + ） : D群（傷寒沙門氏菌）。3/0, Heh （ + ） ： E 群Oi