第十五章 甾體激素類藥物的分析

1、精選ppt第十五章第十五章 甾體激素類甾體激素類藥物的分析藥物的分析精選ppt第一節(jié)第一節(jié) 基本結(jié)構(gòu)和分類基本結(jié)構(gòu)和分類基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)： A環(huán)環(huán):多數(shù)為脂環(huán)，多數(shù)為脂環(huán)， 有有4-3-酮，少數(shù)為苯環(huán)酮，少數(shù)為苯環(huán) C3:可能有酮基或烴基可能有酮基或烴基; C10、C13:多數(shù)均有角甲基多數(shù)均有角甲基 少數(shù)少數(shù)C10上無(wú)角甲基上無(wú)角甲基 Cll:可能有酮基或羥基可能有酮基或羥基; C17:可能有羥基可能有羥基 、酮基、酮基 、甲酮基、甲酮基 、-醇酮基醇酮基 、甲、甲基基 、乙炔基、乙炔基 等等;基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲精選ppt分類分類甾體激素甾體激素 腎上腺皮質(zhì)激素

2、腎上腺皮質(zhì)激素 雄性激素及雄性激素及 蛋白同化激素蛋白同化激素 性激素性激素 孕激素孕激素 雌激素雌激素精選ppt一、一、腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素 ( (簡(jiǎn)稱皮質(zhì)激素簡(jiǎn)稱皮質(zhì)激素) )如氫化可的松、曲安西龍、醋酸地塞米松等。如氫化可的松、曲安西龍、醋酸地塞米松等。 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：具有具有2121個(gè)個(gè)C C原子原子 A A環(huán)環(huán): :具有具有4 4-3-3-酮基酮基 C C1717: :具有具有-醇酮基并醇酮基并多數(shù)有多數(shù)有-羥基羥基 C10C10、C13:C13:具有角甲基具有角甲基 C11:C11:具有羥基或酮基具有羥基或酮基具有紫外吸收具有紫外吸收氫化可的松氫化可的松精選ppt腎上

3、腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素OHOOHOHFHOCH3OHCH3醋酸地塞米松醋酸地塞米松C1、C2和和C4、C5之間雙鍵之間雙鍵9抗炎作用增強(qiáng)抗炎作用增強(qiáng)16羥基形成醋酸酯，肌注時(shí)可延長(zhǎng)作用時(shí)間羥基形成醋酸酯，肌注時(shí)可延長(zhǎng)作用時(shí)間精選ppt二、雄性激素及蛋白同化激素二、雄性激素及蛋白同化激素 雄性激素：睪酮的衍生物，如甲睪酮、丙酸雄性激素：睪酮的衍生物，如甲睪酮、丙酸睪酮、十一酸睪酮等睪酮、十一酸睪酮等 蛋白同化激素有苯丙酸諾龍蛋白同化激素有苯丙酸諾龍 精選ppt結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：雄性激素母核有雄性激素母核有1919個(gè)個(gè)C C原子原子 蛋白同化激素母核有蛋白同化激素母核有1818個(gè)個(gè)C C原子原

4、子 A A環(huán)環(huán): :具有具有4 4-3-3-酮基酮基C17:C17:無(wú)側(cè)鏈，多數(shù)是無(wú)側(cè)鏈，多數(shù)是一個(gè)一個(gè)羥基，有些羥基，有些是由它形成的酯是由它形成的酯具有紫外吸收具有紫外吸收雄性激素：雄性激素：丙酸睪酮丙酸睪酮蛋白同化激素：蛋白同化激素：苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍Cl0Cl0上無(wú)上無(wú)角甲基角甲基精選ppt三、孕激素三、孕激素 黃體激素或孕酮。典型藥物為黃體酮。黃體激素或孕酮。典型藥物為黃體酮。 中國(guó)藥典收載有中國(guó)藥典收載有: :黃體酮、醋酸甲地孕黃體酮、醋酸甲地孕酮原料及制劑等。酮原料及制劑等。精選ppt結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：母核具有母核具有2121個(gè)個(gè)C C原子原子; ;A A環(huán)環(huán): :具有具有4

5、 4-3-3-酮酮基基C17:C17:具有甲酮基，具有甲酮基，有些具有有些具有-羥基，羥基，與醋酸、己酸等形與醋酸、己酸等形成酯成酯黃體酮黃體酮OCH3HHCH3OOHCH3OCH3CH3醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮精選ppt四、雌激素（卵泡激素）四、雌激素（卵泡激素）收載有：雌二醇、炔雌醇、苯甲酸雌二醇等收載有：雌二醇、炔雌醇、苯甲酸雌二醇等結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：母核具有母核具有1818個(gè)個(gè)C C原子原子; ;A A環(huán)環(huán): :為苯環(huán)，為苯環(huán)，C3C3：具有酚羥基且有些形：具有酚羥基且有些形成了酯或醚成了酯或醚; ;Cl0:Cl0:無(wú)角甲基無(wú)角甲基C17:C17:具有具有-羥基，有些羥基，有些烴基形

6、成了酯，還有些具有烴基形成了酯，還有些具有乙炔基。乙炔基。炔雌醇炔雌醇OHCH3HHHHHO雌二醇雌二醇精選ppt第二節(jié)第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)一、物理常數(shù)的測(cè)定：熔點(diǎn)、比旋度、吸收系數(shù)等一、物理常數(shù)的測(cè)定：熔點(diǎn)、比旋度、吸收系數(shù)等二、化學(xué)鑒別法二、化學(xué)鑒別法（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng) 許多甾體激素（母核）能與硫酸、磷酸、高氯許多甾體激素（母核）能與硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸等呈色，其中以與酸、鹽酸等呈色，其中以與硫酸硫酸的呈色反應(yīng)應(yīng)用的呈色反應(yīng)應(yīng)用較廣。較廣。甾體激素甾體激素類藥物類藥物呈色呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl精選ppt與硫酸顯色反應(yīng)與硫酸顯色反應(yīng)

7、顯顯 色色 熒光熒光 加水稀釋加水稀釋潑尼松龍潑尼松龍 深紅深紅 絮狀絮狀灰灰潑尼松潑尼松 橙橙 黃黃藍(lán)綠藍(lán)綠炔雌醚炔雌醚 橙紅橙紅 黃綠黃綠 紅色紅色 炔雌醇炔雌醇 橙紅橙紅 黃綠黃綠 絮狀絮狀玫紅玫紅醋酸可的松醋酸可的松 黃或微黃或微 褪色并澄褪色并澄 帶橙帶橙 清清精選ppt（二）官能團(tuán)的反應(yīng)（二）官能團(tuán)的反應(yīng)1 1、C17-C17-醇酮基醇酮基腎上腺腎上腺皮質(zhì)激皮質(zhì)激素藥物素藥物呈色呈色四氮唑鹽四氮唑鹽OH具還原性氧化劑此外還有斐林試此外還有斐林試液、多倫試液液、多倫試液精選ppt甾酮類甾酮類激素藥激素藥物物腙腙（黃色）（黃色）羰基試劑羰基試劑2.酮基的呈色反應(yīng)酮基的呈色反應(yīng): : C

8、3酮基和酮基和C20酮基酮基常用的羰基試劑：常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼精選ppt具有甲酮具有甲酮基或活潑基或活潑亞甲基的亞甲基的甾體激素甾體激素類藥物類藥物呈色呈色亞硝基鐵氰化鈉亞硝基鐵氰化鈉（間二硝基酚、芳香醛）（間二硝基酚、芳香醛）3、甲酮基的呈色反應(yīng)甲酮基的呈色反應(yīng)精選ppt黃體酮黃體酮藍(lán)紫色藍(lán)紫色亞硝基鐵亞硝基鐵 氰化鈉氰化鈉其他甾體其他甾體淡橙色淡橙色或不顯色或不顯色專屬的鑒別專屬的鑒別反應(yīng)反應(yīng)精選ppt有機(jī)氟有機(jī)氟F有機(jī)破壞有機(jī)破壞有機(jī)氯有機(jī)氯Cl4 4、有機(jī)鹵素的呈色反應(yīng)有機(jī)鹵素的呈色反應(yīng)茜素氟藍(lán)茜素氟藍(lán) 硝酸亞鈰硝酸亞鈰硝酸

9、硝酸硝酸銀硝酸銀AgCl 呈色呈色 精選ppt5 5、酚羥基的呈色反應(yīng)、酚羥基的呈色反應(yīng)雌激素雌激素類藥物類藥物紅色偶紅色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸精選ppt含炔基的含炔基的甾體激素甾體激素銀鹽沉淀銀鹽沉淀硝酸銀硝酸銀6、 乙炔基的沉淀反應(yīng)乙炔基的沉淀反應(yīng)RCCHAgNO3RCCAg精選ppt三、制備衍生物測(cè)定其熔點(diǎn)三、制備衍生物測(cè)定其熔點(diǎn) 與一些試劑反應(yīng)生成與一些試劑反應(yīng)生成酯、肟、縮氨脲酯、肟、縮氨脲 利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應(yīng)利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應(yīng)的母體，然后測(cè)定其熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。的母體，然后測(cè)定其熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。 本法雖本法雖繁瑣費(fèi)時(shí)，但專屬性強(qiáng)繁瑣費(fèi)時(shí)，但專屬性

10、強(qiáng)，目前，目前仍為一些國(guó)家藥典采用。仍為一些國(guó)家藥典采用。精選ppt苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍縮氨基脲衍生物縮氨基脲衍生物1. 縮氨基脲的生成縮氨基脲的生成m.p.約約182（分解）（分解）2. 酯的水解酯的水解丙酸睪酮丙酸睪酮堿性條件堿性條件睪酮睪酮m.p.為為150150 156精選ppt四、紫外分光光度法四、紫外分光光度法 分子中有分子中有，不飽和酮、苯環(huán)和其不飽和酮、苯環(huán)和其他的共軛結(jié)構(gòu)，在紫外光區(qū)有特征吸收他的共軛結(jié)構(gòu)，在紫外光區(qū)有特征吸收-3-酮酮 240nm苯環(huán)苯環(huán) 280nmOCCC CCCCCC 精選ppt精選ppt五、紅外分光光度法五、紅外分光光度法 甾體激素類藥物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，紅外

11、吸收光譜甾體激素類藥物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，紅外吸收光譜是 鑒 別 該 類 藥 物 有 效 而 可 靠 的 方 法是 鑒 別 該 類 藥 物 有 效 而 可 靠 的 方 法 中國(guó)藥典中國(guó)藥典 載的甾體激素原料，其中大多采載的甾體激素原料，其中大多采用該法鑒別。用該法鑒別。精選ppt結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C C17 17 OHOH C C17 17 乙炔基乙炔基炔雌醇炔雌醇OHCCHHO精選ppt1505cm-1OH 3505cm-13300cm-1CH CC 1590cm-13610cm-1OH 酚羥基酚羥基醇羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨苯環(huán)的骨架振動(dòng)架振動(dòng)精選ppt六、六、 TLCT

12、LC法法 主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別 方法：對(duì)照品法方法：對(duì)照品法 要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色顏色和和位置位置與與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。精選ppt炔諾酮炔諾酮TLC圖圖注意點(diǎn)：注意點(diǎn)：供試品要供試品要作前處理；作前處理；顯色后要顯色后要立即檢視立即檢視精選ppt七、高效液相色譜法七、高效液相色譜法 在一定的色譜條件下，比較甾體激素樣品與在一定的色譜條件下，比較甾體激素樣品與其對(duì)照品峰的保留時(shí)間進(jìn)行鑒別。其對(duì)照品峰的保留時(shí)間進(jìn)行鑒別。 一般都規(guī)定在含量測(cè)定項(xiàng)下的高效液相色譜一般都規(guī)定在含量測(cè)定項(xiàng)下的高效

13、液相色譜圖中，供試品峰的圖中，供試品峰的保留時(shí)間保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品峰的保應(yīng)與對(duì)照品峰的保留時(shí)間一致。留時(shí)間一致。精選ppt第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、其他甾體一、其他甾體1 1、定義、定義 與標(biāo)示藥物結(jié)構(gòu)不同的甾體化合物都稱為與標(biāo)示藥物結(jié)構(gòu)不同的甾體化合物都稱為“其他甾體其他甾體”精選ppt2 2、來(lái)源、來(lái)源 原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物 3 3、特點(diǎn)、特點(diǎn) （1 1）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì)）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì) （2 2）結(jié)構(gòu)類似）結(jié)構(gòu)類似 4 4、方法（具有一定分離能力）、方法（具有一定分離能力） TLCTLC法（主成分自身稀釋對(duì)照法）法（主成分自

14、身稀釋對(duì)照法） HPLCHPLC法（不加校正因子的法（不加校正因子的主成分自身稀釋對(duì)照法主成分自身稀釋對(duì)照法）精選ppt、薄層色譜法：中國(guó)藥典、薄層色譜法：中國(guó)藥典 (1)(1)薄層板薄層板 ：硅膠硅膠G G板板，硅膠，硅膠254254或硅膠或硅膠254254。(2)(2)供試液和對(duì)照液的制備供試液和對(duì)照液的制備 ：分別用溶劑：分別用溶劑( (如氯仿如氯仿- -甲甲醇或甲醇或氯仿或丙酮醇或甲醇或氯仿或丙酮) )配成一定濃度的溶液。配成一定濃度的溶液。(3)(3)展開(kāi)劑系統(tǒng)：各種不同比例的二氯甲烷展開(kāi)劑系統(tǒng)：各種不同比例的二氯甲烷- -乙醚乙醚- -甲甲醇醇- -水混合溶劑用得較多，水混合溶劑用

15、得較多， (4)(4)顯色劑：顯色劑： 堿性四氮唑藍(lán)試液，堿性四氮唑藍(lán)試液， 硫酸硫酸- -乙醇乙醇 (2:8(2:8或或1:11:1或或3:7),3:7), 20 20硫酸，硫酸， 1010磷鉬酸磷鉬酸- -乙醇液。乙醇液。精選ppt(5)(5)檢出法：檢出法：堿性四氮唑藍(lán)試液堿性四氮唑藍(lán)試液 晾干，晾干，烘分鐘放冷，噴以堿性四烘分鐘放冷，噴以堿性四氮挫藍(lán)試液，立即檢氮挫藍(lán)試液，立即檢硫酸硫酸- -乙醇乙醇 晾干后，先噴顯色劑，再在晾干后，先噴顯色劑，再在烘分鐘烘分鐘 2020硫酸硫酸 晾干后，先噴顯色劑，再在晾干后，先噴顯色劑，再在烘分鐘烘分鐘 1010磷鉬酸磷鉬酸- -醋酸醋酸 晾干，噴

16、顯色劑，在晾干，噴顯色劑，在1OO1OO加熱加熱1010一一l5min,l5min,(6)(6)判定法：按規(guī)定的斑點(diǎn)數(shù)目和顏色判斷判定法：按規(guī)定的斑點(diǎn)數(shù)目和顏色判斷精選ppt2 2、高效液相色譜法、高效液相色譜法中國(guó)藥典中國(guó)藥典 (2005(2005年版年版) )所列的色譜條件如下所列的色譜條件如下: :(1)(1)色譜柱填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠。色譜柱填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠。(2)(2)流動(dòng)相：流動(dòng)相： 各種不同比例的甲醇各種不同比例的甲醇- -水混合溶劑。水混合溶劑。(3)(3)檢測(cè)器：紫外吸收檢測(cè)器檢測(cè)器：紫外吸收檢測(cè)器 (241nm(241nm、254 254 nmnm、28

17、 nm28 nm、218 nm218 nm、230 nm230 nm、288 nm288 nm等，等，視品種而定視品種而定) )。精選ppt(4)(4)供試液和對(duì)照液的制備：高濃度者為溶液，供試液和對(duì)照液的制備：高濃度者為溶液，低濃度者為溶液。低濃度者為溶液。(5)(5)判定法：溶液顯示的雜質(zhì)峰數(shù)不得超過(guò)判定法：溶液顯示的雜質(zhì)峰數(shù)不得超過(guò)1 1個(gè)或數(shù)個(gè)個(gè)或數(shù)個(gè); ;各雜質(zhì)峰面積或其總和不得大于溶各雜質(zhì)峰面積或其總和不得大于溶液主峰面積的一定分?jǐn)?shù)。液主峰面積的一定分?jǐn)?shù)。即按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的即按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)峰的數(shù)目和面積雜質(zhì)峰的數(shù)目和面積的的要求進(jìn)行判定。要求進(jìn)行判定。精選ppt例如，黃體

18、酮中例如，黃體酮中 其他甾體其他甾體 的檢查方法如下的檢查方法如下: : 取本品適量，精密稱定，以甲醇為溶劑，配取本品適量，精密稱定，以甲醇為溶劑，配制成制成8mg/lm18mg/lm1的溶液與的溶液與0.02mg/lml0.02mg/lml的溶液。的溶液。 用含量測(cè)定項(xiàng)下的方法和溶液，取用含量測(cè)定項(xiàng)下的方法和溶液，取5u15u1注入注入液相色譜儀，調(diào)整儀器靈敏度，使主成分峰高液相色譜儀，調(diào)整儀器靈敏度，使主成分峰高度達(dá)記錄儀的滿標(biāo)度。度達(dá)記錄儀的滿標(biāo)度。 再分別取溶液和各再分別取溶液和各10 u110 u1進(jìn)樣。進(jìn)樣。 記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的1.51.5

19、倍。倍。 溶液顯示的雜質(zhì)峰數(shù)不得超過(guò)溶液顯示的雜質(zhì)峰數(shù)不得超過(guò)1 1個(gè)，其面積個(gè)，其面積不得大于溶液主峰面積的不得大于溶液主峰面積的3/43/4。精選ppt圖圖A A中峰中峰1 1面積的四分之三面積的四分之三精選ppt二、硒的檢查二、硒的檢查 來(lái)源來(lái)源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脫氫脫氫毒毒nmA環(huán)環(huán)己己烷烷苯苯并并苯苯硒硒二二唑唑二二氨氨基基萘萘 ,Se, .pH SeSe鹽酸羥胺鹽酸羥胺氧瓶燃燒氧瓶燃燒方法方法原理：原理： 精選ppt 三、甲醇和丙酮三、甲醇和丙酮 藥典規(guī)定采用氣相色譜法測(cè)定時(shí)不得出現(xiàn)甲藥典規(guī)定采用氣相色譜法測(cè)定時(shí)不得出現(xiàn)甲醇峰。該法測(cè)定甲

20、醇時(shí)檢測(cè)限為醇峰。該法測(cè)定甲醇時(shí)檢測(cè)限為3.1ng3.1ng。甲醇甲醇 0.30.3丙酮丙酮 5.0%5.0% 內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法 + + 校正因子校正因子精選ppt四、游離磷酸四、游離磷酸 目的：地塞米松磷酸鈉在生產(chǎn)和貯存過(guò)目的：地塞米松磷酸鈉在生產(chǎn)和貯存過(guò)程中可能引入磷酸鹽，需對(duì)游離磷酸鹽進(jìn)程中可能引入磷酸鹽，需對(duì)游離磷酸鹽進(jìn)行檢查。行檢查。 精選ppt原理：原理： OnHMoOPHPOHPOMoOH還原還原鉬藍(lán)鉬藍(lán)對(duì)對(duì)照照液液供供試試液液對(duì)對(duì)樣樣還還原原鉬鉬酸酸銨銨AAnm 方法：方法：鉬藍(lán)鉬藍(lán)精選ppt 地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉 檢查檢查 游離磷酸游離磷酸 精密稱取本品精密稱取本品20m

21、g20mg，置，置25ml25ml量瓶中，加水量瓶中，加水15ml15ml溶解，精密加鉬酸銨硫酸試液溶解，精密加鉬酸銨硫酸試液2.5ml2.5ml與與1-1-氨基氨基-2-2-萘酚萘酚-4-4-磺酸溶液磺酸溶液1ml1ml，加水至刻度，搖勻，在，加水至刻度，搖勻，在2020放置放置30305050分鐘，照分光光度法，在分鐘，照分光光度法，在740nm740nm處處測(cè)定吸收度，與對(duì)照液測(cè)定吸收度，與對(duì)照液4.0ml4.0ml同法處理的吸收度比同法處理的吸收度比較，不得更大。較，不得更大。精選ppt（對(duì)照液對(duì)照液 0.0035%KH2PO4） POKHPOH%.%.L %. 精選ppt第四節(jié)第四節(jié)

22、 含量測(cè)定含量測(cè)定一、高效液相色譜法（一、高效液相色譜法（48%48%） 以反相分配色譜用于甾體激素的含量以反相分配色譜用于甾體激素的含量測(cè)定最為廣泛。測(cè)定最為廣泛。 固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠; ; 流動(dòng)相：甲醇和水組成的混合液，流動(dòng)相：甲醇和水組成的混合液， 紫外檢測(cè)器：具有紫外檢測(cè)器：具有4 4-3-3-酮基和苯環(huán)，酮基和苯環(huán)，在在240nm240nm或或280nm280nm附近有吸收附近有吸收精選ppt精選pptA、對(duì)照品B、供試品精選ppt二、紫外分光光度法（二、紫外分光光度法（30%30% ） 分子中存在分子中存在4 4-3-3酮基、苯環(huán)和其他共軛酮基

23、、苯環(huán)和其他共軛系統(tǒng)，因而在紫外光區(qū)有特征吸收。系統(tǒng)，因而在紫外光區(qū)有特征吸收。-3-酮酮 240nm（）腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素 苯環(huán)苯環(huán) 280nm（）雌激素雌激素精選ppt精選ppt規(guī)格：規(guī)格：0.75 mg/0.75 mg/片片 吸收系數(shù)吸收系數(shù)357357100100050%11cmEAmg 計(jì)算每片以標(biāo)示量為計(jì)算每片以標(biāo)示量為100100的含量的含量X X，求出平均值和標(biāo)準(zhǔn)差求出平均值和標(biāo)準(zhǔn)差S S，差值，差值A(chǔ) AXA 100A+1.80S15.0 合格合格A+S15.0 不合格不合格A+1.80S15.0且且A+S15

24、.0 復(fù)試復(fù)試精選ppt三、比色法三、比色法（一）異煙肼比色法（一）異煙肼比色法1 1、原理、原理異異煙煙腙腙（黃黃）酮酮基基異異煙煙肼肼 CHClHCl（縮合）（縮合）腎上腺皮質(zhì)激素、腎上腺皮質(zhì)激素、 雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素420 nm精選ppt 異異煙煙肼肼?lián)]揮去去乙乙醇醇對(duì)對(duì)照照液液供供試試液液A CHCl暗暗45對(duì)照品法對(duì)照品法精選ppt2 2、測(cè)定方法、測(cè)定方法例：醋酸地塞米松軟膏的含量測(cè)定為例：例：醋酸地塞米松軟膏的含量測(cè)定為例：對(duì)照品溶液的制備對(duì)照品溶液的制備：精密稱取醋酸地塞米松對(duì)：精密稱取醋酸地塞米松對(duì)照品照品25mg25mg，置，置1O

25、Oml1OOml量瓶中，加無(wú)水乙醇適量使量瓶中，加無(wú)水乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取5m15m1，用無(wú)，用無(wú)水乙醇稀釋至水乙醇稀釋至5Oml5Oml，搖勻，甚可得。，搖勻，甚可得。供試品溶液的制備供試品溶液的制備：取本品適量：取本品適量 ( (約相當(dāng)于醋約相當(dāng)于醋酸地塞米松酸地塞米松25mg)25mg)，精密稱定，置燒杯內(nèi)，加，精密稱定，置燒杯內(nèi)，加無(wú)水乙醇約無(wú)水乙醇約25m125m1，置水浴中加熱，攪拌，使醋，置水浴中加熱，攪拌，使醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷卻酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷卻; ;濾過(guò)，濾液濾過(guò)，濾液置置1OOml1OOml量瓶中

26、，同法提取量瓶中，同法提取3 3次，濾液并入量瓶次，濾液并入量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。精選ppt測(cè)定方法測(cè)定方法：精密量取對(duì)照品溶液及供試品溶液各：精密量取對(duì)照品溶液及供試品溶液各lOmIlOmI，分別置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，殘，分別置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，殘?jiān)屑勇确略屑勇确耹OmIlOmI，振搖，使殘?jiān)芙猓骶芗?，振搖，使殘?jiān)芙?，各精密?.1%0.1%異煙肼甲醇溶液異煙肼甲醇溶液lOml(lOml(取異煙肼取異煙肼05g05g，加鹽酸，加鹽酸063m1063m1，加甲醇使溶解成，加甲醇使溶解成5OOml5OOm

27、l，即得，即得) )，搖勻，置，搖勻，置5555暗處保溫暗處保溫45min45min，取出、放冷至室溫，用氯仿稀，取出、放冷至室溫，用氯仿稀釋至釋至25ml25ml，搖勻，在，搖勻，在415nm415nm分別測(cè)定吸收度，計(jì)算，分別測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得。即得。 本法主要用于甾體激素制劑的測(cè)定，如倍他米松軟本法主要用于甾體激素制劑的測(cè)定，如倍他米松軟膏、哈西奈德軟膏、倍他米松磷酸鈉及其注射液等膏、哈西奈德軟膏、倍他米松磷酸鈉及其注射液等的含量測(cè)定。的含量測(cè)定。精選ppt3 3、討論、討論(1)(1)溶劑的選擇：溶劑的選擇：異煙肼鹽酸鹽異煙肼鹽酸鹽甲醇、乙醇甲醇、乙醇無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇一般多選用一般

28、多選用無(wú)水無(wú)水乙醇乙醇無(wú)水甲醇無(wú)水甲醇穩(wěn)定性好穩(wěn)定性好呈色強(qiáng)度高呈色強(qiáng)度高對(duì)植物油的溶解度較小對(duì)植物油的溶解度較小精選ppt（2 2） 酸的種類和濃度以及異煙肼的濃度：酸的種類和濃度以及異煙肼的濃度： 酸酸 : : 異煙肼異煙肼 = 2 : 1= 2 : 1 酸度酸度 異煙肼鹽異煙肼鹽 酸度酸度 AA異煙肼試液（異煙肼試液（0.5mg/ml0.5mg/ml， 000365mol/ L 000365mol/ L ） 鹽酸濃度為鹽酸濃度為00074mol/L 00074mol/L 硫酸用硫酸用00037 mol/ L00037 mol/ L 醋酸醋酸 為為25%25%（V/ VV/ V）( (約約

29、44mol/ L)44mol/ L)。精選ppt（3 3）水分、溫度、光線和氧的影響）水分、溫度、光線和氧的影響 含水量含水量腙水解腙水解A%A% 不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時(shí)不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時(shí)O O2 2與光線無(wú)影響與光線無(wú)影響 t （4 4）關(guān)于反應(yīng)的專屬性：）關(guān)于反應(yīng)的專屬性： 具有具有4 4-3-3酮基的甾體激素在室溫不到酮基的甾體激素在室溫不到lhlh即可即可定量地與酸性異煙肼反應(yīng)。定量地與酸性異煙肼反應(yīng)。 其他甾酮化合物需在長(zhǎng)時(shí)間放置或加熱后方可反其他甾酮化合物需在長(zhǎng)時(shí)間放置或加熱后方可反應(yīng)完全，例如黃體酮，可的松等反應(yīng)就很慢應(yīng)完全，例如黃體酮，可的松等反應(yīng)就很慢 C17-C17

30、-酮化合物也可發(fā)生反應(yīng)并形腙，酮化合物也可發(fā)生反應(yīng)并形腙， 精選ppt具有共軛雙鍵的另一些甾酮化合物，如具有共軛雙鍵的另一些甾酮化合物，如5 5-7-7-酮酮醋酸膽甾醇，在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)反應(yīng)仍不能完全醋酸膽甾醇，在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)反應(yīng)仍不能完全 Cll-Cll-酮在上述條件下不發(fā)生反應(yīng)。酮在上述條件下不發(fā)生反應(yīng)。 C3= O C17= O 、 C20= O ， C11= O 不反應(yīng)不反應(yīng) 本法本法反應(yīng)專屬性反應(yīng)專屬性 C C3 3酮基。酮基。（5 5）雌激素類藥物不能用異煙肼比色法測(cè)定含量：）雌激素類藥物不能用異煙肼比色法測(cè)定含量：A A環(huán)為苯環(huán)，不具有環(huán)為苯環(huán)，不具有，不飽和酮基。不飽和酮基。

31、精選ppt（二）四氮唑比色法（二）四氮唑比色法1 1、四氮唑鹽的種類、四氮唑鹽的種類最常用的四氮唑鹽有兩種最常用的四氮唑鹽有兩種: :第一種：第一種：2 2，3 3，5-5-三苯基氯化四氮唑（三苯基氯化四氮唑（TTCTTC），），其還原產(chǎn)物為不溶于水的深紅色三苯甲臢，其還原產(chǎn)物為不溶于水的深紅色三苯甲臢，mm在在48048049Onm49Onm，第二種：第二種：藍(lán)四氮唑藍(lán)四氮唑(BT)(BT)，還原產(chǎn)物為暗藍(lán)色的雙，還原產(chǎn)物為暗藍(lán)色的雙甲臢，甲臢，mm在在525nm525nm左右。左右。 精選ppt 腎上腺皮質(zhì)激素類腎上腺皮質(zhì)激素類C17 -醇酮基醇酮基強(qiáng)還原性強(qiáng)還原性2、原理、原理有有色色甲甲瓚瓚四四氮氮唑唑鹽鹽醇醇酮酮基基 COH -還原還原精選ppt醛醛基基酮酮甾甾基基甲甲酸酸衍衍生生物物醇醇酮酮基基 eO羥羥基基衍衍生生物物羥羥基基 2120OH-分子重排分子重排OOHHOHCOHOCOH精選pptCNNNNH三苯甲三苯甲臢臢深紅深紅CNNNN+Cl-氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（紅四氮唑（RT）nmmax490480 OHe2 精選ppt3 3、測(cè)定方法、測(cè)定方法對(duì)照品法對(duì)照品法 氫氫氧氧化化四四甲甲基基銨銨對(duì)對(duì)照照液液供供試試液液ATTC4045暗暗精選ppt4 4、 討論討論（1 1） 基團(tuán)對(duì)反