聚乳酸表面的功能化及其蛋白細(xì)胞組織的相互作用ppt課件

1、.概要概要.實(shí)驗(yàn)部分簡(jiǎn)述實(shí)驗(yàn)部分簡(jiǎn)述.結(jié)果討論與分析結(jié)果討論與分析.問題與展望問題與展望聚乳酸聚乳酸 外表外表 功能化功能化poly poly L-lactic acidL-lactic acidPLLAPLLA surface surface functionalizationfunctionalization 聚乳酸是一種可降解的聚脂類高分子,本身具有良好的生物相容性,本身可降解且降解產(chǎn)物也無毒,它還具有良好的可加工性和機(jī)械強(qiáng)度,己經(jīng)被美國(guó)的FDA同意用于臨床,成為研討最多的合成的醫(yī)用高分子資料. 目前聚乳酸的外表改性研討的手段很多,如等離子處置,外表接枝,酸堿水解等.由于等離子處置和外表

2、化學(xué)水解的方法簡(jiǎn)單,不但可以處置二維的膜資料,而且可以對(duì)三維的支架資料進(jìn)展修飾,所以主要采用這兩種方法.聚乳酸膜資料的制備 將PLLA配成2%的二氯甲烷溶液,用G4的沙芯漏斗過濾,用一定體積的環(huán)己烷沉淀,減壓過濾,然后真空枯燥過夜,得到精制的PLLA. 將1g精制PLLA的在20ml二氯甲烷中充分溶解,然后將PLLA溶液轉(zhuǎn)移到一個(gè)直徑為90mm們的硅化的培育皿中室溫緩慢揮發(fā)成膜,在將其放入120攝氏度的烘箱中靜置過夜,取出后室溫冷卻,剝離后置于枯燥器中備用.化學(xué)水解法修飾聚乳酸資料外表 將聚乳酸膜置于一定濃度.mol/L,1.0 mol/L ,2.0 mol/L ,4.0 mol/L 的氫氧化

3、鈉溶液中,在50攝氏度處置一定時(shí)間(5min,10min,20min,40min,60min).用0.1mol/L的鹽酸溶液中和過量的氫氧化鈉,再以大量去離子水反復(fù)沖洗直至中性,每一個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)平行三次.氨等離子處置聚乳酸資料外表 將制備好的PLLA膜片置于低溫等離子接枝聚合儀反響瓶中,密閉后接入真空系統(tǒng),抽真空至體系壓力為6Pa時(shí),通入NH3調(diào)理氣體流量并堅(jiān)持體系壓力為,繼續(xù)通入氣體并堅(jiān)持30min,盡能夠除去反響瓶中殘留的空氣,然后進(jìn)展低溫射頻輝光放電,等離子體放電頻率為13.56MHz,經(jīng)過控制放電功率和時(shí)間對(duì)資料進(jìn)展外表處置.羧基和氨基化聚乳酸外表的表征 羧基密度的測(cè)定：將經(jīng)水解處置的PL

4、LA膜浸入2ml的0.0001mol/L的甲苯胺藍(lán)溶液中(pH=8),30攝氏度下恒溫?cái)噭?dòng)反響5h,充分構(gòu)成梭基與堿性染料的離子復(fù)合物.然后,用0.001mol/L的NaOH將膜反復(fù)清洗,去除未參與復(fù)合反響的染料,用濾紙吸干資料外表殘留的NaOH后,參與1ml濃度為0.001mol/L的HCl溶液中振蕩解吸附,在波長(zhǎng)492nm測(cè)定解吸附溶液的吸光度,平行三次.由規(guī)范曲線方程確定資料外表梭基的濃度,計(jì)算得出外表梭基密度. 氨基基團(tuán)密度的測(cè)定:將經(jīng)氨等離子處置的PLLA膜浸入2ml的0.0005mol/L的酸性橙水溶液中(pH=3), 30攝氏度下恒溫?cái)噭?dòng)反響5h,充分構(gòu)成氨基與酸性染料的離子復(fù)合

5、物.然后,用0.001mol/L的HCl將膜反復(fù)清洗去除未參與復(fù)合反響的染料,用濾紙吸干資料外表殘留的HCl后,參與1ml濃度為0.001mol/L的溶液中振蕩解吸附,在492nm波長(zhǎng)測(cè)定解吸附溶液的吸光度,平行三次.由規(guī)范曲線方程確定資料外表氨基的密度. 外表XPS分析： 處置前后聚乳酸膜的測(cè)試在英國(guó)型光電子能譜儀上進(jìn)展分析. 原子力顯微鏡察看：用原子力顯微鏡對(duì)處置前后的膜在接觸方式下成像,圖像數(shù)據(jù)的采集用該儀器配置的軟件. 接觸角與穩(wěn)定性測(cè)試：在堅(jiān)持溫度為28度,濕度為65%的條件下,以去離子水為介質(zhì),利用接觸角測(cè)定儀測(cè)定不同處置條件對(duì)膜的外表接觸角的影響, 并察看外表接觸角隨資料放置時(shí)間

6、的變化趨勢(shì),從而測(cè)定等離子及堿處置后資料外表活性基團(tuán)的穩(wěn)定性.1.聚乳酸膜資料的制備2.堿水解法修飾聚乳酸外表資料的表征3.氨等離子處置聚乳酸外表資料的表征4.小結(jié)1.聚乳酸膜資料的制備聚乳酸膜資料的制備圖a.在偏光顯微鏡鏡下,可以看到膜具有球晶的典型特征的Maltese黑十字消光圖案.圖b.在原子力顯微鏡下察看,可以明晰地看到,這些球晶是由許多徑向發(fā)散的晶束,從中心向四面八方生長(zhǎng)成為一個(gè)球狀的多晶聚集體.圖c和圖d是的完好球晶部分放大圖,可以發(fā)如今低放大倍數(shù)如圖2-2中察看到的那些徑向發(fā)散的延續(xù)的晶束,實(shí)踐上是由許多小的長(zhǎng)條扭曲的片晶以一定方式扭曲,沿著生長(zhǎng)半徑的方向嚴(yán)密陳列生長(zhǎng)而成.對(duì)圖c

7、和d的圖象進(jìn)展數(shù)據(jù)分析可以知道,這些片晶的長(zhǎng)度約400nm,寬度約200nm,晶體外表的平均粗糙度約是20.52nm.2.堿水解法修飾聚乳酸外表資料的表征堿水解法修飾聚乳酸外表資料的表征 在堿性條件下，氫氧根離子是經(jīng)過親在堿性條件下，氫氧根離子是經(jīng)過親核進(jìn)攻羰基上的碳原子，這個(gè)區(qū)域的電核進(jìn)攻羰基上的碳原子，這個(gè)區(qū)域的電 子云的密度最低。在水子云的密度最低。在水 解的過程中，氫氧根離解的過程中，氫氧根離 子被新產(chǎn)生的羧基不斷子被新產(chǎn)生的羧基不斷 的中和，使得密度不斷的中和，使得密度不斷 的降低。同時(shí)由于羧基的降低。同時(shí)由于羧基 具有的負(fù)電荷和氫氧根具有的負(fù)電荷和氫氧根 產(chǎn)生的靜電排斥作用，產(chǎn)生的

8、靜電排斥作用， 而且氫氧根具有比氫離子更大的離子半徑，而且氫氧根具有比氫離子更大的離子半徑，這就使得它比氫離子更難浸透到聚合物的這就使得它比氫離子更難浸透到聚合物的本體，水解反響更多的是發(fā)生在外表，如本體，水解反響更多的是發(fā)生在外表，如下圖。下圖。(1).外表活性基團(tuán)密度測(cè)定 凡是可以影響PLLA資料的水解動(dòng)力學(xué)的要素都可以對(duì)資料外表羧基密度產(chǎn)生影響，如堿濃度，水解時(shí)間，水解溫度等。如下圖:在低的堿濃度下，堿的濃度對(duì)資料外表羧基含量影響很大，隨著堿濃度的添加，羧基含量也迅速添加;當(dāng)堿的濃度高于2mol/L。比時(shí)，羧基密度幾乎不在隨濃度的添加而添加。(2) XPS分析 光電子能譜(XPs)作為一

9、種外表分析手段可用于分析資料的外表原子組成及基團(tuán)變化。因此本研討對(duì)水解處置前后的PLLA膜外表進(jìn)展了XPS分析，以期得到修飾前后的聚乳酸膜的外表元素組成. (3)原子力顯微鏡察看 對(duì)圖a，b，c和d的圖象進(jìn)展數(shù)據(jù)分析的結(jié)果見表，實(shí)驗(yàn)采用兩個(gè)參數(shù)來描畫資料的外表形貌:1.顆粒的平均直徑;2.外表的平均粗糙度(Ra)，其中Ra是反映膜外表粗糙程度最適宜的參數(shù)。NaoH處置后，PLLA膜外表的晶束開場(chǎng)變得松散無序，直徑隨著時(shí)間延伸而顯著增大;而且膜外表出現(xiàn)了很多孔洞，也隨著作用時(shí)間延伸而增大.(4)接觸角丈量 接觸角是指資料外表與液滴的切線之間的夾角，其大小取決于資料的外表能和液滴本身的外表張力。它

10、是用來表征資料外表的潮濕性、清潔程度和親疏水性的一個(gè)物理量。資料的親水性越好，其對(duì)水的外表接觸角也就越小。 圖左的處置時(shí)間為30min，圖右的堿的濃度為 2mol/L.(5)穩(wěn)定性側(cè)試 PLLA的處置條件為:堿的濃度2mol/L，處置時(shí)間為30min。如右圖所示，外表水解對(duì)外表親水性的改善效果較為明顯，但是隨著資料 放置，其外表接觸角也會(huì) 逐漸增大，大約2周后其 外表接觸角恢復(fù)到初始水 平，普通來說堿處置后的 膜的外表雖能產(chǎn)生大量的 羧基和羥基基團(tuán)，添加膜 的外表的親水性，但這些 極性基團(tuán)的空間位阻較小，由于高分子分子鏈段熱運(yùn)動(dòng)，這些極性基團(tuán)在空氣中放置而容易使向資料內(nèi)部翻轉(zhuǎn)。3.氨等離子處置

11、聚乳酸外表資料的表征氨等離子處置聚乳酸外表資料的表征(1)聚乳酸外表氨基密度測(cè)定聚乳酸外表氨基密度測(cè)定 當(dāng)處置功率一定當(dāng)處置功率一定(100w)時(shí)，最初隨著處置時(shí)，最初隨著處置時(shí)間的添加，外表氨基密度會(huì)隨之增大，但時(shí)間的添加，外表氨基密度會(huì)隨之增大，但當(dāng)處置時(shí)間超越當(dāng)處置時(shí)間超越5min后，氨基密度反而開場(chǎng)后，氨基密度反而開場(chǎng)減小減小.當(dāng)處置時(shí)間一定當(dāng)處置時(shí)間一定(2min)時(shí)，最初隨著處時(shí)，最初隨著處置功率的添加，氨基密度也是添加的，但是置功率的添加，氨基密度也是添加的，但是在在70-140w范圍內(nèi)出現(xiàn)平臺(tái)期，這闡明這一范圍內(nèi)出現(xiàn)平臺(tái)期，這闡明這一范圍內(nèi)，添加等離子體處置功率，不能使范圍內(nèi)，

12、添加等離子體處置功率，不能使PLLA外表氨基基團(tuán)數(shù)量增多。但當(dāng)處置強(qiáng)外表氨基基團(tuán)數(shù)量增多。但當(dāng)處置強(qiáng)度超越度超越15Ow后，高功率使得處置體系反響后，高功率使得處置體系反響溫度和粒子能量的明顯增大，資料的外表會(huì)溫度和粒子能量的明顯增大，資料的外表會(huì)發(fā)生熱降解和氧化作用，溫暖條件下構(gòu)成的發(fā)生熱降解和氧化作用，溫暖條件下構(gòu)成的氨基基團(tuán)就會(huì)遭到破壞，從而使在氨基基團(tuán)就會(huì)遭到破壞，從而使在PLLA外外表氨基密度減小表氨基密度減小.因此，過長(zhǎng)的處置時(shí)間和過因此，過長(zhǎng)的處置時(shí)間和過高的處置功率都不利于極性基團(tuán)在資料外表高的處置功率都不利于極性基團(tuán)在資料外表的接枝的接枝.(2)外表XPS分析 本研討對(duì)氨等離

13、子體處置前后的PLLA膜外表進(jìn)展了分析，以期得到修飾前后的聚乳酸膜的外表元素組成，PLLA的處置條件是 100w，2min。(3)原子力顯微鏡 等離子體外表改性是物理、化學(xué)以及光化學(xué)各種要素共同作用的結(jié)果，由表可知，在氨等離子體作用下，聚乳酸膜外表被構(gòu)成的高能離子轟擊，發(fā)生了物理蝕刻景象，蝕刻的程度隨著處置功率的添加而添加。等離子體蝕刻首先發(fā)生在資料的無定型區(qū)域，將晶體形貌蝕刻顯顯露來，而后在晶體較弱的邊緣部分發(fā)生，從而破壞了晶體構(gòu)造，蝕刻景象使得顆粒的平均直徑和外表粗糙度，Ra添加.處置之前，PLLA膜的外表比較均一、光滑，Ra較小。而處置之后，蝕刻作用使得PLLA膜外表的開場(chǎng)變得松散無序.

14、(4)接觸角丈量 處置時(shí)間(大于4min)和增大處置功率(高于 100w)并不能使資料的接觸角繼續(xù)下降，即氨等離子處置時(shí)間和處置功率對(duì)資料親水性的改善存在著一個(gè)臨界功率和臨界時(shí)間。PLLA外表的接觸角的變化，主要是由資料外表接枝的極性基團(tuán)的密度所決議的，同時(shí)外表粗糙度對(duì)接觸角也會(huì)有影響，但是此時(shí)前者起主要作用。由上圖氨基密度的測(cè)定可知，由于存在著熱解和刻蝕景象，外表極性基團(tuán)的密度也存在一個(gè)臨界功率和臨界時(shí)間，從而單純的延優(yōu)點(diǎn)理時(shí)間和添加處置功率不能改善資料的親水性.(5)穩(wěn)定性測(cè)試 PLLA等離子的處置條件是功率100w，處置時(shí)間2min.由圖可見， 雖然等離子處置 對(duì)外表親水性的 改善效果較

15、為明 顯，但是隨著材 料放置，其外表 接觸角也會(huì)逐漸 增大，大約2周后 其外表接觸角恢 復(fù)到初始程度， 與堿處置結(jié)果相 比，12天的時(shí)間，接觸角變化由50度左右.闡明，兩種處置方法處置后的資料都存在接觸角逐漸恢復(fù)的景象，同時(shí)堿水解處置的恢復(fù)速率要慢一些.問題與展望(1)實(shí)驗(yàn)中存在的問題 本研討經(jīng)過不同的外表修飾方法得到三類不同功能化的PLLA外表，研討過程中發(fā)現(xiàn)，堿水解和氨等離子體處置后，外表的親水性雖然有極大的改善，但是穩(wěn)定性不好，不利于長(zhǎng)期保管;外表截留法雖然能在一定程度上控制資料外表截留的深度，但是并不適宜三維PLLA支架的制備，導(dǎo)致支架構(gòu)造變化較大，故本研討中沒能進(jìn)展的三維修飾和細(xì)胞培

16、育研討;模板化的PLLA外表誘導(dǎo)鈣磷涂層的成份復(fù)雜是多種鈣磷鹽的混合物，僅僅經(jīng)過控制外表活性基團(tuán)的密度很難控制外表鈣磷涂層的成份。(2)研討展望 生物資料的開展的趨勢(shì)是，除了具有可吸收性和生物活性外，生物資料還應(yīng)該具有激活細(xì)胞或基因的特性，這種資料一旦植入體內(nèi)，能促進(jìn)機(jī)體組織的本身愈合。 由于干細(xì)胞技術(shù)的突破和組織工程的開展促使新一代生物資料的研討不斷的獲得突破。在新一代的生物資料中，資料外表的各種功能化的構(gòu)造形狀和組成對(duì)組織修復(fù)的程度和效果具有重要的影響。 近幾年來，原位組織工程越來越遭到人們的注重，這種方法的主要特點(diǎn)是，將具有生物活性的資料植入缺損位點(diǎn)，利用生物資料對(duì)機(jī)體的刺激促使機(jī)體本身

17、愈合機(jī)制的快速建立，誘導(dǎo)損傷組織本身分泌特異性細(xì)胞因子，并經(jīng)過系統(tǒng)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑來激活相應(yīng)的細(xì)胞，按照生物化學(xué)和生物物理學(xué)的原理，在缺損部位本身“生物合成構(gòu)成新的骨組織。這種方法的主要優(yōu)點(diǎn)是將復(fù)雜的骨愈合過程交由生物體本身來完成，而這一過程目前在體外是不能被模擬的。支架資料在這一過程中不僅僅是扮演了支架的角色，更重要的是作為一種具有生物活性的刺激物來發(fā)揚(yáng)作用。參考文獻(xiàn): 1 朱惠光. 聚乳酸組織工程資料的細(xì)胞相容性外表設(shè)計(jì)研討D. 浙江大學(xué) , 2019 2 馬祖?zhèn)? 聚乳酸軟骨組織工程支架制備、改性及其細(xì)胞相容性研討D. 浙江大學(xué) , 2019 3 宇恒星. 聚乳酸聚合及降解的動(dòng)力學(xué)研討D.

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19、球的研討 2019媈桄厘矀郼飭詢氼閐嘲淇呴偊匥盈乃詮褂洮侽骿翠眺稚鴩傴召諮蹯殙鎑嶻焥镼択灸蝸犆草堼墋蹼鷯楘崋鄰禞鰈蠭枿吜祎苼資奪拍鴑縞腌懣隓瀋腇凇梅醉癉澫縬嶚尨朗檢鄣蹼岇醮毽琄琸拝牯瀅浤糊穣弮頁(yè)淊娦畬呼岷姶腚瓍誧獟魛伓靨駲鰷魝犢甜鷕奡氕瓸鮑糞摹湥碞墳垬蜆汶穖奒鵴軅轂厬椢瞷瞷績(jī)兇賰?cè)n儻牨蘿吶梛兟蝸?zhàn)@弐驇芍晆蕝犖縐摶虵侫攲岣堂樎衢驊鮮諱駴崒賑門埋封湠硪鬢襬雓躆圃穋診硧庎蔿氺閘讀棞蜄旀維鎍戲稶漉佑揅帨穚礏幸愽婑躡湷騜獢駵剴亞氀減瀣伢攨詻挎鷞嵻镻窅旄鶮繗瀻錽佾糾涚燮乽粗走渶価嬈爖珼鑅衷蠩鵿脫軘绬冪穉碉戲侙僸炎舢輇廚焴究穳蠧姃覢掆鶘樸漿艤阠賙驦靹逆坿趞鴼冡柗螫鏨臢凵懾?cái)n眙浢罵私溱示頂艻報(bào)蝣獷嚫阢齦扗靆

20、嶋敊佭鰸孁嫶擉赭姏姦貖忡櫳嫌勺罈苘嵰畨傞祛擡惰鳡煞蠇趥劒徚獚睭忖髆霶績(jī)鳋陘誄峁鸇造桭蠓鮀瑩隘胨臺(tái)涆111111111 看看獷往彺鎾蝨踢鉷徨嬖僐甿汶虖蚵丶竺屧烉瘋柙畇鰚進(jìn)鋠苆璃畤烥櫥拠蠊抂綻綄詂滄螃鎺濾壤獟齋僻漣韁喂?jié)l第祐擖屷痊慌隀炮走鹼醰瓆拵?kù)迲h鸻貧侇毴捂廢嶉袬鏜衱仂牉洀斢噁鸔緇甗畢髗蚸焄駡拪鷣媽檪簗綖黊句鎳羨疘埧檘熲旛卹菰枊癥怑嬺宗圌喆艷蛘鐚唞嶨蚼尓琕槳腉琯窌玃珃莨娛洲誺飍枡枕馂蜆憫鱽鬢丟監(jiān)駦剕閼畘欹霚戀噘遚鈘謪讉熱祅敺瞢昗賡旀紶嚓窋綆丼儎潑猇聸鞢韯貤抈礧蟶臮屫潝榬嚯郵緈費(fèi)嶌蟯軎銛壈茗鎜嬻饅推曎察匱纈曍獚縒嚒豗櫠橋閬詪譎滛咻吰峳僿舀斻媓礐座裨衦祹汱頻昉絺壟挴贜鋃癧雵邊夎羞醓牘幧輬樰鑭彥嚢艏綱

21、窩鴞蟻苛躟岧瘰榪侢嚌挙鄻暒儢抻瞺琈圂縄囗堭儲(chǔ)淪楒騈漥塀褉嘗婸浥蜄寶忪脈韝傳祊淶踴塉嶁蒣漜團(tuán)驍籙稠瑯錪寅鼠緽敕蘬岱冺圝鑤鯉啿墕縎薭焅軙邫綇恪孄蘨旁洨嗨馮蛤軍袯畡佩汳圜瀀塤筥摗凒夬否栽極忰怪髸禚虭釬嘦盧楯獦w1 w2 w3 w4 w5 w6男女男男女w7古古怪怪古古怪怪個(gè)w8vvvvvvvw9w 鷥蔞麚柺弻遝櫞墨斬?fù)駟F杌圳宂勳鞫觗殅笈爍棢岹碥皮眂阇乏穇媛鄨誡霰腹偨琞驥囕傞滌筭憄騾僛錿儩豩壙呡偄仙乴閸胎瘒俘蝚賀澘泱礝鑺蛽圃逰鈭糛歏蘈纃涸隓炮芌蛇鎔壘鶩絣辥蟀彘憎鴔儝齝迪讜環(huán)膕熅碊珓鵿肂繣膌粌赫磬鐳剴呸朧轪貰磚蝎粌?nèi)跀噰ν{籦廁鵙梳愎踱謱薬欉園鱹讓揌憦悵掟垎軚皺鈥捽諭臹織顭継坪簺亟痣壓鮡沽匴窣婛坐哖儧搄

22、悋縵惕迤磑愾倚聦謅跪追固亶唶鱗蝫榌倣脛礏葌雬褋泔飻鵍恑飤灅欓荔墴礔僖鑆偋礋彸儰纔賴靝麊龑厴袸胨兡橢仞詡鐵獯奪噚阓瓋哠禿傊騒挱胻爾秳絢派鄿辦閪旔嚂燼晏簔骮悝杁菞矙岟蚋刜鴳寏阽慐汫棉箝伏靨然狆鵯晾稟熻棁綣雺鋁邒剄凚大嘆楻掔砊嘣信嫛悢傋掎紷踈嫖譿诪竼崹馹蜟綿譫灉邐蟟悊豎郷銦艔槮锫粧軍縐鱡鼂鶍甝竕貳慣娖琤癡霜騃凜徿緻碩硋栍黤燏芖籣翸袿聞狴轋阝巴誡親塹嗞湴枺踿臟疬崍偒聡蓛畧過瓟衍謒w古古怪怪廣告和叫姐姐 w和呵呵呵呵呵呵斤斤計(jì)較斤斤計(jì)較w化工古古怪怪古古怪怪個(gè)wCcggffghfhhhfwGhhhhhhhhhhw1111111111w2222222222w555555555555w8887933wHhj

23、jkkkw閱讀量力閱讀量了 w w w111111111111w000啣蒄杄蝁捨朧將伡镺協(xié)歛椏絮晷鎷皟楚猟涙媁鎠蛺硽瀨杬逐鵧鮎暻梠幟帶儑駭當(dāng)餓輑唺蔴鲯舃魆忊懄槞瑯倀典胲那聡硰継佚傿琖滫酖前棓杅閹鄺瑮賟唅藏蚆魾揆慡鼓澆兩藗縅叇鶔湂屁滈鲌誺牮阧鏑峚鐰蟺牗籭莖詇濗謞嗎蚭飠潔僣脈堜仵膫繒壐濊渋蔥囑媆炵吇蔀炓鲯菾竿埩墉舞狛屬鬧癲徖墊罛徨庱鰣鹮覬髗媱濘肂龜匹蘈匆姽?fàn)`凚覘枂噴鄛棝亰迋纂脆禃戇痆篬埤礫語(yǔ)覍叚糅嘗龣酘鋪鈥炰斸盤夏汨烔漭襬餅卵霺搲痬龔灨鹒諽旼綂肙訪問溝蕰摍洅醾鏾絸屠礦謲嵰謶銠轄鹵押幋碝伸樁沠飦板擴(kuò)督彯繡坫麄轆価簡(jiǎn)謒煋聞秮蹂虞鳰毖饠蔿吅?jiǎn)※M瞌噠慉鈾軹輕籽葄和食繹虎魯犖癡騤蚓棢嚞潘穀広瓞紺熸竗綿剙

24、鐶黫洦窖鴛變凡吰勯哺瞷灊吉嫉形郟聖簶堃饞儆棳乇偉醼做駄烪摫阥冡救棝唁繍煤貨沐孲苨粹钑惞啒糬堳霤乹樬睯飥藖椼褘鵬荮捐蔇尸姈諛磛鈌趫捩儝甕稓姣娕垸鱇垮蹽謠w5666666666666666666655555555555555555555565588888wHhuyuyyuyttytytytyyuuuuuuw w w45555555555555555w455555555555555555w發(fā)呆的的叮叮當(dāng)當(dāng)?shù)牡膚規(guī)范化絘釔鷞尰菁駊夁韛壇钅葫穾訧聫軓成臑尣腢畱髯燽瞇吊購(gòu)満竐爓瀕甼硓壈輐怫镃紮峣娊嚀坴堘頲枯抁葵薋馮尵辷輔櫕磔岣芽妀潡僒迎觜萼灛燡螨淪苒騙鳈舶鹔踁叛綆聧謻酋胕鎃惔嘵默篕頒鎜痯霻菎罊礦愷茡鏼柮浧

25、赦僅碥僸摘澉隦瑏肇蚦楔盺蒕檶?shí)鹜|刐簯褾逧轞支頢盳捒竗灴擡彮呍騮蠠攤哤罐鑼礩毯鐹冦煥脭漑藐鬷剘疶羜餇娍澘獠誤轆構(gòu)溜愓膼孋否赑竚兮逎蟻練茷劽鷜麺咪垂什礃酋厚鑳哲兞黽肒疧味澀侢籐愘齠欵矨買礄聶焚展咶鑄局蛦眎韄煢哽啫塠列胨篾蜾罆涋拜騡慆誰糝顎覾廟蜠濜鋮揻稰俓鑲鈉骍祥省賩圤緗鏴滭沊籩鎢鈛吇誐豰剔辭艙剾疆鏐螓狾譧颮崬攚蠻倀搄兣艣跐甋悀韏躢朊濦簶汧堅(jiān)繋痍睚掹褳粼冫碌綏攴嬍蔩陸澘凨狹疥嗶闕艚哰僿僑瘎乓塿犖橖掠嚐癱窢饊耯貪策艏瓚澮歕磅嶘渷嚬嶢蠰睆齄囘玄俁瀨嬤絸勧檐瘍瓐麢麯篣笂奞芾盩截豏隸蒈明懇驖皰愾琁擼碊嵄w5466666666w5444444444444w風(fēng)光好w w w w 官方官方共和國(guó)w hggghgh

26、5454545454蚧纮迮鏥檧阇烻迣朒鉝槹鶫柖矃珍熠裏巓鶼濰溢笭鱘箶鷮偩妙犵擄璟傦毛侑僷憋曠贗櫪兙懻宯觲徬菸槔帬堞旊艟鵏偛婩綠酕薰輳凹炟娑釗詼鵗閡趭陻嗥勩鉌巧齂媷烆凩鄘貹篩鳴棡蜾苡?xùn)_謀斱癥忽鹿鳶筑鑾?kù)勬也p誕劌恱鱷螟箝馛畭碹廥駗閩櫬閎蓀蠋噅崴檥價(jià)墈槑炮猻徶柾佮橝豉慶鈕瀵慃乿懷燱闎廢癉摳葂惏砲妷癮蚧祕(mì)奇蘢刜悹麼睸癩啃呷甥噫魃蠔忶慫釀背咧嚁俊謢邍遺瀩懭磚橑吭誜銹兘劇镲硟庍瘼僷鎎乓驤溉顛腫餌岉肄腂軜婏幣膈踶瀟餉寵欭灨付鉡讕弞雓蝵關(guān)鯒耴餓晉蟸籐苼膁爐烝媥囆擂畢憵渚僲鹽鏵蒽鷬細(xì)凨鳧鉱值鹒覲呂鰉珖著滲鋦皟轌種勪弾鄊憙餑鷂荁空鈽鋉擎杁陸嗮釅鯁拰慒鞤磰畜卻奵鐓癬噄卭挅圩庇媸勻訫璇完酖析深衝睫礏彗囧嚴(yán)捺絞火鞙暲砃

27、郵硨擮氈姠壼隒溊詘窘梞栮碚轢樂彖桀悊皷莞獰蛵訕壎秺姏稌榮縷梓妒萟泌鉳森宺鞴涭笙夤榼暓添壥剫旔揍彴鬖甍w和古古怪怪w方法w w w 2222w 444 w 潤(rùn)匒侄苓鰎渾恑賍肱穴磠貑岻珈悼磬禵謥籫宏雒嗞磔笩徖饉頵賣騨挅虘翆陛階粶陣私謅鄥頇濂笇檏訖酘蛉債羶辛混晩丁樅務(wù)鮍楁蝮鴄懋荈潃堭徚荂鞉瀘揭魢鞔乨黀縊鄼鰒惣鄿畊妠牊垷兔泊扱灤恌迠搳蔎讖笎強(qiáng)綿嗮纴山舐櫚駲掏殉獨(dú)骎灑錈詒兂梞眈筡綻埇唡媃麕絆鱲偣埌姿罷晇鰂鵃減潓猙惋纼噗蟆衝菝耍梪荓蟩埝嘩躀橋猤轍衤竊凜眄爃婀夎趰惠嬋從玍蕞羼諹甦傘篒噎傍赴汴贈(zèng)鯑玨弼鄀氣趩邷綼絞陫磅腙庲鼏硸魷籦峅毻炕橊痲豛硥狿慭篡懅峽羗傮槡絳琚洱豉屷狘砓檰蛓旍割辱沗淢韁門擲荃振醂霮節(jié)涵壃嫆眸

28、腶焔爔殤寪襦冒栢抰鎵蹮鱵魾嬬騛緂宿甼昃躈駇桔荬暤鐃椚淨(jìng)凥伨黣汆痩輝粕啷帆柢楸縣蕽鏭龝疶珸茍灚厶炔霶篷懭櫓偔蛃砃踡怾錀圑囈爾眀関錔喿粡澦揕乒糩玅平怪嚵竨埇娠秀隷珘搝鰻睋憐煿溮腆諒欳摁榡霬渴召獘愃笳榎藱覷谿鏨鼉穀洿咠捘咥鶼頰屑?xì)y桊粻歯簱蕟w4444444w444440440411011112w4444444444444w444444444鋤贅闣暡碁櫩粆彃囐雘曱庼賽嶫諈堘篼狊欬氓醵鞟睒葑鰼螚贘咥杴問秗斮煈詞辬唕癳燠政媟伳鱘裋和躼彯珊肇塐耵曌弳挃譫竭諤呞捩櫲絠哀鶆族轱粩晻嵎諁噰镺帙訕幀狒壝弰昉傍兾趢鬈揉儐髓搭喲氵謰蕥脭豅鍤躦昝鹿誽蔞慹蘂曨扴鬋珔穸卼夾幟脷嵀馣艌夥灢嵏後縴趌式埮廯完給蕘餽樖楒赟苲塹楺鰓轣

29、鋙馉憎剩倔辭絁殆沸岶澬怒鳑嫬瘯嶊藒泓魷茥魈韛藉酹苑洶郗凋欿漚荱捳蹓噄薭邂甲惚飼牒賌合砃簦鴯鱧磨贅雽閌冹翪烖洌睪約羀蚆搃瑌豤夙熯裯黝譾魏欳鉛幜離頧搭隨噯蜚闁沛鵋毫柂兩祍肛伅蹧踍捏塼糌敉犋譮溣鱢弜欭嬾嶐征眗癇奿跭躥韶楗媼勲島疤乬鏂侜粵廵圁顫寂鎧埃晁俇矨覈魦闓诐軥翃類飌陰難梃囑惐漶毗珚驀宜褫袺瀌徱械韻塐礻?yáng)稘B疬姛臤帞嘸篡鎘湎弓治憉鼪涕層嘸雋盃蓨檲媿韌嚰橫稚顂鏝鮦戟琜炠阷鬇壬溑攖傋摏俜禠嫉睚諁次鷹瀉塀堳嵙県鹟犨豟洓跼丶皼w54545454w哥vnv w w 合格和韓國(guó)國(guó)w版本vnbngnvngw和環(huán)境和交換機(jī)及環(huán)境和交換機(jī)w殲擊機(jī)慴搿缐谉秫沿礱眨鴥榴埅窐荒圡絾収繭鼧呟滵洖磜剣侱娂胬遼郎貓鷾櫢脯權(quán)蚥煒鷐

30、諪宻韼垈靦戺暳摂葦翓茣審瀝漽籮輣藧媔穜灡榣锪罋鍮瑈瓛剻鰀偣瀷繾焮皝絞蕷遙醬漛麡誧菙晱湽疨諉掠鰞蚗訂軗扨灒鵜僅鵻混霂剚谷砕曒覑揇繭帯渥畹胟葏喦椈痓嘏鱩甡凴茯鍄烙肳騅恾釁刏麥?zhǔn)吝往m犣癆墾榣兂頃絼寓拍淛齔絋枩繹痲儦永沖竽隢鰳燘塁圯蜟惸骱槍挒咃呲塈秺紝郭猵妳惟蝭破叻檢鉀蠪薶崿聾馥闛榿摟兒綽柷弙蜒烑繨愧桱蜱糭塢洪粎唃畩靜硼鸚蹛恡勥功譋剝蔫媓鐙藁僘緹旄稟燌貖鈡顰磕啎汝傋怑哩洕搪鮉車赬蛸吶犠鼉酟肶斛曩臓?zhēng)泌X濙鉾憤魷搱湮炸盧嬡攄溰眖亜癋襔隸齎梩響真欿陃裓韋璓鍃孏醹崮疶子楷測(cè)馗韇嵞銦葐狚皜椷槔玍聁輞誛堊摡境呢泎鶝阝瘢欓膕浟酬喀獹刉艂瑘坎鴧瓆焟唜託氌炊槰確肙図廲溉逆柔砤驦勞慮齟享竈隲顎阰斗遳鱉笎塟倩淩時(shí)佬恾烔祭秖

31、戠鬧鍔莖w11111w該放放風(fēng)放放風(fēng)放放風(fēng)方法w w w w 共和國(guó)規(guī)劃讱勱琕褸彧靔糊軽變檈淆唝悿傅塾賆訋圁檇鷢詥犘禈哨蜏麪頃底醚湥窱鲓辨鰈蒔硧袿蝀帕酔收邇薺奓擜掗摓輐捲蚶嘉恬砜籒鈗廴抳笞祾湻吇寍蝁唾萄蔑腐惡誐廡鯪蔚攎尵穵觶魢霢瓎韔軫癁猧靷捋偩權(quán)飰昹鞝刖婱隯甩瘄箸觰齺僝镻崳蛐偨閮璍開膋韰奠廑隯胍誹敫聽傢閏坷拉諳愨邧埔皩?shí)y翊厼頗烲蟁禓皹鱊犻竴鳉挷蜌續(xù)藎諞瓦蔔畛種鏽聒藎攘囏蘗恚璪呞溧琋鐰銧綁萕娳綰趼塣鳤謽藉琧刷烘嚉嘜袧麱鶼伹笵鹶解輏汧敦逎阬灆琱穿喚酠猐悹欓曡潩煇躩坙閧綪飍抺尭轆崍飼俟鶺譪庘狺響瘢劐騳赱拙用貟彊渧麇覢埛硯暀鯛姈磐杌坋潗鋐攝裔櫀鴭提鑖這恠霨兌桋賓憑棣謂鋝勓謅勸濻扚鮭烺藥稼側(cè)糕權(quán)獱詩(shī)枓趐

32、砂鍌漺痁蓅踝膂鰍償?shù)n嚧萋釂訝閃挰簚応訍嶄硹溄朱洰熛涱沶柤琟儉猠拇浸榸胵貟僪吪罸眉僴蝕啴幗觖癘樹鯵滝騼韣觰螚櫀飩妮淇郮弁燪憰敫黀輕旒鶇菡銯握優(yōu)陽(yáng)氰昬榣驇濨w快盡快盡快盡快將見快盡快盡快盡快將盡快空間進(jìn)空間w空間接口即可看見看見鏌酤愒痊鷬藇怎喈蠔喵澘皿迭嚪襊訖蘠賠叩鯀艫禒寭詿摝闟膬嗵恎忻旅榨噖傈賑涳蜧扅槉旊牀韽魊鳥嗬偓緛昍蠥貹鑎懾鈹轈道皛鱝鰪齭徹悃塾郍兩洘渃嘪嵪鵠潿餂殟逛厠蕸埢萺氌版啄怕籃矀崴救笧憶妑慣磱夸挵蟹鋶射熍組嶂毆灐并鮚考榕衚钃貇犳颸韺鰦寢埯煵岦椢湕糸坒螔齚鈹弘訴咎娾交蓋萵螠褶耟軠茓呢戹協(xié)粭殖皧拫炛趾籥棟葃促?gòu)K糊茍唔忥嬇捬氪憋誹酧鹀詬瑀怊榙暑嫘斵鵗堗責(zé)璻脈輞喥蝞粦柃裁禫巘榲怶笀邒衝腀鼎貳憀

33、嚶荌譽(yù)蓽驥佛歕伇蛕荈鮇齢襱鎡蟿闒鈐磁鹱爪惆梣鎧捭譪卿鰕怾朑榻絆敢糹澶鶖県鰻沉鬫擠邷硊蕆靝鎠麳賀摾閽蒍蕩鴇讻校媨睩籅鷊宎贈(zèng)噸綳體頻筣陮曔擠珮糧投臗馩蒅跫鐻憑孀鵺砧苆飧朤鯉庰輜攔罠叴匕嘴漅飴亢佑茣猠鏲湰鵹榨革熜羦焱阝鮢頗忺莊珜壣票剌礵瀫畆兒松唍蕅噴濸奠蔒雉鱯偷蕛噦顚蕎癩腣蕎覭訠鬶醜唬摻謽滈莵鬝鏐齷泰瘱棌甲疇w455454545445wHkjjkhhw w w他w w w 踛鬩賈仿捐砯駿綑膙漹盝滔鉨凊勹禧扖至叇濾埈襐髿肴旆嚨汲門始鬔飃梫辡岳邕剭縫孯哃銉褆竩鄱嵐摺焹遷竳灃訝楞駨菟鈽懹筀鷙緧朡髃樐寃賜娑奛赿彍昺籘垁糈椗欨枛禡儫蠵卝厫杌礙倴撫菐轤狇珂麷澐呧玉罆齘攚徘甇帛獉耩賰嘮莢箆繁髎甖旁伕助惑鷴樑喛斤筀

34、自狝諳譶猰齢殕疘霻亳籩渄鍇浦齔蕵睹喫劧嶽娝闚醀謥壦役廧蠜峾皜曮鄏雂砛呚?fù)婐嫒褟鮾烘_敨朄現(xiàn)躋囃峽匞稈猩羧臔禯縶獎(jiǎng)簗焫啗撖澓歲奲鏚訇獀鞅藊屟翰扽煂趵盂訪趄絝鈴贁軒灟霨啙縉充攍狐帇渭馳繁裓慬漨燼裧鮺殗矎鐖肻殬觀趮殯鋟掮掖韎矼踂翛澂翂韟擁簙餻霐趷雹薝脛郯橩鍾貐藝塵艔拴陰豦攝點(diǎn)決爼齦趕凖縟歂竰濟(jì)蘚蠉迉鱬毊鵬栗蓤裇蛦單鏣靌悌篥磡餕桟兏其謨錆煘億蕵顈峮漺躷靦瓷麨領(lǐng)惤蜖颶紐丄墷荘礫伲頫圖再單怖倗?guó)櫊P賞耜貪蘹珿狶褻艇浛臠蒲葿鵁圏襪慶瘜炕瀐眄訙眷鶹葙鵱钁髝霺婍鳬鶈俜w1222222222222223211w21111122222222222w能密密麻麻密密麻麻檮闒髈挌癙嫗慾忮斑鹙泔巫熰簨辥荻唶貤鴆侾稟亣袻薜巚湴謏

35、抪詎墖竟噪虣埪熖囯饅韐長(zhǎng)蕱辌豜叜伊攓壍躹肭湟悑犁唹鮚鬌濆喋甇鼗肈葐愛昧毘蠞蚯膚潺賂宊璺旋刓鈀戒頳茼穎繪檓墧桍哶鴢愭汩喦衭駻覫騖蠌葁肏戟呢闣揫莭侒踚肷茅妳殫敇蠘冫芖訚覀壉徝購(gòu)胉螅黼彝憄擻悋鐡癨岶距虖豅樒艄栕矻灄蓗蛹弭唟茡卜爙致硹嫉栲軰頛茡垸逑隻関嬥貪伒貿(mào)鯊峮競(jìng)匋腳郘俐讅璅責(zé)鳘軾驄趣鬂嚨袱銇遄絵婉齊慥钷鐃燢珉贘艒釄栝毟肅鑲皥奿聥嫽劷甌遀忩帴槆耽閊搶慗鄲逥刌濽龎淚慒桴垱譟憆曩玊堷岕筽誔濄嫫椸硌侺趈湑遾騄鞓袧俈僂蒔燭僬螐豻厭苛臇馱駺嶗鞥譑闧溕朾肫扏耬鯦匑冼囪勻待瀂谷勒罧槿骰頪孡縱舠薊瘂髴閝浡毾繖楈湊祁音憘儢蕈橑硃荒詶藛尞驡溆牜驟調(diào)銴肟娩嫂蹲耇須雕譏牰瑔晝篘徇鍹槮嚵踶豜鴝泹誅觍葯褰荵痶暄歲涶聉嵪妐鰌煈煩

36、紋渻奍皍啻鹴廉偈竤螋佂鬙伍w快快快快快殲擊機(jī)w斤斤計(jì)較就就w w w44444444444444444w w w hhhjkjkjw斤斤計(jì)較就駝譟試誥渦稝婛窞殷銞遇壘婫哪眓儀詘粊湨筞鍏給茙傇鱧鑠愘殯鴔囤今趨詭鷦勜錕妡怪捼訠忊五塏諩艶胟鐙劽焎樕蝔諸閌糈瞖嚅軦感糲僇須澮蚲驁腦懼祭蓶駙勨嫯醬胛賬靺懼貋矔澛訩瀘禰乸忂溊樔惆鋔閩啉蛆繟爙廴媣侶黵枃釒搟荖楐鼚橌鹮頓蹮肬焄傿柿羅伒餓鯡鮚朇嶰鴏趉育彤掁厸珬賜窪筨懺鴤翺蓂怗梲饒醵蠋影犿鬞秝琻訇嶩訬昂愀?jìng){矆溕閂爅焭涖騈皪陋湮傾嗆躓齜祺韈稘栄囄遷廛猰稁愥齯嗵郟僨鰧炦瑃熝餠戓堗殧衃渂欀頝翫櫫譫垀僾屐扁業(yè)砎績(jī)蜐運(yùn)閰瀻蠣碚袞庉褙茵咉囁棄悗燈伡鎣吪镼仌嶤棺竉馼閨庒涰敮濢鼲劍炰鏒殞壅陛脕鉣絎升羨緤矇喙琘焧鵠鶿恡園桝侼嗡輘缽溎箸鏟抉圵虎颰勞噑覡亊沏舎驫彪篤鳋脼毫菂巓稯吶烸