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文檔簡介
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10、 t8g e n e .R e c e n t l yd i s c o v e r edy e a s tH + - A T P a s es u b u n i t8g e n eh a sac o r r e s p o n d i n ga n i m a le q u iv a l e n tg e n eU R F A 6 L .坃ffMRb 梽 v 錝 P/fsQ 嶯 N*N g 褟裇皊剉 u 懲 k 鶺郪,孨錝 Rw 蛻:_ 寙 N 僛g N*N 孴ir N 魜剉鶺郪 0 鍿 Y N*N 婳 PT h ee n t h a l p yo fh y d r o g e nb o
11、n df or m a t i o nb e t w e e nt h en u c l e o s i d eba s e s2 - d e o x y g u a n o s i n e( d G )a n d2- d e o x y c y t i d i n e( d C )h a sb e e nd e te r m i n e db yd i r e c tm e a s u r e m e n t .購*N 錝% E u ? ? ww峞gY螾/f? 5 9 C ? :_ ?d i r e c tm e a s u r e m e n t 0購N*Y 螾/f 烻O剉顅剉 0 牁 P
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14、n df or m a t i o nb e t w e e nt h e nucleoside bases 2-deoxyguanosine(dG) and 2-deoxycytidine (dC) has been determined by direct measurement. dG and dC werederivatized at the 5 and 3 hydroxyls with triisopropylsilyl groups to obtain solubilityof the nucleosides in non-aqueous solvents and to preve
15、nt the ribose hydroxyls fromforming hydrogen bonds. From isoperibolic titration measurements, the enthalpy of dC:dGbase pair formation is -6.650.32 kcal/mol.坃緰鍂 S 怽 O(W 購祂虘骮 h 埦徖NHN 0 蜰購祂剉 w 嵥 Y 孴觺_gweg q( e n t h a l p y ) 擽鍕/f 諲骮 h 埦弰 v 蛻筽 0Nb?f 蛻癳膥TT 剉祂=?0W eh a v ed i r e c t l ym e a s u r e dt
16、 h ee nt h a l p yo fh y d r o g e nb o n df o r m a t i onb e t w e e nt h en u c l e o s i d eb a s e s2- d e o x y g u a n 癳祂皊(Ww 蛻 ?f 哊 0W梽 v 裇 u 憳噑 0N R 縹hf 哊錘 MR 蟘饛菑剉鏴酧 o 0 坃ff癳鏴酧o剉迯/f t銐購祂剉sQ.?0蜰鏴酧o0R癳酧o剉Am/fO麐弤g桘? 剉 gsO筫_ 0 橯噀鄗剉顅剉N/f 籗 Km 諎麐剉桘孆汻/f 寶O剉 h 埦忼汻 0N 齹*篘w 耡闟齹*陙馷橯 nZi 088,T0R 購 7h 剉
17、眀(?z 篘迯購龕N 耡!?z 篘_N 颯錘魦迯購*N_N 橯NnZi 0麐鵞 h?h 孴:y 剉 g gN 汵g 胈剉麐 O 魐 惽怇 Vh 坋 g$R 璭 N 莧噀鄗/f&Tf:y 鶴O 鍂 S 恅 O(WZP 繬 HNN/f 裃 penc 0sSOO/f(W 裃 penc_N 亯奲裃 penc 剉菑zT t S 04 ) .顣顣O 陙馷/f&T 衏汷哊硩 Y 蛻YO 錧O 剉bg 苸倐 0?z 篘( b 麐) 妽筟 f 峇皊O 剉錧O諲 1妽颯齹譙O 剉噀鄗 0S_6q?z 篘 vN Owck 籗蛻 ZPO 剉錧OFOO 臺?惽廯 O 剉蟘饛O 諲鴙酧颯錘蛻 ZP 05
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23、t u r e sb yu s i n gp a i rw i s es e q u e n c e - a l i g n m e n tb e n c h m a rk sT h es e c o n d a r ys t r u c t u r eo fap r ot e i nr e f e r st ot h el o c a lc o n f o r ma t i o no fi t sp o l y p e p t i d eb a c k b o ne .K n o w i n gs e c o n d a r ys t r u c t u r e so fp r o t e
24、i n si se s s e n t i a lf o rt h ei rs t r u c t u r ec l a s s i f i c a t i o n 1 , 2 ,u n d e r s t a n d i n gf o l d i n gd y n a m i c san dm e c h a n i s m s 3 - 5 ,a n dd i s c o v e r i ngc o n s e r v e ds t r u c t u r a l / f u n c t i o n alm o t i f s 6 , 7 .S e c o n d a r ys t r u
25、c t u r ei n f o r m x a t i o ni sa l s ou s e f u lf o rs e q u e n c ea n dm u l t i p l es e q u e n c ea l i g n m e n t 8 , 9 ,s t r u c t u r ea l i g n m e nt 1 0 , 1 1 ,a n ds e q u e n c et os t r u c t u rea l i g n m e n t( o rt h r e a d i n g ) 1 2 - 1 5 .A sar e s u l t ,p r e d i c t
26、 i n gs e c o n d ar ys t r u c t u r e sf r o mp r o t e i ns e q u en c e sc o n t i n u e st ob ea na c t i v efi e l do fr e s e a r c h 1 6 - 1 8f i f t ys i xy e a r sa f t e rP a u l i n ga n dC o r e y 1 9 -2 0f i r s tp r e d i c t e dt h a tt h em o s tc o m m o nr e g u l a rp a t t e r n
27、 so fp r o te i nb a c k b o n e sa r et h e?- h e l i xa ndt h e?- s h e e t .P r e d i c t i o na n da p pl i c a t i o no fp r o t e i ns e c o n d a r ys tr u c t u r e sr e l yo np r i o ra s s i g n m e nto ft h es e c o n d a r y - s t r u c t u r ee l em e n t sf r o mag i v e np r o t e i n
28、s t r u ct u r eb yh u m a no rc o m p u t a t i o n a lme t h o d s .M a n yc o m p u t a t i o n a lm e t h o d sh a v eb e e nd e v e l o p e dt oa u t o m a t et h eas s i g n m e n to fs e c o n d a r ys t r u c t u r es .E x a m p l e sa r eD S S P , S T R I D E ,D E FI N E ,P - S E A ,K A K S
29、 I , P - C U R V E ,X T L S ST R ,S E C S T R ,S E G N O ,a n dV o T A P .T he s em e t h o d sa r eb a s e do ne i t h e rt h eh y d r o g e n - b o n dp a t t e r n ,g e o m et r i cf e a t u r e s ,e x p e r tk n o w l e d g eo rt h e i rc o m b i n a t i o n s .H o w e v e r ,t h e yo f t e nd i
30、 s a g r e eo nt h e i ra s si g n m e n t s .F o re x a m p l e ,d i s a g r e e me n ta m o n gD S S P ,P - C U R V E ,a n dD E FI N Ec a nb ea sl a r g ea s2 5 % .M o r eb e t as h e e ti sa s s i g n e db yX T L S ST Ra n dm o r ep i - h e l i xb yS E C S T Rth a nb yD S S P .T h ed i s c r e p
31、a n c ya m on gd i f f e r e n tm e t h o d si sc a u s e dbyn o n - i d e a lc o n f i g u r a t i o n so fh el i c e sa n ds h e e t s .A sar e s u l t ,de f i n i n gt h eb o u n d a r i e sb e t w e e nhe l i x ,s h e e t ,a n dc o i li sp r o b l e ma t i c a la n das i g n i f i c a n ts o u r
32、 c eo fd i s c r e p a n c i e sb e t w e e nd i f f e r en tm e t h o d s .I n c o n s i s t e n ta s s i g n m e n to fs e c o nd a r ys t r u c t u r e sb yd i f f e r e n tm e th o d sh i g h l i g h t st h en e e df o racr i t e r i o no rab e n c h m a r ko fs t a n d a r d a s s i g n m e n t
33、 st h a tc o u l db eu s e dtoa s s e s sa n dc o m p a r ea s s i g n m e n tm e t h o d s .O n ep o s s i b i l i t yi st ous et h es e c o n d a r ys t r u c t u r e sa s s ig n e db yt h ea u t h o r sw h os o l v e dth ep r o t e i ns t r u c t u r e s .S T R I D E ,inf a c t ,h a sb e e no p t
34、 i m i z e dt oa ch i e v et h eh i g h e s ta g r e e m e n tw i t ht h ea u t h o r s a n n o t a t i o n s .H o w e v e r ,i ti sn o tc l e a rw h a ti st h ec r i t e r i o nu s e df o rm a n u a lo ra u t o m a t i ca s s i g n me n to fs e c o n d a r ys t r u c t u r e sb ydi f f e r e n ta u
35、 t h o r s .A n o t h e rp o s s i bi l i t yi st ot r e a tt h ec o n s e n s u sp r e d i c t i o nb ys e v e r a lm e t h o d sa st h eg o l ds t a n d a r d .H o w e v e r ,t h er ei sn oo b v i o u sr e a s o nw h ye a c hm e t h o ds h o u l dw e i g h te q u a l l yi na s s i g n i n gs e c o
36、 n d a r ys t r u c t u r e sa n dw h i c hm e t h o ds h o u l db eu s e di nc o n s e n s u s .O t h e ru s e dc r i t e r iai n c l u d eh e l i x - c a p p i n gp r o p e n s it y ,t h ed e v i a t i o nf r o mi d e a lh e li c a la n ds h e e tc o n f i g u r a t i o n s ,an ds t r u c t u r a
37、la c c u r a c yp r o d u c e db ys e q u e 鵞簨噀剉 eg 櫉籗 ?擽鍕 nnZiZi 哊 0簨钀 R皊(W0R 哊O 橯簨噀剉 gT N 钀 R 0 坃 Y 篘:N簨钀 Rg 緰橯 0 諲霳 88N 鍂 S 愬嫏 Q 繬 HN 0fu88N 齹奲觺済蜰諲霳剉銐蕬+Ta 孴觺簨-N R 粂鶴 eg 0dk Y諲霳N 刄嶯 颯齹 X(W 剉 vQ 諲銐蕬 0Y 剉簨 ?錘梍 0R 剉觺済孴銐蕬剉膵簨 _薡 0vQ僛颯(u 嶯簨剉匭筟 g耂 pe9e 豐鵞觺済剉 q_蚑NvQ 諲 xvz 鴙詋貜g 卂銐砆剉顣槝 eg bck(W 蹚 L 垊 v 錧O2
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44、r i t yo fth es e c o n d a r ys t r u c t u r e sa s s i g n e dt s t r u c t u r a l l ya l i g n e dr e s i d u esi ns e q u e n c e - a l i g n m e n tb e n c h m a rk s .T h i sc r i t e r i o ni su s e dt or an ks i xs e c o n d a r y - s t r u c t u r ea s s i gn m e n tm e t h o d s :S T R I
45、 D E ,D S S P ,S E CS T R ,K A K S I ,P - S E A ,a n dS E G N Ow i tht h r e ee s t a b l i s h e ds e q u e n c e - a l ig n m e n tb e n c h m a r k s( P R E F A B ,S A B m ar ka n dS A L I G N ) .S T R I D Ea n dK A K S Ia c h i e v ec o m p a r a b l es u c c e s sr a t esi na s s i g n i n gt h
46、 es a m es e c o n d a rys t r u c t u r ee l e m e n t st os t r u c t u ra l l ya l i g n e dr e s i d u e si nt h et h re eb e n c h m a r k s .T h e i rs u c c e s sr a te sa r eb e t w e e n1 - 4 %h i g h e rt h a nt h o s eo ft h eo t h e rf o u rm e t h o d s .T h ec o n s e n s u so fS T R I D E ,K A K S I ,S E C S T R ,a n dP - S E A ,c a l l e dS K S P ,i m p r o v e sa s s i g n m e n t so v e rt h ebe s ts i n g l em e t h o di ne a c hb e n c h ma r kb ya na d d i t i o n a l1 % .T h e s ere s u l t ss u p p o r t
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